Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Интраназальная доставка мРНК-полиплексов с помощью аэрозолей для расщепления Рэлея: метод in vitro для назательного отложения и функционального тестирования

748 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70000

⸱

20 января 2026 г.

 ,  , 
1GKT School of Medical Education, Faculty of Life Sciences and Medicine, King's College London, 2Genetics, Faculty of Life Sciences and Medicine, King's College London, 3Institute of Pharmaceutical Science, King's College London

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол представляет распад Рэлея как мягкий процесс аэрозолизации невирусных мРНК-векторов. Региональное осаждение для аэрозольных мРНК-векторов оценивается с помощью модели Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI). Экспрессия зелёного флуоресцентного белка (GFP) в клетках лёгких человека отражает поддержание физико-химических и биологических функций постаэрозольных мРНК-векторов.

Аннотация

Интраназальная доставка мРНК-терапевтических средств — это перспективная стратегия вакцинации и лечения респираторных заболеваний, обеспечивающая прямую иммунную активацию в месте попадания патогена. Однако традиционные методы аэрозолизации (например, ультразвуковые или небулайзеры высокого давления) разрушают невирусные мРНК-векторы из-за чрезмерных сдвиговых сил, что приводит к потере структурной целостности и биологической активности мРНК. Для плавной аэрозолизации мРНК-векторов полиэтиленимина (ПЭИ) в равномерные капли использовался назальный атомайзер для распада Рэлея. МРНК, кодирующая зелёный флуоресцентный белок (GFP), была сформулирована в катионные полиплексы и охарактеризовала период до и после аэрозолизации. Процесс разрушения Рэлея образует непрерывную микрострую капель с минимальным сдвигом, сохраняя тем самым физико-химические свойства наночастиц. Наблюдались стабильные размеры частиц, низкий индекс полидисперсности и стабильный зета-потенциал до и после аэрозолизации, что подтверждало хорошо сохранение физико-химических свойств мРНК-полиплексов благодаря расщеплению Рэлея для аэрозолизации. Используя модель Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI) носовых дыхательных путей, были доставлены аэрозоли PEI-mRNA. Аэрозольные мРНК в основном отлагались в носовых раковинах. Незначительные фракции были обнаружены в носоглотке или сечениях, эквивалентных лёгким. Кроме того, постаэрозольные мРНК-полиплексы были успешно доставлены в эпителиальные клетки лёгких человека A549 и провели обнаруживаемую экспрессию GFP. Этот протокол демонстрирует неразрушительный метод доставки интраназальной мРНК с использованием аэрозолизации расщепления Рэлея. Он эффективно сохраняет физико-химические свойства и биологические функции невирусных мРНК-векторов, распыляя водную фазу в капли подходящих размеров для целенаправленного назального отложения. Этот протокол раскрывает новый подход к эффективной аэрозолизации мРНК и оценке их регионального отложения в носовой полости.

Введение

Доставка вакцин в слизистую слизисую носа (входной портал для многих респираторных патогенов) может вызвать сильный локальный иммунитет и блокировать инфекции в их источнике. Успех интраназальных вакцин против гриппа и недавнее одобрение интраназальных вакцин против COVID-19 подчёркивают эффективность носового пути для вызова как слизистых, так и системных иммунныхответов 1. Интраназальная доставка мРНК-вакцин вызывает большой интерес как стратегия профилактики респираторных вирусных инфекций. Однако одной из главных технических задач является преобразование хрупких мРНК-полиплексов в ингаляемый аэрозоль без ущерба для их стабильности.

Аэрозоль при разрушении Рэлея предлагает мягкую альтернативу, основанную на другом физическом принципе. В устройстве для разрушения Рэлея давление поток жидкости проталкивается через микромасштабное отверстие, образуя непрерывный микроструй. Струя естественным образом разбивается на капли равномерного размера из-за нестабильностиПлато-Рэлея 2. Поверхностное натяжение вызывает фрагментацию жидкой колонки на характерной длине волны примерно вдвое больше диаметра сопла. В отличие от ультразвуковой небулайнизации, этот процесс практически не приводит к турбулентному сдвигу; капли естественным образом образуются из-за самонеустойчивости струи, а не из-за внешних разрушительных сил. В результате наночастицы испытывают минимальное напряжение. Было показано, что с помощью расщепления Рэлея мРНК липидных наночастиц (LNP) аэрозоль не меняется существенным их размером, зарядом поверхности или эффективностью инкапсуляции до сравнения с распылением 3,4,5. В этом методе ПЭИ-мРНК остаётся целой и функциональной после аэрозолизации, в отличие от ухудшения, наблюдаемого при более жёстких методах небулизации.

Ещё одним преимуществом разрыва Rayleigh является контроль над размером капель. Образующиеся капли относительно крупные (порядка 20–30 мкм). Такой размер капли идеально подходит для носовой доставки: частицы диаметром >10 мкм в аэродинамическом диаметре склонны откладываться в носу и верхние дыхательные пути, а не дрейфовать влёгкие 3. Производя капли преимущественно выше этого порога, атомайзер Рэлея естественным образом нацеливается на отложение в носовую полость. Таргетирование дополнительно улучшается с использованием модели Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI) для оптимизации методов введения. AINI — это 3D-печатная копия носовых дыхательных путей, которая точно предсказывает схемы накопления in vivo 6. Используя эту модель, было установлено, что распыление под углом 45° в ноздрю значительно увеличивает осаждение носовыхраковин 7. Угол введения существенно влияет на паттерносаждения 7. Отложение в нецеленаправленных областях, таких как носоглотка или лёгкие, нежелательно, так как может вызвать раздражение горла, неприятный вкус или системные побочныеэффекты 8. В этом протоколе эти условия были воспроизведены (угол распыления 45° и контролируемый поток воздуха при вдыхании) для максимизации накопления мРНК-аэрозоля3 в раковину. Предыдущие данные показывают, что более половины доставленной массы мРНК может быть сфокусирована в области носовой раковины при оптимальных условиях, тогда как <10% достигает носоглотки илиболее 3. Ожидается, что такая целевая доставка повысит эффективность вакцины за счёт концентрации дозы в индуктивных участках иммунитета (которые хорошо васкуляризированы и богаты иммунными клетками), а также минимизируя нецелевое отложение, которое может привести к отходам или побочных эффектам.

В этой статье методов подробно описана экспериментальная процедура аэрозольной мРНК посредством расщепления Рэлея, оценивая региональные осаждения в модели AINI и оценивая биологическую активность отложенной мРНК in vitro. Репортерная мРНК, кодирующая GFP, используется для визуализации результатов трансфекции в человеческих клетках. HEK293T ячейки выбираются для проверки функциональности аэрозольных комплексов. Для усиления клеточного поглощения аэрозольной мРНК in vitro мРНК ветвяется с PEI для образования полиплексов PEI-mRNA перед их добавлением в клетки. PEI — это катионный полимерный трансфекционный агент, способный повысить эффективность доставки мРНК, и здесь использовалось молярное соотношение N:P (азот: фосфат) 24:1 на основе предыдущей оптимизации доставки генов. PEI используется только для этапа валидации клеточной культуры в этом исследовании и не является частью доставки аэрозолей в настоящий нос (in vivo можно полагаться только на LNP-мРНК, но в клеточной культуре это помогает максимизировать экспрессию генов для обнаружения).

Этот протокол выделяет новый подход к доставке интраназальной мРНК-вакцины, который решает проблему стабильности аэрозольной мРНК. Расщепление Рэлея недавно было применено к доставке нуклеиновых кислот в нескольких исследованиях3, 4, 5, 9, и эта работа предоставляет подробный методологический ориентир для реализации этой методики. Следуя этой пошаговой процедуре, исследователи могут воспроизвести мягкую аэрозолизацию мРНК-наноносителей и оценить их характеристики отложения и трансфекции. Раздел «Протокол» ниже организован по последовательным частям: (1) формулировка PEI-mRNA; (2) характеристика наночастиц (размер и дзета-потенциал) до и после аэрозолизации; (3) Операция расщепляющего атомайзера Rayleigh и процедуры назального осаджения AINI. Отмечаются ключевые факторы успеха, такие как поддержание условий без РНазы и правильное выравнивание устройства. Результаты и обсуждение включают репрезентативные результаты, преимущества метода по сравнению с традиционными методами, возможные применения (например, назальные вакцины против гриппа илиCOVID-19 10,11,12), а также ограничения и советы по устранению неполадок. Эта комплексная методология направлена на возможность воспроизводимых внутриносовых экспериментов с доставкой мРНК и ускорение разработки вакцин на основе слизистой РНК без игл.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Клеточные линии HEK293T и A549 в полной среде, состоящие из модифицированной среды Eagle Medium (DMEM) от Dulbecco, дополненной 10% плодовой сывороткой крупного рогатого скота (FBS) и 2% пенициллин-стрептомицином перед трансфекцией ПЭИ-мРНК. Проходите обе клеточные линии примерно каждые 48 часов при достижении слияния. Семенные клетки с плотностью 40 000 клеток на см² и культивирование в течение ~48 час. Удалите культурную среду и промывайте клетки фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS) непосредственно перед трансфекцией для удаления остаточной сыворотки и стандартизации условий трансфекции. Автоклав всех колб клеточной культуры, пластин с 24 лунками, PBS, пипеток и наконечников пипеток перед использованием.

1. Формулировка ПЭИ-мРНК

  1. Образование комплексов ПЭИ-мРНК (для трансфекции in vitro )
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг необходим только если PEI используется для усиления трансфекции в клеточной культуре.
    1. Вычислите необходимое количество PEI для желаемого молярного отношения N:P.
      ПРИМЕЧАНИЕ: используется N:P = 24 (то есть 24 моля положительно заряженных аминов на моль отрицательно заряженных фосфатов на мРНК); а количество мРНК 10 мкг потребует ~31 мкг PEI для формирования PEI-mRNA при этом соотношении N/P.
    2. Приготовьте разбавленный раствор PEI (например, 1 мг/мл бульона в воде) и автоклав.
    3. Разведите мРНК до нужной концентрации (например, 0,2 мкг/мкл).
    4. Добавьте раствор PEI в раствор мРНК, аккуратно смешивая (не вихрьте).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Смесь может находиться в небольшой трубке; Аккуратно поднимайте и опускайте пипетку или дергайте трубку для смешивания.
    5. Инкубировать при комнатной температуре в течение ~20 минут, чтобы обеспечить электростатическое связывание PEI с мРНК.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если не использовать ПЭИ, голая мРНК может быть аэрозолизирована напрямую. Дополнительный PEI значительно улучшил экспрессию генов в клетках A549, но он является необязательным и может не использоваться для фактической доставки in vivo из-за причин токсичности.

2. Характеристика наночастиц (размер и дзета-потенциал)

ПРИМЕЧАНИЕ: Настройте параметры измерения в программном обеспечении и сохраните как метод перед использованием анализатора для измерения размера или зета-потенциала. Для работы прибора требуется настройка метода , а параметры зависят от среды измерения, используемой кюветы и свойств образца.

  1. Динамическое рассеяние света (DLS) до аэрозолизации
    1. С помощью анализатора размера частиц загрузите разбавленный образец формулы в одноразовую кювету (например, 500 мкл при 0,2 мкг/мкл).
    2. Включите анализатор и откройтепрограммное обеспечение 13 на подключённом компьютере.
    3. Нажмите кнопку «Измерить » в верхней части окна.
    4. Нажмите на синюю иконку «Файл » в верхней части окна, чтобы выбрать метод предустановленного размера.
    5. Переименуйте протокол так, чтобы он соответствовал названию образца.
    6. Нажмите кнопку крышки анализатора, чтобы открыть камеру.
    7. Вставьте кювету в камеру.
    8. Нажмите зелёную кнопку «Запустить » в верхней части окна программного обеспечения. Дождитесь, пока измерениезавершит 13.
    9. Нажмите кнопку «Анализировать » в верхней части окна программного обеспечения, а затем кнопку «Размер » на страницерезультатов 13.
    10. Получите средний гидродинамический диаметр (Z-среднее) и индекс полидисперсности (PDI) из таблицы статистики.
    11. Нажмите кнопку крышки анализатора, чтобы открыть камеру, снимите кювет и закройте крышку.
    12. Утилизируйте кювету и промывайте атомайзер водой без РНКазы и этанолом 70% В/В для дезинфекции и облегчения сушки между измерениями размера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для атомайзера Rayleigh убедитесь, что в сопле не осталось соляных отложений или остатков, так как они могут повлиять на эффективность распыления.
  2. Потенциал зета до аэрозолизации
    1. Используйте тот же прибор (или анализатор потенциала Зета), загрузите разбавленный образец формулы в сложенную капиллярную ячейку (например, 700 мкл при 0,2 мкг/мкл).
    2. Включите анализатор и откройтепрограммное обеспечение 13 на подключённом компьютере.
    3. Нажмите кнопку «Измерить » в верхней части окна.
    4. Нажмите на синюю иконку «Файл » в верхней части окна, чтобы выбрать предустановленный метод zeta.
    5. Переименуйте протокол так, чтобы он соответствовал названию образца.
    6. Нажмите кнопку крышки анализатора, чтобы открыть камеру.
    7. Вставьте кювету в камеру.
    8. Нажмите зелёную кнопку «Запустить » в верхней части окна программного обеспечения. Ждите, пока машина выставит13.
    9. Нажмите кнопку «Анализировать » в верхней части окна программного обеспечения, а затем нажмите кнопку Zeta на страницерезультатов 13.
    10. Получите зета-потенциал (поверхностный заряд), посмотрев в таблице статистики.
    11. Нажмите кнопку крышки анализатора, чтобы открыть камеру, вынуть образец и закрыть крышку.
    12. Промывайте кювету и атомайзер водой без РНКазы и 70% этанолом V/V для дезинфекции и облегчения сушки между измерениями потенциала Зета.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для атомайзера Rayleigh убедитесь, что в сопле не осталось соляных отложений или остатков, так как они могут повлиять на эффективность распыления.

3. Аэрозоль при расщеплении Рэлея и назальное отложение

  1. Атомайзер и настройка AINI
    1. Соберите устройство для расщепления носа Rayleigh и модель Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Модель AINI состоит из анатомически репрезентативных полых сечений, соответствующих различным областям носовой полости человека (например, ноздревой вестибюль, носовой носовой области, обонятельной области, носоглотки).
    2. Убедитесь, что все компоненты AINI чисты и сухие перед использованием (остатки могут повлиять на результаты осаждения). Очищайте, промывая деионизированнойводой 9 , а затем этанолом или органическим растворителем.
    3. Подключите AINI к ударному аппарату следующего поколения (NGI), который подключён к вакуумному насосу на выходе для подачи воздуха через носовые ходы.
    4. Установите скорость потока на 7,5 л/мин — поток, представляющий медленное, глубокое вдыхание носа увзрослого 6. Используйте откалиброванный расходомер (или ротаметр), подключённый к индукционному порту NGI. Регулируйте насос до тех пор, пока расходомер не покажет 7,5 л/мин.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте расходомер для измерения потока воздуха при необходимом расходе для тестирования.
    5. Поддерживайте этот поток воздуха на время распыления. Используйте парапленку, чтобы правильно запечатать устройство на AINI.
  2. Позиционирование атомайзера
    1. Вставьте сопло расщепляющего атомайзера Rayleigh во вход ноздри AINI (вестибюль) под углом 45°.
    2. Закрепите атомайзер так, чтобы он не смещался во время работы (все соединения, секции модели, трубка для насоса) герметичны.
  3. Загрузка образца
    1. Аккуратно смешайте подготовленную суспензию PEI-mRNA для обеспечения однородности (избежать образования пузырей).
    2. Втяните образец в резервуар атомайзера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от конструкции устройства это может включать наполнение кончика шприца или пипетки, который крепится к атомайзеру.
    3. Загрузите образец в устройство.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Например, удалите центральную крышку или камеру из атомайзера, введите образец пипеткой, а затем надёжно соберите устройство. Убедитесь, что нет протечек и что устройство правильно загрунтировано, если это необходимо.
  4. Генерация аэрозоля
    1. Включите поток воздуха (7,5 л/мин через AINI) воздушного насоса до или одновременно с запуском распыления, согласно инструкциям устройства.
    2. Активируйте расщепляющий атомайзер Rayleigh для начала аэрозолизации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для ручного атомайзера, приводящегося в шприц, постепенно нажимайте на поршень шприца, чтобы протолкнуть жидкость через отверстие. Если возможно, распыляйте весь объём образца одним непрерывным движением. Поршень следует плавно нажимать для создания стабильного рабочего давления, поскольку формула аэрозолизируется только после давления до повышенного давления и воздействия скорости сдвига стенки внутримикроотверстия 14. Быстрые движения поршня изменяют давление и, следовательно, изменяют как скорость сдвига, так и время воздействия на сдвиг14.
    3. Следите за тем, чтобы расход оставался на уровне 7,5 л/мин на протяжении всего участка. Капли аэрозоля должны проходить через модель носовых проходов и отлагаться в разных областях в зависимости от их аэродинамических размеров.
    4. Немедленно выключайте воздушный насос, чтобы капли не стягивались ниже или не высыхали неравномерно.
  5. Сбор образцов от AINI
    1. Аккуратно разберите модель AINI на отдельные анатомические сегменты, чтобы собрать отложенные наночастицы из каждой области.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Перед разборкой отметьте или отметьте ориентацию, чтобы отслеживать секции.
    2. Собирать отложения из шести отсек: (i) атомизатор, (ii) носовой вестибюль, (iii) носовой раковины, (iv) обонятельной области, (v) носоглотки и (vi) любой нижний захват (например, стадии прикреплённого NGI или финальный фильтр, представляющий фракцию, проникающую в легкие)
    3. Для каждого компартмента используйте измеренный объём среды для клеточной культуры, чтобы промыть отложенный материал.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Например, чтобы собрать осаждение раковин, отсоедините часть носовой раковины и тщательно промыйте её внутренние поверхности 5 мл модифицированного орла (DMEM) от Dulbecco, используя одноразовую пипетку. Аккуратно промыйте все поверхности, затем налейте промывку в маркированную трубку центрифуги на 15 мл (используйте воронку для облегчения переноса). Во время промывания сегмент удерживался горизонтально или слегка наклонён, чтобы обеспечить полный внутренний контакт с поверхностью и предотвратить выход жидкости. Аналогично повторяйте для вестибюля, обонятеля, носоглотки и других участков, используя 5 мл свежего DMEM для каждого и собирая в отдельные маркированные трубки.
    4. Восстанавлите остатки образца из атомайзера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для шприца прополосните шприц и сопло в тюбике.
    5. Если AINI был подключён к NGI, чтобы уловить мелкие частицы (например, промывая ступени DMEM).
    6. Закройте трубку собранной жидкостью.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте потери капель на поверхности стола или при испарении.
  6. Обработка после сбора
    1. Сразу после сбора образцы ПЭИ-мРНК отдельно помещались на клетки для трансфекции.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы ПЭИ-мРНК можно оставить в холодильнике на ~1-2 часа (максимум до 6 час) перед использованием для трансфекции. Из каждого собранного образца PEI-mRNA берётся определённый объём (максимум 1 мл) для характеристики постаэрозольных векторов (например, измерения DLS и зета).
  7. Чистка аппарата
    1. Тщательно очищайте атомайзер и модель AINI после каждого запуска, чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение последующих экспериментов.
    2. Промыйте все секции AINI и части атомайзера деионизированной водой для удаления среды и наночастиц, затем 70% этанола для дезинфекции и облегчения сушки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Если у устройства или модели есть маленькие отверстия, промите их шприцем.
    3. Перед сборкой полностью высушите все детали до проветривания (или поставьте в сушильный шкаф на низком нагреве). Для атомайзера Rayleigh убедитесь, что в сопле не осталось соляных отложений или остатков, так как они могут повлиять на эффективность распыления.

4. Клеточная визуализация

ПРИМЕЧАНИЕ: После трансфекции удалите трансфекционную среду и замените его на свежую полную среду, чтобы прекратить экспозицию. Культивировать клетки в течение 48 часов для репортёрной экспрессии и восстановления клеток. При ~80% совпадения фиксировать клетки 4% формальдегидом в течение 8 минут, затем окрашивать ядра 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI; 300 нМ) в течение 5 минут, после чего дважды промывать PBS перед визуализацией.

  1. Флуоресцентная визуализация
    1. Используйте флуоресцентный микроскоп с фильтрами для DAPI и GFP.
    2. Начните с синего канала (длина волны возбуждения = 385 нм, длина волны излучения = 477,5 нм), чтобы визуализировать ядра с помощью DAPI.
    3. Переключитесь на зелёный канал (длина волны возбуждения = 488 нм, длина волны излучения = 525 нм) для визуализации GFP-положительных ячеек.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Как рукопись, ориентированная на методы, подробные результаты не являются основной целью; однако представлены репрезентативные результаты, иллюстрирующие ожидаемые результаты каждой части протокола. Приведённые ниже рисунки показывают примеры данных (например, графики или изображения), подтверждающие валидность метода, но новых количественных анализов, кроме демонстрации, не включены.

Размер капель и схема осадки:
Атомайзер разбивания Рэлея...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этом протоколе перед аэрозолем мРНК ветвяется с PEI для улучшения клеточного поглощения. Это служит заменой для доставки ЛНП-мРНК во время валидации in vitro 10,15. PEI-мРНК сохраняет большинство функций формул LNP, включая важные биологические и функциональныехарактеристики 10. Положительно заряженные аминные группы в PEI связываются с отрицательно заряженным мРНК посредством электростатических...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы выразили признательность финансовой поддержке King's Undergraduate Research Fellowship (KURF) и Фонда студенческих возможностей, предоставленных King's College London.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Центрифугные трубки объемом 50 млКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедCLS430829-500EA
50– 1000 & mu; Наконечники L пипеткиКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедZ740031-1000EA
Линия ячеек A549Коллекция американской типографической культурыATCC CRM-CCL-185
Измеритель расхода воздухаН/ДН/ДМожет использоваться универсальный расходомер воздуха.
Модель идеализированного носового входа Альберты (AINI)TSI Incorporated (через Copley Scientific, Великобритания)0001-01-8540
Лента индикаторов автоклаваКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедZ744090
DAPIКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедD1306
DMEM (Модифицированный Eagle Medium от Dulbecco)Gibco, Thermo Fisher Scientific11966025
Этиловый спирт, чистыйКомпания Сигма-Олдрич Лимитед32221-МПриобретено через Merck
Сыворотка для плода быка (FBS)Gibco, Thermo Fisher ScientificA5256701
ФормальдегидКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедF8775
HEK293T Клеточная линияКоллекция американской типографической культурыATCC CRL-3216
Шкаф биобезопасности Heraeus HERAsafe HS 12ГереусН/Д
Импактор следующего поколенияMSP — это подразделение TSI0170-01-1000Этот продукт также представлен в каталоге Copley, номер детали 5201.
Монохромная микроскопическая камера Nikon DS-Qi2NikonН/Д
Клеточная культура Nunc MultidishsТермо Фишер Сайентифик142475
Колбы, обработанные культурой клеток Nunc EasYFlaskТермо Фишер Сайентифик156340
ПарафильмКомпания Сигма-Олдрич ЛимитедP7793-1EA
Пенициллин-стрептомицин (10 000 U/мл)Gibco, Thermo Fisher Scientific15140148
Фосфатно-буферные физиологические таблетки (PBS)Термо Фишер Сайентифик18912014
Полиэтилениминовый гидрохлоридКомпания Сигма-Олдрич Лимитед764965-1GПриобретено через SLS
Назальный атомайзер Rayleigh JetResyca BV ЭнсхедеМягкий назальный спрей
Вода, свободная от РНКТермо Фишер СайентификJ60610. EQC
Размерная кюветкаMalvern PanalyticalZEN0040
Складчатая капиллярная клеткаMalvern PanalyticalDTS1070
Zetasizer ProMalvern PanalyticalZetasizer Pro
Программное обеспечение Zetasizer Ultra-Pro ZS XplorerMalvern PanalyticalН/Д

Ссылки

  1. Akula, V. R., et al. Effect of heterologous intranasal incovacc(r) vaccination as a booster to two-dose intramuscular COVID-19 vaccination series: a randomized phase 3 clinical trial. Commun Med (Lond). 5 (1), 133(2025).
  2. Van Hoeve, W., et al. Breakup of diminutive Rayleigh jets. Phys Fluids. 22 (12), (2010).
  3. Li, H. Y., et al. Targeted nasal delivery of LNP-mRNAs aerosolised by Rayleigh breakup technology. Int J Pharm. 672, 125335(2025).
  4. He, P., et al. Rayleigh-based soft mist inhalers preserve mRNA-LNP integrity for pulmonary delivery. J Drug Deliv Sci Technol. 115, 107651(2026).
  5. Biesel, A., et al. Soft mist inhaler nebulization by Rayleigh-breakup largely preserves functional integrity of liposomal mRNA in respirable aerosols. Eur J Pharm Sci. 214, 107300(2025).
  6. Chen, J. Z., Finlay, W. H., Martin, A. In vitro regional deposition of nasal sprays in an idealized nasal inlet: comparison with in vivo gamma scintigraphy. Pharm Res. 39 (11), 3021-3028 (2022).
  7. Chen, J. Z., Kiaee, M., Martin, A. R., Finlay, W. H. In vitro assessment of an idealized nose for nasal spray testing: comparison with regional deposition in realistic nasal replicas. Int J Pharm. 582, 119341(2020).
  8. Hopke, P. K., Wang, Z. Fine Particles in Medicine and Pharmacy. Fine Particles in Medicine and Pharmacy. , Springer. US, Boston, MA. (2012).
  9. Wang, H., et al. Evaluation of Rayleigh jet atomizer for intranasal delivery of lipid nanoparticle-siRNA formulations: stability, deposition, and device performance. Int J Pharm. 683, 126084(2025).
  10. Moreno Herrero, J., et al. Compact polyethylenimine-complexed mRNA vaccines. Nat Nanotechnol. 20 (9), 1323-1331 (2025).
  11. Geall, A. J., et al. Non-viral delivery of self-amplifying RNA vaccines. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (36), 14604-14609 (2012).
  12. Xi, J., Lei, L. R., Zouzas, W., Si, X. A. Nasally inhaled therapeutics and vaccination for COVID-19: developments and challenges. MedComm. 2 (4), 569-586 (2021).
  13. Zetasizer Advance Series User Guide. , MAN0592-15-EN edn, Malvern Panalytical. (2023).
  14. Method of aerosolizing nanoparticle formulations. China patent. , CN116723892A (2023).
  15. Casper, J., et al. Polyethylenimine (PEI) in gene therapy: current status and clinical applications. J Control Release. 362, 667-691 (2023).
  16. Jin, Y., et al. A novel experimental approach to measure nebulized droplet deposition pattern and deposition fraction in an idealized mouth-to-throat model. Phys Fluids. 35 (8), (2023).
  17. Darquenne, C. Aerosol deposition in health and disease. J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 25 (3), 140-147 (2012).
  18. Liu, J., et al. Turbinate-homing IgA-secreting cells originate in the nasal lymphoid tissues. Nature. 632 (8025), 637-646 (2024).
  19. Debus, H., Baumhof, P., Probst, J., Kissel, T. Delivery of messenger RNA using poly(ethylene imine)-poly(ethylene glycol)-copolymer blends for polyplex formation: biophysical characterization and in vitro transfection properties. J Control Release. 148 (3), 334-343 (2010).
  20. Brandtzaeg, P. Potential of nasopharynx-associated lymphoid tissue for vaccine responses in the airways. Am J Respir Crit Care Med. 183 (12), 1595-1604 (2011).
  21. Foley, R. A., et al. Lipid nanoparticles for the delivery of CRISPR/Cas9 machinery to enable site-specific integration of CFTR and mutation-agnostic disease rescue. bioRxiv. , (2025).
  22. Hou, X., Zaks, T., Langer, R., Dong, Y. Lipid nanoparticles for mRNA delivery. Nat Rev Mater. 6 (12), 1078-1094 (2021).
  23. D'Angelo, I., et al. Hybrid lipid/polymer nanoparticles for pulmonary delivery of siRNA: development and fate upon in vitro deposition on the human epithelial airway barrier. J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 31 (3), 170-181 (2018).
  24. Movia, D., Bazou, D., Volkov, Y., Prina-Mello, A. Multilayered cultures of NSCLC cells grown at the air-liquid interface allow the efficacy testing of inhaled anti-cancer drugs. Sci Rep. 8 (1), 12920(2018).
  25. Waltl, E., Eckl-Dorna, J., Selb, R., Valenta, R., Niederberger, V. Characterisation and culture of primary human nasal epithelial cells and the influence of interferon-gamma. Clin Transl Allergy. 4 (2), P21(2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Интраназальная доставка мРНКполиэтилениминовая мРНКклетки A549модель назального входа Альбертыэкспрессия GFPневирусные векторы мРНКтрансфекция аэрозольной мРНК
Интраназальная доставка мРНК-полиплексов с помощью аэрозолей для расщепления Рэлея: метод in vitro для назательного отложения и функционального тестирования
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.