$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Микрофлюидные устройства стали необходимыми для контроля концентраций и химической среды в клеточных анализах, исследованиях осмотических стрессов и экспериментах по введению лекарств в биомедицинских исследованиях, криобиологии и других диагностическихприложениях 1,2. Эти устройства позволяют точно контролировать поток и концентрацию жидкости на микрометровом масштабе. Например, микрофлюидные устройства использовались для добавления и удаления криопротекторных средств во время криоконсервации клеток с целью предотвращения осмотическогоповреждения 3. Аналогично, эти микрофлюидные устройства также используются для установления последовательных разбавлений антибиотиков с целью проверки восприимчивости антимикробных препаратов к устойчивыморганизмам 4. Это позволяет определить оптимальные комбинации лекарств для лечения антимикробно-резистентных (АМР) инфекций. Кроме того, он позволяет проводить живые изображения и мониторинг клеток, снижает потребление реагентов и обеспечивает точность градиентов концентрации, в отличие от макроскопических методов, таких как камера Бойдена, которые обеспечивают более грубые и статические градиенты без мониторинга клетки в реальномвремени 1,5. Эти возможности позволяют имитировать in vivo-подобные химические среды in vitro для высококачественных исследований поведения клеток, миграции клеток, анализов вторжения клеток, ответа на лекарства и тестирования на токсичность.
Несмотря на преимущества микрофлюидных приборов, традиционные методы микроизготовления таких устройств (например, фотолитография и формование полидиметилсилоксана (PDMS) часто занимают много времени, требуют высокой стоимости и требуют специализированного оборудования иэкспертизы 6. Поэтому создание нового устройства с помощью мягкой литографии может занять несколько дней работы, а итеративные изменения конструкции также требуюттрудоёмких усилий 6. В последнее время 3D-печать стала быстрой альтернативой прототипирования, чтобы преодолеть эти ограничения. Однако раннее внедрение 3D-печатной микрофлюидики было ограничено стоимостью принтеров высокого разрешения (часто ≥ 10 000 долларов), а недорогие устройства не обеспечивают достаточногоразрешения 7. Улучшение недорогой стереолитографии на базе ЖК-экранов значительно продвинуло эту область, поскольку потребительские принтеры (часто ~$150-$500) теперь предлагают микромасштабное (~20-50 мкм) разрешение, достаточное для многих микрофлюидныхприложений 5. Учитывая эти достижения, главной целью нашей работы было создание экономически эффективного и эффективного рабочего процесса для полностью 3D-печатных микрофлюидных устройств, способных генерировать контролируемые градиенты концентрации без типичных барьеров сложности производства8. Мы стремились разработать быстрый и надёжный метод создания индивидуальных микрофлюидных моделей, используя потребительский 3D-принтер и биосовместимую смолу, что сделало их доступными для широкого спектра лабораторий.
Здесь мы представляем 3D-печатное микрофлюидное устройство, способное смешивать растворы, генерировать непрерывные и программируемые градиенты концентрации, а также формировать комбинации растворов и программируемые градиенты концентрации. Устройство изготавливается с помощью настольной стереолитографии и полностью собрано с использованием открытого канала, полностью герметичного прозрачного клеевого пленки, индуцированного смолой. Обструкция канала, вызванная смолой, является широко известной проблемой в микрофлюидной стереолитографии 9,10; однако этот подход создаёт надёжное, герметичное микрофлюидное устройство без необходимости специализированного оборудования для обработки поверхностей или склеивания и решает распространённую проблему незатвердевшей смолы, перекрывающей небольшие каналы припечати 11. Кроме того, используя недорогие смолы, отвергаемые ультрафиолетом, каждое устройство можно быстро произвести всего за несколько долларов материала. Ещё одним преимуществом является то, что его конструкция не является фиксированной; Его легко модифицировать и перепечатывать, в отличие от коммерческих устройств, которые стоят сотни долларов за штуку и не подлежат настройке12, 13, 14.
Для контроля концентрации раствора 3D-печатное устройство было интегрировано с двумя шприцовыми насосами (по одному на каждое вводное решение), управляемыми открытым скриптом Python, как ранее описано для микрофлюидныхприложений 15. Это позволяет автоматически регулировать расходы, шаги градиента и тайминг. 15 Расход в нашей системе обычно варьируется от нескольких микролитров до 30 мкл/мин на вход, при этом стабильно достигалось равномерное смешивание при минимальном сдвиговом напряжении. Используя эту систему, мы сформировали линейные профили концентраций, охватывающие примерно изоосмотические (~300 мОсм/кг) до экстремальных гиперосмических (~9 000 мОсм/кг) условий и обратно до изотонических с определёнными временными интервалами. Непрерывные показания осмометра подтвердили, что генерируемые градиенты были линейными и точными, а простой колориметрический анализ подтвердил эффективное смешивание входных решений. Эти результаты подтверждают, что сложные, изменяющиеся во времени градиенты концентраций можно воспроизводить с помощью нашей полностью 3D-печатной платформы, что подчёркивает её потенциал для повышения производительности и стандартизации исследований осмотического воздействия за долю обычной стоимости.
Эта 3D-печатная микрофлюидическая платформа демонстрирует недавние достижения в области решений «лаборатория на чипе», обеспечивающих достаточное разрешение для многих клеточных микрофлюидных приложений 16,17. Кроме того, эксперты прогнозируют, что аддитивное производство станет ведущим методом производства микроустройств по мере продолжения прогресса в технологиях принтеров и материалов6. Ключевое преимущество нашего подхода в том, что доступность не идёт за счёт производительности. В соответствии с предыдущими исследованиями, демонстрирующими недорогие стратегии микрофлюидного производства18,19, эти доступные принтеры обеспечивают функции устройств, сопоставимые со многими коммерческими промышленными системами по надежности иточности 7. Таким образом, исследователи могут использовать этот метод с уверенностью, что он удовлетворит требования к точности большинства приложений. Эта платформа может быть адаптирована под различные потребности — от автоматизации многоступенчатого добавления/удаления криопротекторов до скрининга реакций на лекарства в различных концентрационных диапазонах и точной химической модуляции в моделяхорган-на-чипе 16. В частности, размеры напечатанного разрешения (около 100 мкм канала) достаточны для многих биологическиханализов 16, обеспечивая хороший диапазон для типичных масштабов длины клеток или частиц. В заключение, благодаря значительному сокращению времени изготовления, затрат и требований к экспертизе, эта полностью 3D-печатная микрофлюидическая платформа позволяет исследователям эффективно создавать прототипы и реализовывать индивидуальные микрофлюидические решения. Хотя по-прежнему требуются ручные этапы послеобработки, такие как полировка поверхности и герметизация клеевой лентой, общий рабочий процесс остаётся доступным и экономит время по сравнению с традиционными методами микропроизводства.