Методическая статья

Протокол изучения регуляции Honokiol сигнализации трансформирующегося фактора роста бета 1/SMAD в моделях фотовозраста кожи, индуцированных ультрафиолетовым A-индуцированным

DOI:

10.3791/70099

⸱

8 мая 2026 г.

 ,  ,  , 
1Plastic Surgery Center, the 988th Hospital of Joint Logistic Support Force of Chinese People's Liberation Army

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол исследует, улучшает ли хонокиол фотостарение, вызванное UVA, в фибробластах кожи человека и мышиной коже, активируя путь TGF-β1/Smad и снижая экспрессию MMP.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Honokiol (HNK), ключевой компонент, получаемый из Magnolia officinalis, обладает потенциалом для лечения кожных заболеваний. В настоящее время влияние и механизм действия HNK на фотоповреждение, вызванное ультрафиолетовым А (UVA), в коже остаются неясными. Модель фотовозрастного повреждения HDF-клеток и безшерстной кожи мышей была построена с помощью индукции UVA. Влияние HNK на жизнеспособность нормальных HDF-клеток и HDF-клеток, вызванных UVA, было изучено с помощью теста жизнеспособности клеток. Уровни SOD, GSH, CAT и MDA в клетках HDF измерялись с помощью различных наборов, а уровни ROS — с помощью DCFH-DA и дигидроэтидия. SA-β-галактозидаза и окрашивание TUNEL выявило старение и апоптоз в клетках HDF, а проточная цитометрия оценила прогрессирование клеточного цикла. Гистопатологические повреждения кожи оценивались с помощью патологического окрашивания. Кроме того, иммунофлуоресценция и вестерн блот использовались для оценки уровней белков, связанных с путями Ki67, коллагена, матриксной металлопротеиназы (MMP) и TGF-β1/Smad. Лечение HNK (2,5-10 мкм) не оказало негативного влияния на нормальную жизнеспособность клеток HDF, но ослабило повреждение клеток, вызванное UVA, снижая окислительный стресс и апоптоз. UVA вызвано старением клеток HDF, индуцированным остановкой S-фазы, снижением уровня Ki67, снижением содержания коллагена и увеличением экспрессии MMP, в то время как HNK эффективно ослаблял эти аномалии, вызванные UVA. Кроме того, UVA вызывала более глубокие морщинки, снижала содержание воды и коллагена, а также увеличивала толщину эпителия в коже мышей, тогда как подкожная инъекция HNK ослабляла патологические повреждения кожи и увеличивала содержание воды и коллагена. Кроме того, HNK активировал путь TGF-β1/Smad, а ингибитор TGF-β1 SB431542 нарушал защитное действие HNK от повреждения фотовозраста в клетках HDF. В заключение, HNK обладает потенциалом как препарат для смягчения повреждений от фотовозраста, снижая экспрессию MMP через активацию пути TGF-β1/SMAD, тем самым ингибируя фотостарение, вызванное UVA, в клетках HDF и коже мышей.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Процесс старения кожи сложный и делится на две основные формы: естественное старение ифотостарение 1. Исследования показывают, что от 80% до 90% старения кожи вызвано экзогенными факторами окружающей среды (например, ультрафиолетовыми лучами, загрязнением воздуха), из которых наиболее серьёзные последствия оказывают долгосрочное фотостарение, вызванное ультрафиолетовымизлучением 2,3. Ультрафиолетовое излучение делится на UVC, UVB и UVA. Поскольку UVC не может проникнуть в озоновый слой, текущие исследования фотостарения сосредоточены на UVA (320-400 нм) и UVB (280-320 нм)4,5,6. По сравнению с UVB, UVA обладает меньшей энергией, но более проникающей, проходя через эпидермис и проникая глубоко в дерму, что является важной причиной серьёзного старения кожи7. Предыдущие исследования показали, что повреждения, вызванные облучением HaCaT-клеток с концентрацией 57 мДж/см² UVB и 20 Дж/см² UVA,сопоставимы 8. Фотостарение кожи вызывает изменения в её функции и структуре, особенно проявляющиеся в провисшении поверхности кожи, углублении морщин, потере коллагена и появлении серого цвета кожи, видимого невооружённым глазом; В тяжёлых случаях могут возникать различные доброкачественные, предраковые пораженияи опухоли 9,10. Вместе с ростом исследований по старению и борьбе со старением, риски для здоровья, связанные с фотостарением, стали одной из самых важных проблем для здоровья во всём мире. Поэтому крайне важно изучать патофизиологические процессы, лежащие в основе фотовозраста, вызванного UVA, с целью разработки новых терапевтических методов его лечения.

Извлекаемый из магнолии официналис, традиционного китайского лечебного растения, Хонокиол (HNK) является значимым биоактивным соединением с химической формулой C18H 18O211. HNK проявляет различные фармакологические свойства, а его фенольная гидроксильная группа высокочувствительна к окислению и обладает сильным антиоксидантным и поглощающим свободными радикалами12. Кроме того, HNK обладает антибактериальным, противовоспалительным, противовирусным, противоопухолевым, антидепрессантным, нейропротективным и противовременным яичниковым фармакологическимэффектом 13,14,15,16. Пероральный HNK был признан практически безопасным в исследованиях на животных и клинических исследованиях, и значимых побочных эффектов выявленоне 17,18,19. Недавние исследования показали, что HNK предотвращает рак кожи, вызванный UVB, а также ингибирует воспалительный ответ кожи и гиперметилированиеДНК 21, что указывает на его потенциальное применение для лечения кожных заболеваний. По сравнению с широко используемыми антифотовозрастными препаратами, такими как витамин C и ресвератрол, HNK обладает отличительными и превосходными свойствами: его липофильная структура обеспечивает лучшую трансдермальную проницаемость, чем гидрофильный витаминC22; И демонстрирует более высокую фотостабильность и биодоступность in vivo, чем ресвератрол-23. Эти доклинические результаты подтверждают идею о том, что HNK обладает перспективным трансляционным потенциалом как безопасный и эффективный кандидат для средств по уходу за кожей и клинических вмешательств против фотоповреждений, вызванных ультрафиолетом. Однако влияние лечения HNK на фотовозрастные повреждения, вызванные UVA, пока не сообщалось.

Трансформирующий фактор роста-β1 (TGF-β1) — это многофункциональный цитокин, ключевой для роста и развития клеток, восстановления и регенерации тканей, а также роста и развития клеток, тканейи органов 24,25. Показано, что TGF-β1 сигнализирует клетке преимущественно через представителей семейства белков Smad, что приводит к специфической регуляции транскрипции генов-целей ниже по потоку. При активации сигнализации TGF-β1 происходит фосфорилирование Smad2 и Smad326,27. Недавние исследования показали тесную связь между путём TGF-β1/Smad и фиброзом кожи ифотостарением 28,29. Сообщалось, что млекопитающая мишень рапамицина активирует путь TGF-β1/Smad в тканях кожи крыс, что, в свою очередь, способствует синтезу церамидов, важных для удержания влаги кожи и поддержания кожногобарьера 30. Примечательно, что сообщается, что HNK модулирует путь TGF-β1/Smad в пепатовидных звёздчатых клетках, что, в свою очередь, способствовало улучшению фиброзапечени 31. Поэтому были установлены клеточные и мышиные модели фотостарения, вызванного UVA, с лечением HNK 2,5–10 мкм в клетках HDF и вмешательством 5 мг/кг или 10 мг/кг HNK у безшерстных мышей, чтобы изучить влияние HNK на повреждения от фотостарения и его потенциальную роль в модулировании пути TGF-β1/Smad. Целью данного исследования было разработка новых терапевтических стратегий для фотоповреждения кожи, вызванных UVA.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты по культуре клеток проводились в соответствии с институциональными рекомендациями по биобезопасности и в лабораторных условиях уровня биобезопасности 2 (BSL-2). Эксперименты на животных проводились после одобрения Комитета по этике животных 988-го госпиталя Объединённых сил материально-технической поддержки Народно-освободительной армии Китая (номер одобрения: 2023-089).

Все экспериментальные процедуры проводились в строгом соответствии с институциональными и национальными рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных. В конце эксперимента мышей эвтаназировали с помощью передозировки пентобарбитала натрия (100 мг/кг, внутрибрюшинная инъекция). Были предприняты все усилия для минимизации страданий животных во время содержания, обработки и отбора проб. Реагенты, химикаты, оборудование и программное обеспечение, используемые в протоколе, перечислены в Таблице материалов.

1. Культивирование и обработка клеток

  1. Культура человеческих дермальных фибробластов (HDF) в фибробластной культурной среде. Поддерживайте культуры при 37 °C в насыщенной влажности с 5%CO2.
  2. Заменяйте посевную среду каждые 3 дня, а HDF пропустите в соотношении 1:3 при слиянии.
  3. Облучайте HDF с помощью ламп UVA (спектр излучения: 320-400 нм) при дозе 5 Дж/см².
  4. Пополните его свежей средой сразу после 30 минут облучения UVA. Повторяйте облучение UVA один раз в день в течение 8 дней подряд32.
  5. Лечите HDF 2,5, 5, 10, 20 или 40 мкм HNK в течение 24 или 48 часов в экспериментах с дозовымскринингом 33. В последующих экспериментах обрабатывайте HDF 2,5, 5 или 10 мкм HNK в течение 24 часов, после чего применяется облучение UVA (5 Дж/см²).
  6. Экспонировать HDF на 10 мкм HNK в течение 4 часов, затем инкубировать ингибитором TGF-β1 SB431542 10 мкм в течение 24 часов, а затем облучить UVA (5 Дж/см²) в группе HNK+SB431542.

2. Оценка жизнеспособности клеток

  1. Инокулировать HDF в 96-колодочные культивные пластины с плотностью 1×10 4 клетки на колодцу.
  2. После различных обработок добавьте в каждую скважину 10 мкл 10% водорастворимого реагента с солью тетразолия до конечного объёма 100 мкл на колодцу и инкубировать клетки при 37°C в течение 1,5 часа в темноте.
  3. Измерьте значения OD450 ячеек с помощью считывателя микропластин.

3. Определение уровней супероксиддисмутазы (SOD), малондальдегида (MDA), каталазы (CAT) и глутатиона (GSH)

  1. Промыйте HDF предварительно охлаждённым PBS объемом 1 мл (0,01 м, pH 7,4), добавьте 200 мкл раствора для подготовки образцов SOD (из SOD Assay Kit), чтобы лизировать клетки на льду в течение 15 минут.
  2. Центрифугуйте лизат при 8000 × г в течение 5 минут при 4 °C и возьмите супернатант в качестве образца анализа.
  3. Используйте белковый тест BCA (бицинчониновой кислоты), чтобы определить концентрацию белка в супернатанте, и скорректируйте образец до 50 мкг белка в объёме 50 мкл.
  4. Смешайте образец белка с 50 мкг с буфером SOD до конечного объёма реакции 200 мкл, инкубируют смесь при 37 °C в течение 30 минут в темноте, затем измеряйте значение OD450.
  5. Возьмите тот же лизатный супернатант клеток, что используется для SOD-анализа, измерьте уровни CAT, GSH и MDA с помощью соответствующих тестовых наборов.

4. Измерение уровней клеточного ROS

  1. Обрабатывайте HDF-клетки при различных условиях, дважды промывайте 500 мкл PBS и хорошо смешивайте с 500 мкл реактивного кислородного зонд с 10 мкм флуоресцентным зондом и инкубировать при 37 °C в течение 20 минут вдали от света.
  2. Центрифугуйте при 1000 × г в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы собрать элементы, затем прополосните два раза 500 мкл PBS.
  3. Ресуспензировать клетки в среде 500 мкл и затем проанализировать окрашивание с помощью проточной цитометрии.
  4. Зафиксируйте интенсивность флуоресценции с помощью программного обеспечения для анализа потоковой цитометрии, а затем рассчитывайте уровни ROS на основе интенсивности флуоресценции, что более высокая ROS соответствует более сильной зелёной флуоресценции).

5. Окрашивание, ассоциированное со старением β-галактозидаза (SA-β-галактозидаза).

  1. Засеять HDF в 6-колодцевые культивные пластины с плотностью 1×106 клеток на колодцу и высеять с соблюдением привязки. После различных обработок промой HDF один раз с 2 мл PBS.
  2. Добавьте 1 мл β-галактозидазного фиксатора для окрашивания в каждую колодку и инкубуйте клетки при комнатной температуре с фиксатором в течение 15 минут.
  3. Промыйте клетки три раза с 2 мл PBS, добавьте рабочий раствор для окрашивания 1 мл в каждую колодцу, а затем инкубуйте при 37°C ночью в темноте.
  4. Наблюдайте и фотографируйте клетки с помощью светового микроскопа (стареющие клетки выглядят синими).

6. Анализ клеточного цикла

  1. Засеять HDF в пластины с 6 колодцями при 1×10 6 ячеек/колодцы; после различных процедур промывайте клетки дважды с помощью 2 мл PBS.
  2. Центрифугите при 1000 × г в течение 5 минут при комнатной температуре для сбора клеток, добавьте 1 мл 70% этанола (фиксирующего элемента) и аккуратно перемешайте с помощью пипетирования. Фиксированные ячейки поместите в холодильник при температуре 4°C на 12 часов.
  3. Подготовьте 500 мкл на образец раствора для окрашивания клеток, смешивая йодид пропидия (PI, конечная концентрация 50 мкг/мл) и РНазу (конечная концентрация 200 мкг/мл) в PBS. Подвергнуть клетки воздействию 500 мкл раствора для окрашивания, инкубировать в темноте при 37°C в течение 30 минут.
  4. Оценить интенсивность флуоресценции с помощью потоковой цитометрии. Проведите анализ циклов клетки с помощью потокового цитометра.

7. Окрашивание TUNEL

  1. Подвергать HDF-клетки разных групп обработки 1 мл 4% параформальдегида и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут.
  2. Добавьте 1 мл PBS, содержащего 0,3% тритона X-100, в клетки и инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут.
  3. Промыйте клетки дважды PBS, затем капляйте 500 мкл раствора TUNEL, чтобы равномерно покрыть элементы. Инкубировать температуру при 37°C в темноте в течение 1,5 часа.
  4. Добавьте 200 мкл раствора окрашивания DAPI, чтобы покрыть клетки, и инкубировать вдали от света в течение 10 минут при 25 °C.
  5. Запечатайте клетки монтажной средой для сохранения флуоресцентного сигнала, затем наблюдайте и фотографируйте их с помощью флуоресцентного микроскопа (TUNEL-положительные клетки показывают зелёную флуоресценцию).

8. Иммунофлуоресцентное окрашивание

  1. Семена HDF-клеток из разных групп обработки в пластины с 12 ямецами. Когда плотность клеток достигает 50%-60%, подвергайте клетки воздействию 1 мл параформальдегида 4% и инкубируем при комнатной температуре в течение 25 минут.
  2. Добавляйте 1 мл 5% бычьей сыворотки альбумина (BSA) по каплею, чтобы блокировать поверхность клетки, и инкубировать при комнатной температуре в течение 30 минут.
  3. Добавляйте 500 мкл первичных антител Ki67 (1:300), коллаген I (1:100), матриксную металлопротеиназу (MMP)-1 (1:50) или MMP-3 (1:100) по капле и инкубировать при 4°C ночью.
  4. На следующий день инкубировать клетки с 500 мкл вторичного антитела, маркированного флуоресцеином изотиоцианатом (FITC) (1:100) при 37°C вдали от света в течение 1 часа.
  5. Добавьте 200 мкл раствора окрашивания DAPI, чтобы покрыть клетки, инкубировать вдали от света в течение 10 минут, наблюдать с помощью флуоресцентного микроскопа и анализировать с помощью программного обеспечения для анализа изображений (положительные клетки коллагена I и MMP-1 показывают красную флуоресценцию, положительные клетки Ki67 и MMP-3 — зелёную флуоресценцию).

9. ЭЛИЗА

  1. Добавьте 100 мкл супернатированной культуры HDF в колодцы с пластинами наборов ИФП MMP-1 или MMP-3 и инкубировать при 37°C в течение 2 часов.
  2. Промыйте колодцы 3 раза 200 мкл PBS, затем добавьте 100 мкл соответствующего антитела в каждую яме и инкубуйте при 37 °C в темноте в течение 1 часа.
  3. Промыть колодцы три раза с помощью 200 мкл буфера для промывания (в комплекте), стряхнуть лишний раствор и инкубировать образцы 100 мкл стрептавидина-HRP в течение 30 минут при 37°C в темноте.
  4. После промывания PBS добавьте 100 мкл субстратов A и B согласно инструкции в наборе и инкубуйте при 37°C в темноте в течение 10 минут.
  5. Добавьте 50 мкл раствора терминирования, хорошо перемешайте, оцените значениеOD 450 с помощью считывателя микропластин и рассчитывайте концентрацию.

10. Конструкция модели мыши с повреждением фото

  1. Содержать самок SKH1 класса SPF (15-20 г, 4-5 недель) при 22 °C при влажности 55%-60%, обеспечивая автономный доступ к еде и воде. Регулярно дезинфицируйте объекты, включая контейнеры для еды, бутылки с водой и питьевые носики.
  2. Случайным образом назначайте мышей контрольной группе (n=6) и модельной группе (n=18). Облучать мышей модельной группы с UVA при 0,35 Дж/см² в течение 8недель 34; Контролируемые мыши в той же среде без UVA облучения.
  3. Разделим мышей из модельной группы поровну на 3 подгруппы (n=6 каждая).
  4. Введение подкожных инъекций HNK в дозе 5 мг/кг или 10 мг/кг в объеме 100 мкл дважды в неделю двум подгруппам во время облучения UVA (зафиксированы как группа HNK 5 мг/кг и группа HNK 10 мг/кг соответственно). Вводите подкожные инъекции 100 мкл физиологического раствора дважды в неделю третьей подгруппе во время облучения UVA-облучения (запись как группа UVA).
  5. Оцените образование морщин на коже и содержание воды после успешногомоделирования 35.
  6. Эвтаназия мышей с помощью пентобарбитала натрия (100 мг/кг) внутрибрюшинно, а затем собирать дорсальные кожные ткани для дальнейших экспериментов.

11. Измерение содержания коллагена кожи I

  1. Соберите 50 мг тканей дорсальной кожи мышей, тщательно измельчите их в жидком азоте и лизируйте с помощью 500 мкл предварительно охлаждённого буфера RIPA на льду в течение 30 минут.
  2. Центрифугуйте лизат при 8000 × г в течение 5 минут при 4 °C, затем соберите супернатант и измерьте содержание коллагена с помощью набора для про-коллагенового I-C пептида согласно инструкции производителя.

12. Окрашивание гематоксилином и эозином (HE)

  1. Зафиксировать ткани кожи мыши в 10 мл 4% параформальдегида при комнатной температуре в течение 24 часа, обезвожить градиентным этанолом (50%, 75%, 95%, 100%, каждый в течение 5 минут), вложить в парафин и разрезать на срезы диаметром 4 мкм.
  2. Запекайте ломтики при 65°C в течение 8 часов, дважды депарафинизуйте в ксилоле по 10 минут каждая, а затем увлажняйте в градиентном этаноле при комнатной температуре.
  3. Покрасьте ломтики раствором гематоксилина в течение 8 минут, промывайте проточной водопроводной водой 1 минуту, дифференцируйте дифференциационным раствором 30 секунд и окрашивайте эозином 1 минуту при комнатной температуре.
  4. Обезвожить окрашенные срезы градиентным этанолом, прочистить ксилол, запечатать монтажной средой и наблюдать под микроскопом (ядро клетки выглядит сине-фиолетовым цветом, а цитоплазма, коллагеновые волокна и эритроциты в разной степени розовые).

13. Окрашивание Массона

  1. Окрашивайте парафинные секции тканей кожи мышей с помощью набора Masson trichrome дляокрашивания 36. Депарафинизируйте парафиновые срезы в ксилоле дважды по 10 минут каждая, добавьте раствор окрашивания железа Weigert гематоксилина и окрашивайте 10 минут.
  2. Дифференцируйте кислотным раствором для дифференцировки этанола в течение 30 секунд, затем промывайте проточной водопроводной водой в течение 5 минут, затем окрашивайтесь раствором Понсо-фуксена по каплям в течение 10 минут при комнатной температуре. Проведите обратное поблющение с помощью синего раствора Masson, а затем прополосните дистиллированной водой в течение 1 минуты.
  3. Приготовьте рабочий раствор с слабой кислотой в соотношении дистиллированной воды: раствор слабой кислоты (в комплекте) = 2:1; Добавьте 1 мл рабочего раствора слабой кислоты по каплям и стирайте 30 секунд при комнатной температуре.
  4. Вылейте лишнюю жидкость, добавьте 1 мл раствора фосфомолибдовой кислоты по каплям и обрабатывайте 2 минуты при комнатной температуре. Добавьте 1 мл слабого кислотного рабочего раствора по каплям, затем промывайте 30 секунд.
  5. Вылейте лишнюю жидкость, капляйте 1 мл анилин-синего раствора для окрашивания и окрашивайте 1 минуту. Добавляйте 1 мл рабочего раствора слабой кислоты по каплям и промывайте 30 секунд.
  6. Быстро обезвоживайте в 95% этаноле в течение 2 секунд. Обезвоживайте в абсолютном этаноле дважды, по 10 секунд каждый раз.
  7. После высыхания очистите срезы в ксилоле и закрепите нейтральной жвачкой. Наблюдайте распределение коллагеновых волокон в каждой группе под микроскопом (коллагеновые волокна выглядят синими, мышечные волокна, цитоплазма и эритроциты ярко-красные, а ядра клеток — отчетливо сине-чёрными).

14. Измерение уровня ROS в ткани кожи

  1. Возьмите замороженные участки ткани кожи мыши (подготовленные в течение 1 часа после удаления), нанесите 1 мл очищающего раствора по каплям по всей поверхности и оставьте при комнатной температуре 10 минут.
  2. Встряхните раствор для промывки, затем добавьте 1 мл 10 мкм зонда с реактивными кислородными формами по капле, чтобы равномерно покрыть участки; Инкубировать при 37 °C вдали от света в течение 30 минут.
  3. Промывайте срезы дважды PBS, добавляйте крышные школьцы и наблюдайте с помощью флуоресцентного микроскопа (ROS-положительные участки демонстрируют красную флуоресценцию; чем ниже уровень ROS, тем слабее красный сигнал флуоресценции).

15. Тестирование биохимических индикаторов

  1. Собирайте сыворотку мышей и подготовьте реагенты для обнаружения согласно инструкциям соответствующих наборов для анализа.
  2. Измерьте активность аспартат трансаминазы (AST) и аланинтрансаминазы (ALT) в сыворотке мышей с помощью соответствующих наборов.
  3. Определите уровни азота мочевины в крови (BUN) и креатинина (CRE) в сыворотке мышей с помощью соответствующих наборов.

16. Вестерн блот

  1. Собрать 50 мг ткани или 1×106 клеток, лизировать образцы на льду в течение 30 минут с использованием буфера лизиса RIPA 200 мкл для получения белков.
  2. Центрифугуйте при 8000 × г в течение 5 минут при 4 °C и собирайте супернатант. Оцените содержание белка в клетках и тканях с помощью набора для анализа концентрации белка BCA.
  3. Провести электрофорез образцов белков на 12% геле SDS-PAGE и перенести разделённые белки в мембраны PVDF при температуре 4 °C.
  4. Блокируйте мембраны PVDF 5% BSA на 3 часа при комнатной температуре. Промыть мембраны TBST (содержит 20 мМ Tris-HCl, 150 мМ NaCl и 0,1% Tween-20) 3 раза, затем инкубировать ночью при 4°C с первичными антителами: P53 (1:1000), P21 (1:1000), P16 (1:100), коллаген I (1:1000), циклин A2 (1:500), циклин-зависимая киназу 2 (CDK2, 1:1000), MMP-1 (1:500), MMP-3 (1:1000), TGF-β1 (1:1000), Smad2 (1:1000), Smad3 (1:1000), p-Smad2 (1:1000) или p-Smad3 (1:1000).
  5. На второй день промыйте мембраны TBST 3 раза, затем инкубируют с 1 мл козьего противокроличьего IgG (1:10000) при комнатной температуре в течение 2 часов. Равномерно нанесите 500 мкл усиленного хемилюминесцентного (ECL) реагента на мембраны, затем сканируйте их с помощью гелевой визуализации.
  6. Проведите анализ серых значений с помощью программного обеспечения для анализа изображений. Выражаем относительный уровень выражения как отношение его серого значения к значениям GAPDH.

17. Статистический анализ

  1. Для in vitro клеточных анализов все эксперименты повторяются независимо три раза (n=3, биологические реплики).
  2. Для экспериментов на животных in vivo в каждой группе включено 6 мышей (n=6), что соответствует принципам 3R для благополучия и этики лабораторных животных.
  3. Все результаты выражаются в виде среднего ± стандартного отклонения. Проводите статистический анализ с помощью программного обеспечения для статистического анализа. Нормальность данных проверялась с помощью теста Шапиро-Уилка.
  4. Для нормально распределённых данных используйте односторонний ANOVA для сравнения между группами, а затем пост-хок тест Тьюки для парных сравнений между группами. Для ненормально распределенных данных применяется непараметрический тест Крускаля-Уоллиса. P< 0,05 указывает на значительную разницу.
  5. Генерируйте графики с помощью программного обеспечения для создания графиков.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

HNK облегчает повреждение от окислительного стресса в HDF-клетках, вызванное UVA
Влияние различных концентраций лечения HNK в течение 24 или 48 часов на жизнеспособность клеток HDF было изучено с помощью теста жизнеспособности клеток для выявления соответствующей концентрации и длительности лечения. Результаты показали, что 2,5, 5 и 10 мкм HNK не влияют существенно на жизнеспособность нормальных HDF-клеток после 24 или 48 часов лечения, что демонстрирует нетоксичность...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ультрафиолетовый свет — один из факторов окружающей среды, вредящий клеткам и организмам. Предыдущие исследования сообщали, что UVA, обладающая высокой проникающей силой, является основным типом ультрафиолетового света, достигающегоповерхности Земли 38. Фибробласты — важные функциональные клетки дермы, и их старение может прямо или косвенно вызывать возрасткожи до 39 лет. Фотовозраст, вызванный UVA, в модели HDF-клеток и модели безшерстной ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы утверждают, что у них нет финансовых конфликтов интересов.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор для анализа активности ALTBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайP2711MНабор для обнаружения активности аланиновых трансаминаз.
Набор для анализа CRE Amplex RedBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0291SНабор для обнаружения креатинина
Монтажная среда AntiFadeBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайP0126Монтажная среда для сохранения флуоресцентных сигналов
Набор для анализа активности ASTBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайP2715SНабор для обнаружения активности аспартатной трансаминазы
Белковый тест BCABeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайP0012Набор для определения концентрации белков
BSASigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАV900933блокирующий реагент для неспецифического связывания
Набор BUN AssayBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0574SНабор для обнаружения азота в крови мочевины
Набор для анализа CATBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0051Набор для обнаружения активности каталазы
Реагент CCK-8Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США96992Раствор для анализа жизнеспособности клеток, который представляет собой водорастворимую соль тетразолия
Антитела к CDK2Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA5-79024первичные антитела для обнаружения CDK2
Хемилюминесцентный агент ECLMedChemExpress, Монмут Джанкшн, Нью-Джерси, СШАHY-K1005Усовершенствованный реагент для обнаружения хемилюминесценции
Антитело к коллагену IInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA1-26204Первичные антитела для обнаружения коллагена I
Антитела к циклину A2Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA5-34682первичное антитело для обнаружения циклина A2
Раствор для окрашивания DAPISigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАD9542Ядерный окрашивающий краситель
Флуоресцентный зонд DCFH-DAMedChemExpress, Монмут Джанкшн, Нью-Джерси, СШАHY-D0940Реактивный кислородный флуоресцентный зонд
Решение дифференцированияBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайC0161Реагент для этапа дифференцировки гематоксилина
Зонд дигидроэтидияBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0063Датчик реактивных видов кислорода
Среда культуры фибробластовSunncell Biotechnology Co., Ltd., Ухань, Хубэй, КитайSNPM-H342Полная культурная среда для роста фибробластов
IgG с маркировкой FITC для коз против кроликовInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАF-2765Вторичные антитела, маркированные флуоресцеин изотиоцианатом (FITC)
Проточная цитометрияBD biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, СШАBD FACSCaliburTMПотоковый цитометр
Программное обеспечение FlowJoBD biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, СШАv10.8Программное обеспечение для анализа потоковой цитометрии
Флуоресцентный микроскопLeica, Гейдельберг, ГерманияГЛАВНЫЙ МИНИСТР ИЛМикроскоп для флуоресцентной визуализации
Антитела к GAPDHInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA1-987Антитела внутреннего контроля для нормализации белка
Гелевая система визуализацииInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАiBright CL1500Система визуализации для обнаружения белков
козёл против кроликов IgGInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, США31460Вторичные антитела для иммуннодетектирования
Программное обеспечение Graphpad Prism 9.0GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, СШАPrism 9.0Программное обеспечение для графов
Набора GSH AssayBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0053Набор для определения содержания глутатиона
Набор для окрашивания HEBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайC0105SГистологический набор для анализа морфологии тканей
HNKMedChemExpress, Монмут Джанкшн, Нью-Джерси, СШАHY-N0003Хонокиол, биоактивное соединение
Человеческие дермальные фибробластыSunncell Biotechnology Co., Ltd., Ухань, Хубэй, КитайSNP-H342Первичные клетки фибробластов кожи человека
Программное обеспечение IBM SPSS Statistics 26.0IBM Corporation, Армонк, Нью-Йорк, СШАСтатистика IBM SPSS 26.0Программное обеспечение для статистического анализа
Программное обеспечение ImageJУэйн Расбанд, Национальный институт психического здоровья, СШАВерсия 1.54HПрограммное обеспечение для анализа изображений
Антитела к Ki67Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАMA5-14520Первичные антитела для обнаружения маркеров клеточной пролиферации
Световой микроскопLeica, Гейдельберг, ГерманияDM3000Оптический микроскоп для изображения яркого поля
Набор для окрашивания трихрома MassonСоларбио, Пекин, КитайG1340Набор для окрашивания коллагена и соединительной ткани
Набор для анализа MDABeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0131SНабор для определения уровня малондиалдегида (маркер перекисления липид)
Считыватель микропластинThermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США1410101Инструмент измерения поглощения для клеточных анализов
Антитело к MMP-1Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA5-27210Первичные антитела для обнаружения матрикс-металлопротеиназы-1
Комплект для ИФА MMP-1Биотехнология, связанная с ферментами, Шанхай, Китайml038199Количественное обнаружение MMP-1 в биологических образцах
Антитела к MMP-3Абкам, Кембридж, Массачусетс, СШАab52915Первичные антитела для обнаружения матрикс-металлопротеиназы-3
Комплект для ИФА MMP-3Биотехнология, связанная с ферментами, Шанхай, Китайml105322количественное обнаружение MMP-3 в биологических образцах
Нейтральная резинкаBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайC0173Монтажная среда
Антитела к P16Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАPA5-20379Первичные антитела для обнаружения белка p16
Антитела к P21Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАMA5-14949Первичные антитела для обнаружения белка p21
Антитела к P53Абкам, Кембридж, Массачусетс, СШАAB131442Первичные антитела для обнаружения белка p53
параформальдегидСоларбио, Пекин, КитайP1110Реагент фиксации клеток и тканей
PIBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайST512Йодид пропидия для окрашивания ДНК в анализе клеточного цикла
Набор для про-коллагенового I-C пептидаТАКАРА, Токио, ЯпонияMK101Набор для обнаружения синтеза коллагена
Антитела p-Smad2Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США44-244Gпервичные антитела для фосфорилированного обнаружения Smad2
Антитела p-Smad3Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США44-246Gпервичные антитела для фосфорилированного обнаружения Smad3
Мембраны PVDFInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, США88520Мембрана переноса белков для западного блотинга
Буфер лизиса RIPABeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайP0013BБуфер экстракции белков для лизатов клеток и тканей
RNaseABeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайST579рибонуклеазу для удаления РНК во время окрашивания ДНК
Набор для окрашивания SA-β-галактозидазыBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайC0602Набор для обнаружения клеточного старения
SB431542MedChemExpress, Монмут Джанкшн, Нью-Джерси, СШАHY-10431TGF-и бета; 1 Ингибитор сигнального пути
Гели SDS-PAGEInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАWG1403BX10Полиакриламидные гели для белкового электрофореза
Бесшерстные мыши SKH1Виталривер, Пекин, КитайЖивотная модель для фотостарения кожи
Антитела к Smad2Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США51-1300первичные антитела для обнаружения Smad2
Антитела Smad3Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США51-1500первичные антитела для обнаружения Smad3
Набор SOD AssayBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайS0101SНабор для определения активности супероксиддисмутазы
TGF-и бета; 1 антителоАбкам, Кембридж, Массачусетс, СШАab215715первичные антитела к TGF и бета; 1 обнаружение
Triton X-100Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, СШАX-100Неионный детергент для проницаемости клеточной мембраны
Решение для анализа TUNELBeyotime Biotechnology, Шанхай, КитайC1086Реагент для обнаружения апоптоза для фрагментации ДНК
КсилолSigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США247642Органический растворитель для депарафинизации тканей

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gu, Y., Han, J., Jiang, C., Zhang, Y. Biomarkers, oxidative stress and autophagy in skin aging. Ageing Res Rev. 59, 101036 (2020).
  2. Chaudhary, M., Khan, A., Gupta, M. Skin ageing: pathophysiology and current market treatment approaches. Curr Aging Sci. 13 (1), 22-30 (2020).
  3. Lephart, E. D. Equol’s anti-aging effects protect against environmental assaults by increasing skin antioxidant defense and ECM proteins while decreasing oxidative stress and inflammation. Cosmetics. 5 (1), 16 (2018).
  4. Gromkowska-Kępka, K. J., Puścion-Jakubik, A., Markiewicz-Żukowska, R., Socha, K. The impact of ultraviolet radiation on skin photoaging—review of in vitro. studies. J Cosmet Dermatol. 20 (11), 3427-3431 (2021).
  5. Tsai, T. Y., et al. Djulis supplementation against oxidative stress and ultraviolet radiation-induced cell damage: the influence of antioxidant status and aging of skin in healthy subjects. J Cosmet Dermatol. 21 (7), 2945-2953 (2022).
  6. McCormick, E., et al. Topical nanoencapsulated cannabidiol cream as an innovative strategy combating UV-A-induced nuclear and mitochondrial DNA injury: a pilot randomized clinical study. J Am Acad Dermatol. 91 (5), 855-862 (2024).
  7. Ansary, T. M., Hossain, M. R., Kamiya, K., Komine, M., Ohtsuki, M. Inflammatory molecules associated with ultraviolet radiation-mediated skin aging. Int J Mol Sci. 22 (8), 3974 (2021).
  8. Deng, H., et al. Pterostilbene's protective effects against photodamage caused by UVA/UVB irradiation. Pharmazie. 73 (11), 651-658 (2018).
  9. Ho, C. Y., Dreesen, O. Faces of cellular senescence in skin aging. Mech Ageing Dev. 198, 111525 (2021).
  10. Bocheva, G., et al. Protective role of melatonin and its metabolites in skin aging. Int J Mol Sci. 23 (3), 1238 (2022).
  11. Rauf, A., et al. Honokiol: a review of its pharmacological potential and therapeutic insights. Phytomedicine. 90, 153647 (2021).
  12. Cardullo, N., Monti, F., Muccilli, V., Amorati, R., Baschieri, A. Reaction with ROO• and HOO• radicals of honokiol-related neolignan antioxidants. Molecules. 28 (2), (2023).
  13. Prasher, P., et al. Honokiol and its analogues as anticancer compounds: current mechanistic insights and structure-activity relationship. Chem Biol Interact. 386, 110747 (2023).
  14. Xin, L., et al. Honokiol alleviates radiation-induced premature ovarian failure via enhancing Nrf2. Am J Reprod Immunol. 90 (4), e13769 (2023).
  15. Faysal, M., et al. Neuropharmacological potential of honokiol and its derivatives from Chinese herb Magnolia species: understandings from therapeutic viewpoint. Chin Med. 18 (1), 154 (2023).
  16. Fan, X. X., et al. Honokiol improves depression-like behaviors in rats by HIF-1α-VEGF signaling pathway activation. Front Pharmacol. 13, 968124 (2022).
  17. Du, E., et al. Dietary honokiol supplementation improves antioxidant capacity, enhances intestinal health, and modulates cecal microbial composition and function of broiler chickens. Poult Sci. 103 (7), 103798 (2024).
  18. Sarrica, A., Kirika, N., Romeo, M., Salmona, M., Diomede, L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 84 (16), 1151-1164 (2018).
  19. Zhuang, Q., et al. A validated ultra-HPLC-MS/MS method for determination of honokiol in human plasma and its application to a clinical pharmacokinetic study. Bioanalysis. 11 (11), 1085-1098 (2019).
  20. Guillermo, R. F., et al. Time- and dose-response effects of honokiol on UVB-induced skin cancer development. Drug Discov Ther. 6 (3), 140-146 (2012).
  21. Prasad, R., Singh, T., Katiyar, S. K. Honokiol inhibits ultraviolet radiation-induced immunosuppression through inhibition of ultraviolet-induced inflammation and DNA hypermethylation in mouse skin. Sci Rep. 7 (1), 1657 (2017).
  22. Dikalov, S., Losik, T., Arbiser, J. L. Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals. Biochem Pharmacol. 76 (5), 589-596 (2008).
  23. Shen, C. Y., Jiang, J. G., Yang, L., Wang, D. W., Zhu, W. Anti-ageing active ingredients from herbs and nutraceuticals used in traditional Chinese medicine: pharmacological mechanisms and implications for drug discovery. Br J Pharmacol. 174 (11), 1395-1425 (2017).
  24. Kim, K. K., Sheppard, D., Chapman, H. A. TGF-β1 signaling and tissue fibrosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 10 (4), (2018).
  25. Lodyga, M., Hinz, B. TGF-β1—a truly transforming growth factor in fibrosis and immunity. Semin Cell Dev Biol. 101, 123-139 (2020).
  26. Liu, H., et al. TGF-β/Smads signaling pathway, Hippo-YAP/TAZ signaling pathway, and VEGF: their mechanisms and roles in vascular remodeling-related diseases. Immun Inflamm Dis. 11 (11), e1060 (2023).
  27. Huang, Y., et al. HIF-1α switches the functionality of TGF-β signaling via changing the partners of Smads to drive glucose metabolic reprogramming in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 398 (2021).
  28. Xie, X., et al. Iguratimod inhibits skin fibrosis by regulating TGF-β1/Smad signalling pathway in systemic sclerosis. Eur J Clin Invest. 52 (8), e13791 (2022).
  29. Guo, K., et al. Compound collagen peptide powder improves skin photoaging by reducing oxidative stress and activating TGF-β1/Smad pathway. Photochem Photobiol. 100 (6), 1874-1893 (2024).
  30. Yamane, T., et al. mTOR inhibition by rapamycin increases ceramide synthesis by promoting transforming growth factor-β1/Smad signaling in the skin. FEBS Open Bio. 6 (4), 317-325 (2016).
  31. Kataoka, S., et al. Honokiol acts as a potent anti-fibrotic agent in the liver through inhibition of TGF-β1/SMAD signaling and autophagy in hepatic stellate cells. Int J Mol Sci. 22 (24), 13678 (2021).
  32. Jang, H. Y., et al. Fisetin inhibits UVA-induced expression of MMP-1 and MMP-3 through the NOX/ROS/MAPK pathway in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes. Int J Mol Sci. 24 (24), 16212 (2023).
  33. Zheng, X., et al. Honokiol attenuates mitochondrial fission and cell apoptosis by activating Sirt3 in intracerebral hemorrhage. Chin Med J (Engl). 136 (6), 719-731 (2023).
  34. Xia, Y., Zhang, H., Wu, X., Xu, Y., Tan, Q. Resveratrol activates autophagy and protects from UVA-induced photoaging in human skin fibroblasts and the skin of male mice by regulating the AMPK pathway. Biogerontology. 25 (4), 649-664 (2024).
  35. Kim, J., Lee, N., Chun, Y. S., Lee, S. H., Ku, S. K. Krill oil's protective benefits against ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice and in vitro. experiments. Mar Drugs. 21 (9), (2023).
  36. Zhang, C., et al. Combination of lyophilized adipose-derived stem cell concentrated conditioned medium and polysaccharide hydrogel in the inhibition of hypertrophic scarring. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 23 (2021).
  37. Sun, G., et al. Panax ginseng Meyer cv. Silvatica phenolic acids protect DNA from oxidative damage by activating Nrf2 to protect HFF-1 cells from UVA-induced photoaging. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115883 (2023).
  38. Fadadu, R. P., Wei, M. L. Ultraviolet A radiation exposure and melanoma: a review. Melanoma Res. 32 (6), 405-410 (2022).
  39. Wlaschek, M., Maity, P., Makrantonaki, E., Scharffetter-Kochanek, K. Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging. J Invest Dermatol. 141 (4 Suppl), 985-992 (2021).
  40. Duan, Y., et al. Handelin reduces ultraviolet A-induced photoaging by inhibiting reactive oxygen species generation and enhancing autophagy. Tohoku J Exp Med. 259 (3), 189-198 (2023).
  41. Liu, S., et al. Oral supplementation of sea cucumber and its hydrolysate mitigates ultraviolet A-induced photoaging in hairless mice. J Sci Food Agric. 102 (5), 1987-1994 (2022).
  42. Liu, S., et al. Gly-Pro protects normal human dermal fibroblasts from UVA-induced damages via MAPK-NF-κB signaling pathway. J Photochem Photobiol B. 237, 112601 (2022).
  43. Lu, Z., et al. Hesperetin attenuates UVA-induced photodamage in human dermal fibroblast cells. J Cosmet Dermatol. 21 (11), 6261-6269 (2022).
  44. Michel, P., et al. Anti-inflammatory, antioxidant and photoprotective activity of standardised Gaultheria procumbens L. leaf, stem, and fruit extracts in UVA-irradiated human dermal fibroblasts. J Ethnopharmacol. 319 (Pt 2), 117219 (2024).
  45. Fu, H., et al. Tremella fuciformis polysaccharides inhibit UVA-induced photodamage of human dermal fibroblast cells by activating and up-regulating Nrf2/Keap1 pathways. J Cosmet Dermatol. 20 (12), 4052-4059 (2021).
  46. Park, C., et al. Honokiol ameliorates oxidative stress-induced DNA damage and apoptosis of C2C12 myoblasts by regulating ROS generation and the mitochondrial pathway. Anim Cells Syst. 24 (1), 60-68 (2020).
  47. Chen, Q., et al. Metformin attenuates UVA-induced skin photoaging by suppressing mitophagy and the PI3K/AKT/mTOR pathway. Int J Mol Sci. 23 (13), 6969 (2022).
  48. Wang, M., Guo, Y., Wan, M., Chen, Z., Zhong, J. L. TAZ reduces UVA-mediated photoaging through regulation of cell proliferation in skin fibroblasts. Photochem Photobiol. 99 (1), 153-159 (2023).
  49. Han, S., et al. Inhibitory effect of seawater pearl hydrolysate on UVA-induced photoaging of human skin fibroblasts. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1558288 (2022).
  50. Alam, A., et al. Computational development of new inhibitors for apoptosis stimulating protein of p53 (iASPP) using pharmacophore modeling, docking, and MD simulation approaches. J Cancer Biomol Ther. 1 (2), 1-9 (2024).
  51. Bai, G. L., et al. Rapamycin protects skin fibroblasts from UVA-induced photoaging by inhibition of p53 and phosphorylated HSP27. Front Cell Dev Biol. 9, 633331 (2021).
  52. Zhang, J., Yu, H., Man, M. Q., Hu, L. Aging in the dermis: fibroblast senescence and its significance. Aging Cell. 23 (2), e14054 (2024).
  53. Liu, H., Dong, J., Du, R., Gao, Y., Zhao, P. Collagen study advances for photoaging skin. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 40 (1), e12931 (2024).
  54. Fisher, G. J., et al. Skin aging from the perspective of dermal fibroblasts: the interplay between adaptation to the extracellular matrix microenvironment and cell autonomous processes. J Cell Commun Signal. 17 (3), 523-529 (2023).
  55. Li, F., et al. Discovery of matrix metalloproteinase inhibitors as anti-skin photoaging agents. Eur J Med Chem. 267, 116152 (2024).
  56. Song, M. J., et al. Downregulation of carnitine acetyltransferase by promoter hypermethylation regulates ultraviolet-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 116 (2), 70-77 (2024).
  57. Choi, S. I., et al. Eisenia bicyclis extract repairs UVB-induced skin photoaging in vitro and in vivo.: photoprotective effects. Mar Drugs. 19 (12), (2021).
  58. Kim, M. K., et al. Dual role of enhancer of zeste homolog 2 in the regulation of ultraviolet radiation-induced matrix metalloproteinase-1 and type I procollagen expression in human dermal fibroblasts. Matrix Biol. 119, 112-124 (2023).
  59. Xue, N., Liu, Y., Jin, J., Ji, M., Chen, X. Chlorogenic acid prevents UVA-induced skin photoaging through regulating collagen metabolism and apoptosis in human dermal fibroblasts. Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).
  60. Meng, L., et al. NPRC deletion attenuates cardiac fibrosis in diabetic mice by activating PKA/PKG and inhibiting TGF-β1/Smad pathways. Sci Adv. 9 (31), eadd4222 (2023).
  61. Li, W., et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad axis in liver cancer. Cancer Cell Int. 21 (1), 304 (2021).
  62. Xiang, D., et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling. Phytomedicine. 78, 153294 (2020).
  63. Jiang, H., Zhou, X., Chen, L. Asiaticoside delays senescence and attenuates ROS generation in UV-exposed cells through regulation of the TGF-β1/Smad pathway. Exp Ther Med. 24 (5), 667 (2022).
  64. Tong, T., Park, J., Moon, Y., Kang, W., Park, T. α-Ionone protects against UVB-induced photoaging in human dermal fibroblasts. Molecules. 24 (9), 1688 (2019).
  65. Liu, X. Y., Hwang, E., Park, B., Xiao, Y. K., Yi, T. H. Photoprotective and anti-inflammatory properties of vina-ginsenoside R7 ameliorate ultraviolet B-induced photodamage in normal human dermal fibroblasts. Appl Biochem Biotechnol. 189 (3), 729-744 (2019).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

TGFSmadHDF

Похожие статьи