Влияние полисахаридов кордицепса на почечное старение, вызванное D-галактозой.

Краткое содержание

Модель старения была установлена у мышей и HK-2-клеток с использованием D-галактозы. Влияние полисахаридов Cordyceps (CCP) на старение почек оценивалось с помощью западного блотинга и иммунофлуоресценции, при этом изменения митохондрий оценивались с помощью обнаружения реактивных видов кислорода и окрашивания JC-1.

Аннотация

Хроническая болезнь почек (ХБП) представляет собой серьёзную глобальную проблему для здоровья. Старение почечных трубчатых эпителиальных клеток (RTEC) нарушает регенерацию и восстановление почек, а также способствует прогрессированию ХБП через высвобождение секреторного фенотипа (SASP), ассоциированного с старением. Cordyceps sinensis, основными биоактивными компонентами которого являются полисахариды Cordyceps (CCP), включен в многочисленные клинические препараты для лечения ХБП и обладает продемонстрированными терапевтическими свойствами. Для изучения роли CCP в старении почек была разработана модель старения почек, индуцированная D-галактозой, у мышей с применением CCP в качестве вмешательства. Результаты лечения оценивались с помощью окрашивания, связанного с старением, и оценки функции почек. Была дополнительно установлена модель старения, вызванная D-галактозой, в клетках HK-2, для изучения лежащих в основе клеточных механизмов. Окрашивание JC-1 и обнаружение реактивных видов кислорода (ROS) использовались для оценки изменений митохондрий после обработки CCP в стареющих условиях. Для оценки влияния CCP на фосфорилирование MAPK, транслокацию ядра NF-κB и активацию инфламмасом NLRP3 проводили иммунофлуоресценцию, вестерн-блоттинг и количественное ПЦР (RT-PCR). Результаты показывают, что CCP ослабляет старение тубулоинтерстициальных клеток, повреждения почек и фиброз, одновременно улучшая функцию митохондрий как в клеточных и животных моделях старения, индуцированного D-галактозой. Эти эффекты связаны с модуляцией сигнального пути ROS/MAPK/NF-κB/NLRP3.

Введение

Хроническая болезнь почек (ХБП) — одно из самых распространённых заболеваний почек и затрагивает большую часть населения по всему миру. Его появление тесно связано с^{возрастом 1}. Почечные канальцы являются основными функциональными единицами почек, а клеточное старение внутри трубчатых эпителиальных клеток почки (RTEC) является одним из основных факторов снижения функционального ухудшения^{почек 2}. Воздействие лекарств и другие стрессоры могут вызвать старение, связанное с трубочным стрессом, что приводит к прогрессирующей потере функции почек и в конечном итоге к терминальной стадии заболе....

Протокол

Все процедуры на животных проводились в соответствии с институциональными рекомендациями и утверждён Комитетом по этике животных Нанкинского университета китайской медицины (Этическое одобрение No 202108A006). Все отходы, образовываемые во время процедур культуры клеток и окрашивания, собирались в герметичные контейнеры и пакеты для биологической опасности и утилизировались лицензированной службой управления медицинскими отходами.

Модель животных и терапевтические вмешательства

Для минимизации межиндивидуальных вариаций 40 мышей были случайным образом распределены по пяти группам (....

Результаты

D-галактоза была использована для создания модели старения у мышей, при этом витамин E служит широко используемым положительным антистареющим контролем. Стареющих мышей лечили разными дозами полисахаридов Cordyceps (CCP). У пожилых мышей наблюдалось значимое нарушение почек, что подтверждается повышенным уровнем белка в мочевыводящей системе, мочевой кислоты и креатинина (рисунок 2B-D). И витамин E, и приём CCP ослабляли эти нарушения. Окраш.......

Обсуждение

Это исследование демонстрирует защитное действие полисахаридов Cordyceps на почечные трубчатые эпителиальные клетки и приводит доказательства того, что они ослабляют воспалительное старение в клетках HK-2, модулируя сигнальный путь ROS/MAPK/NF-κB/NLRP3. Эти результаты дополнительно проясняют возможные механизмы, лежащие в основе эффектов соединений, полученных из Cordyceps sinensis, при лечении острых и хронических заболеваний почек, и служат ори.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Casepase1/pAb рассечаного кролика	WL03450	Ваньлэй, Шэньян, Китай
Комплект CCK-8	C0037	Бийотай, Шанхай, Китай
КПК	B21296	Юанье Био, Шэньян, Китай
Набор для тестирования креатинина	C011-2-1	Цзянчэн, Нанкин, Китай
Д-гал	HY-N0210	MCE, США
ERK Rabbit pAb	4695	CST, США	AB_390779
gapdh Rabbit pAb	ac033	Abclonal, Ухань, Китай
Набор для окрашивания H & E Набор для окрашивания	G1120	Соларбио, Пекин, Китай
Комплект JC-1	C2003S	Бийотай, Шанхай, Китай
Набор для окрашивания Массона	G1340	Соларбио, Пекин, Китай
NLRP3 Rabbit pAb	WLH3383	Ваньлэй, Шэньян, Китай
P21 Rabbit pAb	64016	CST, США	AB_2892063
p38 Кролик pAb	9212	CST, США	AB_330713
p50 pAb Rabbit	3035	CST, США	AB_330564
p65 pAb Rabbit	8242	CST, США	AB_10859369
p-ERK Rabbit pAb	4370	CST, США	AB_2315112
Фосфо-SAPK/JNK мАнтитело	4668	CST, США	AB_823588
p-p38 Кролик pAb	4511	CST, США	AB_2139682
Набор для окрашивания ROS	S0033S	Бийотай, Шанхай, Китай
Антитела SAPK/JNK	9256	CST, США	AB_2250373
SA-β-gal Kit	C0602	Бийотай, Шанхай, Китай
Набор для тестирования мочевой кислоты	C012-2-1	Цзянчэн, Нанкин, Китай
Набор для обнаружения белков мочевыводящих	C035-2-1	Цзянчэн, Нанкин, Китай
Витамин E	S27812	Юанье Био, Шэньян, Китай
Primer для PCR
Имя гена	Прямой грунт	Реверсная грунтовка
Caspase-1	5'-TACAGAAAGGGTGCTGAACAA-3'	5'-CGGAATAACGGAGTCAAAA-3'
GAPDH	5'-AGAAGGTGGTGAAGCAGGCGTC-3'	5'-AAAGGTGGGGGAGTGTGTCG-3'
NLRP3	5'-GATCTTCGCTGCGATCAACAG-3'	5'-CGTGCATTATCTGAACCCCAC-3'