Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Генерация и генетическая манипуляция шейными органоидами человека

731 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69617

⸱

10 марта 2026 г.

 ,  ,  , 
1Department of New Biology, DGIST, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University Chilgok Hospital, 3Clinical Omics Institute, Kyungpook National University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Kyungpook National University School of Medicine, 5New Biology Research Center, DGIST, 6Graduate Program in Biomedical Science & Engineering, DGIST

В этой статье

Краткое содержание

Мы представляем подробный протокол создания и генетической обработки органоидов шейки матки человека.

Аннотация

Рак шейки матки — четвёртый по распространённости вид рака у женщин и чаще всего поражает эктоцервикс матки. Маточный эктоцервикс покрыт стратифицированным плоским эпителием, состоящим из базальных клеток и дифференцирующего парабазальные и супрабазальные клетки. Регенерация, наблюдаемая после конизации шейки матки, указывает на наличие устойчивой активности стволовых клеток. Однако наше понимание идентичности и регуляторных механизмов цервикальных стволовых клеток и их злокачественного процесса трансформации было ограничено из-за ограниченного доступа к шейным тканям человека и отсутствия оптимальных систем для оценки активности стволовых клеток в матке эктоцервикс. Недавно установленные органоиды шейки матки человека могут помочь преодолеть эти ограничения и предоставить новые возможности для изучения физиологии и патологии шейки матки. Однако стандартизированного метода для выделения и установления органоидов шейки матки человека не существует. Здесь мы описываем метод установления эктоцервикальных органоидов человека. В частности, мы представляем протокол по выделению отдельных клеток от эктоцервикального эпителия человека. Инкубируя шейную ткань в оптимизированном ферментном растворе, мы отслаиваем эпителий шейки матки, чтобы максимизировать выход клеток и минимизировать загрязнение фибробластами. Далее мы описываем условия для культивирования человеческих шейных органоидов с использованием оптимальной формулы среды. Кроме того, мы подробно описываем процедуры передачи и генетической манипуляции цервикальными органоидами. Этот протокол обеспечивает высокоэффективный подход к установлению органоидов шейки матки и их использования для изучения стволовых клеток шейки матки и заболеваний.

Введение

Эктоцервикс матки является самым частым местом рака шейкиматки 1,2. Хотя рак шейки матки снижается после внедрения вакцинации вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитых странах, в мире он по-прежнему остаётся четвёртым по распространённости раком среди женщин3,4. Кроме того, в некоторых странах частота предраковых поражений шейки матки продолжаетрасти 5,6. В то время как низкостепенное плоско-интраэпителиальное поражение (LSIL) часто регрессирует самостоятельно, высокостепенное плоскоэпителиальное поражение (HSIL) несёт риск прогрессирования в инвазивный рак и обычно требует хирургического вмешательства, такого как удаление или конизация. Эти процедуры могут укоротить эктоцервикс и увеличить риск выкидыша или преждевременныхродов 7,8. Более глубокое понимание шейной биологии в сочетании с развитием регенеративной терапии могло бы помочь решить эти проблемы, но требует надёжных и физиологически значимых модельных систем.

Животные модели значительно продвинули наше понимание гомеостаза шейки матки, механизмов заболеваний и терапевтических стратегий. Однако их отличия от человеческой биологии и патологии ограничивают их трансляционную ценность. В качестве альтернативы органоиды стали мощными платформами для моделирования биологии и заболеваний человека. Органоиды — это трёхмерные микроструктуры, полученные из стволовых клеток, которые воспроизводят гистологию и молекулярные сигнатуры своей тканипроисхождения 9,10,11. Они использовались для идентификации различных стволовых клеток человеческих тканей в различных тканях, включая трахею, пищевод и шейкуматки 12,13,14. Кроме того, органоиды способствуют генетической манипуляции, моделируя патогенез различных заболеваний, включая рак ифиброз 15,16,17. Кроме того, органоиды служат эффективной платформой для скрининга эффективности и токсичности лекарств или клеточныхтерапий 18,19,20,21.

Недавно две независимые группы создали органоидные системы шейки маткичеловека 22,23. Опираясь на эти достижения, мы значительно повысили эффективность культуры органоидов шейки матки и выявили стволовые клетки шейкиматки человека 13. Кроме того, отклеивая шейный эпителий, мы минимизировали включение фибробластов, лежащих под шейным эпителием. Используя шейные органоиды с генетической манипуляцией, мы выявили роль микробных метаболитов и их низших путей в поддержании гомеостаза шейки матки и предотвращении предракового прогрессирования. Таким образом, стандартизированный и оптимизированный протокол для генерации, поддержания и генетической модификации шейных органоидов станет необходимым инструментом для изучения биологии и патологии шейки матки.

В этой статье мы представляем подробный и оптимизированный протокол для генерации и передачи органоидов шейки матки человека. Мы также описываем протокол их генетической манипуляции с помощью электропорации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Выделение клеток и культура органоидов с использованием шейных маток человека были одобрены и проведены в соответствии со всеми соответствующими этическими нормами внутренними экспертными советами DGIST, Тэгу, Корея, и Национальной университетской больницы Чильгок Кёнгпук, Кёнсанбук-до, Корея (DGIST-20210401-BR-112-01 и KNUCH-2020-12-020-001). Человеческие эктоцервикальные ткани были предоставлены кафедрой акушерства и гинекологии Национальной университетской больницы Чилгок Кёнпук. Здоровые шейные ткани были получены у пациентов, перенесших тотальную лапароскопическую гистерэктомию по поводу доброкачественных маточных заболеваний. Информированное согласие было получено от всех пациентов.

1. Выделение одной клетки из эктоцервикальных тканей

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол начинается с образца биопсии человека эктоцервикса примерно 5 мм × 5 мм × 5 мм (рисунок 1).

  1. Поместите биопсийную ткань в чашку Петри диаметром 10 см и промойте её ледяным DPBS (без кальция и магния), чтобы удалить кровь и мусор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Человеческие шейные ткани были доставлены в лабораторию в течение 3 часов после операции в ледяной терапии Advanced DMEM/F12 и обработаны сразу по прибытии.
  2. Переместить ткань в трубку объёмом 1,5 мл с 1 мл раствора Dispase (2,4 U/mL) и инкубировать 1 час при 37 °C с мягким перемешиванием на ротаторе трубки (20 об/мин).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Раствор Dispase (2,4 U/mL) был свежеприготовлен непосредственно перед использованием путём растворения порошка Dispase до рабочей концентрации в ледяной DPBS.
  3. Перенесите образец в новую чашу Петри диаметром 10 см. Аккуратно отдельте белый эпителий от остальной ткани с помощью щипца.
  4. Используйте острые щипцы, чтобы аккуратно отклеить эпителиальную поверхность в виде целостного листа. Немедленно перенесите изолированный эпителиальный слой в коническую трубку объёмом 50 мл, хранящуюся на льду.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если поверхностный эпителий сложно отслаить, соскребите поверхность тупыми щипцами.
  5. Добавьте 1 мл рекомбинантного раствора для диссоциации на основе трипсина в очищенный или соскобленный образец и переместите всю смесь в коническую трубку объемом 50 мл.
  6. Оставшиеся ткани с предыдущего этапа оставьте в другой конической трубке объёмом 50 мл.
  7. Инкубировать коническую трубку объёмом 50 мл с шейным эпителием при 37 °C в течение 5 минут с мягким перемешиванием на ротаторе трубки (20 об/мин).
  8. Добавьте 10 мл свежеприготовленного ледяного блокирующего буфера (PBS с сывороткой 2% бычьей телячьей сыворотки (BCS)) в суспензию клетки, чтобы остановить ферментативную реакцию.
  9. Центрифугуйте трубку при 450 × г в течение 5 минут при 4 °C. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если в диссоциированной ткани видна кровь или ткань кажется липкой, выполните следующий шаг. В противном случае перейдите к шагу 1.13.
  10. Добавьте 1 мл 1X лизисного буфера эритроцитов и 20 мкл ДНКазы (10 U/μL) в пеллету. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, чтобы лизировать эритроциты и расщеплять липкую ДНК.
  11. Добавьте 10 мл ледяного блокирующего буфера (PBS с 2% сывороткой бычьей теляты (BCS)) в суспензию клетки, чтобы остановить ферментативную реакцию.
  12. Центрифугуйте трубку при 450 × г в течение 5 минут при 4 °C. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант.
  13. Промыйте клеточную гранулу ледяным блокирующим буфером (PBS с сывороткой 2% бычьей телячьей сыворотки (BCS)).
  14. Центрифугуйте трубку при 450 × г в течение 5 минут. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант.
  15. Суспензировать клеточную гранулу в 200-500 мкл органоидной культурной среды.
  16. Подсчитайте номер клетки с помощью гемоцитометра с раствором трипана синего. Ожидаемый выход клеток составляет от 50 000 до 500 000 клеток на один образец биопсии.

2. Посев и культивирование эктоцервикальных органоидов

  1. Ресуспензировать 500–2 000 жизнеспособных клеток в конечном объёме 50 мкл органоидной культурной среды (состав описан в списке материалов) в микроцентрифугной трубке объемом 1,5 мл. Жизнеспособность клеток оценивалась по исключению трипана синего перед посевом.
  2. Добавьте 50 мкл матрицы базальной мембраны (например, Матригель) к суспензии клетки. Аккуратно перемешайте на льду, чтобы избежать образования пузырей, и введите смесь 100 мкл внутрь вставки для клеточной культуры, помещённой в пластину на 24 лунки. Все процедуры, связанные с обработкой матрицы базальных мембран, проводились на льду или при 4 °C для предотвращения преждевременного гелирования, если не указано иное.
  3. Инкубировать пластину в течение 20-30 минут при 37 °C, пока смесь матрици базальной мембраны и клетки не затвердеет.
  4. После затвердевания смеси добавьте 400 мкл органоидной культурной среды в колодец под вставкой.
  5. Органоиды выращивайте в течение 1-2 недель, пока их средний диаметр не достигнет 150-250 мкм (максимальный диаметр около 500 мкм).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Когда органоиды достигают соответствующего размера и демонстрируют концентрический ламеллярный узор микроструктур, похожих на луковую кожуру, при необходимости рассмотрите возможность перехода.

3. Органоидная диссоциация и повторное засеяние

  1. Добавьте 1 мл раствора Dispase (2,4 U/mL) поверх вставки для клеточной культуры и аккуратно диссоциируйте матрицу базальной мембраны с помощью пипетки.
  2. Перенесите матрицу мембраны диспазы и базы в трубку объёмом 15 мл и инкубируемые в течение 1 часа при 37 °C.
  3. Добавьте 10 мл свежеприготовленного ледяного блокирующего буфера (PBS с сывороткой 2% бычьей телячьей сыворотки (BCS)) в суспензию клетки, чтобы остановить ферментативную реакцию.
  4. Центрифугуйте трубку при 450 × г в течение 5 минут при 4 °C.
  5. Удалите супернатант и снова подвесите гранулу в 200 мкл TrypLE Express.
  6. Инкубировать 5 минут при 37 °C.
  7. Добавьте 1 мл ледяного блокирующего буфера (PBS с 2% сывороткой для телята (BCS)) и аккуратно пипетьте для нейтрализации фермента.
  8. Фильтруйте суспензию через сито 40 мкм для получения отдельных ячеек.
  9. Центрифугуйте трубку при 450 × г в течение 5 минут при 4 °C. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант.
  10. Суспензировать клеточную гранулу в 200-500 мкл органоидной культурной среды.
  11. Подсчитайте номер клетки с помощью гемоцитометра с раствором трипана синего. Ожидаемый выход клеток составляет от 50 000 до 500 000 клеток на скважину для 24-луночной вставки клеточной культуры.
  12. Затем суспензировать 500–2 000 клеток в 50 мкл органоидной культурной среды (состав описан в списке материалов). Добавьте 50 мкл матрицы базальной мембраны к суспензии клетки. Аккуратно перемешивайте, избегайте образования пузырей и вводите смесь 100 мкл внутрь вставки для клеточной культуры, помещённой в пластину на 24 лунки.
  13. Инкубировать пластину в течение 20-30 минут при 37 °C, пока смесь матрици базальной мембраны и клетки не затвердеет.
  14. После полного затвердевания смеси (обычно через 20–30 минут при 37 °C) добавьте 400 мкл органоидной культурной среды в колодец под вставкой.
  15. Органоиды выращиваются в течение 1-2 недель в среде для органоидной культуры (состав описан в списке материалов) с использованием 3D-внеклеточного метода, встроенного в матрицу. Поддерживайте культуры при 37 °C, 5% CO₂ в увлажнённом инкубаторе. Заменять среду каждые 2-3 дня и следить за ростом, пока органоиды не достигнут среднего диаметра 150-250 мкм.
  16. Пропустите органоиды для следующего круга, когда они достигнут нужного размера, и при необходимости демонстрируйте концентрический ламеллярный узор микроструктур, похожих на луковую кожуру.

4. Генетическая манипуляция органоидами шейки матки человека с помощью электропорации

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол основан на использовании 4D-нуклеофектора Lonza Amaxa и комплекта P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X (#V4XP-4032).

  1. После выделения из суспензии шейных клеток человека пересадите по 100 000–200 000 клеток в каждую трубку объемом 1,5 мл.
  2. Центрифугуйте трубки при 450 × г в течение 3 минут при 4 °C. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант.
  3. Ресуспензировать клеточную гранулу в 20 мкл смеси раствора/добавки Nucleofector из комплекта P4 Primary Cell 4D-Nucleofector X. Смесь готовится путём смешивания 16,4 мкл раствора нуклеофектора и 3,6 мкл добавки на пробирку.
  4. Добавьте 300 нМ либо контрольного, либо целевого siRNA олиго в каждую трубку, содержащую ресуспендированные клетки. Аккуратно перемешивайте, пипетируйте.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Объём олиго siRNA не должен превышать 2 мкл на пробирку.
  5. Аккуратно перенесите нуклеофекционную смесь (20 мкл клеток, ресуспендированных в смеси раствора нуклеофектора + до 2 мкл сиРНК; всего 20-22 мкл) в сосуды электропорационной куветки из комплекта P4 Primary Cell 4D-нуклеофектор X.
  6. Аккуратно постукуйте по сосудам нуклеокувету, чтобы образец покрывает нижнюю часть кювета.
  7. Закройте крышку сосудов нуклеокувет и поместите её в ретейнер включённого 4D-нуклеофлекторного блока.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что сосудов нуклеокувэта в ретейнере расположено правильно.
  8. Инициировать процесс нуклеофекции. Установите импульсный код EA-125 для каждой кюветы с помощью процесса первичной ячейки P4.
  9. После завершения аккуратно удалите сосуды нуклеокувэта из ретейнера.
  10. Инкубировать сосуды нуклеокувэта при комнатной температуре в течение 10 минут, чтобы клетки стабилизировались.
  11. Откройте крышку сосудов нуклеокуветы, добавьте 180 мкл предварительно нагретой органоидной культурной среды при температуре 37 °C в каждую кювету и аккуратно перенесите суспензию клетки в новую трубку объёмом 1,5 мл для ресуспензии.
  12. Возьмите объём клеточной суспензии с 500–2 000 клеток и ресуспензируйте его в органоидной культурной среде до конечного объёма 50 мкл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не выбрасывайте оставшиеся ячейки из шага 4.12. Они будут использоваться на шаге 4.14.
  13. Культивируйте органоиды, следуя протоколу из Метода 2: Ectocervix Organoid Seeding and Cultivate. Сравните эффекты siRNA, оценивая различные факторы, включая количество, размер и структуру полученных органоидов.
  14. Оставшиеся клетки с шага 4.12 поместить в 96-положенную ультранизкоопределённую пластину и инкубировать в течение 48 часов при 37 °C.
  15. Через 48 часов перенесите клетки в трубку на 1,5 мл и центрифугуйте при 450 × г в течение 3 минут. Отбросьте супернатант.
  16. Используйте клеточную гранулу для ПЦР-экспериментов в реальном времени, чтобы подтвердить knockdown целевых генов и оценить любые изменения в экспрессии генов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все шейные ткани и клеточные суспензии человека следует рассматривать как потенциально инфекционный материал. Выполнять все процедуры, связанные с первичными человеческими образцами, в сертифицированном шкафу для биобезопасности в соответствии с практиками BSL-2 и в соответствии с институциональными этическими и биобезопасными нормами. Наденьте соответствующие средства индивидуальной защиты (лабораторный халат, перчатки и защитные глаза) и дезинфицируйте рабочие поверхности и оборудование после использования одобренным учреждением дезинфицирующим средством. Ферментативные реагенты (например, ферменты диспазы и диссоциации, такие как TrypLE Express) могут вызывать раздражение кожи и глаз, а также образовывать аэрозоли во время пипетирования; Избегайте образования аэрозолей, держите трубки закрытыми по возможности и немедленно промывайте водой в случае контакта, соблюдая процедуры воздействия учреждения и рекомендации производителя SDS. Утилизировать все биологические отходы (включая материалы, содержащие матрицу и загрязнённый пластик) в соответствии с институциональными рекомендациями. Для электропорации siRNA следуйте инструкциям производителя по электрической безопасности: убедитесь, что кюветы правильно расположены и крышка полностью закрыта перед началом импульсов, избегайте работы с устройством в мокрых перчатках или близких к разливам, осматривайте устройство и аксессуары на наличие повреждений, а также избегайте прямого контакта с электродами кюветы сразу после импульсации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

3D культура органоидов шейки матки человека

Свежеизолированные человеческие эктоцервикальные ткани диссоциировались на отдельные клетки в указанном порядке, после чего они покрывались поверх 24-колодцевых вставок и культивировались для образования шейных органоидов, как описано в данном протоколе (Рисунок 1). Человеческие шейные органоиды вырастают до 500 мкм в диаметре отдельных клеток за 2 недели (

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой рукописи мы описываем протокол установления и передачи человеческих шейных органоидов. Мы также предлагаем протокол генетической манипуляции с ними, что значительно продвигает изучение биологии и патологии шейки матки. Хотя мы оптимизировали протокол специально для шейных органоидов матки матки, наш протокол можно применить к другим органоидным системам с небольшими изменениями.

Необходимая информация для установления и оптимизации культуры органоидов в...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом Министерства здравоохранения и социального обеспечения (RS-2024-00439434 для Y. Jeong).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
P4 Primary Cell 4D-нуклеофектор X-комплектЛонзаV4XP-4032
96-ячественная ультранизкоопределённая пластина крепленияSPL39796
Клеточное сито 40 и микро; mSPL93040
50 мл конической трубки 500 в коробкуSLPSPL50050
15 мл конической трубкиСарштедт62.554.502
Трубка CryoPure 1,8 мл — белыйСарштедт72.379P
37 градусов; C, 5 % CO2  ИнкубаторЭппендорф9734IQ905476
Вставка для клеточной культурыSPL37024
Amaxa 4D-нуклеофекторЛонзаAAF-1003X
Блокирующий буфер (2% BCS в DPBS)Gibco / WelgeneBCS: 26010074; DPBS: LB001-02
Порошок Dispase IIGibco17105041
ДНКа IЭнзимомикаM059L
МатригельКорнинг356231
Буфер лизиса эритроцитовBiosesangR2015
TrypLE ExpressGibco12605
Буфер для мойки (HBSS)JBIBL003-1
Продвинутый DMEM/F12Gibco12634028
Добавка GlutaMAXGibco35050-061
Penicillin– стрептомицинBiowestL0022-100
HEPESGibco15630-080
Дополнение B27Gibco17504044
НоггинPeproTech118214
N-ацетил-l-цистеинSigmaA9165
Y-27632Технологии STEMCELL72307
FGF2PeproTech100-18B-50UG
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG
A83-01СеллекхемS7692 
ФорсколинSigmaF6886
Нейрегулин 1PeproTech100-03-50UG
NGFPeproTechAF-450-01-100UG
R-spondinСинобиологические11083-HNAS
HGFPeprotech100-39H-250ug
FGF10Peprotech100-26
петридиш 35 мм SPL10035
<рецепт сильной>органоидной среды
<стронг>Имя<Сильный>Ротакаталожный номер<сильная>концентрация
Продвинутый DMEM/F12Gibco12634028
Добавка GlutaMAXGibco35050-0611 раз
Penicillin– стрептомицинBiowestL0022-1001 раз
HEPESGibco15630-08010 мМ
Дополнение B27Gibco175040441x
без витамина A
НоггинPeproTech118214100 нг/мл
N-ацетил-l-цистеинSigmaA91651 мМ
Y-27632Технологии STEMCELL7230710 мкМ
FGF2PeproTech100-18B-50UG50 нг/мл
FGF7PeproTechAF-100-19-250UG25 нг/мл
FGF10Peprotech100-26100 нг/мл
A83-01СеллекхемS7692 500 нм
ФорсколинSigmaF688610 μ M
Нейрегулин 1PeproTech100-03-50UG50 нг/мл
NGFPeproTechAF-450-01-100UG20 нг/мл
R-spondinСинобиологические11083-HNAS100 нг/мл
HGFPeprotech100-39H-250ug25 нг/мл

Ссылки

  1. Singh, D., et al. Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020:a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative. Lancet Glob Health. 11 (2), e197-e206 (2023).
  2. Worldwide cancer data. , World Cancer Research Fund International. https://www.wcrf.org/cancer-trends/worldwide-cancer-data/ (2022).
  3. Cohen, P. A., Jhingran, A., Oaknin, A., Denny, L. Cervical cancer. Lancet. 393 (10167), 169-182 (2019).
  4. Kwak, K., Hwang, S. S. Predicted cervical cancer prevention: impact of National HPV Vaccination Program on young women in South Korea. Cancer Res Treat. 56 (3), 898-908 (2024).
  5. Kim, J., Lee, D., Son, K. B., Bae, S. The burden of cervical cancer in Korea:a population-based study. Int J Environ Res Public Health. 17 (17), 6308(2020).
  6. Chang, H. K., Seo, S. S., Myong, J. P., Yu, Y. L., Byun, S. W. Incidence and costs of cervical intraepithelial neoplasia in the Korean population. J Gynecol Oncol. 30 (3), e37(2019).
  7. Anwar, A., et al. Pregnancy outcome after electrosurgical cervical cone biopsy using Fischer cone biopsy excisor. J Matern Fetal Neonatal Med. 29 (3), 477-481 (2016).
  8. Pils, S., Eppel, W., Seemann, R., Natter, C., Ott, J. Sequential cervical length screening in pregnancies after loop excision of the transformation zone conisation: a retrospective analysis. BJOG. 121 (4), 457-462 (2014).
  9. Lee, C. J., Nam, Y., Rim, Y. A., Ju, J. H. Advanced animal replacement testing strategies using stem cell and organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 107-125 (2025).
  10. Jeong, Y. Methods to identify epithelial stem cells. Organoid. 2, e24(2022).
  11. Dutta, D., Heo, I., Clevers, H. Disease modeling in stem cell-derived 3D organoid systems. Trends Mol Med. 23 (5), 393-410 (2017).
  12. Jeong, Y., et al. Identification and genetic manipulation of human and mouse oesophageal stem cells. Gut. 65 (7), 1077-1086 (2016).
  13. Myeong, J., et al. Microbial metabolites control self-renewal and precancerous progression of human cervical stem cells. Nat Commun. 16 (1), 2327(2025).
  14. Rock, J. R., et al. Basal cells as stem cells of the mouse trachea and human airway epithelium. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 12771-12775 (2009).
  15. Rajkumar, S., et al. Loss of ubiquitin-specific protease 11 mitigates pulmonary fibrosis in human pluripotent stem cell-derived alveolar organoids. Int J Stem Cells. 18 (2), 205-213 (2025).
  16. Ko, K. P., et al. Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion. Gastroenterol. 165 (3), 613-628 (2023).
  17. Choi, Y. J., et al. YAP1 regulates esophageal stem cells' self-renewal and differentiation. Biochem Biophys Res Commun. 726, 150280(2024).
  18. Oh, B., Kim, J., Kim, N., Jeong, Y. Lung cancer organoid system to evaluate the cytotoxicity of natural killer cells. Int J Stem Cells. 18 (1), 99-106 (2025).
  19. Han, K., et al. Synergistic drug combinations for cancer identified in a CRISPR screen for pairwise genetic interactions. Nat Biotechnol. 35 (5), 463-474 (2017).
  20. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NFE2L2 mutations in the chemotherapeutic response of patients with non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 26 (1), 274-281 (2020).
  21. Zhang, S., et al. Genetically defined, syngeneic organoid platform for developing combination therapies for ovarian cancer. Cancer Discov. 11 (2), 362-383 (2021).
  22. Lohmussaar, K., et al. Patient-derived organoids model cervical tissue dynamics and viral oncogenesis in cervical cancer. Cell Stem Cell. 28 (8), 1380-1396 (2021).
  23. Chumduri, C., et al. Opposing Wnt signals regulate cervical squamocolumnar homeostasis and emergence of metaplasia. Nat Cell Biol. 23 (2), 184-197 (2021).
  24. He, X. C., et al. PTEN-deficient intestinal stem cells initiate intestinal polyposis. Nat Genet. 39 (2), 189-198 (2007).
  25. Wang, S., et al. Pten deletion leads to the expansion of a prostatic stem/progenitor cell subpopulation and tumor initiation. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1480-1485 (2006).
  26. Yanagi, S., et al. Pten controls lung morphogenesis, bronchioalveolar stem cells, and onset of lung adenocarcinomas in mice. J Clin Invest. 117 (10), 2929-2940 (2007).
  27. Jeong, Y., et al. Role of KEAP1/NRF2 and TP53 mutations in lung squamous cell carcinoma development and radiation resistance. Cancer Discov. 7 (1), 86-101 (2017).
  28. Liu, C., et al. Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression. Sci Adv. 9 (4), eadd8977(2023).
  29. Koster, S., et al. Modelling Chlamydia and HPV co-infection in patient-derived ectocervix organoids reveals distinct cellular reprogramming. Nat Commun. 13 (1), 1030(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Эктоцервикс человекаорганоидная культураизоляция единичных клетокмногослойный плоский эпителийэлектропорацияактивность стволовых клетокиммунофлуоресцентное окрашиваниескрининг лекарственных препаратов
Генерация и генетическая манипуляция шейными органоидами человека
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.