Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Вэнь Ян Дин Чуань Тан ослабляет астматическое ремоделирование дыхательных путей, ингибируя активацию фибробластов, управляемых макрофагами M2

195 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/69737

⸱

24 марта 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Traditional Chinese Medicine, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 2Department of Respiratory, The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine, 3Department of Clinical Pharmacy, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 4Department of Central Laboratory, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 5Department of Stomatology, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University, 6Department of Magnetic Resonance, The Third Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описывается исследование регуляции фиброза лёгочных фибробластов с помощью отваря Вэньян Динчуань посредством ингибирования поляризации макрофагов M2.

Аннотация

Изучать влияние Вэнь Ян Дин Чуань Тан (WYDCT) на функцию фибробластов, ремоделирование дыхательных путей при астме и основной механизм. IL-4 был использован для индуцирования поляризации M2 макрофагов RAW264.7, после чего поляризованные макрофаги были обработаны WYDCT для изучения его влияния на фибробласты лёгких мышей. Поляризированные клетки RAW264.7 подвергались различным обработкам, а затем кокультурировали с фибробластами. Оценивались уровни маркеров M1 и M2, морфология клеток и концентрация IL-6. Был проанализирован уровень белка STAT3. Жизнеспособность фибробластов, пролиферация, формирование колоний, экспрессия PCNA, а также экспрессия фибронектина, COL1A1 и α-SMA анализировались с использованием различных анализов, включая ПЦР в реальном времени, Western blot, CCK-8, Edu, иммунофлуоресценцию и анализы формирования колоний. WYDCT обратил морфологические изменения, вызванные IL-4, в клетках RAW264.7, снизил уровень маркеров M2 (Arg-1, CD206) и IL-6, а также снизил экспрессию STAT3 в клетках RAW264.7, а добавка IL-6 восстановила эффект WYDCT на маркеры M2. Кроме того, WYDCT ингибировал жизнеспособность и пролиферацию фибробластов, снижал экспрессию PCNA и снижал маркеры фиброза (фибронектин, COL1A1, α-SMA), что свидетельствует о том, что WYDCT ингибирует жизнеспособность, пролиферацию и фиброз лёгких фибробластов, подавляя поляризацию макрофагов M2, в которой сигнальный путь IL-6/STAT3 может играть ключевую роль.

Введение

Астма, также известная как бронхиальная астма, — это устойчивое воспалительное состояние дыхательныхпутей 1. Часто связано с воздействием аллергенов, низкими температурами и раздражителями как физического, так и химического характера, это состояние характеризуется инфильтрацией воспалительных клеток, обратимым сужением дыхательных путей, выделением слизи ибронхоспазмом 2. В настоящее время в мире насчитывается не менее 300 миллионов пациентов с астмой, и распространённость растет с каждым годом в3 года. В 2015 году от астмы умерло 400 000 человек, что делает её серьёзной глобальной проблемойздравоохранения 4,5. Китай также сталкивается с той же проблемой: исследования показывают уровень распространённости астмы 4,2%, на который приходится примерно 45,7 миллиона взрослых пациентов, при этом уровень контроля ниже по сравнению сразвитыми странами 6,7. Благополучие людей, пострадавших от этой болезни, сильно ухудшается, что приводит к значительным финансовым нагрузкам на семьи.

Ремоделирование дыхательных путей считается важным фактором в лечении астмы, которую трудноконтролировать 8. Поэтому лечение хронической персистирующей астмы становится ключевым моментом. Клиническая практика часто включает использование ингаляционных кортикостероидов в сочетании с бронходилататорами, которые эффективно облегчают симптомы упациентов 9. Однако эти методы лечения имеют определённые побочные эффекты и могут быть менее эффективными для улучшения симптомов у некоторых пациентов. Кроме того, астма часто возвращается после прекращения приёма лекарств. Исследования показали, что активация фибробластов лёгких связана с ремоделированием дыхательных путей в ходе прогрессированияастмы 10. После активации фибробласты лёгких проходят фенотипическую трансформацию и выделяют ключевые белки для стимулирования отложения внеклеточного матрикса (ECM) — основной патологической особенности ремоделирования дыхательных путей. В частности, фибронектин служит ранним каркасом для сборки РЭК, способствуя набору и адгезии других компонентов матрицы; COL1A1 (цепь коллагена α1 типа I) является основным структурным белком ЭКМ, и его чрезмерное накопление приводит к утолщению стенок дыхательных путей и жёсткости; α-SMA (α-актин гладкой мускулатуры) отмечает превращение фибробластов в миофибробласты с сильными сокращениями и секреторными способностями, что дополнительно ускоряет отложение ЭКМ и фиброз дыхательных путей.

IL-6 является самым важным цитоплазматическим сигнальным фактором для активации путиSTAT3 11. Повышенный уровень IL-6 активирует путь STAT3. В ткани лёгких астматической мыши экспрессия STAT3 и фосфорилированной мРНК и белка значительно увеличивается. Сигнальный путь IL-6/STAT3 является одной из целей для лечения астмы. Исследования подтвердили, что активация сигнального пути IL-6/STAT3 связана с воспалением дыхательных путей при астме, и ингибирование этого пути может снизить воспалениедыхательных путей 12,13. IL-6/STAT3 также связан с M2-поляризацией макрофагов. Зарубежные исследования показали, что экспрессия IL-6 значительно снижает активацию STAT3 на последующих этапах, что коррелирует с уменьшением количества поверхности опухоли, снижением пролиферации и снижением количества макрофагов M2 впечени 14.

Иммунные клетки, известные как макрофаги, можно классифицировать на отдельные фенотипы, а именно классическую активацию (M1) и альтернативную активацию (M2), каждый из которых выполняет уникальныефункции 15. Макрофаги M1 могут вызывать воспалительные реакции и повреждение тканей, тогда как макрофаги M2 способствуют пролиферации клеток и способствуют заживлению ран и восстановлению тканей. Исследования показали, что ремоделирование дыхательных путей при астме связано с макрофагамиM2 16. Эксперименты in vitro показали, что индукция M2-поляризации макрофагов с помощью IL-4 значительно увеличивает способность к пролиферации α-SMA-положительныхклеток 17. Ингибирование поляризации макрофагов M2 — эффективный подход для лечения ремоделирования дыхательных путей при астме.

Астма относится к категории «Сяо Бин» в традиционной китайской медицине. Патологические факторы Сяо Бина в основном связаны с мокротой. Образование мокроты происходит из-за дисбаланса между Инь и Ян в внутренностях, в сочетании с внешними факторами, такими как экзогенные патогены, питание и состояния после болезни, которые влияют на движение жидкостей организма, приводя к застою и накоплению. С продолжающимся изучением механизмов традиционной китайской медицины в лечении астмы, всё больше исследований показывают, что традиционная китайская медицина оказывает значительный эффект в снижении воспаления дыхательных путей, снижении избыточной секреции слизи и подавлении ремоделирования дыхательныхпутей 18,19. В Сяо Бин в первую очередь поражается легкое, за ним следуют селезёнка и почки. У пациентов с синдромом Сяо Бин наблюдается дефицит ци лёгких и слабая защита от внешних патогенов, что приводит к потере распространения ци в легких и долгосрочному, повторяющемуся повреждению ян ци, что приводит к дефициту легкой ян. Дефицит ян приводит к нарушению циркуляции жидкостей организма, которые конденсируются в мокроту. При длительных приступах холодная мокрота поражает ян селезёнки и почек, что приводит к выявлению дефицита легких-селезёнок-почек, дисбаланса инь и ян, чрезмерному преобладанию или недостатку конституции, а также нарушению кровообращения жидкостей в организме. Лёгкие не могут рассеивать жидкость, селезёнка не может преобразовывать воду и эссенцию, а почки не могут испарять и преобразовывать жидкости, что приводит к конденсации мокроти и образованию стазиса, который проявляется как астма. Таким образом, дефицит ян является коренной причиной синдрома Сяо Бин, а застой мокроты — его характеристикой. Wen Yang Ding Chuan Tang состоит из 12 китайских лекарственных трав, включая эпимедиум (15 г), эфедру (обработанную) (10 г), женьшень (15 г), астрагал (15 г), гинкго билоба (15 г), Flos farfarae (15 г), горькое абрикосовое ядро (15 г), Pinellia ternata (обработанная) (10 г), Schisandra chinensis (10 г), дождевого червя (10 г), персику (10 г) и лакрицу (обработанную) (10 г). Эта травяная формула взята из модифицированной формулы Дин Чуань Тан из книги «Шэ Шэн Чжун Мяо Фан» и обладает эффектом согрева ян, укреплением ци, удалением мокроти, улучшением кровообращения и облегчением кашля и астмы. Клиническая эффективность этого лечения была подтверждена, что побудило проводить экспериментальные исследования механизма решения ремоделирования дыхательных путей при астме.

В сравнении с современными фармакологическими методами лечения астмы, такими как ингаляционные кортикостероиды, β2-агонисты и моноклональные биологические препараты на основе антител, направленные на IgE или IL-5, Вэнь Ян Дин Чуань Тан (WYDCT) предлагает потенциальную многоцелевую и более безопасную терапевтическую стратегию. Обычные кортикостероиды эффективно снимают воспаление дыхательных путей, но часто сопровождаются побочными эффектами, такими как иммуносупрессия, гормональный дисбаланс и рецидив после отмены. Биологические препараты, хотя и более специфичны, дороги и ограничены определёнными фенотипами астмы. В отличие от этого, WYDCT, выведенный из теории традиционной китайской медицины о «нагревающем яне и устраняющем мокроту», оказывает комплексное влияние на регуляцию иммунного баланса, снижение воспаления дыхательных путей и подавление ремоделирования дыхательных путей, как показано в клинических и экспериментальныхисследованиях 20. Его многокомпонентный состав может одновременно модулировать поляризацию макрофагов, активацию фибробластов и высвобождение цитокинов, обеспечивая более широкое и потенциально устойчивое улучшение патологии астмы.

В этом исследовании водный экстракт Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) был приготовлен из двенадцати трав в фиксированном традиционном пропорции, концентрирован в итоговый раствор 1 г/мл (эквивалент сырого препарата) и отфильтрован для использования в клеточной культуре. Экстракт применялся в концентрациях 50, 100 и 200 мкг/мл, которые были отобраны на основе предварительных тестов жизнеспособности клеток для обеспечения нецитотоксичности при сохранении фармакологической активности. Модель in vitro включала IL-4-индуцированную M2-поляризацию макрофагов RAW264.7 и кокультурирование с фибробластами лёгких мышей (клетки L929), что позволило оценить влияние макрофагов паракрина на активацию фибробластов и реакции, связанные с фиброзом. Эти детали предоставляют воспроизводимую основу для будущих исследований, изучающих характеристики доза-ответ и механистические пути WYDCT при ремоделировании дыхательных путей.

Основываясь на вышеуказанных данных, мы предполагаем, что Вэнь Ян Дин Чуань Тан оказывает свои антимоделирующие эффекты при астме, подавляя поляризацию макрофагов по M2 и подавляя активацию фибробластов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование было проведено в соответствии с международными, национальными и институциональными рекомендациями по гуманному обращению с животными и в соответствии с соответствующим законодательством. В частности, все процедуры с участием мышей были одобрены Комитетом по этическому уходу за животными Третьей аффилированной больницы Медицинского колледжа Цицихар (AECC-2022-009). Мышей содержали в стандартных лабораторных условиях с доступом к еде и воде ad libitum, и были предприняты все усилия для минимизации страданий. Гуманные конечные точки были установлены и контролировались на протяжении всего исследования.

1. Приготовление экстракта WYDCT

12 трав Вэнь Ян Дин Чуань Тан взвешивали по традиционному пропорцию: эпимедиум (15 г), обработанная эфедра (10 г), женьшень (15 г), астрагал (15 г), гинкго билоба (15 г), фарфара (flos farfarae) (15 г), горькая абрикосовая зерна (15 г), обработанная Pinellia ternata (10 г), Schisandra chinensis (10 г), дождевой червь (10 г), персика (10 г), и обработанная лакрица (10 г).

Добавляли в десять раз больше дистиллированной воды, и смесь кипячили 30 минут. Извлечение было повторено дважды, и фильтраты были объединены. Комбинированный экстракт концентрировался под пониженным давлением до концентрации, эквивалентной сырому препарату, составляющей 1 г/мл. Экстракт фильтровали через мембрану размером 0,22 мкм, акуйлировали и хранили при температуре −20 °C. Рабочие концентрации (50, 100 и 200 мкг/мл) готовились разбавлением непосредственно перед использованием.

2. Культура клеток и поляризация M2

Клетки RAW264.7 (ATCC, США) были разморажены и засеяны с плотностью 1 × 10⁶ клеток на 10-сантиметровую чашку в 10 мл DMEM с дополнением 10% плодовой бычьей сыворотки, 100 U/mL пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки инкубировались при 37 °C в увлажнённой атмосфере с 5% CO₂ в течение 24 часов, пока не достигли слияния 80%-90%.

Затем культурная среда заменялась свежей DMEM с содержанием 20 нг/мл IL-4, а клетки инкубировали дополнительно 24 часа для индуцирования поляризации M2. После инкубации клетки дважды промывались PBS и затем обработаны экстрактом WYDCT (10 мг/мл, разбавленный до указанных конечных концентраций) в течение 24 часов. Для экспериментов с добавками IL-6 во время лечения WYDCT добавляли 50 нг/мл IL-6.

Клетки, обработанные 0,1% ДМСО, служили отрицательным контролем. Клеточная морфология была изучена под перевёрнутым микроскопом, и были получены репрезентативные изображения.

3. Изоляция и культивирование фибробластов лёгких мыши

Мышей усыпляли в соответствии с утверждёнными этическими протоколами. Доли лёгких были собраны и помещены в холодный сбалансированный соляный раствор Хэнкса. Были удалены видимые кровеносные сосуды и соединительная ткань, а легкая ткань измельчена на мелкие куски (~1мм 3).

Фрагменты ткани переваривались в трипсине 0,25% в течение 40 минут при 37 °C с мягким перемешиванием, после чего следовало второе переваривание с добавлением 0,25% трипсина в течение 30 минут. Суспензия клетки была центрифугирована при 300 × г в течение 5 минут, супернатант отброшен, а гранулу вновь суспензировали в DMEM с добавлением сыворотки из 10% плода бычьего скота.

Суспензия инкубировала 100 минут для прилипления фибробластов, после чего клетки снова центрифугировали при 300 × г в течение 5 минут для усиления очистки. Очищенные фибробласты были засеяны в соответствующие посевные пластины и инкубированы при 37 °C в увлажнённой атмосфере с содержанием 5% CO₂ до достижения примерно 80% слияния.

4. Кокультура фибробластов с кондиционированной средой

Супернатант был собран из обработанных клеток RAW264.7 и центрифугирован при 3000 × г в течение 10 минут при 4 °C. Среда для культуры фибробластов была заменена собранной макрофаг-кондиционированной средой. Фибробласты инкубировали 24 часа при 37 °C в увлажнённой атмосфере с содержанием 5% CO₂ перед проведением функциональных анализов. После инкубации фибробласты были собраны для экстракции РНК и белка для последующих анализов qRT-PCR и Western blot.

5. Жизнеспособность клеток (анализ CCK-8)

Фибробласты засеивались с плотностью 5 × 10³ клеток на скважину в пластинах с 96 колодцами, содержащих 100 мкл культурной среды. Клетки подвергались указанным процедурам в течение 24 часов. Впоследствии в каждую скважину добавляли по 10 мкл реактива CCK-8, и пластины инкубировали в течение 2 часов при 37 °C. Оптическая плотность (OD) измерялась на 450 нм с помощью считывателя микропластин. Жизнеспособность клеток рассчитывалась как (OD_treated / OD_control) × 100%. Все эксперименты проводились с использованием трёх биологических репликат.

6. Анализ формирования колоний

Клетки засеивались с плотностью 1 × 10³ ячеек на скважину в пластинах с 6 колодцами, при этом на каждом состоянии было три дублированных колодца. Пластины инкубировали в течение 10–14 дней, пока не образовались видимые колонии. Колонии были окрашены 0,1% кристаллической фиолетовой в течение 10 минут при комнатной температуре. После окрашивания колонии были вымыты и сфотографированы. Связанный краситель растворялся в 30% уксусной кислоте в течение 15 минут, а оптическая плотность измерялась на расстоянии 590 нм. Были проведены три независимых эксперимента.

7. Анализ распространения EdU

Клетки обрабатывались согласно указаниям в течение 24 часов. Впоследствии в каждую скважину добавляли по 100 мкл EdU 50 мкм, и клетки инкубировали 2 часа при 37 °C. Клетки фиксировались в 4% параформальдегиде в течение 30 минут и закалены глиценом 2 мг/мл в течение 5 минут. Клетки были проникли с добавлением 0,5% Triton X-100 в PBS, промыты и инкубировали раствором окрашивания Apollo в течение 30 минут. Ядра были контрокрашены Hoechst 33342 (1×) в течение 30 минут. Были обнаружены и изображены EdU-положительные клетки с помощью флуоресцентного микроскопа.

8. ELISA для IL-6

Супернатант ячейки RAW264.7 был центрифугирован при 3000 × г в течение 15 минут при 4 °C. Уровни IL-6 измерялись с помощью комплекта Beyotime ELISA согласно инструкциям производителя. Поглощение измерялось с помощью считывателя микропластин, а концентрации IL-6 рассчитывались на основе стандартной кривой.

9. Иммунофлуоресценция

Фибробласты фиксировались в предварительно охлаждённом ацетоне на 10 минут и три раза промывались с помощью PBS. Клетки были пермеабилизированы с помощью 0,1% тритона X-100 в течение 10 минут и заблокированы 1% BSA в PBS на 30 минут. Клетки затем инкубировали первичным антителом против PCNA (1:100) ночью при 4 °C. После трёх промывок с помощью PBS клетки инкубировали с FITC-конъюгированным вторичным антителом (1:200) в течение 1 часа при комнатной температуре. Ядра окрашивались с помощью DAPI, промывались и снимались с помощью флуоресцентного микроскопа.

10. qRT-PCR

Общая РНК экстракцировалась с помощью реагента Тризол (Бейотим, Китай) согласно протоколу производителя. Обратная транскрипция проводилась с помощью комплекта для синтеза cDNA с использованием 2 мкг РНК и случайных праймеров. ПЦР-реакции были подготовлены в объёме 20 мкл, содержащем 10 мкл SYBR Green Master Mix, 0,5 мкл каждого геноспецифического праймера (конечная концентрация 0,5 мкм) и 1 мкл кДНК-шаблона. Использовались праймеры CD16, iNOS, Arg-1, CD206, фибронектин, COL1A1, α-SMA и GAPDH (предоставлены последовательности).

Условия термического цикла включали начальную денатурацию при 95 °C в течение 5 минут, затем 40 циклов при 95 °C в течение 30 секунд, 60 °C 30 с и 72 °C в течение 30 секунд. Анализ кривой плавления проводился от 60 °C до 95 °C с интервалами 0,5 °C для проверки специфичности усиления.

Анализ данных: Относительная экспрессия была рассчитана методом 2^−ΔΔCT и нормализована до GAPDH. Праймеры были следующими: CD16 (мышь): 5′- AGGAGCTGAGGAGGGAGG-3′ и 5′- TGAGGAGAGAGGAGGG-3′, iNOS (мышь): 5′-TGCTCCCCAGGAGGGTGT-3′ и 5′-TGGTCTGGGGTAGGCTGTACGG-3′, Arg-1 (мышь): 5′- GCTGCTGCTGCTGCTGCTGCT-3′ и 5′- GGTGGCTTTTTGTGGTGTC-3′, CD206 (мышь): 5′- GGCTTCTATGAGCTGGGTGA-3′ и 5′- CTGGGCTTCTGGTGTGTT-3′, фибронектин (мышь): 5'-CGTGGTGAAGGTTTCTC-3' и 5'-GAGGTCAGTGGGGTT-3', COL1A1 (мышь): 5'-CCCTGGACACCTGGTTTT-3' и 5'-GCGGGTCACCTTCTTC-3', α-SMA (мышь): 5'-CTGGAACAGCACAGCTTCTC-3' и 5'-GGGACATAGCACACCTTCTC-3', GAPDH (мышь): 5′- TGTGTCCGTCGTGGATCTGA -3′ и 5′- CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3′.

11. Вестерн блот

Клетки лизировали с помощью буфера RIPA, содержащего ингибиторы протеаз. Концентрации белка определялись с помощью BCA-анализа. Для SDS-PAGE 60 мкг белка загружалось в каждую полосу геля с 10% полиакриламидом и разделялось при 120 В в течение 1,5–2 часа. Белки переносились на мембрану PVDF с помощью влажного переноса при 100 В в течение 1 часа. После блокировки 5% обезжиренным молоком в TBS-T в течение 1 часа при комнатной температуре мембрана была инкубирована первичными антителами (разбавление 1:1000) в течение ночи при 4 °C. После промывания с TBS-T мембрана была инкубирована с вторичными антителами, конъюгированными с HRP (разбавление 1:5000) в течение 1 часа при комнатной температуре. После дополнительных промывок белковые полоски были обнаружены с помощью реагента ECL для хемилюминесценции и сфотографированы с помощью системы хемилюминесценции. Интенсивность полос была количественно измерена с помощью программного обеспечения ImageJ, а уровень белка нормализовался до GAPDH как внутренний контроль.

12. Статистический анализ

Данные анализировались с использованием SPSS 17.0. Непрерывные переменные выражались как среднее ± стандартное отклонение (SD). Сравнения между двумя группами проводились с помощью непарного t-теста, а сравнение между несколькими группами — с помощью одностороннего ANOVA, после чего следовал пост-хок тест на LSD. p-значение менее 0,05 считалось статистически значимым.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Влияние WYDCT на M2-поляризацию макрофагов в клетках RAW264.7

Мы наблюдали морфологию клеток RAW264.7 с помощью светового микроскопа. Как показано на рисунке 1A, стимуляция IL-4 вызывала удлинение клеток, что приводило к более удлинённой, веретенообразной форме по сравнению с необработанными клетками. Кроме того, клетки, стимулираемые IL-4, демонстрировали повышенную цитоплазматическую гранулярность и улучшенную прицепность к субстрату культуры. Э...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Целью данного исследования было изучение влияния WYDCT на активность фибробластов и ремоделирование дыхательных путей при астме, а также основные механизмы. Текущие результаты показывают, что WYDCT может ингибировать M2-поляризацию макрофагов RAW264.7, что впоследствии влияет на жизнеспособность, пролиферацию и фиброз лёгких фибробластов у мышей. Кроме того, сигнальный путь IL-6/STAT3 сыграл ключевую роль в опосредовании этих эффектов.

Поляризация макрофагов —...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Ни одного.

Благодарности

Мы искренне благодарим всех партнёров, внесших вклад в этот исследовательский проект. Эта работа была поддержана Операционными расходами Университета фундаментальных научных исследований в провинции Хэйлунцзян в 2022 году (No2022-KYYWF-0827), за что мы благодарны.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Реагент гибридизации Apollo 643Guangzhou RiboBio Co., Ltd.C10371-2
Аргиназа-1 (E4U1I) мыши mAb Cell Signaling Technology, Inc.43933T
Набор для определения концентрации белка BCABeyotime Biotechnology Co., Ltd.P0012
BeyoBlot с HRP-конъюгированной мышью Anti-Rabbit Native IgG (H+L)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.A0210
Инкубатор углекислого газаShanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd.HF240
CD206/MRC1 (E6T5J) XP® Rabbit mAbCell Signaling Technology, Inc.24595T
Набор для подсчёта клеток 8Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0037
COL1A1 (E8F4L) XP Rabbit mAb Cell Signaling Technology, Inc.72026T
ДиметилсульфоксидBeyotime Biotechnology Co., Ltd.ST038-100 мл
DMEM с высоким содержанием сахараБиологическая компания Гранд-Айленд11965092
EDUBeyotime Biotechnology Co., Ltd.ST067-250 мг
FC и гамма; RIII/CD16 (F6K6G) Rabbit mAb Cell Signaling Technology, Inc.71345T
Сыворотка для плода телятаБиологическая компания Гранд-АйлендA5256701
Антитела к фибронектину/FN1  Cell Signaling Technology, Inc63779S
FITC-конъюгированный козёл против мышей IgG (H+L)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.A0568
Флуоресцентный количественный ПЦР-приборYarui Biotechnology Co., Ltd.MA-6000
Hoechst 33342 Раствор для окрашивания живых клеток (100X)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C1029
iNOS (E1W4J) Rabbit mAbCell Signaling Technology, Inc.70706SF
Инвертированный микроскопГуанчжоу Минмэй Оптоэлектроника Технолоджис Ко., Лтд.MI52-N
LRRK2 T1348N mut RAW 264.7ATCCSC-6005
Буфер проницаемости для проницаемости (с Triton X-100)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P0096-100 мл
Набор мыши IL-6 ELISABeyotime Biotechnology Co., Ltd.PI326
Фибробластные клетки лёгких мышиWuhan Procell Life Technology Co., Ltd.CP-M006
PCNA (PC10) мышь mAbCell Signaling Technology, Inc.2586T
Пенициллин-стрептомицинБиологическая компания Гранд-Айленд15140148
Рекомбинантный мышей IL-4Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P5916-5μ g
Рекомбинантный мышей IL-6Beyotime Biotechnology Co., Ltd.P5925-10μ g
Инструмент с энзимной меткой ReduRayto Life SciencesRT-6100
Stat3 (124H6) Мышь mAb Cell Signaling Technology, Inc.9139T
Скамейка SupercleanJinan BioBase Biotech Co., Ltd.BBS-SDC
SynGAP и альфа; 2 (E4Y6I) Rabbit mAb Cell Signaling Technology, Inc.56927T
Thermo Fisher Scientific Lysis и буфер экстракции RIPAThermoFisher89901
Тризол (реагент для экстракции полной РНК)Beyotime Biotechnology Co., Ltd.R0016
&бета;-Антитела к актинуCell Signaling Technology, Inc.4967S

Ссылки

  1. Chetta, A., Calzetta, L. Bronchial asthma: An update. Minerva Med. 113 (1), 1-3 (2022).
  2. Medoff, B. D., Thomas, S. Y., Luster, A. D. T cell trafficking in allergic asthma: The ins and outs. Annu Rev Immunol. 26, 205-232 (2008).
  3. Ding, S., Zhong, C. Exercise and asthma. Adv Exp Med Biol. 1228, 369-380 (2020).
  4. Bateman, E. D., et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 31 (1), 143-178 (2008).
  5. GBD Risk Factor Collaborators. Global, regional, and national comparative risk assessment of 84 behavioural, environmental and occupational, and metabolic risks or clusters of risks, 1990-2016: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016. Lancet. 390 (10100), 1345-1422 (2017).
  6. Huang, K., et al. risk factors, and management of asthma in China: A national cross-sectional study. Lancet. 394 (10196), 407-418 (2019).
  7. Bousquet, J., et al. Next-generation Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma (ARIA) guidelines for allergic rhinitis based on Grading of Recommendations Assessment, Development and Evaluation (GRADE) and real-world evidence. J Allergy Clin Immunol. 145 (1), 70-80.e3 (2020).
  8. Varricchi, G., et al. Biologics and airway remodeling in severe asthma. Allergy. 77 (12), 3538-3552 (2022).
  9. Cardet, J. C., Papi, A., Reddel, H. K. 34;As-needed" inhaled corticosteroids for patients with asthma. J Allergy Clin Immunol Pract. 11 (3), 726-734 (2023).
  10. Zhou, Z., et al. TGF-β1 promotes SCD1 expression via the PI3K-Akt-mTOR-SREBP1 signaling pathway in lung fibroblasts. Respir Res. 24 (1), 8(2023).
  11. Sun, J. Y., et al. An IL-6/STAT3/MR/FGF21 axis mediates heart-liver cross-talk after myocardial infarction. Sci Adv. 9 (14), eade4110(2023).
  12. Francisco, D., et al. Surfactant protein-A protects against IL-13-induced inflammation in asthma. J Immunol. 204 (10), 2829-2839 (2020).
  13. Xue, Y., et al. STAT3 and IL-6 contribute to corticosteroid resistance in an OVA and ozone-induced asthma model with neutrophil infiltration. Front Mol Biosci. 8, 717962(2021).
  14. Zhao, J., et al. PRMT1-dependent macrophage IL-6 production is required for alcohol-induced HCC progression. Gene Expr. 19 (2), 137-150 (2019).
  15. Landis, R. C., Quimby, K. R., Greenidge, A. R. M1/M2 macrophages in diabetic nephropathy: Nrf2/HO-1 as therapeutic targets. Curr Pharm Des. 24 (20), 2241-2249 (2018).
  16. Wang, Q., et al. Targeting M2 macrophages alleviates airway inflammation and remodeling in asthmatic mice via miR-378a-3p/GRB2 pathway. Front Mol Biosci. 8, 717969(2021).
  17. Wang, J., et al. FIZZ1 promotes airway remodeling through the PI3K/Akt signaling pathway in asthma. Exp Ther Med. 7 (5), 1265-1270 (2014).
  18. Bao, H. R., et al. Sinomenine attenuates airway inflammation and remodeling in a mouse model of asthma. Mol Med Rep. 13 (3), 2415-2422 (2016).
  19. Wei, L., et al. Effects of Shiwei Longdanhua formula on LPS-induced airway mucus hypersecretion, cough hypersensitivity, oxidative stress and pulmonary inflammation. Biomed Pharmacother. 163, 114793(2023).
  20. Wen, L., et al. Modified Dingchuan Decoction treats cough-variant asthma by suppressing lung inflammation and regulating the lung microbiota. J Ethnopharmacol. 306, 116171(2023).
  21. Shapouri-Moghaddam, A., et al. Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease. J Cell Physiol. 233 (9), 6425-6440 (2018).
  22. Fang, J., et al. TcpC inhibits M1 but promotes M2 macrophage polarization via regulation of the MAPK/NF-κB and Akt/STAT6 pathways in urinary tract infection. Cells. 11 (17), (2022).
  23. Nam, S. Y., et al. NecroX-5 ameliorates inflammation by skewing macrophages to the M2 phenotype. Int Immunopharmacol. 66, 139-145 (2019).
  24. Zhao, B., et al. Matrine suppresses lung cancer metastasis via targeting M2-like tumour-associated-macrophages polarization. Am J Cancer Res. 11 (9), 4308-4328 (2021).
  25. Braune, J., et al. IL-6 regulates M2 polarization and local proliferation of adipose tissue macrophages in obesity. J Immunol. 198 (7), 2927-2934 (2017).
  26. Zhang, B., et al. Hyperglycemia modulates M1/M2 macrophage polarization via reactive oxygen species overproduction in ligature-induced periodontitis. J Periodontal Res. 56 (5), 991-1005 (2021).
  27. Wang, Y., et al. Xuanfei Baidu Decoction protects against macrophage-induced inflammation and pulmonary fibrosis via inhibiting IL-6/STAT3 signaling pathway. J Ethnopharmacol. 283, 114701(2022).
  28. Liu, G., et al. Therapeutic targets in lung tissue remodelling and fibrosis. Pharmacol Ther. 225, 107839(2021).
  29. Ramaesh, K., Billson, F. A., Madigan, M. C. Effect of bile acids on fibroblast proliferation and viability. Eye (Lond). 12 (4), 717-722 (1998).
  30. Zhu, B., et al. Formononetin ameliorates ferroptosis-associated fibrosis in renal tubular epithelial cells and in mice with chronic kidney disease by suppressing the Smad3/ATF3/SLC7A11 signaling. Life Sci. 315, 121331(2023).
  31. Han, D., et al. Hesperidin inhibits lung fibroblast senescence via IL-6/STAT3 signaling pathway to suppress pulmonary fibrosis. Phytomedicine. 112, 154680(2023).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Макрофаги M2путь IL-6 STAT3фибробласты легкогополяризация макрофаговмаркеры фиброзавестерн-блоттингПЦР в реальном времени
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.