$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
В исследовании участвовали 30 частично адентульных пациентов, которые обращались за протезированием в Клинику стоматологических протезов Университетского стоматологического клинического центра Косово с сентября 2021 по март 2022 года. Этическое одобрение было получено институциональным ревизионным советом (Одобрение No 378/19), и все процедуры соответствовали принципам Хельсинкской декларации. Письменное информированное согласие было получено от всех участников.
Размер выборки был определен на основе предыдущих исследований, которые показывают, что 11–30 участников достаточно для получения значимых результатов по микробным и пародонтическим параметрам среди носителейРПД 21,23. При условии двухстороннего парного t-теста с альфа-уровнем 0,05, анализ мощности показал, что выборка из 28 участников обеспечит 80% мощности для выявления статистически значимой разницы такой величины. Чтобы учесть возможные отчисления, мы зарегистрировали 30 участников. Кроме того, период наблюдения в три месяца был достаточным для наблюдения за увеличением бактериальной нагрузки у этихпациентов 24.
Подходящие пациенты были впервые использовавшими протезы, имея как соседние, так и антагонистические естественные зубы. Критерии исключения включали: глубину зондирования >4 мм, иммунокомпрометированный статус (например, химиотерапия), употребление антибиотиков за последние 90 дней, интенсивное курение (>25 сигарет в день) и когнитивные нарушения, мешающие пониманию процедур РПД.
Всем участникам были получены RPD с защёлкой, изготовленные из каркаса из кобальт-хрома и акриловой смолы (полиметилметакрилат). Дизайн каждого RPD был адаптирован с учётом классификации эдентулизма, качества остаточного гребня и биомеханических особенностей.
Процедура сбора образцов
Сбор образцов проводился исключительно на зубах опор съёмных частичных протезов (RPD) между временными точками T0 и T3. Сначала участников попросили тщательно полоскать горло водой, чтобы удалить остатки пищи. Перед сбором образца выбранный зуб опоры изолировали с помощью хлопковых рулонов для поддержания сухой рабочей среды. Два стерильных бумажных наконечника (No 35; 04 сужаются) были вставлены в десневую борозду на мезиальной и дистальной сторонах щечной поверхности зуба и оставлены на месте на 1 минуту. Бумажные точки затем переносились в стерильную микротрубку с 1,5 мл обычного физиологического раствора и транспортировались в специализированную микробиологическую лабораторию. Образцы хранились при -20°C до процесса выделения ДНК.
Подготовка и амплификация бактериальной ДНК:
Для идентификации T. denticola, T. forsythia и P. gingivalis с помощью RT-PCR 26 использовался тест пародонтоскрина (Таблица материалов). Тест состоит из: подготовки ДНК; амплификацию ПЦР в реальном времени с использованием специфических реагентов (смесь для универсальной бактериальной амплификации, смесь для оппортунистической бактериальной амплификации и смесь для амплификации геномной ДНК человека); а также запись и интерпретация результатов усиления.
Экстракция ДНК проводилась с использованием набора для экстракции ДНК (Таблица материалов), следуя рекомендациям производителя для обеспечения оптимального качества ДНК. Тест использует качественный анализ ПЦР в реальном времени с использованием парафин-герметичной смеси ПЦР. Эта смесь включает внутренний контроль для проверки достоверности ПЦР-анализа и контроль забора образца (SIC) для оценки качества экстракции и подтверждения достаточного количества ДНК для точной амплификации.
ПЦР-амплификация проводилась с использованием специализированных полосок и крышек, реагенты включали раствор Taq-полимеразы, мастер-смесь под парафиновым слоем, образец ДНК и минеральное масло. Программа ПЦР следующая: (i) начальная денатурация при 80 °C в течение 30 с, (ii) денатурация при 94 °C в течение 1 минуты 30 с, (iii) 5 циклов по 30 с при 94 °C (денатурация), 15 с при 64 °C (связывание праймера и удлинение, обнаружение флуоресценции), (iv) 45 циклов по 10 с при 94 °C (денатурация), 15 с при 64°C (связывание и удлинение праймера, обнаружение флуоресценции), (v) 5 с при 94 °C (окончательная денатурация).
Флуоресцентное обнаружение проводилось на каналах Fam и Hex, за исключением лампы No5, где был обнаружен маркер (где флуоресценция была обнаружена на каналах Fam и Rox). Процесс усиления проводился с использованием термических циклеров реального времени (Таблица материалов). Программное обеспечение RealTime для прибора (версия 7.9) использовалось для автоматической регистрации, интерпретации и количественного анализа данных ПЦР-амплификации, что позволило точно оценивать нагрузку патогена.
Микробные нагрузки представлялись как «Lg (геномные эквиваленты/образцы)». Результаты были представлены в трёх диапазонах в отчёте по Parodontoscreen для каждого пациента на основе уровней бактериальной нагрузки следующим образом: P. gingivalis (нормальный <5,0; умеренный ≥5,0; тяжёлый >6,0); T. forsythia (нормальная <5,0; умеренная ≥5,0; тяжёлая >5,5); и T. denticola (нормальный <3,5; умеренный ≥3,5; тяжёлый >5,0).
Клиническое обследование
Клиническое обследование включало детальное изучение пародонтального состояния зубов абатментов и неабатментов на уровне T0 и T3. Индекс налёта (PI) оценивался с помощью зубного зонд согласно критериям Silness-Loe (0-3)27. Состояние десн оценивалось в шести точках на поверхности зуба с использованием индекса дессен (ГИ) по следующим критериям: 0, отсутствие воспаления; 1 — лёгкое воспаление; 2, воспаление с кровоизлиянием десн во время зондирования; 3, сильное воспаление с возможным спонтанным кровотечениемдесна 28.
Глубина зонда (PD) измерялась с помощью зонда Уильямса от края дессен до конца клиническойглубины 29. Подвижность зубов (ТМ) определялась бимануальной пальпацией в горизонтальном и вертикальном направлениях согласно критериюМиллера 30.
Все участники исследования получили адекватное нехирургическое пародонтологическое лечение перед клиническим осмотром, включая удаление зубного налёта и зубного камня с помощью ультразвукового масштабирования. Участников также обучали процедурам гигиены полости рта, таким как чистка зубов и чистка протезов, а также советы по снятию протезов ночью.
Статистический анализ
Данные анализировались с помощью Microsoft Excel и IBM SPSS Statistics for Windows. Описательная статистика (среднее, стандартное отклонение и диапазон) рассчитывалась для возраста, микробной нагрузки и пародонтальных индексов, включая PI, GI, PD и TM. Изменения клинических и микробиологических параметров между периодом до (T0) и 3 месяцами после введения (T3) оценивались с помощью теста Wilcoxon с знаковым рангом для парных непараметрических данных. Точный тест Фишера (моделирование Монте-Карло, двусторонняя) использовался для оценки категориальных данных, связанных с классификацией микробной нагрузки. Коэффициент корреляции ранга Спирмана (ρ) был использован для оценки ассоциаций между микробной нагрузкой и параметрами пародонта. p-значение < 0,05 считалось статистически значимым для всех анализов.