Методическая статья

Точечная платформа для одновременного выявления вирусов чикунгунья, денге и Зика с помощью триплексного ПЦР

DOI:

10.3791/69580

⸱

30 декабря 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1the Fourth People's Hospital of Nanning, 2The Fangchenggang Hospital of the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region - The First People's Hospital of Fangchenggang City, 3Department of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье рекомендуется полностью автоматизированная интегрированная система, использующая технологию тройной ПЦР для одновременной диагностики сопутствующих инфекций вирусов Чикунгунья, Денге и Зика с использованием одного образца, что оптимизирует эффективность тестирования в клинических и первичных лабораториях.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Лихорадка Чикунгунья (CHIKF), острая вирусная болезнь, передающаяся комарами и впервые обнаруженная в Танзании в 1952 году, демонстрирует периодическое распространение в Китае с ростом местных вспышек. К июлю 2025 года провинция Гуандун, которая сейчас является центром вспышки, сообщила о 4 824 местных случаях, включая почти 3 000 новых заражений всего за одну неделю. Этот быстрый всплеск создает острую потребность в передовых диагностических технологиях. Такие инструменты крайне важны для поддержки усилий по сдерживанию на передовой. Мы предлагаем решение для быстрого одновременного выявления инфекций денге (DENV), чикунгунья (CHIKV) и вируса Зика (ZIKV) с целью повышения возможностей ранней профилактики и контроля эпидемии. Этот подход предполагает разработку индивидуальных протоколов тестирования для пограничных пунктов и учреждений первичной медико-санитарной помощи.

Традиционные методы диагностики CHIKV и DENV часто не обладают чувствительностью и специфичностью в случаях коинфекции. Поскольку CHIKV, DENV и ZIKV имеют схожие паттерны передачи и симптомы, одновременный мониторинг имеет решающее значение. Этот протокол представляет собой триплексный метод qPCR с использованием зондов TaqMan для обнаружения этих арбовирусов в одной трубке в течение 90 минут. По сравнению с вирусными культурами и серологическими тестами, этот метод повышает эффективность, выявляя активные инфекции и коинфекции с высокой специфичностью, упрощая рабочий процесс и устраняя требования к специализированному оборудованию.

Валидация с использованием клинических и внешних образцов оценки качества (EQA) подтвердила 100% соответствие с золотым стандартом одинаковых анализов. Этот метод служит эффективным инструментом для мониторинга лихорадочных заболеваний в эндемичных регионах, особенно в условиях ограниченных ресурсов, где важно быстрое сдерживание вспышек.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Лихорадка чикунгунья (CHIKF) — это всё более распространённое арбовирусное заболевание, которое преимущественно передаётся переносчиками комаров Aedes aegypti и Aedes albopictus. Характеризуется повторяющимися вспышками в тропических регионах, это заболевание клинически проявляется как острое лихорадочное заболевание, часто сопровождающееся сильной болью в суставах и персистированнымартритом 1. По состоянию на 26 июля общее количество лабораторно подтверждённых случаев чикунгунья в городе Фошань достигло 4 824, из которых впечатляющие 87,2% приходится на район Шунде. Эта выраженная географическая концентрация создаёт значительную нагрузку на региональную инфраструктуру общественного здравоохранения и приводит к значительным расходам на здравоохранение, а также к более широким макроэкономическимвызовам 2.

В условиях всё более перекрывающейся циркуляции вирусов CHIKV, DENV и ZIKV современные диагностические методы сталкиваются с тремя основными ограничениями. Во-первых, серологические анализы не могут отличить острые инфекции из-за длительной персистенции антител после вирусногоклиренса 1. Во-вторых, методы вирусного культурирования демонстрируют низкую чувствительность и требуют нескольких дней, что затрудняет своевременное клиническое принятие решений. В-третьих, хотя количественные ПЦР-анализы демонстрируют высокую специфичность (более 95%), они не могут обнаружить коинфекции в рамках одной реакции, что является значительным недостатком с учётом сообщаемого уровня коинфекции CHIKV-DENV в 12,8% вИндии 3. Филогенетический мониторинг указывает на сдвиг парадигмы. Линия ECSA, доминировавшая во время эпидемии в Индии 2019–2022 годов, приобрела конвергентные мутации в белках оболочки: E1-A226V (повышающий инфекцию комаров) и E2-K252Q (связанный с уклонением от иммунитета). Эти мутации привели к появлению генотипа с задокументированно более высокой вирулентностью, как сообщалось в недавних эпизотажных исследованиях в Керале иМахараштре 3. Параллельно Китай сталкивается с трудностями из-за импорта генотипа ECSA, задокументированного в Юньнаньской вспышке, и других генотипов, при этом автохтонная передача зарегистрирована в нескольких провинциях, включаяЮньнань 4.

Эти реалии создают острые, ограниченные ресурсами потребности в (i) дифференциальной диагностике, несмотря на перекрывающиеся клинические проявления, 5) диагностические анализы, устраняющие сложность инструментов, обычно требуемой для традиционного количественного ПЦР в реальном времени (qPCR)6, и (iii) всесторонней валидации новых технологий точечной помощи, включая RT-LAMP и методы на основеCRISPR 5. Для решения этих диагностических проблем мы предлагаем быстрый тройной ПЦР-анализ, использующий полностью автоматизированную интегрированную систему, позволяющую одновременно обнаруживать CHIKV, DENV и ZIKV в одной реакции. Мы подтвердили эффективность нашего триплексного qPCR-анализа путем прямого сравнения с устоявшимися моноплекснымианализами 5, которые служили эталонным стандартом. В следующих разделах подробно описаны процедуры как для триплексного, так и для референсных одинаковых анализов. Сравнительный анализ результатов обоих методов представлен в разделе «Репрезентативные результаты».

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Данное исследование соответствует этическим нормам, установленным Этическим комитетом Гуандунской провинциальной народной больницы Южного медицинского университета, Гуанчжоу, Китай (номер одобрения: KY2025-510-01). Подробная информация о материалах, используемых в этом исследовании (реагенты, химикаты, оборудование и программное обеспечение), представлена в Таблице материалов.

1. Отбор участников

  1. Выбирайте участников в возрасте от 18 до 60 лет.
  2. Выбирайте участников, которые проявили острое лихорадочное заболевание (подмышечный Т ≥ 38 °C) в течение 12 дней после появления симптомов, а также с высыпанием, артраалгией или шейной лимфаденопатией, а также недавними поездками в эндемичные районы чикунгунья; или бессимптомных людей с идентичной историей путешествий.
  3. Исключение: применение антимикробных/противовирусных препаратов в течение 7 дней или лихорадка, вызванное подтверждённым ВИЧ или злокачественным заболеванием.

2. Сбор и обработка образцов

  1. Проверьте, не повреждена ли внешняя упаковка коробки для проб, а затем удалите внутренние материалы.
  2. Позиционируйте субъекта с вытянутой рукой. Определите среднюю кубитальную вену, наложите жгут и продезинфицируйте место венипункции мазком с 70% спиртом.
  3. Собрать 1~3 мл крови из предкубитальной вены испытуемого с помощью трубки для сбора крови без антикоагулянтов.
  4. Аккуратно переверните трубку 5-8 раз и дайте ей свернуться при комнатной температуре в течение 30 минут.
  5. Центрифугуйте образец крови при 4 °C, 1000 x g на центрифуге, в течение 10 минут. Образец сыворотки, полученный после центрифугирования, можно немедленно проверить.
  6. Аккуратно аккуратно переложите супернатантную сыворотку в стерильные микроцентрифугальные трубки. Немедленно используйте сыворотку для тестирования или храните аликвоты при -80 °C до дальнейшего анализа нуклеиновых кислот патогена с помощью qPCR.

3. Автоматическое триплексное qPCR обнаружение CHIKV, DENV и ZIKV

  1. Подготовка реагентов и трубок
    1. Достать все необходимые реагенты из хранилища и разморозить их при комнатной температуре.
    2. Визуально осмотрите каждую герметичную трубку детектора TD на предмет повреждений или поломки уплотнения. Убрать все скомпрометированные трубки.
    3. Кратковременно закрутите буфер для экстракции нуклеиновых кислот TD в течение 5 секунд, чтобы обеспечить равномерность.
    4. Асептически подайте 500 мкл гомогенизированного буфера в трубку реагента для экстракции TD (содержащую фиолетовые сублимированные магнитные шарики).
    5. Энергично разжигайте смесь в течение 30 секунд, пока все компоненты полностью не растворятся и шарики не будут полностью взвешены.
    6. Переместите весь восстановленный раствор в заранее маркированную трубку для обнаружения TD.
  2. Загрузка выборок
    1. Пипетта 200 мкл прозрачной, негемолизированной и нелипемической сыворотки в подготовленную трубку для обнаружения TD.
    2. Плотно запечатайте трубку и переверните её десять раз, чтобы смешать однородно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Во время инверсии дайте парафиновому слою ненадолго плавать внутри трубки. Это нормальная часть процесса.
  3. Работа приборов и сбор данных
    1. Вставьте герметичные детекторные трубки в отведённые слоты анализатора.
    2. На интерфейсе сенсорного экрана введите образцовую идентификационную информацию.
    3. НажмитеS tart Detection , чтобы запустить полностью автоматизированный рабочий процесс с закрытой трубкой.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Система автоматически выполняет сканирование штрихкодов, экстракцию нуклеиновых кислот с помощью магнитного захвата шариков и усиление ПЦР с помощью флуоресценции без дополнительного вмешательства пользователя. Стандартная программа включает этап денатурации при 95 °C в течение 3 минут, затем 40 циклов усиления.
  4. Интерпретация результатов
    1. После завершения запуска наблюдайте результаты усиления для всех трёх целей (CHIKV, DENV, ZIKV) и внутреннего управления на одном экране.
    2. Запишите автоматически сгенерируемый индикатор «Положительный», «отрицательный» или «Недействительный» для каждого целевого патогена в его соответствующий флуоресцентный канал.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Внутреннее программное обеспечение системы использует порог цикла (Ct) 37,0 для автоматической интерпретации. Ручной анализ данных не требуется.

4. Ссылка на анализы Singleplex qPCR для сравнения методов

  1. Подготовка реагентов для экстракции нуклеиновых кислот
    1. Достаньте готовую пластину на 96 лунок из комплекта. Аккуратно постучите по пластине с 96 яками, чтобы реагенты и магнитные шарики сконцентрировались на дне пластины с 96 лунками. Аккуратно снимите алюминиевую фольгированную герметичную пленку, чтобы избежать вибраций пластины с 96 лунками, чтобы жидкость не разбрызгивалась.
    2. В столбцах 1 и 7 пластины с 96 лунками сначала добавляется 20 мкл протеиназы K, затем 200~300 мкл образца, подлежащего извлечению.
    3. Автоматизированная экстракция нуклеиновых кислот (метод на основе магнитных шариков)
      1. Заранее упакованные пластины на 96 лунок (с образцами) размещаются в соответствующих слотах автоматизированной системы экстрактора нуклеиновых кислот.
      2. Процесс экстракции нуклеиновой кислоты выглядит следующим образом: адсорбировать магнитные шарики, связанные с нуклеиновой кислотой, с помощью магнитного стержня внутри лабораторной камеры. Перенесите комплекс шариков в следующее отверстие реагента. Активируйте устройство для перемешивания, чтобы тщательно перемешать жидкость с магнитными шариками через быстрое и многократное перемешивание. Позвольте автоматическому экстрактору нуклеиновой кислоты выполнять следующие этапы: i) Лизис клетки: 10 минут при 25 °C. ii) Адсорбция нуклеиновой кислоты: 15 минут при 70 °C, с магнитной адсорбцией 3 раза. iii) Промывка: перемешивать 2 минуты (повторять 3 раза), затем дважды адсорбировать магнитной адсорбцией (по 15 с каждая). iv) Элюция: выполнять дважды (по 5 минут каждый), магнитная адсорбция выполняется три раза. В конечном итоге получите нуклеиновые кислоты высокой чистоты.
    4. Для немедленного обнаружения непосредственно аспирируйте нуклеиновую кислоту элуата из колонок 6 и 12. Для длительного хранения перенесите оставшиеся образцы нуклеиновых кислот до -20°C.
  2. Подготовка амплификационных реагентов
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для одноплексной ПЦР-реакции подготовьте три отдельных ПЦР-пробирки с использованием трёх разных ферментов и трёх соответствующих реакционных смесей. Подготовка реагента пройдет в три отдельных шага. Поскольку этапы подготовки схожи, ниже мы продемонстрируем только этапы подготовки реагента для обнаружения CHIKV.
    1. Удалите из комплекта реакционный раствор для амплификации нуклеиновых кислот и реакционный раствор CHIKV (специфические для CHIKV праймеры/зонды). После размораживания поместите их в температуру 22~25 °C, тщательно перемешайте интенсивным встряхиванием, затем проведите короткую центрифугу (1000 x g, 15 с, 22~25 °C).
    2. Вычислим общее количество реакций как N + 2 (где N = количество пробных образцов, +2 = один отрицательный и один положительный контроль качества). Приготовьте мастер-смесь в микроцентрифугной пробирке подходящего размера, смешивая для каждой реакции: раствор реакции амплификации нуклеиновой кислоты объемом 17 мкл (содержащий буфер, дНТФ, ДНК-полимеразу, фермент UDG), 3 мкл раствора реакции CHIKV (содержащий праймеры, зонды для генов CHIKV и IC). Тщательно используйте Vortex The Master Mix, чтобы обеспечить полное сведение. Кратко центрифугуйте трубку при 10 000 x g в течение 15 секунд при комнатной температуре (22~25 °C), чтобы собрать раствор на дне. В каждую реактивную трубку ПЦР вводите 20 мкл Master Mix.
    3. Добавьте образцы нуклеиновой кислоты и образцы контроля качества: в подготовленные выше ПЦР-пробирки (20 мкл) соответственно добавьте 5 мкл нуклеиновой кислоты из тестируемых образцов — положительный контроль и отрицательный контроль, достигая итогового объёма 25 мкл на пробирку; плотно закройте трубки и выполните мгновенное центрифугирование (1000 x g, 15 с, 22 ~25 °C), после чего поместите трубки в ПЦР-прибор.
  3. Усиление ПЦР
    1. Задайте программу циклирования следующим образом: предденатурация: 50 °C в течение 15 минут, затем при 95 °C в течение 15 минут (оба шага вместе составляют 1 цикл); следующие два этапа на 40 циклов: денатурация при 94 °C на 15 с и отжиг при 55 °C в течение 45 с.
    2. Установите параметры обнаружения флуоресцентных сигналов следующим образом: FAM-флуоресцентная маркировка генов CHIKV; Флуоресцентная маркировка гена IC в VIC используется как внутренний контроль комплекта. Собирайте данные при 55 °C. После завершения реакции убедитесь, что данные сохранены для дальнейшего анализа.
    3. Анализ данных с помощью программного обеспечения, специфичного для qPCR
      1. Информация о образце: В схеме расположения пластин скважины в программном обеспечении помечайте типы образцов (например, положительный контрольный, отрицательный контрольный, неизвестный образец, внутренний эталонный ген и т.д.), соответствующие положениям загрузки образцов.
      2. Размещение реактивных трубок: Откройте крышку нагревательного модуля прибора, аккуратно поместите запечатанные ПЦР-пластины/трубки внутрь, убедитесь, что они плотно прилегают к нагревательному модулю, и плотно закройте крышку модуля (чтобы избежать температурной неравномерности).
      3. Запуск реакции: после подтверждения правильности настроек программы нажмите Start Run и запишите идентификатор эксперимента для будущей ссылки.
      4. Остановка запуска и снятие трубок: после завершения программы дождитесь, пока температура нагревательного модуля не опустится ниже 50 °C. Затем откройте крышку и аккуратно снимите ПЦР-пластину или пробирки. При необходимости приступайте к анализу или хранению образцов.
      5. Анализ данных Перед началом анализа убедитесь, что: i) кривые усиления для всех образцов и внутреннего контроля характерно S-образны; ii) Порог флуоресценции устанавливается в пределах экспоненциальной фазы, что даёт значения Ct ≤ 38 циклов (CV < 5%); iii) Результаты контроля валидны, указывая на отсутствие загрязнения. Если какое-либо условие не выполнено или если образец проявляет аномальное усиление (например, нетипичную кривую или критический КТ), повторно проверяйте всю партию или конкретный образец соответственно.
      6. Обрабатывайте исходные данные с помощью программного обеспечения для определения значения Ct, используя автоматически выбранный порог; образец считается положительным, если Ct < 38, а его кривая усиления имеет сигмоидальную форму.

5. Биобезопасность и утилизация отходов

  1. Переместите все материалы в специально предназначенный, устойчивый к проколам контейнер для биологической опасности и деконтаминируйте с помощью автоклава перед окончательной утилизацией через институциональную систему медицинских отходов. Немедленно переместите эти материалы в герметичный, устойчивый к проколам контейнер с маркировкой как отходы с высоким риском. Следуя институциональным рекомендациям, деконтаминируйте все отходы, содержащие амплифицированные продукты, путём автоклава (например, 121 °C в течение 30 минут) для инактивации патогенов и разложения нуклеиновых кислот. Наконец, утилизируйте стерилизованные отходы через специальную систему управления медицинскими отходами.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте все шаги в соответствии с практиками биобезопасности уровня 2 (BSL-2), используя соответствующие средства индивидуальной защиты для минимизации риска воздействия.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для подтверждения стабильности и точности системы тройного обнаружения ПЦР мы отобрали пять клинически репрезентативных образцов из нашей внутренней лаборатории и десять внешних слепых образцов EQA для проверки. Эти пять репрезентативных клинических выборок включают как отрицательные, так и положительные случаи (S1-S5), включая образцы, положительные на CHIKV и DENV, выбранные для демонстрации клинической применимости анализа и внутренней валидации эффективности теста (Таблица 1). Панель слепых образцов ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CHIKV — это одноцепочечный РНК-вирус положительного смысла, классифицируемый в альфавирусный род семействаTogaviridae 7. Ускоренное глобальное потепление, усиление международной торговли и расширение туристических сетей в совокупности повысили риск воздействия арбовирусных угроз на человека8. За последнее десятилетие быстрая эволюция молекулярной диагностики фундаментально изменила ландшафт управления инфекционными заболеваниями. Среди этих...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было профинансировано Медицинским исследовательским фондом Гуандуна (A2025034). Спонсоры не участвовали в проектировании исследования, сборе и анализе данных, решении о публикации или подготовке рукописи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Автоматический экстрактор нуклеиновых кислотDAANSmart 32Для экстракции ДНК
BECKMAN X-12БЕКМАНALA04H01For  центрифугирование сыворотки 
BSC-1500IIA2-XBIOBASESEDA 20143222263Кабинет биобезопасности
E-центрифугаWEALTECЦентрифугуйте остаточную жидкость со стенки трубки
Полностью автоматический медицинский ПЦР-анализаторBioustar‌  UP0102Флуоресцентное количественное усиление ПЦР
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса чикунгунья (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)DAAN 20250804Обнаружение   Гены вируса чикунгунья
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса денге (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)DAAN 202504003Обнаружение   Гены вируса денге
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вирусов Денге, Зика и чикунгунья (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)Bioustar‌  20250724Обнаружение   Гены вирусов денге, вируса Зика и вируса чикунгунья
Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для вируса Зика (метод ПЦР-флуоресцентного зонда)DAAN 202508041Обнаружение вируса Зика  Гены
Набор для экстракции нуклеиновых кислотDAANЭкстракт нуклеиновой кислоты
SLAN — полностью автоматизированная система медицинского ПЦР-анализаХУНШИАнализ данных
ПЦР-аппарат SLAN-96S в реальном времениХУНШИSLAN-96SФлуоресцентное количественное усиление ПЦР
Морозильники с ультранизкой температурой (DW-YL450)МЕЛИНГSEDA 20172220091-20 & °; C для хранения реагентов
Vortex-5Kylin-bellДля смешивания реагента

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chikungunya epidemiology update - June 2025. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/m/item/chikungunya-epidemiology-update-june-2025 (2025).
  2. Li, Y., Chen, H., Wang, J., Zhang, X., Liu, B. Notes from the field: An outbreak of chikungunya fever in China - Foshan City, Guangdong Province, China, July 2025. Curr Med Sci. 7, 1064-1065 (2025).
  3. Naren Babu, N., et al. Clinical and molecular epidemiology of chikungunya outbreaks during 2019-2022 in India. Sci Rep. 15, 27280(2025).
  4. Liu, L. B., et al. Epidemiological and clinical characteristics of the chikungunya outbreak in Ruili City, Yunnan Province, China. J Med Virol. 94, 499-506 (2021).
  5. Cardona-Trujillo, J. D., Ocampo-Cárdenas, T., Tabares-Villa, F. A., Zuluaga-Vélez, A., Sepúlveda-Arias, J. C. Recent molecular techniques for the diagnosis of Zika and chikungunya infections: A systematic review. Heliyon. 8, e10225(2022).
  6. Hauner, A., et al. Technical validation of a multiplex real-time PCR for combined detection of Rift Valley fever, chikungunya, Zika and dengue viruses. J Virol Methods. 337, 115174(2025).
  7. Burt, F. J., et al. Chikungunya virus: An update on the biology and pathogenesis of this emerging pathogen. Lancet Infect Dis. 17, e107-e117 (2017).
  8. de Souza, W. M., et al. Chikungunya: A decade of burden in the Americas. Lancet Reg Health Am. 30, 100673(2024).
  9. Laurent, P., et al. Development of a sensitive real-time reverse transcriptase PCR assay with an internal control to detect and quantify chikungunya virus. Clin Chem. 53, 1408-1414 (2007).
  10. Pongsiri, P., Praianantathavorn, K., Theamboonlers, A., Payungporn, S., Poovorawan, Y. Multiplex real-time RT-PCR for detecting chikungunya virus and dengue virus. J Trop Med. 5, 342-346 (2012).
  11. Santiago, G. A., et al. Performance of the Trioplex real-time RT-PCR assay for detection of Zika, dengue, and chikungunya viruses. Nat Commun. 9, 1391(2018).
  12. Kanti, D., et al. Simultaneous detection of Zika, chikungunya and dengue viruses by a multiplex real-time RT-PCR assay. J Clin Virol. 83, 66-71 (2016).
  13. Waggoner, J. J., et al. Single-reaction multiplex reverse transcription PCR for detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses. Emerg Infect Dis. 22 (7), 1295-1297 (2016).
  14. Souza, J. V. C., et al. Viral metagenomics for the identification of emerging infections in clinical samples with inconclusive dengue, Zika, and chikungunya viral amplification. Viruses. 14, 1933(2022).
  15. Berrueta, M., et al. Safety, immunogenicity, and effectiveness of chikungunya vaccines in pregnant persons, children, and adolescents: A protocol for a living systematic review and meta-analysis. Reprod Health. 22, 56(2025).
  16. Lura, T., et al. A validated triplex RT-qPCR protocol to simultaneously detect chikungunya, dengue and Zika viruses in mosquitoes. J Vector Borne Dis. 59, 198-205 (2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Triplex PCRPoint Of Care TestingChikungunya DetectionDengue DetectionZika Virus DetectionTaqMan ProbesArbovirus CoinfectionqPCR MethodFebrile Illness MonitoringRapid Virus Detection
Видео скоро будет доступно

Похожие статьи