Точечная платформа для одновременного выявления вирусов чикунгунья, денге и Зика с помощью триплексного ПЦР

Краткое содержание

В этой статье рекомендуется полностью автоматизированная интегрированная система, использующая технологию тройной ПЦР для одновременной диагностики сопутствующих инфекций вирусов Чикунгунья, Денге и Зика с использованием одного образца, что оптимизирует эффективность тестирования в клинических и первичных лабораториях.

Аннотация

Лихорадка Чикунгунья (CHIKF), острая вирусная болезнь, передающаяся комарами и впервые обнаруженная в Танзании в 1952 году, демонстрирует периодическое распространение в Китае с ростом местных вспышек. К июлю 2025 года провинция Гуандун, которая сейчас является центром вспышки, сообщила о 4 824 местных случаях, включая почти 3 000 новых заражений всего за одну неделю. Этот быстрый всплеск создает острую потребность в передовых диагностических технологиях. Такие инструменты крайне важны для поддержки усилий по сдерживанию на передовой. Мы предлагаем решение для быстрого одновременного выявления инфекций денге (DENV), чикунгунья (CHIKV) и вируса Зика (ZIKV) с целью повышения возможностей ранней профилактики и контроля эпидемии. Этот подход предполагает разработку индивидуальных протоколов тестирования для пограничных пунктов и учреждений первичной медико-санитарной помощи.

Традиционные методы диагностики CHIKV и DENV часто не обладают чувствительностью и специфичностью в случаях коинфекции. Поскольку CHIKV, DENV и ZIKV имеют схожие паттерны передачи и симптомы, одновременный мониторинг имеет решающее значение. Этот протокол представляет собой триплексный метод qPCR с использованием зондов TaqMan для обнаружения этих арбовирусов в одной трубке в течение 90 минут. По сравнению с вирусными культурами и серологическими тестами, этот метод повышает эффективность, выявляя активные инфекции и коинфекции с высокой специфичностью, упрощая рабочий процесс и устраняя требования к специализированному оборудованию.

Валидация с использованием клинических и внешних образцов оценки качества (EQA) подтвердила 100% соответствие с золотым стандартом одинаковых анализов. Этот метод служит эффективным инструментом для мониторинга лихорадочных заболеваний в эндемичных регионах, особенно в условиях ограниченных ресурсов, где важно быстрое сдерживание вспышек.

Введение

Лихорадка чикунгунья (CHIKF) — это всё более распространённое арбовирусное заболевание, которое преимущественно передаётся переносчиками комаров Aedes aegypti и Aedes albopictus. Характеризуется повторяющимися вспышками в тропических регионах, это заболевание клинически проявляется как острое лихорадочное заболевание, часто сопровождающееся сильной болью в суставах и персистированным^{артритом 1}. По состоянию на 26 июля общее количество лабораторно подтверждённых случаев чикунгунья в городе Фошань достигло 4 824, из которых впечатляющие 87,2% приходится на район Шунде. Эта выраженная географическая концентрация с....

Протокол

Данное исследование соответствует этическим нормам, установленным Этическим комитетом Гуандунской провинциальной народной больницы Южного медицинского университета, Гуанчжоу, Китай (номер одобрения: KY2025-510-01). Подробная информация о материалах, используемых в этом исследовании (реагенты, химикаты, оборудование и программное обеспечение), представлена в Таблице материалов.

1. Отбор участников

1. Выбирайте участников в возрасте от 18 до 60 лет.
2. Выбирайте участников, которые проявили острое лихорадочное заболевание (подмышечный Т ≥ 38 °C) в течение 12 дней после появлен....

Результаты

Для подтверждения стабильности и точности системы тройного обнаружения ПЦР мы отобрали пять клинически репрезентативных образцов из нашей внутренней лаборатории и десять внешних слепых образцов EQA для проверки. Эти пять репрезентативных клинических выборок включают как отрицательные, так и положительные случаи (S1-S5), включая образцы, положительные на CHIKV и DENV, выбранные для демонстрации клинической применимости анализа и внутренней валидации эффективности теста (Таблица 1). Панель слепых образцов .......

Обсуждение

CHIKV — это одноцепочечный РНК-вирус положительного смысла, классифицируемый в альфавирусный род семейства^{Togaviridae 7}. Ускоренное глобальное потепление, усиление международной торговли и расширение туристических сетей в совокупности повысили риск воздействия арбовирусных угроз на человека⁸. За последнее десятилетие быстрая эволюция молекулярной диагностики фундаментально изменила ландшафт управления инфекционными заболеваниями. Среди этих.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Автоматический экстрактор нуклеиновых кислот	DAAN	Smart 32	Для экстракции ДНК
BECKMAN X-12	БЕКМАН	ALA04H01	For  центрифугирование сыворотки
BSC-1500IIA2-X	BIOBASE	SEDA 20143222263	Кабинет биобезопасности
E-центрифуга	WEALTEC		Центрифугуйте остаточную жидкость со стенки трубки
Полностью автоматический медицинский ПЦР-анализатор	Bioustar‌	UP0102	Флуоресцентное количественное усиление ПЦР
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса чикунгунья (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)	DAAN	20250804	Обнаружение   Гены вируса чикунгунья
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса денге (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)	DAAN	202504003	Обнаружение   Гены вируса денге
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вирусов Денге, Зика и чикунгунья (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)	Bioustar‌	20250724	Обнаружение   Гены вирусов денге, вируса Зика и вируса чикунгунья
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса Зика (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)	DAAN	202508041	Обнаружение вируса Зика  Гены
Набор для экстракции нуклеиновых кислот	DAAN		Экстракт нуклеиновой кислоты
SLAN — полностью автоматизированная система медицинского ПЦР-анализа	ХУНШИ		Анализ данных
ПЦР-аппарат SLAN-96S в реальном времени	ХУНШИ	SLAN-96S	Флуоресцентное количественное усиление ПЦР
Морозильники с ультранизкой температурой (DW-YL450)	МЕЛИНГ	SEDA 20172220091	-20 & °; C для хранения реагентов
Vortex-5	Kylin-bell		Для смешивания реагента