Температурная реакция скоростей разложения органического вещества в почве: строительство и применение блока с температурным градиентом

Краткое содержание

Мы вводим блок температурного градиента и подробно описываем его конструкцию и использование. Блок обеспечивает 22 отдельных температуры, линейно распределённых в пользовательском диапазоне от 0 до 90 °C. Данные, собранные с этой установки, позволяют проверять и разрабатывать новые теории температурного отклика на скорость разложения органического вещества в почве.

Аннотация

Почва — крупнейший на Земле резервуар углерода (C), содержащий почти вдвое больше C, чем атмосфера. Повышение температуры, вызванное изменением климата, может ускорить разложение органического вещества в почве (SOM), потенциально выбросая углекислый газ (_CO2) в атмосферу, что приводит к положительной обратной связи на изменение климата. Это ставит вопрос: как определить реакцию скоростей разложения SOM на краткосрочные изменения температуры? Можем ли мы использовать эти данные для механистически определённых уравнений в моделях системы Земли для климатических прогнозов? Большинство исследований на сегодняшний день сосредоточены на лабораторных инкубациях почвы при различных дискретных температурах. Однако это не приводит к появлению детальной кривой температурного отклика, которая необходима для проверки новых гипотез, навязанных последними достижениями в этой области, такими как теория макромолекулярных скоростей (MMRT). В этой статье мы представляем блок температурного градиента, модифицированный и усовершенствованный по сравнению с предыдущими работами, подробно описываем процесс его создания и подробно объясняем его использование. Блок температурного градиента представляет собой алюминиевый блок с четырьмя рядами по 22 отдельных отверстия, что позволяет одновременно инкубировать 88 микрокосмов (флаконов объёмом 60 мл). Блок охлаждается с одного конца и нагревается с другого, создавая линейное распределение температуры. Он предоставляет 22 отдельных температурных точки в пользовательском диапазоне в пределах от 0 до 90 °C. После 3,5 часа инкубации выработка_CO2 измеряется в каждом из 88 микрокосмов. Результаты показывают, что блок создаёт пользовательский температурный градиент и облегчает построение кривых температурного отклика при разложении SOM. Кроме того, собранные данные с этой системы могут использоваться для проверки и разработки новых гипотез и теорий относительно влияния изменений температуры на скорость разложения SOM — области, которая становится всё более важной в контексте изменения климата.

Введение

Повышение концентрации углекислого газа (_CO2) в атмосфере приводит к повышению температур на^Земле-1. Это явление впервые было описано в 1856 году Юнис^{Фут 2}, которая провела простой, но новаторский эксперимент. Она заполнила один баллон окружающим воздухом, другой —_CO2, и зафиксировала температуры в обоих¹. Результаты были ясны: цилиндры с более высокой концентрацией_CO2 демонстрировали более высокие температуры, демонстрируя потеплительный эффект увеличения атмосферного_CO221. Это наблюдение имеет значительные последствия для изменения климата. Сегодня ранние открытия Фута продолжают служить в основе современной климатологии, направляя исследования того, как повышение уровня_CO2 влияет на глобальное потепление и различные экосистемы.

Почвы в первом метре хранят почти вдвое больше углерода (C), чем атмосфера, играя ключевую роль в глобальном^{цикле C 3}. Ключевым процессом, влияющим на запасы почвы C, является разложение органического вещества в почве (SOM), которое определяет скорость обратного высвобождения C обратно в^{атмосферу 4,5}. Более высокие среднегодовые температуры, вызванные изменением климата, могут стимулировать разложение органического вещества в почве (SOM), ускоряя выброс_CO2 в^{атмосферу 6,7}. Это представляет собой положительный механизм обратной связи на изменение климата, особенно когда высокие температуры ускоряют потери C через разложение SOM больше, чем стимулируют фотосинтетические входы^{C 6}. Несмотря на обширные исследования по теме, масштаб и направление так называемой обратной связи между землёй, углеродом и климатом остаются предметом широкой^{дискуссии} 8,9,10,11. Эта неопределённость в первую очередь связана с фундаментальными пробелами в знаниях о температурной реакции скоростей разложения SOM. Устранение этих пробелов необходимо для уточнения моделей системы Земли и включения теоретически обоснованных представлений температурного отклика скоростей разложения SOM.

Температурная реакция скоростей разложения SOM обычно представлена значением_{Q 10} и уравнением Аррениуса. Значение Q₁₀ определяется как коэффициент, на который скорость умножается при повышении температуры на 10 °C. Несмотря на сомнения с его^{достоверностью} 12,13,14,15, _Q10 стал стандартным подходом для сравнения температурной реакции различных обработок и почв. Теория Аррениуса предполагает экспоненциальное увеличение скоростей процессов, таких как при разложении SOM, при увеличении^{температуры 16}. Однако фактическая активность ферментов обычно происходит в унимодальной форме с чётко выраженным тепловым оптимумом и снижается при более высоких^{температурах 17, 18, 19}. Уравнения на основе Аррениуса пытаются объяснить это снижение, предлагая денатурацию ферментов за пределами термического^{оптимума 6}. Однако денатурация ферментов происходит при более высоких температурах, чем обычно встречаются в почвах, что указывает на то, что ферменты достигают термического оптимума до денатурации^19,20. Более того, простое добавление второй функции к уравнению Аррениуса для учёта коллапса скоростей дыхания из-за денатурации не позволяет оценить температуру точки перегиба — температуру, при которой скорость изменения дыхания^{максимизируется 21,22}. В результате уравнения на основе Аррениуса не могут полностью отразить обычно измеряемую форму общей температурной реакции скоростей разложения SOM в диапазоне температур, обычно наблюдаемых в^{почвах 14,23}.

Для устранения ограничений теории Аррениуса было разработано множество уравнений для представления температурной чувствительности биологических процессов; однако лишь немногие из них основаны на биологической теории или были применены к^{почвам 24,25}. Среди биологически основанных подходов теория макромолекулярных скоростей (MMRT) преодолевает некоторые ограничения уравнения Аррениуса, включая термодинамические свойства биологических макромолекул, таких как^{ферменты 26}. Аналогично, теория ферментно-ассистированного Аррениуса (EAAR) объясняет температурно-зависимую роль ферментов в снижении энергии активации^{реакции 24}. Оба уравнения успешно применялись для изучения температурного отклика биохимических реакций в почвах и^{микроорганизмах 17, 24, 27, 28}. Эти уравнения дают ценные механистические представления о температурной реакции разложения SOM и основных этапах реакции. Однако их широкое распространение и параметризация часто затрудняются экспериментальными трудностями.

Как полевые, так и лабораторные исследования имеют преимущества и ограничения для понимания температурного отклика скоростей разложения SOM. Полевые эксперименты дают ценные данные о долгосрочной температурной реакции скоростей разложения SOM. Однако интерпретация измерений потока_CO2 в полевых условиях может быть сложной из-за смешивающих факторов, таких как автотрофное дыхание, вариабельность влажности и доступность^{субстрата} 29,30,31,32,33. Хотя эти взаимодействия необходимы для количественной оценки реальных процессов, такие исследования обычно сосредоточены на долгосрочных реакциях экосистем, а не на измерениях краткосрочных механистических процессов. Понимание краткосрочной температурной реакции крайне важно для параметризации уравнений, определяемых современными теориями, такими как MMRT и EAAR, и для этого лабораторные исследования играют ключевую роль. Многие лабораторные исследования обычно страдают от смешивающих эффектов истощения субстрата, которые усиливаются с инкубацией и температурными^{обработками 34, 35, 36}. Кроме того, большинство лабораторных экспериментов используют лишь несколько температурных методов^{37, 38, 39, 40}, что приводит к подгонке простых экспоненциальных уравнений или вычислению соотношений Q₁₀ вместо более сложных уравнений, которые требуют измерения скоростей при большем числе дискретных температур⁴¹. Для решения этих проблем крайне важно разработать новые экспериментальные подходы, позволяющие точно измерять скорости разложения SOM в более широком диапазоне температур, тем самым поддерживая тщательное тестирование и разработку теорий разложения SOM в связи с температурной реакцией.

В этой статье мы описываем строительство и использование блока с температурным градиентом, который не только решает текущие экспериментальные ограничения, но и предоставляет современное исследование для демонстрации краткосрочной реакции разложения SOM на температуру. Представленный здесь дизайн является адаптацией методологии, впервые разработанной Томасом и др. (1963)⁴² и позднее модифицированной Робинсоном и др. (2017)⁴¹. Основные отличия включают: 1) улучшение системы охлаждения, 2) сокращение времени работы за счёт соединения блока с анализатором_CO2 для прямого измерения_{концентраций} CO2, и 3) устранение необходимости транспортировки флаконов во время эксперимента. В то время как предыдущие^{отчеты 21, 41, 43} содержали широкое описание температурного блока, детальное проектирование, методы строительства и тестирование были минимальными, что ограничивало возможности других исследователей использовать этот подход. Здесь мы предоставляем полные детали как проектирования, так и конструкции, а также результаты многочисленных тестов, чтобы продемонстрировать правильную функциональность системы для различных образцов почвы.

Протокол

Здесь мы представляем подробное строительство и глубокое использование блока температурного градиента. Все материалы с соответствующими спецификациями можно найти в Дополнительной таблице 1 и Таблице материалов. Стоимость строительства и сборки блока температурного градиента составляла примерно €20,000 без учёта стоимости газоанализатора. Этот блок температурного градиента назван «Юнис» в честь Юнис Фут.

1. Строительство блока температурного градиента

1. См. рисунок 1 для конструкции корпуса блока с температурным градиентом.
2. Сборка алюминиевого блока
   1. Разместите и закрепите сырой алюминиевый блок на универсальном фрезерном станке. Введите измерения и расположение каждого отверстия в программное обеспечение машины. На рисунке 2 указано расположение и диаметр каждого отверстия для установки.
   2. Просверлите отверстия для грелочных стержней. На одном конце блока просверлите два отверстия диаметром 16 мм и глубиной 133 мм. Расположите эти отверстия так, чтобы их центры находились в 25 мм от верхнего края и в 36,25 мм от боковых краёв (рисунок 2).
   3. Создайте замковый узор для охлаждающего агента. На противоположном конце блока просверлите замковый узор длиной 180 мм (рисунок 3A). Убедитесь, что толщина замка составляет 16 мм, а глубина — 140 мм. Просверлите 12 дополнительных отверстий внутри замкового узора, каждое диаметром 10 мм и глубиной 140 мм. См. рисунок 3B для точного расположения и распределения этих отверстий.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Замковый узор был создан для увеличения контакта охлаждающего агента с блоком, а 12 отверстий служат для предотвращения переливания.
   4. Создайте прокладку для замкового узора. Вырежьте алюминиевую прокладку, чтобы заключить охлаждающее средство внутри блока, и разместите его поверх замкового узора. Это используется для предотвращения утечки охлаждающего агента.
   5. Просверлите отверстия для соединения с кулером. На передней и задней сторонах блока просверлите отверстия диаметром 15 мм для соединения охлаждения (рисунок 4). Разместите центр отверстий на глубине 75 мм. Убедитесь, что отверстие на передней стороне находится в 18 мм от края, а отверстие с обратной стороны — в 162 мм от края. Убедитесь, что эти два отверстия соединяют начало и конец замка.
   6. Просверлите отверстия для температурных датчиков. Просверлите 8 отверстий диаметром 3 мм и глубиной 150 мм. Эти датчики расположены в центре блока и равномерно распределены по его длине. Убедитесь, что центр первого отверстия сенсора находится в 940 мм от края, а последнее отверстие — в 205 мм от края.
   7. Просверлите отверстия для флаконов на 60 мл. Создайте 88 отверстий, каждое диаметром 28 мм и высотой 144 мм. Эти отверстия равномерно распределены по всему блоку. Центр отверстий первого и последнего флакон совпадает с центрами первого и последнего отверстий датчиков.
3. Подготовка утеплителя
   ПРИМЕЧАНИЕ: Утеплительный материал изготовлен из полиизоцианурата толщиной 40 мм.
   1. С помощью циркулярной пилы вырежьте утеплительный материал в трапециевидную форму под углом 135°. Чтобы покрыть четыре длинные стороны алюминиевого блока, изрежьте изоляционный материал в прямоугольник размером 1080 мм на 230 мм. Обрежьте каждую из четырёх сторон этого прямоугольника под углом 135°, чтобы плотно обхватить блок. Одна из этих сторон будет приклеена к крышке блока. Используйте алюминиевую ленту для защиты изоляционного материала крышки блока.
   2. Для двух коротких сторон блока вырежьте утеплительный материал в квадрат размером 230 мм на 230 мм. Снова обрежьте обе стороны квадрата под углом 135°, чтобы обеспечить правильную посадку.
4. Подключение системы охлаждения (рисунок 5)
   ПРИМЕЧАНИЕ: Система охлаждения, используемая в этой системе, компактна и энергоэффективна. Эта система охлаждения работает за счёт циркуляции естественного охлаждающего агента с охлаждающей ёмкостью до -30 °C.
   1. Прикрепите коленную муфту и загонщик шланга к блоку (рисунок 5C). Затем подключите шланг, который направляет охлаждающее средство к охладителю.
   2. Накройте шланг гибким утеплительным материалом, чтобы полностью закрыть его. Это позволит охлаждающему агенту оставаться на нужной температуре. Отрежьте гибкий утеплительный материал и плотно прикрепите его к шлангу, используя клейкий герметик для закрепления изоляции.
5. Вставьте нагревательный стержень и датчики в блок, чтобы убедиться в их подходе (рисунок 5D).
6. См. рисунок 5 для обзора описанных выше шагов.

Рисунок 1: Конструкция кузова и части блока температурного градиента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 2: Блок температурного градиента, обозначающий расположение и диаметр отверстий, используемых для различных целей. Буква «S» обозначает сенсор. Размеры указаны в миллиметрах (мм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 3: Дизайн и измерения узора замка, используемого для охлаждающего агента. (A) Измерения толщины, длины и диаметра замка, а также (B) расстояния и расположения 12 отверстий, используемых для предотвращения переполнения. Размеры указаны в миллиметрах (мм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 4: Боковой вид блока температурного градиента, указывающий глубину каждого отверстия и расположение охлаждающих соединений. Буква «S» обозначает сенсор. Размеры указаны в миллиметрах (мм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 5: Обзор конструкции блока с температурным градиентом. (A) Бурение отверстий для размещения флаконов объёмом 60 мл; (B) изготовление изоляционного материала, покрывающего алюминиевый блок; (C) соединение и корпус для охлаждающего агента; (D) вставить нагревательный стержень и датчики в блок. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

2. Изготовление корпуса из нержавеющей стали.

1. Вырежьте нержавеющую сталь для длинных сторон размерами 1080 мм x 230 мм x 230 мм. Для коротких сторон вырежьте нержавеющую сталь размерами 230 мм x 230 мм. Обязательно сделайте отверстия для охлаждающего шланга, датчиков, грелочных стержней и ручек.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Одна из длинных сторон используется как крышка блока.
2. Тепло соедините ручки, петли крышки и защитки к корпусу из нержавеющей стали.

3. Конструкция электронного блока

ПРИМЕЧАНИЕ: Только квалифицированный электрик может изготовить электронный блок. Протокол, изложенный здесь, был разработан в соответствии с законодательством Нидерландов и ЕС. Ниже приведён краткий обзор основных используемых компонентов; подробные инструкции по проводке приведены в Дополнительном файле 1.

1. Спроектировать электронную схему (рисунок 6).
2. Установите распределительные коробки.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Распределительные коробки установлены для защиты электрических компонентов и соединений от внешних объектов и повреждений.
   1. Надёжно закрепите три распределительных коробки к корпусу из нержавеющей стали с помощью крепежных винтов.
   2. Подготовленные входные точки кабеля. В главной распределительной коробке выбийте шесть отверстий для кабельных вводов. В двух меньших коробках выбейте два отверстия для кабельных вводов. В одной коробке будет двухполосный выключатель, а в другой — кабели обогревателя.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Двухсторонний выключатель используется для включения и выключения устройства, то есть подаёт питание на мини-автоматический выключатель.
   3. В главной распределительной коробке просверлите одно отверстие сверху для зелёного светодиода.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Этот светодиодный индикатор указывает, когда устройство включено, и питание доступно для каждого компонента.
   4. Вырежьте и вставьте рельс DIN-рельс в основной распределительный короб. Затем отметьте три отверстия для крепления, которые будут держать DIN-рейку. Закрепите DIN-рельс в главный распределительный ящик.
      ПРИМЕЧАНИЕ: DIN-рейка используется для облегчения монтажа электрических компонентов. Желательно разместить его примерно в центре основной распределительной коробки.
3. Установка электрических компонентов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте рисунок 7 в качестве ориентира и установите каждый электрический компонент.
   1. Найдите распределительную коробку для двухканального коммутатора. Снимите верхнюю половину выключателя, чтобы найти ту часть, которую нужно пропустить через крышку. Отметьте и просверлите отверстие в крышке коробки выключателя, которая должна плотно прилегать, и закрепите выключатель к крышке. Используйте инструкцию по креплению выключателя.
   2. В главной распределительной коробке разместите терминал PE/GND на рельсе DIN. Затем установите миниатюрный автоматический выключатель (MCB) на рельсе DIN.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Клеммы PE/GND используются в качестве торцов. MCB — это миниатюрный автоматический выключатель и основной аварийный выключатель в случае неисправности или нехватки. Когда MCB включён, он подаёт питание на блок питания переменного и постоянного тока.
   3. Поставьте два тройных терминала с подачей на рельсе DIN. Для соединения их в верхней и нижней части терминалов с использованием двух терминалов с двойным мостом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте клеммы feed-thru для соединения более двух проводов и мосты для соединения нескольких контактных клемм. Обеспечьте надёжное и надёжное соединение с помощью разъёмов феррула.
   4. Подключите блок питания постоянного тока к DIN-рейке, как показано на фото.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовался блок питания на 24 В и 2,5 А переменного тока и постоянного тока. Он использует переменный ток и преобразует его в 24 В постоянного тока для входных требований других компонентов.
   5. Поставьте термостат на DIN-рейку, как на фото. Убедитесь, что не потеряете кабельный модуль (зелёный на рисунке 7).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для контроля и контроля температуры использовался термостат. Это программное обеспечение на базе веб-браузера, которое требует IP-адреса устройства для входа в систему, установки температуры грелочных стержней и записи данных. Он был подключён к локальной сети (LAN), чтобы можно было подключаться к устройству с любого компьютера на кампусе.
   6. Разместите семь тройных терминалов подачи на DIN-рельсе, как показано на фото. Используя три пятикратных моста, соедините первые пять сквозных проходов в верхней, средней и нижней концах.
   7. Используйте два пятикратных моста, чтобы соединить последние два прохода в верхнем и нижнем проходах.
   8. Поставьте один держатель предохранителя на DIN-рейку, как показано на фото.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для защиты компонентов блока от повреждений в случае коротких замыканий и скачков напряжения использовался предохранитель мощностью 630 мА.
   9. Поставьте два одиночных терминальных соединительных блока на рельсе DIN, как показано на фото.
   10. Поставьте твердотельное реле на DIN-рейку, как показано на фото.
       ПРИМЕЧАНИЕ: Твердотельное реле используется для включения и выключения грелочных стержней.
   11. Поставьте один терминал PE/GND в качестве конечной остановки.
4. Для процедуры подключения электрических проводов см. дополнительный рисунок 1.
5. Для обзора электронного устройства см. рисунок 7.

Рисунок 6: Схема электронного блока. Цвета проводов следующие: коричневый = линия переменного тока напряжения (VAC), синий = нейтраль VAC, зелёный и жёлтый = GND (земля/земля), красный = положительный постоянный ток напряжения (VDC), чёрный = отрицательный VDC. Провода передачи данных белые, но для удобства идентификации на этом рисунке показаны зелёным цветом. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 7: Главная распределительная коробка электронного блока, прикреплённая к блоку температурного градиента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

4. Сборка блока температурного градиента

1. Используйте клейкий герметик, чтобы приклеить утеплительный материал к корпусу из нержавеющей стали. Дайте высохнуть на ночь.
2. Вставьте датчики и нагревательные стержни внутрь алюминиевого блока.
3. Поместите алюминиевый блок внутрь корпуса из нержавеющей стали, проведя кабели через соответствующие отверстия для подключения к электронному устройству.
4. Используйте петли для крепления изолированной крышки из нержавеющей стали к блоку.
5. Подключите систему охлаждения к алюминиевому блоку.
6. Разместите блок температурного градиента в лаборатории, убедившись, что все соединения надёжны и функциональны (рисунок 8A). Убедитесь, что в лаборатории установлен прочный стол длиной не менее 2 м. Убедитесь, что есть доступ к Ethernet и электричеству. Для оптимальной работы необходима контролируемая температура окружающей среды.

5. Строительство системы промыва

ПРИМЕЧАНИЕ: Промывная линия была разработана для стандартизации концентрации_CO2 в каждом флаконе в начале инкубации. См. рисунок 8B , чтобы визуализировать систему промыва с блоком температурного градиента.

1. Разрежьте гибкую трубку меньшего диаметра на 10 частей, каждая длиной 15 см. Прикрепите иглу к одному концу каждой из 10 меньших трубок.
2. Разрежьте трубу большого диаметра на цельный кусок длиной 1 м. Поставьте пробку на один конец этой трубки и подключите другой конец к проводнику воздуха в лаборатории.
3. Измерьте и отметьте большую трубку с интервалом в 5 см вдоль её длины. На каждом отмеченном интервале вводите иглу, соединённую с одной из меньших трубок.

Рисунок 8: Блок температурного градиента. (A) Блок температурного градиента, установленный в лаборатории с закрытой крышкой и (B) открытой, при этом система промывки на экране. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

6. Описание блока впрыска газоанализатора

ПРИМЕЧАНИЕ: Газоанализатор этой системы позволяет измерять концентрацию_CO2 непосредственно в стеклянных флаконах объёмом 60 мл. Диапазон для этого газоанализатора составляет от 0 до 10000 ppm с точностью 0,04 ppm при 400 ppm. Газоанализатор поставляется в комплекте для уменьшения расхода, который измеряет скорость 1,17 мл/с.

1. Модифицировать инжекторную трубку газоанализатора, добавив внешний фильтр 0,45 мкм и иглу для впрыска (рисунок 9).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Фильтр 0,45 мкм был добавлен в качестве дополнительной меры предосторожности, чтобы не попасть воды в газоанализатор. Размер иглы составляет 18 G, а размеры — 1,2 мм x 25 мм. Игла была выбрана по диаметру, чтобы минимизировать повреждения резиновых перегородок стеклянных флаконов объёмом 60 мл.
2. Подключите инжекторную трубку газоанализатора к входу прибора.
3. На конце инжекционной трубки прикрепите мужской разъём Luer-lock. Используя гибкую трубку внутреннего диаметра 1/4, закрепите замок Люра на инъекционной трубке. Затем подключите фильтр 0,45 мкм с помощью гибкой трубки, чтобы всё герметично соединить.
4. На винтовом конце фильтра 0,45 мкм используйте мужской и женский соединители для надёжного крепления иглы.

Рисунок 9: Блок впрыска газоанализатора. (A) Инжекторная трубка газоанализатора. (B) внешний фильтр 0,45 мкм и инъекционная игла. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

7. Разработка методов обработки для инкубации

1. Выберите образцы почвы.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы почвы, выбранные для этой рукописи, демонстрируют функциональность протокола и демонстрируют тип данных, которые можно собрать с помощью этой схемы.
2. Выберите температурный диапазон для блочной инкубации, который является пользовательским диапазоном от 0 °C до 90 °C.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Температурный диапазон для этой рукописи составлял от 4 °C до 60 °C. Если система используется за пределами этого диапазона, соблюдайте лабораторные протоколы безопасности при работе с высокими или минусовыми температурами.
3. Планируйте рандомизацию выборок.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Для этой рукописи образцы были рандомизированы внутри температурного блока (позиции A–D). Хотя это исследование изначально проверяло рандомизацию показаний образца после инкубации, это вызвало ошибки маркировки в процессе чтения. Поэтому приоритет был установлен в последовательном порядке измерений (от высоких к низким температурам).

8. Подготовка образцов к прединкубации

ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы ограничить сдвиги в почвенных микробных сообществах, образцы почвы следует инкубировать свежими как можно скорее после отбора. Однако, в зависимости от экспериментальных ограничений и логистики, образцы почвы могут потребовать сушки на воздухе для транспортировки и хранения перед инкубацией. В этой рукописи была стандартизирована процедура сушки на воздухе для обработки образцов перед инкубацией.

1. Просейте свежую почву с помощью решета толщиной 2 мм. Дайте просеянной почве высохнуть при 40 °C в течение 24 часов. Эта высушенная почва может храниться до дальнейшей обработки.
2. Положите образец почвы в металлическую банку и тщательно перемешайте. Распределите смешанную почву по 22 заранее маркированным стеклянным флаконам по 60 мл. С помощью бумаги для взвешивания добавьте 3 ± 0,03 г почвы в каждый флакон объёмом 60 мл.
3. С помощью пипетки регулируйте почву до желаемой водозадержимой способности (WHC) по методу воронки. После корректировки содержания воды до целевого %WHC запишите точный вес каждого флакона.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Отобранные образцы почвы для этой рукописи были скорректированы до 60% WHC.
4. Закрывайте флаконы ватой, чтобы обеспечить обмен воздухом в воздухе.
5. Предварительно инкубировать образцы в течение 10 дней в лаборатории с контролируемой температурой при 20 °C.

9. Корректировка WHC во время прединкубации

1. После 7 дней предварительной инкубации записывайте вес флаконов и регулируйте целевой WHC. Используйте пипетку, чтобы быть точным, и добавляйте воду по мере необходимости. Вычислите количество воды для добавления в каждый флакон с помощью уравнения 1.
   Добавление воды = вес_T0 (g) -_{вес T7} (g) (1)
   где вес_T0 представляет вес флакона в момент нуля, а _{вес T7} — вес флакона после 7 дней.

10. Инициализация блока температурного градиента

ПРИМЕЧАНИЕ: Система охлаждения управляется с помощью панели спереди прибора. Система отопления управляется с помощью выключателя за прибором и онлайн-интерфейса.

1. Следуйте инструкциям производителя, чтобы включить систему охлаждения. Нажмите кнопку питания один раз (пункт A, дополнительный рисунок 2). Убедитесь, что значения температуры °C и оборотов должны мигать сообщением OFF. Это означает, что система ВКЛЮЧЕНА, но в данный момент неактивна.
2. Активируйте насос, нажав кнопку OK/Pump (пункт E, дополнительный рисунок 2) и кнопку + или - (элементы G и F, дополнительный рисунок 2), чтобы установить обороты на 3500. Перед активацией системы охлаждения проверьте, что уровень жидкости горит зелёным индикатором (пункт L, дополнительный рисунок 2). Если уровень жидкости красный, это значит, что охлаждающего агента недостаточно. Свяжитесь с руководителем лаборатории или ознакомьтесь с руководством производителя.
3. Активируйте систему охлаждения, нажав Temp (пункт B, рисунок S2) и кнопки + или - (пункт D и C, дополнительный рисунок 2), чтобы установить температуру °C на -1,6 °C. Установленная точка (пункт O, дополнительный рисунок 2) должна мигать. Это указывает на то, что система охлаждения ещё не достигла установленной точки.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Установленная температура в системе охлаждения не совпадает с температурой внутри блока.
4. Включите выключатель за блоком (дополнительный рисунок 3). Убедитесь, что загорается зелёный индикатор. Это означает, что система отопления ВКЛЮЧЕНА, но регулятор температуры не активен.
5. Чтобы активировать контроль температуры системы отопления, откройте онлайн-интерфейс блока температурного градиента, введя IP-адрес 10.75.117.227 в браузере. Войдите в систему с указанным именем пользователя и паролем, чтобы увидеть температуру каждого датчика (дополнительный рисунок 4). Этот интерфейс показывает значения датчиков, которые обновляются каждые 3 секунды.
6. Настройте установленную температуру нагрева до 60,00 °C, нажав стрелки вверх/вниз . Нажмите кнопку ON , чтобы активировать систему отопления.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Блоку требуется около часа, чтобы достичь стабильного линейного температурного градиента.
7. Через десять минут после включения блока проверьте регулятор обогревателя, чтобы убедиться, что он работает. Прибор работает при разной температуре для каждого датчика.

11. Настройка газоанализатора

1. Следуя инструкции производителя, включите газоанализатор, нажав кнопку питания один раз. Подождите 45 минут, пока инструмент прогреется.
2. Подключите ПК к Wi-Fi сети газоанализатора, идентифицируемой уникальным именем хоста (TG15-XXXXX), и используйте пароль для подключения.
3. Запишите имя хоста или IP-адрес в веб-браузере и нажмите Enter , чтобы подключиться. Затем откройте раздел настроек и выберите «Уменьшить расход». Если опция уже выбрана, не меняйте ничего в программном обеспечении.

12. Подготовка к загрузке образцов

1. Корректируйте WHC в соответствии с разделом 6 протокола за 1 час до начала инкубации.
2. Проверьте регулятор обогревателя, чтобы убедиться, что температура достигла нужной за 10 минут до размещения образцов в блоке.
3. Включите окружающий проводник, который находится в лаборатории.
4. Подключите систему промывки и газоанализатор к компьютеру.

13. Собирайте заготовки

1. Пустые записи следуют следующим двум процедурам:
2. Подключите промывную линию к системе впрыска газоанализатора и напрямую зафиксируйте_CO2 (в ppm) промывающей линии.
3. Поставьте пять стеклянных флаконов по 60 мл в пустой держатель. Для каждого флакона ставьте одну линию для промыва. Через 1 минуту достаньте шнур для промывания и закройте флакон крышкой. Подождите четыре часа, прежде чем измерять_CO2 внутри флаконов.

14. Загрузка образцов в блок температурного градиента

ПРИМЕЧАНИЕ: В блоке будут позиции блоков A, B, C, D. Разместите тот же образец в той же позиции по всему блоку (рисунок 10). Например, выборка номер 175 занимает позицию блока A от 1 до 22, выборка номер 45 — в позицию блока B с 1 по 22 и так далее.

Рисунок 10: Расположение флаконов внутри блока. Буква «S» обозначает сенсор. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

1. Откройте блок, разместите компьютер и систему промыва поверх крышки блока (рисунок 11). На подвижном столе положите коробки с образцами.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Носите маску KN95, чтобы минимизировать изменчивость_CO2 в образцах. Это предотвращает загрязнение флаконов_CO2 из дыхания.
2. Подготовьте таблицу для фиксации времени закрытия (час: минута) каждого отдельного флакона и параллельно визуализируйте время газоанализатора.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Время закрытия каждого флакона используется для нормализации скорости при обработке данных.
3. Начинайте загружать образцы в блок температурного градиента. Работайте партиями по восемь образцов. Разместите незакрытые образцы внутри блока, начиная с охлаждающей части. Это означает, что первые восемь выборок — A1, B1, C1, D1, A2, B2, C2, D2.
4. Поставьте промывочный шланг в восемь флаконов и подождите 1 минуту. Снимите промывочный шланг и сразу закройте флаконы. В таблице запишите точное время каждого флакона с закрытием.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Аккуратно вставляйте промывочный шланг в каждый флакон, чтобы он не соприкасался с почвой. Это предотвращает перекрёстное загрязнение и помогает поддерживать целостность образца.
5. Пока первые восемь флаконов промываются, загрузите следующую партию образцов в блок с температурным градиентом. Например, промывочные образцы: A1, B1, C1, D1, A2, B2, C2, D2. Следующая партия образцов для добавления: A3, B3, C3, D3, A4, B4, C4, D4.
6. Поставьте промывную линию в следующую партию образцов.
7. Повторяйте эти шаги, пока блок не будет полностью загружен.
8. Закройте блок и подождите 3,5 часа с момента закрытия последнего образца.
9. Переведите газоанализатор в режим сна, нажав кнопку питания дважды за 3 секунды.
10. Выключите систему промыва с помощью красного клапана, расположенного в стене.

Рисунок 11: Установка блока с градиентом температуры нагрузки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

15. Начиная с измерений_CO2

1. Выведите газоанализатор из режима сна , нажав кнопку питания один час перед началом измерения_CO2 . Проверьте настройки анализатора, как указано в разделе 8.
2. Включите систему промыва и поставьте газоанализатор на подвижный стол (рисунок 12).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Подвижный стол должен быть достаточно высоким, чтобы система впрыска газоанализатора могла охватить все образцы.
3. Проверьте диагностический раздел газоанализатора (дополнительный рисунок 5). Убедитесь, что статус прибора зелёный для всех компонентов. Здесь есть два варианта:
   1. Если всё зелёно, начинайте анализ.
   2. Если есть красные или жёлтые компоненты, проверьте руководство по газоанализатору и, при необходимости, попросите техническую помощь. Если ошибка устранена, приступайте к измерениям_CO2 . Если ошибка не исправлена, остановите эксперимент.
4. Откройте раздел графика газоанализатора, чтобы визуализировать измерения в реальном времени. Имейте в виду, что прибор постоянно измеряет_CO2 из воздуха.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Отображение измерения задерживается на ~3-5 с.
5. Через 3,5 часа инкубации начинайте измерять образцы. Начнем с более высоких температур. Например, первыми образцами для чтения: A22, B22, C22 и D22.
   ПРИМЕЧАНИЕ: При измерении образцов при температуре <15 °C носите маску KN95. Это снизит уровень шума в данных.
6. Подключите иглу анализатора к промывающей линии между образцами. Это упростит очистку данных.
7. На верхней части экрана в программном обеспечении газоанализатора есть функция REMARK . Каждый раз, когда измеряется образец, создайте УНИКАЛЬНУЮ и ПРОСТОЕ замечание. Не забудьте нажать REMARK перед запуском каждого сэмпла.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте уникальные номера или уникальный идентификатор образца в качестве ЗАМЕЧАНИЯ. Если в ЗАМЕЧАНИИ была допущена ошибка, обратите внимание на время измерения образца. Например, записывайте поздние инъекции, было ли RENOTE завершено раньше или поздно и т.д.
8. Введите иглу в ампулу для образца объёмом 60 мл на 20 секунд. После этих секунд достань иглу из флакона.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Газоанализатор может испытывать проблемы с давлением, если иглу оставлять внутри флакона объёмом 60 мл более 38 секунд. Избегайте этого, потому что газоанализатор перестанет работать на несколько минут, пока давление не стабилизируется.
9. Следуйте следующим шагам для считывания образцов и пяти заготовок с помощью газоанализатора:
   ПРИМЕЧАНИЕ: Нажмите кнопку RENOTE в онлайн-программе газоанализатора, чтобы начать и завершить комментарий.
   1. Начинайте РЕМАРК с hh:mm:00.
   2. Введите иглу в флакон в соотношении hh:mm:10.
   3. Достань иглу из флакона на hh:mm:30.
   4. Остановить ЗАМЕЧАНИЕ на: hh:mm:45.
10. Меняйте фильтр 0,45 мкм, подключённый к стрелке анализатора каждые 16 образцов. Этот фильтр предназначен для захвата влаги и предотвращения засорения фильтров внутри анализатора.
11. Повторяйте эти шаги для всех образцов.

Рисунок 12: Поместите газоанализатор на подвижный стол. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

16. Разгрузка образцов из блока температурного градиента

1. Один за другим доставайте образцы из блока и кладите их в коробку. Следуйте одному из следующих вариантов:
   1. Разгрузка при измерении_CO2.
   2. Разгрузка после измерения последнего образца_CO2 .
      ПРИМЕЧАНИЕ: Выберите один из двух вариантов, исходя из требований к будущему анализу образцов после блочной инкубации или расписания лаборатории. Например, шаг 16.1.1 может изменить продолжительность инкубации для некоторых образцов, что может повлиять на результаты последующих анализов. Расписание работы в лаборатории (например, часы работы и закрытия) также может быть ограничивающим фактором.
2. Обрабатывайте и храните образцы для дальнейшего анализа.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В данном случае все 88 образцов были сохранены после блочной инкубации. С помощью лопатки весь образец перемещался из стеклянного флакона объёмом 60 мл в заранее маркированные пластиковые пакеты.

17. Загрузка данных

1. Чтобы извлечь данные, собранные с помощью газоанализатора, перейдите в онлайн-программное обеспечение газоанализатора. Нажмите на «Настройки » и затем нажмите значок «Скачать ».
2. Выберите конкретное время измерения первого и последнего образцов. Нажмите «Скачать».
3. Откройте новую таблицу, выберите «Открыть файл». Измените поиск файлов на «Все файлы» (*.*) и найдите документ, сохранённый на предыдущем этапе. Откроется новое окно, затем выберите «Закончить».

18. Выключение приборов

1. Выключайте газоанализатор с помощью кнопки питания или через программный интерфейс. Чтобы выключить прибор кнопкой, нажмите кнопку выключения три раза в течение 5 секунд.
2. Выключите систему охлаждения. Нажмите замок (Элемент I, Дополнительный рисунок 2) и кнопку OK/Pump (Элемент E, Дополнительный рисунок 2). Белый шум должен прекратиться. Когда белый шум полностью исчезнет, нажмите кнопку ВЫКЛЮЧЕНО.
3. Отключите систему отопления. Отключите систему управления температурным градиентом с помощью переключателя за прибором. Убедитесь, что зелёный индикатор выключен (дополнительный рисунок 3).

19. Преобразование_CO2 ppm в скорость дыхания в мкг С на кг почвы в час

1. Импортируйте данные газоанализатора в программное обеспечение постобработки (мы использовали R) и извлекайте следующие переменные: REMARK, TIME,_{CO 2} и H₂O.
2. Создайте новый столбец для извлечения интересующих секунд, конкретно от >30 с до <35 с.
3. Уберите любые наблюдения, связанные с перепадом давления. Во время эксперимента падения давления могли привести к немного более низким показателям_CO2 , чем ожидалось. Эти небольшие падения (на 3–5% ниже предыдущего или следующего значения) — это не реальные изменения CO₂, а артефакты (ошибки), вызванные падением давления. Поэтому убрать значения_CO2 , которые немного снизились (~3-5%) по сравнению с предыдущим или следующим значением_CO2 .
4. Рассчитайте среднюю концентрацию_CO2 (ppm) для оставшихся точек данных. Для каждой выборки вычтите среднее значение пяти измеренных пробелов.
5. Импортируйте лабораторные данные в программное обеспечение для постобработки (например, R) и извлекайте следующие переменные: REMARK, сухой вес почвы и время закрытия.
6. Чтобы преобразовать_CO2 ppm, измеряемые анализатором, в μg C на g почвы, примените уравнение 2:
   
   где концентрация_CO2 , измеряемая газоанализатором, выражается в ppm; Молекулярная масса_CO2 равна 44,01 г·^моль-1; P — барометрическое давление, равно 1 и выражено в атм; R — универсальная газовая постоянная, равная 0,082058, выраженная в атм·^моль-1· ^K-1; головное пространство рассчитывается на основе головного пространства 60 мл стеклянных флаконов, выраженных в мл; T — предполагаемая внутренняя температура прибора, равная 293,15 и выраженная в K; а сухая масса почвы выражается в g.
7. Затем делим на инкубационное время, выраженное в часах, и умножаем на 1000, чтобы превратить граммы в килограммы почвы.
8. Наконец, преобразуйте мкг_{CO 2} в мкг углерода с использованием молекулярных масс_{CO 2} и C. Это приведёт к скорости дыхания, выраженные в мкг С на килограмм почвы в час.
9. Сохраните или экспортируйте обработанные данные для дальнейшего анализа.

Результаты

Стабильность и распределение температуры блока
В ходе разработки этого протокола мы проверяли линейность и временную стабильность температуры внутри блока. После включения системы охлаждения и обогревателя время инициализации блока составляет примерно один час, в течение которого большинство из восьми равномерно распределенных температурных датчиков достигают целевой температуры и остаются постоянными после пересечения (рисунок 13A). После этого периода температуры, зафиксированные восемью сенсорами, подтверждают идеальное линейное распределение температуры вдоль алюминиевого блока (рисунок 13B).

Рисунок 13: Линейность и временная стабильность внутри блока температурного градиента. (A) временная стабильность температур внутри блока в течение инкубационного периода и (B) температура, зафиксированная датчиками в момент начала инкубации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Температура блока и температура почвы
Мы проверили время, необходимое для достижения температуры образца грунта внутри блока, зафиксированной восемью датчиками (рисунок 14). В этом исследовании мы измерили температуру образцов почвы в восьми разных точках внутри блока, расположенных рядом с датчиками. Датчики, расположенные внутри блока, были предварительно стабилизированы на целевой температуре. Следуя описанному выше протоколу, после стабилизации температуры блока образцы почвы помещались внутрь блока. Для этого теста мы использовали дополнительные датчики, отделённые от блока. Мы использовали 15 г почвы, чтобы сенсорный датчик полностью контактировал с почвой. Образцы почвы оставались открытыми, а температура фиксировалась каждую минуту в общей сложности 30 минут. Во время этого теста блок был слегка закрыт для минимизации колебаний температуры и максимального воспроизведения реальных условий использования (полностью закрыт). Мы обнаружили, что образцам почвы требуется примерно 12 минут, чтобы стабилизироваться на целевой температуре. Мы сочли это время стабилизации приемлемым, учитывая, что инкубации длятся минимум 3,5 часа. Кроме того, мы оценили линейность температуры почвы после 12 минут инкубации блоков. Результаты показывают, что температура почвы демонстрирует линейную зависимость, тесно совпадающую с линейностью, наблюдаемой на восьми датчиках (рисунок 15).

Рисунок 14: Зафиксированная температура почвы, инкубированная при разных температурах. Образцы A, B, C и D инкубировали в флаконах, расположенных рядом с соответствующими датчиками (см. рисунок 10 для справки). Температура почвы фиксировалась с помощью термопары, вставляемой непосредственно в образцы почвы. Конкретные температуры, контролируемые каждым датчиком, следующие: (A) Датчик 1 (S1) при 4,1 °C, (B) Датчик 2 (S2) при 12,5 °C, (C) Датчик 3 (S3) при 20,1 °C, (D) Датчик 4 (S4) при 28,1 °C, (E) Датчик 5 (S5) при 36,1 °C, (F) Датчик 6 (S6) при 43,8 °C, (G) Датчик 7 (S7) при 51,9 °C, и (H) Датчик 8 (S8) при 60 °C. После размещения образцов почвы в блок требуется примерно 12 минут, чтобы достичь нужной температуры. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 15: Сильная линейная корреляция между температурой почвы и температурой датчика. Четыре флакона с грунтом были размещены рядом с восьмью датчиками в блоках A, B, C и D. Температура почвы фиксировалась с помощью термопары, вставляемой непосредственно в образцы почвы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Взаимодействие температуры и влажности
В течение инкубационного периода необходимо оценить неизбежное взаимодействие между температурой и влажностью. Например, высокие температуры могут ускорять испарение, а низкие — вызывать конденсация воды. Для этого теста мы использовали четыре случайно выбранных образца почвы с разной текстурой (Дополнительная таблица 2). Согласно протоколу, каждый образец почвы размещался в одинаковом блочном положении при всех 22 температурах. Результаты показывают, что после среднего времени инкубации в 3,5 часа более высокие температуры приводили к большей потере влаги по сравнению с более низкими температурами, независимо от текстуры почвы (см. рисунок 16). Почвы инкубировались при 60 °C в среднем теряли 12% от общей добавленной воды, тогда как почвы, инкубировавшиеся при 4,1 °C, теряли в среднем лишь 1,88% от общей добавленной воды. Это означает, что в течение 3,5 часов блочной инкубации почвы поддерживались в оптимальных условиях влажности — от 50% до 60% водоудерживаемости, независимо от температуры инкубации^44,45 (Дополнительный рисунок 6).

Рисунок 16: Относительная потеря влажности почвы во время инкубации в четырёх различных образцах. Потеря влаги рассчитывалась относительно общего количества добавленной воды для корректировки WHC. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Измерения концентрации CO2
Для проверки точности и точности газоанализатора мы провели четыре измерения сертифицированного эталонного газа (413 ± 5 ppm CO₂), для которых анализатор зафиксировал 413,71 ± 0,60 (ppm CO₂, среднее ± SD). Это подтвердило высокую точность и точность измерений_CO2 , зафиксированных газоанализатором. Кроме того, для соответствия спецификациям производителя необходимо ежегодно проводить тест с использованием сертифицированного эталонного газа.

Учитывая задержку, вызванную линией впрыска и комплектом для уменьшения расхода в газоанализаторе, было проведено несколько тестов для определения оптимального времени измерения. Результаты показывают, что инъекционная линия вызывает задержку примерно в пять секунд. В этой системе идеальное время измерения составляет 20 с, что позволяет заполнить блок обнаружения_CO2 и достичь равновесия в течение 5 с (рисунок 17). Учитывая, что комплект для уменьшения расхода измеряет скорость 1,17 мл/с, это время измерения соответствует отбору 39% содержания воздуха в флаконах объёмом 60 мл. Кроме того, мы наблюдали, что при использовании газоанализатора в закрытой системе происходит падение давления. Это падение появляется в течение одной секунды, когда нет введения воздуха при извлечении иглы из флакона. Чтобы учесть это снижение давления при обработке данных, мы исключили значения_CO2 , которые немного ниже (от 3% до 5%) по сравнению с предыдущим или следующим.

Рисунок 17: Оптимальное время измерения для отдельного образца почвы, инкубированного при трёх разных температурах. Этот график показывает время инъекции и извлечения иглы, равновесие_CO2 за 5 секунд и падение давления, связанное с выбранным временным интервалом. Incubation_ID показывает позиции блоков (C) и флаконов (5, 10 и 15). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Тестирование полного протокола
Для оценки функциональности и воспроизводимости протокола мы инкубировали два разных образца, каждый с четырьмя техническими репликами, при 22 дискретных температурах от 4 °C до 60 °C. Эти образцы почвы были выбраны для демонстрации типа данных, полученных с помощью этой установки, и её эффективности. Конкретные характеристики образца можно найти в Дополнительной таблице 2. Блок температурного градиента надёжно фиксировал частоты дыхания почвы различных образцов почвы в каждой температурной точке, позволяя визуализировать кривую реакции температуры. Кроме того, полученные кривые температурного отклика для всех репликатов были почти идентичны, что отражено в небольшом стандартном отклонении вокруг средних скоростей дыхания при всех температурах (рисунок 18). Эти результаты демонстрируют высокую воспроизводимость и подтверждают точность протокола.

Рисунок 18: Репрезентативные скорости разложения SOM (Rs) для двух почв, каждая из которых измеряется четырьмя техническими репликами, инкубированными по полному температурному градиенту. Точки обозначают среднюю скорость дыхания при каждой температуре, а полоски ошибки — стандартное отклонение между техническими репликами. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Был проведён второй тест для демонстрации научной применимости протокола. Мы измеряли частоты дыхания почвы по полному температурному градиенту и подбирали данные с помощью модели Аррениуса или MMRT (рисунок 19). Эти образцы почвы были выбраны для демонстрации эффективности системы для контрастных кривых температурного отклика (характеристики образца приведены в дополнительной таблице 2). Результаты показывают, что данные, собранные с помощью блока температурного градиента, можно дополнительно проанализировать, проверяя различные теории температурной чувствительности скоростей разложения SOM. Однако при работе со свежей почвой в любом эксперименте возникают трудности. В течение 10-дневного прединкубационного периода мы наблюдали грибковые сообщества, растущие внутри некоторых флаконов в образцах почвы, выходящие за пределы репрезентативных образцов. Несмотря на наши усилия по аккуратному удалению грибных сообществ, не нарушая почву, этот рост повлиял на результаты некоторых образцов (рисунок 20). В результате мы решили избавиться от поражённых образцов, убрав весь образец, а не только отдельные флаконы, пострадавшие от грибкового роста.

Рисунок 19: Репрезентативные результаты и частоты дыхания (Rs) для четырёх различных образцов почвы, инкубированных в блоке с температурным градиентом. Красная линия обозначает подгонку Аррениуса (A,B), а синяя — подгонку MMRT (C,D). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 20: Модели частоты дыхания для некоторых образцов, затронутых грибковым ростом. Эти результаты являются примерами (A,B) двух загрязнённых образцов, которые были исключены из дальнейшего анализа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Дополнительный рисунок 1: Базовая схема NO/NC . C» также может быть помечена как «COM» для общего языка. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный рисунок 2: Панель управления системой охлаждения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный рисунок 3: Системный выключатель и индикатор света. (A) Переключатель системы управления температурным градиентным блоком; и (B) зелёный индикатор, указывающий на включение датчиков и системы отопления. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный рисунок 4: Управление температурным градиентом блока нагревателя в онлайн-интерфейсе. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный рисунок 5: Диагностический раздел газоанализатора. Всё зелёное означает, что прибор готов к измерениям. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный рисунок 6: Водоудержимость почв, инкубируемых при разных температурах, измерения зафиксированы после 3,5 часа блочной инкубации. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительный файл 1: Подробные инструкции по электропроводке. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительная таблица 1: Список материалов с требуемым количеством. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Дополнительная таблица 2: характеристики образцов почвы, используемых для теста на потерю влаги, и полного протокола. Эти образцы были выбраны для демонстрации функциональности протокола. Классификация текстуры соответствует системе USDA, где крупные, глинистые, иловые и песчаные выражения выражаются в процентах. OC относится к содержанию органического углерода (g C·^kg-1 почва), pH измерялся в воде, а_{CaCO 3} — содержание карбоната кальция (g·^kg-1 почва). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.

Обсуждение

Использование блока температурного градиента для измерения краткосрочной температурной реакции скоростей разложения SOM представляет собой сложности, особенно при определении частот дыхания при низких температурах. Низкие температуры могут напрямую подавлять каталитическую активность внутриклеточных и внеклеточных^{ферментов 46,47}. Поэтому время инкубации должно быть достаточно долгим, чтобы низкие частоты дыхания в нижней температуре позволили накоплению_CO2 в стеклянных флаконах попасть в зону обнаружения газоанализатора. В этой экспериментальной установке минимальная температура составляла 4,1 °C; Эти образцы первыми загружались в блок и последними анализировали, что давало дополнительное время для инкубации. Было установлено, что ~3,5 часа времени инкубации в блоках достаточно для выявления изменений концентрации_CO2 в образцах. Эта длина инкубации, вероятно, зависит от типа почвы и особенно от содержания органического вещества. Например, песчаные почвы с низким содержанием органического вещества могут требовать более длительного времени инкубации, чем богатые углеродом. Однако в тестах здесь было установлено, что инкубационное время в 3,5 часа в целом достаточно для большинства типов почв и уровней органического содержания.

Помимо оптимизации времени инкубации для обнаружения_CO2 при низких температурах, не менее важно минимизировать потерю влаги на верхнем пределе температурного градиента. Влажность почвы играет ключевую роль в транспортировке, диффузии и растворении субстратов в микробные^{сообщества 48}. Например, влажность почвы может ограничивать скорость дыхания, ограничивая диффузию субстрата при низком уровне влаги и снижая доступность кислорода при^{высоких уровнях влажности 45,49}. Поэтому минимизация потерь влаги при высоких температурах важна для предотвращения ограничения микробного доступа к субстратам. Хотя флаконы в этом протоколе были полностью герметичны, вода конденсировала на крышках и внутренних стенках флаконов. Эта конденсация рассматривалась как потеря влаги из почвы. Таким образом, мы сократили время инкубации с 4 ч, как в Robinson et al. 2017⁴¹, до 3,5 часа. Хотя поддерживать полностью постоянный уровень влажности при всех температурных обработках было невозможно, почвы поддерживали оптимальный уровень влажности в течение 3,5-часового инкубационного периода. Даже при высоких температурах WHC почвы оставался выше 50%, что гарантировало, что доступность воды не ограничивала доступ микробиологов к^{субстратам 44,45}.

Ещё одним важным фактором является температурный диапазон инкубации. Хотя система охлаждения может достигать температур до -30 °C, а система отопления — до 320 °C, теплоизоляционный материал имеет температурную устойчивость от -183 °C до 148 °C. Стеклянные флаконы, используемые в этой установке, выдерживают температуру 500 °C. Хотя эти диапазоны широки, инкубация образцов выше 100 °C представляет собой угрозу безопасности для оператора. Чтобы предотвратить перегрев, был установлен тепловой резистор, обеспечивающий автоматическое отключение системы отопления, если алюминиевый блок достигает 90 °C. Включение этого теплового резистора имеет решающее значение из-за наблюдаемого пересечения инициализации (рисунок 13A). Если температура при инициализации превысит 90 °C, система будет отключена. Учитывая эти ограничения, мы рекомендуем использовать эту систему до максимальной температуры 60 °C для безопасной и надёжной работы. Дополнительные испытания необходимы для инкубации образцов почвы при температуре ниже 0 °C, чтобы обеспечить надёжное обнаружение_CO2 , поскольку конденсат и соответствующая вариабельность влажности могут повлиять на измерения при температурах ниже нуля. Для этого протокола мы выбрали более низкий температурный предел в 4 °C, при котором конденсация не наблюдалась. Если система используется в более широких температурных диапазонах, мы рекомендуем внедрить дополнительные рекомендации по тепловой безопасности.

Ещё одним возможным ограничением этого метода является то, что относительно короткий инкубационный период не позволяет микробным сообществам адаптироваться к изменениям температуры. Температурная реакция почв, подвергающихся устойчивому потеплению, была предметом многих исследований, особенно с целью проверки теорий микробной^{адаптации 27, 43, 47, 50, 51}. Микробная адаптация была предложена для объяснения убывающего эффекта экспериментального потепления со временем на частоты дыхания^{почвы 47}. Однако представленная здесь методология была разработана для измерения краткосрочной температурной реакции скоростей разложения SOM. Хотя микробная адаптация вряд ли произойдёт за короткие промежутки^{времени 47}, недавнее исследование использовало аналогичную методологию для количественной оценки скорости микробной адаптации путём инкубации почв по геотермальному градиенту. В этом исследовании MMRT был приспособлен для оценки ключевых параметров, включая оптимальные температуры и точки перегиба. Сравнивая эти параметры по почвам по геотермальному градиенту, результаты показывают, что скорость микробной адаптации значительно ниже скорости^{потепления 52}. Это исследование подчёркивает важность понимания всей кривой температурного отклика, особенно фиксации температурных оптимумов и точек перегина биологических почвенных процессов (рисунок 19C,D). Учитывая эти данные, мы рекомендуем брать пробы микробных сообществ в нескольких температурных точках во время инкубации блока, чтобы оценить, как состав и функции микробных сообществ коррелируют с частотами дыхания и параметрами чувствительности к температуре.

Блок температурного градиента, описанный в этой статье, обладает значительными преимуществами по сравнению с традиционными методологиями. Одним из главных преимуществ является то, что он позволяет исследователям эффективно и точно измерять скорость разложения SOM при 22 отдельных температурах при небольшом объёме почвы. Это является методологическим улучшением по сравнению с инкубацией образцов почвы при нескольких отдельных температурах, что заставляет исследователей применять коэффициент температуры Q₁₀ — метод, который многие исследования оспаривали^{12, 13 и 15}. Ещё одним важным преимуществом является то, что такая система собирает данные, чётко отражающие форму и крутость кривой температурного отклика. Количество отдельных температурных обработок вдоль широкого температурного градиента позволяет определить температуру точки перегиба и оптимальные биологические процессы, сравнивая методы обработок. Примеры, представленные в этой рукописи, показывают два различных закономерности (рисунок 19A,B против рисунок 19C,D), которые исследователи могут дополнительно проанализировать, используя различные теории температурной чувствительности. Некоторые примеры поддерживают теорию Аррениуса, при которой скорость реакций экспоненциально увеличивается с температурой (рисунок 19A,B). В отличие от этого, другие примеры совпадают с теорией MMRT, показывая унимодальный отклик с чётким температурным оптимумом (рисунок 19C,D). Эти два различных паттерна свидетельствуют о том, что представленный протокол инкубации с температурным блоком способен воспроизводить оба типа кривых отклика, которые могут использоваться для проверки теорий температурной чувствительности скоростей разложения SOM, тем самым углубляя наше понимание термодинамики, биологии и химии.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
630 мА стеклянный предохранитель	RS	563-637	https://uk.rs-online.com/web /p/cartridge-fuses/0563637?gb=s
Клейкий герметик	Innotec	01.2451.0000	https://www.innotec.nl /producten/adheseal
Алюминиевый блок и bbsp;	метаалкетен	96082150.1	https://www.metaalketen .com/алюминий/
Алюминиевая лента	Манутан	A159435	https://www.manutan.nl/nl/mnl/aluminiumtape -met-schutlaag-50565-50-m-x-50-mm-tesa -a159435?shoppingab=true& gad_source= 1& gclid=CjwKCAjw74e1Bh BnEiwAbqOAjE5Tw3-r3xiW 9FWALDZMlVUWpqJpQQ R_zwwXR8_R6Sb1Ce_8v x96jxoCtx4QAvD_BwE
Чёрная проволока	RS	361-787	https://nl.rs-online.com/web /p/hook-up-wire/0361787
Синяя проволока	RS	724-4392	https://nl.rs-online.com/web /p/hook-up-wire/7244392
Коричневая проволока	RS	724-4395	https://nl.rs-online.com/web /p/hook-up-wire/7244395
Кабельный ввод	RS	807-9786	https://nl.rs-online.com/web/p /cable-glands/8079786?cm_ mmc=NL-PLA-DS3A-_-goog le-_-CSS_NL_EN_Cables_% 26_Wires_Whoop-_-(NL:Who op!)+Кабель+Железы-_-807978 6& Matchtype=& AUD-8271861 83926:PLA-339598489905& gcli d=Cj0KCQiAw8OeBhCeARIsA GxWtUyscrqjF3FwA6j2jqUyeg_ s70tOXBRuYRF90pwubv3Po8v sbZSJhV4aAq84EALw_wcB& gc lsrc=aw.ds
Циркулярная пила	Ryobitools	RWSL1801M	https://nl.ryobitools.eu/elektrisch-g Ereedschap/ZaagMachines/Cirkelz Agen/RWSL1801/RWSL1801M/?gad_so URCE=1& gclid=Cj0KCQjw2ou2BhCC ARIsANAwM2Easx4PAZzvVYvFFUD ZKemTdqNDXsde_NDPSB8FAlGu7 8Hzy2j3TuoaAhTjEALw_wcB
Закрытия	Крамп	HS491976	https://www.kramp.com/shop-nl/nl/p /verstelbare-haakvergrendeling-118- 128-тип.3--HS491976
Охлаждающее и естественное охлаждающее средство	Dijkstra Vereenigde	L035004186	https://www.laboratorium-apparatuur .nl/ika-rc2-green-basic-koelthermo staat-30-c-bad-volume-4-liter-l035004186
DIN Rail	RS	648-5722	https://nl.rs-online.com/web/p/din-ra ils/6485722?cm_mmc=NL-PLA-DS 3A-_-google-_-CSS_NL_NL_Pmax _Test-_--_-6485722& Matchtype=& & g ad_source=1& gclid=CjwKCAjw8f u1BhBsEiwAwDrsjOqGDs92gjrJHkp SsYmOiS0OK6tC9U_fMHEhlmvu7r SbNp8VnmuDERoCC0UQAvD_ BwE& gclsrc=aw.ds
Двойные мосты	RS	803-7530	https://nl.rs-online.com/web/p/din-rail -terminal-accessories/8037530?sear chId=11c9702f-3312-4bb0-a826-e9d 50bd91ee1& gb=s
Ethernet-кабель	RS	657-2090	https://nl.rs-online.com/web/p/ Ethernet-кабель/6572090
Маска для лица	KN95	NA	https://www.bol.com/nl/nl/p/kn95- Disposable-face-mask-ffp2-x-1-mask s-kn95-wegwerp-gezichtsmasker-ffp 2-x-1mondkapjes/930000000131403 0/? Referrer=NLGOOFS& utm_source =Google& utm_medium=free_shopping
Женский разъём	Косина	17642	https://www.qosina.com/female- to-female-luer-lock-connector-17642
Фильтр 0.45 и микро; m	Уотман	10462650	https://us.vwr.com/store/product/1394 3097/whatmantm-puradisc-aqua-30-m m-syringe-filter-0-45-m-whatman- products-cytiva
Гибкая изоляция (шланг)	Цельсис	4600000198	https://www.celsisbv.nl/k-flex-plaati solatie-op-rol-st-10e-1x10mtr-10mm .-bl-s3-d0/4600000198?gad_source =1& gclid=Cj0KCQjw8MG1BhCoARI sAHxSiQknvLK3RcqgqXwR1Ma7V PznSz8IasKUGvLo0SySzLiff2o_kK Vjip0aAtATEALw_wcB
Гибкая трубка	Avantor	MFLX06491-14	https://www.avantorsciences.com /de/en/product/38670173/bev-a- line-v-transfer-pump-tubing
Комплект для уменьшения расхода	LICOR	7800-113	https://www.licor.com/support /Анализаторы следовых газов/темы/re duced-flow-rate-kit-7800-113.html
Клемба держателя предохранителей	Elektramat	401144228	https://nl.mouser.com/ProductD etail/Phoenix-Contact/3270200? qs=zdVlZaK%252BC241RFTPi Xj4mA%3D%3D& mgh=1& utm_i d=20328035028& gad_source=1 & gclid=CjwKCAjw8fu1BhBsEiwA wDrsjBg9elAMYS9bWJ1Bd086J 7fGBWvcRWZ51okdr2qJgOlOTd BdrUZ_rBoCvuUQAvD_BwE
Газоанализатор	LICOR	LI-7815	https://www.licor.com/env/ продукты/следовой газ/LI-7815
Стеклянные флаконы с крышками 60 мл	Cole-Parmer	GZ-99535-25	https://www.coleparmer.com/i/ Cole-Parmer-Precleaned-EPA- флаконы-прозрачно-стекло-60-мл-72-cs/9953525
Зелёный/жёлтый провод	RS	721-0636	https://nl.rs-online.com/web /p/hook-up-wire/7210636
Ручки	RS	456-539	https://nl.rs-online.com/web/p/ ручки ящика-шкаф-хан<бр/> DLES/0456539
Грелочные стержни	RS	860-6984	https://www.reichelt.com/nl/nl/shop /product/verwarmingspatroon_hotr od_20_0x250_mm_1250_w_230_ v_-317248? PROVID=2809& gad_s ource=1& gad_campaignid=22415 164764& gbraid=0AAAAADwnxtY mY6n2NPja4HF_ftn_kJY-U& gcli d=CjwKCAjwiNXFBhBKEiwAPSa PCaYMjfVMKQazvkQk_deE2koc XA9SZ_ltbPIefniuRsmzBwN_oQ rfQhoCegUQAvD_BwE
Петли	RS	448-1497	https://benl.rs-online.com/ web/p/hinges/4481497
Шланг	Вильдкамп	750568	https://www.slangenboer.nl/wat Erslang-cristal-al-961?channabl e=41cdeE736B7500534230313 0353131333924& bg_source=ga & bg_campaign=21584331548& bg_kw=pla-293946777986-mi-1 09646330-pi-SB01051139-ppi- 293946777986& bg_source_id= 709628610149& gad_source=1 & gad_campaignid=215843315 48& gbraid=0AAAAADegGXwz 91MJFzGxBRxjCSRew10eG& gclid=CjwKCAjwiNXFBhBKEiw APSaPCZNCdBEfvnV2pYYPeV SQaiG_UKP0q_eknv0lC_N_0Y WIIZQvze8TEhoCzPUQAvD_BwE
Шип шланга	Вильдкамп	11000357	https://www.wildkamp.nl/pro DUCT/Slangtule-RVS-316L-Lost-W AX-Buitendraad-X-Slangtule-BS P-X-10-0-mm/11000357
Инъекционная игла	Меркала	303262	https://www.merkala.nl/bd-mic rolance-injectienaalden-18g-ro ze-1-2x40mm-100-stuks.html? gclid=CjwKCAjw_Na1BhAlEiw AM-dm7DrC9mGkmpNN8krYe CmkvpEeSv4CuH3I2Px71KJxY YSm-vjVu2LclRoCwuwQAvD_BwE
Инжекционный газовый анализатор 1/4"	VWR	MFLX06491-12	https://us.vwr.com/store/pr ODUCT/39537334/BEV-A-line- V-трансфер-насос-трубка
Изоляционный материал	Technische Unie	3603842	https://www.technischeunie. nl/product/prd1899911190
Коленные муфты	Крамп	MMI9006K	https://www.kramp.com/shop-nl/ NL/P/HAAKSE-KOPPELING-INSTELBAA R-BU-BU-3-8-BSP-MMI9006K
Трубка большого диаметра 3/8"	Avantor	39213360	https://www.avantorsciences.co m/us/en/product/39213360/mast erflex-transfer-tubing-flexible- vinyl-avantor
Винты M6, шестиугольники	RS	281-120	https://nl.rs-online.com/web/p/so cket-screws/0281120?srsltid=Afm BOorVGq-ZyA2yrJG1kU7SHGiZ EblaRz0nDmX7MwhzIRjcc6P4YIYE
Главная распределительная коробка	RS	Проверь Диа.	https://nl.rs-online.com/w eb/p/general-purpose-enclo sures/2896320?gb=s
Мужской разъём	Косина	12090	https://www.qosina.com/male- to-male-luer-lock-connector-12090
Мужчина Люр	Вальтернедикал	BPC04M	https://www.waltersmedical.co. uk/product/nibp-connector-male-luer-slip/
MCB - Siemens SENTRON	RS	3RF2320-1AA02	https://nl.rs-online.com/we b/p/mcbs/2383188?gb=s
PE/DND feedtrhough	RS	687-9411	https://uk.rs-online.com/we b/p/din-rail-terminal-blocks/ 6879411?searchId=c9a9c1 b1-3def-40d0-8b14-b792f8269615& gb=s
Индикатор питания.	RS	909-2437	https://uk.rs-online.com/ web/p/pilot-lights/9092437?gb=s
Источник питания	Антратек	X-2902992	https://nl.rs-online.com/web/ p/din-rail-power-supplies/054 0731?srsltid=AfmBOoqMPIO Av7bZd1Qu_Acy3KMFR0-x OD_Hkw3NeQCYyzKJLzEGXzxQ
Проводные мосты Quintople	RS	803-6713	https://uk.rs-online.com/web /p/din-rail-terminal-blocks/80 36713?searchId=7de6627a- 3634-42ed-a600-2e3ce8974fe7& gb=s
Красная проволока	RS	361-822	https://nl.rs-online.com/web /p/hook-up-wire/0361822
Кольцевая клемба 2,5 мм²	RS	534-569	https://uk.rs-online.com/ web/p/ring-terminals/0534569
Датчики	Антратек	X-DTS-S3C	https://www.antratek.nl/dig ITAL-температурный датчик-1M-кабель
Септа Красный Бутил	HomeGreen	A255	https://www.homegreen.nl/la b-benodigdheden/septa-rood -butyl-20-mm?srsltid=AfmBO ooStonU5v9Q9j7i_RgQMJ9F m6ZVbPbIRU0cD1_47-BEVmb1r5I5
Однопроводная подача	Elektramat	401167865	https://www.elektramat.nl/ catalogsearch/result/?q=401167865
Однофазный силовой кабель	RS	626-6694	https://nl.rs-online.com/w eb/p/power-cords/6266694?gb=s
Однофазный провод	RS	775-6123	https://uk.rs-online.com/web /p/power-cable/7756123?gb=s
Маленькая распределительная коробка	RS	498-5387	https://nl.rs-online.com/web/p /универсальные корпусы/4985387
Твердотельный ретранслятор	RS	467-4762	https://nl.rs-online.com/web/p /твердотельные реле/4674762
Спиральное сверло и bbsp;	Эрикс	10471300	https://shop.eriks.nl/nl/gereed schappen-verspanende-geree dschappen-boren-hss-en-hsse -boren-cilindrische-schacht/spir aalboor-din340-hsse-geslepen- type-ti-5-80mm-12592599/?srslt id=AfmBOoopMLgX1mtyuUxkU KU7jW4fYY1bY5wSTvSGQUkO zTc6E2wdxUZQ
Корпус и крышка из нержавеющей стали	247 Tailore сталь		https://247tailorsteel.com/nl/?ut m_term=24%207%20steel& utm _campaign=B+-+NL+-+247tailo rsteel+-+NL+-+Doelvertonings процент+%3E+Conv.+Waa rde+met+Doel-ROAS& utm_so urce=adwords& utm_medium= PPC& hsa_acc=2007690635& h sa_cam=783787418& hsa_grp =118504886580& hsa_ad=67 1662182959& hsa_src=g& has _tgt=KWD-374862287021& hs a_kw=24%207%20steel& has _mt=p& hsa_net=adwords& has _ver=3& gad_source=1& gclid= Cj0KCQjw8MG1BhCoARIsAHx SiQnhmktBk_3c_wobSJobrTVp4 _nqiW26Zt7XzSkHdK-htW8medy NCcQaAjbrEALw_wcB
Коммутатор с двусторонним движением	RS	746-9336	https://nl.rs-online.com/web/p /кулачок-переключатель-ручки/7469336
Терминальный мост	Elektramat	401043503	https://www.elektramat.nl/phoenix-c ontact-doorverbindingsbrug-voor-rijg klem-2-polig-5-2-mm-rood-fbs-2-5/?c hannable=0141ac6964003330383936 EC& utm_source=Google-Surfaces& UTM _medium=Organic& bg_source=ga& bg_ кампания=19011971421& bg_kw=-mi-9 214030-pi-401043503-ppi-& bg_source _id=& gad_source=1& gclid=CjwKCAjw 8fu1BhBsEiwAwDrsjE2kRcDZUHPupfy haLoTzWLqM9v8HKaiI67st4UOmUXIN 9OaI25ALRoCvmUQAvD_BwE
Термостат DAQ	Антратек	X-300-I	Температура; Бервачун и Бервачун Термостат (+X-DTS-S3C) von ControlByWeb (antratek.nl)
Универсальный фрезерный станок	Mach4Metal	MACH-ID 7580	https://mach4metal.com/en /фрезерные станки/ЧПУ/FEHLM ANN-Picomax-P54-2
Проводник Wago 3 проводник	RS	803-6713	https://nl.rs-online.com/web/ p/din-rail-terminal-blocks/80 36713?cm_mmc=NL-PLA-D S3A-_-google-_-CSS_NL_N L_Pmax_0525-_--_-803671 3& Matchtype=& & gclsrc=aw.d s& gad_source=1& gad_campa ignid=22555696009& gbraid=0 AAAAADkeWNNXeREaDmJ5n yYqYMqp-c7A6& gclid=CjwKCAj wtfvEBhAmEiwA-DsKjilXxL8uO 4Jo6XyDesHGaQkoz6Ggi4ATI6 FUInWV9TxmIX519DGIZBoCh9 YQAvD_BwE
Разъём Wago	RS	883-7557	https://uk.rs-online.com/ web/p/standard-terminal-b locks/8837557?gb=s
Втулки с проволочными концами (100 штук)	Elektramat	401173609	https://www.elektramat.nl/solar -adereindhuls-geisoleerd-2-5mm 2-hulslengte-8mm-blauw-per-100 -stuks-1505145/?channable=014 1ac69640034303a4& utm_source =Google-Surfaces& utm_medium =органически& bg_source=ga& bg_c ampaign=17673967332& bg_kw= -mi-9214030-pi-401173609-ppi-& bg _source_id=& gad_source=1& gclid= CjwKCAjw8fu1BhBsEiwAwDrsjNms VYTNZ5TuXEHtsF34hcY-T5kLFnhi zir1fUsR3UYcG9bxmugqJRoCp_Y QAvD_BwE