Влияние хронической почечной недостаточности в сочетании с фибрилляцией предсердий на эндотелиальную функцию левой предсердия в модели бигля

Краткое содержание

В этом исследовании была установлена новая in vivo модель бигля хронической умеренной почечной недостаточности в сочетании с фибрилляцией предсердий через транскатетерную эмболизацию почечной артерии и быструю стимуляцию предсердий, а также показало, что эта комбинация серьёзно нарушает эндотелию левой предсердия, повышает прокоагулянтную активность и повышает риск тромбоза через воспалительные и RAAS-опосредованные пути.

Аннотация

Совместное явление фибрилляции предсердий (ФП) и почечной недостаточности (РИ) представляет собой клинически сложное явление с высокой распространённостью. В данном исследовании изучалось влияние хронической умеренной РИ в сочетании с ФП на эндотелиальную функцию левого предсердия у биглей. Хронический РИ был вызван транскатетерной эмболизацией главной ветви левой почечной артерии с использованием гранул желатиновой губки, при этом животных содержали в течение 3 месяцев для развития хронического паренхимального повреждения почек. Автофокус впоследствии индуцировался непрерывной быстрой предсердной стимуляцией (базовая длина цикла — 60 мс; напряжение — в 4 раза выше диастолического порога — 180 мин). Гистологические изменения оценивались с помощью окрашивания гематоксилином и эозином. Параметры, связанные с функцией эндотелия, коагуляцией, фибринолизом, воспалением, а также активностью системы ренин–ангиотензин–альдостерон (RAAS) в тканях плазмы и сердца были изучены с помощью ферментно-связанного иммуносорбентного анализа, количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и западного блотинга. Результаты показали успешное установление модели хронического повреждения почек с умеренным РИ, что подтверждается значительно повышенным уровнем креатинина в плазме, азота мочевины и снижением клиренса креатинина. Функция эндотелия левой предсердия была значительно нарушена у бигли с комбинированными RI и AF, что сопровождалось усилением прокоагулянтного эффекта и снижением фибринолиза. Воспалительные маркеры были повышены после процедуры RI или индукции ФП и дополнительно усилены в комбинированной группе RI+AF. Кроме того, активность RAAS, что подтверждается повышением уровня ренина и альдостерона, была повышена после RI и дополнительно увеличивалась при сочетании с AF. В итоге в этом исследовании успешно установлена модель хронической умеренной РИ в организме в организме в сочетании с ФП у бигли, что показало, что эта комбинация значительно нарушала эндотелиальную функцию левой предсердия и увеличивала тромботический риск.

Введение

Фибрилляция предсердий (ФП), наиболее распространённая форма устойчивой сердечной аритмии, тесно связана с неблагоприятными клиническими результатами. Из-за системных патофизиологических характеристик ФП эта аритмия часто сопровождается сложными патофизиологическими перекрёстными взаимодействиями с рядом сопутствующих заболеваний, включая когнитивное снижение, депрессию и системную^{эмболию 1}. Хроническая болезнь почек (ХБП) была выявлена как независимый фактор риска как для развития ФП, так и для возникновения тромбоэмболических событий. Примерно от 15% до 20% пациентов с диагнозом ХБП страдают от ФП, тогда как доля пациентов, получающих заместительную терапию почек, у которых развивается ФП, составляет от 15% до 40%². В то же время примерно 30%–60% пациентов с диагнозом ФП одновременно имеют лёгкую или умеренную почечную недостаточность (RI)³. Таким образом, совместимость ФП и РИ стала сложным клиническим явлением с высокой распространённостью среди пациентов. Двунаправленная связь между ФП и РИ значительно увеличивает риск заболеваемости ФП и также усугубляет прогрессирование почечной недостаточности, что в конечном итоге приводит к ухудшению клинических^{исходов 4}.

В предыдущих исследованиях крысы часто использовались для создания моделей RI; однако их небольшой размер сердца делает их непригодными для кардиоэлектрофизиологических экспериментов. Собаки, напротив, часто применяются в моделях почечной недостаточности средних и крупных животных, при этом нефрэктомия служит основным методом^{моделирования 5}. Тем не менее, этот подход связан с ограниченным уровнем успеха моделирования. Более того, поскольку нефрэктомия не вызывает напрямую повреждение паренхимы почек, она не способна эффективно моделировать патологические процессы почечной недостаточности. Поэтому крайне важно создать подходящую модель животных с использованием RI и AF. Примечательно, что Лян Зи и др. успешно установили лёгкую модель RI у биглей, эмболизировав мелкие ветви почечной артерии в левой почке в течение двух недель с использованием гранул желатиновой губки, что было связано с^{AF 6}; однако двухнедельный период наблюдения обычно считается недостаточным для моделирования клинической ХБП, поскольку характерные признаки хронической нефропатии, включая гломерулосклероз и тубулоинтерстициальный фиброз, требуют длительного повреждения паренхимы почек для полного развития в животных^{моделях 7,8}. Это подчёркивает необходимость хронической модели с более длительным периодом наблюдения, которая более точно отражает прогрессивный характер клинической ХБП.

Таким образом, настоящее исследование было направлено на создание животной модели хронической умеренной РИ в сочетании с ФП путём проведения транскатетерной эмболизации основного ствола левой почечной артерии у биглей и содержания животных в течение 3 месяцев для развития установленной хронической почечной патологии. Кроме того, мы исследовали патогенез дисфункции эндотелия левой предсердия при этих патологических состояниях, проверяя гипотезу о необходимости сочетания хронического умеренного RI и AF синергетически нарушать функцию эндотелия левой предсердия за счёт усиления воспаления и активации RAAS, тем самым увеличивая риск тромбоза за пределы одного из этих состояний. Эти результаты могут дать более глубокое понимание хронической РИ в сочетании с ФП и заложить основу для дальнейших исследований пользы терапии антикоагулянтами у пациентов с ФП и РИ.

Протокол

Это исследование было проведено строго в соответствии с рекомендациями из Руководства по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения (Публикация No 85-23, пересмотренная 1996 г.). Протокол исследования был утверждён Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Пекинской больницы Анчжэнь (Одобрение No 81700293). Протокол исследования был пересмотрен и утверждён Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию нашего учреждения. Были приложены все усилия для минимизации страданий животных и сокращения количества животных, используемых в исследовании. Реагенты и используемое оборудование перечислены в Таблице материалов.

1. Модель животных и экспериментальный дизайн

1. Подготовка и содержание животных
   Двадцать четыре здоровых самца биглей возрастом 4–5 лет и весом 10–12 кг были получены в компании Шанхайского университета Цзяо Тун по сельскохозяйственной экспериментальной ферме животных (см. таблицу материалов). Только самцы биглей использовались для минимизации потенциальных смешивающих эффектов гормональных колебаний, связанных с эструзным циклом, на свертывание, функцию эндотелиума и воспалительные реакции. Все бигли содержались индивидуально в стандартных клетках при температуре 22–25 °C с влажностью 40%–60% и циклом 12:12 часов свет-темнота. Животным предоставлялся стандартный лабораторный рацион собак и вода ad libitum. Перед началом экспериментальных процедур все бигли проходили недельный период адаптации. Трансторакальная эхокардиография (ТТЭ) проводилась на всех животных с использованием ультразвуковой системы с фазированным антенным датчиком 3,5 МГц для исключения клапанных патологий, кардиомиопатии и других структурных заболеваний сердца.
2. Анестезия и сосудистый доступ
   Все бигли голодали 12 часов перед процедурой. Анестезия была индуцирована внутривенным введением пентобарбитала натрия в дозе 20 мг/ кг через головную вену, вводилось медленно примерно в течение 3–5 минут до подтверждения потери пальпебрального рефлекса. После достижения адекватной анестезии эндотрахеальная интубация проводилась с использованием соответствующего размера (внутренний диаметр 7,0–8,0 мм) манжетной эндотрахеальной трубки, а также инициировали механическую вентиляцию при приливном объёме 15 мл/кг и дыхательной частоте 12–15 вдохов в минуту. Непрерывный гемодинамический мониторинг поддерживался на протяжении всей процедуры. Для контроля сердечного ритма и сердечного ритма применялась электрокардиограмма с тремя проводами (ЭКГ), а для контроля насыщения кислородом применялась пульсоксиметрия. Для введения жидкости (лактатный раствор Рингера, введённый со скоростью 5–10 мл/кг/ч) поддерживалась периферическая внутривенная линия, а при необходимости — дополнительные дозы анестезии.
   Впоследствии в правой паховой области при асептических условиях был сделан кожный разрез размером примерно 3–4 см для обнажения общей бедренной артерии с помощью тупой диссекции. Успешный доступ к артериям был подтверждён пульсационным возвратом крови. Сосудистая оболочка размером 6F была установлена в правую бедренную артерию с использованием модифицированной техники Селдингера. Гепарин натрий (4000 МЕ, разбавленный 10 мл нормального физиологического раствора) вводился через оболочку для предотвращения тромбоэмболии.

2. Эмболизация почечной артерии для индукции хронического умеренного РИ

Многофункциональный катетер 5F был введён через артериальную оболочку и продвинут под С-рукой флюороскопическое управление в брюшную аорту. Была проведена селективная каннуляция левой почечной артерии, а базовая ангиография артерий артерий была проведена путём инъекции 5–8 мл неионной йодированной контрастной среды со скоростью 3 мл/с для визуализации всего почечного артериального дерева. Успешное позиционирование катетера было подтверждено демонстрацией всей левой почечной артерии и её ветвей на ангиографических изображениях.

Затем индуцировали RI через транскатетерную эмболизацию главной ветви левой почечной артерии с использованием васывающихся гранул желатиновой губки (диаметром 50 мг). Гранулы желатиновой губки были приготовлены в виде суспензии путём смешивания примерно 50 мг гранул с смесью контрастной среды и обычного физиологического раствора в соотношении 1:1 до общего объёма примерно 2–3 мл. Эмболизационная суспензия вводилась медленно вручную через катетер в течение примерно 2–3 минут под непрерывным флюороскопическим наблюдением. Успешная эмболизация была подтверждена повторной ангиографией левой почечной артерии, которая показала отсутствие затуманения дистальной артерии в эмболизованных ветвях. После ангиографического подтверждения катетер и оболочка были удалены, а бедренная артерия отремонтирована швом из полипропилена 6-0. Хирургическая рана была закрыта слоями, и животным позволили восстановиться под пристальным наблюдением.

Для контрольной группы и группы ФП (фиктивная процедура) был проведён одинаковый процесс катетеризации, и равный объём (2–3 мл) нормального физиологического раствора был введён в левую почечную артерию через многофункциональный катетер после ангиографии почечной артерии.

3. Индукция предсердий с помощью быстрой стимуляции предсердий

Через три месяца после процедуры RI (или фиктивной процедуры) ФП был вызван в группе ФП и группе RI+AF. ФП была индуцирована у всего 12 биглей (n = 6 в группе AF и n = 6 в группе RI+AF). После повторной анестезии и сосудистого доступа, как описано выше, правая бедренная вена была заканюлирована для установки катетера. Катетер 6F с квадриполярным электродом (см. Таблицу материалов) был установлен под флюороскопическим руководством и размещён на боковой стенке правого предсердия. Правильное положение катетера подтверждалось записью характерных электрограмм предсердий на внутрисердечном канале, показывающих чёткие, резкие отклонения предсердий. Диастолический порог частоты стимуляции определялся постепенным снижением выходного напряжения стимулятора на 0,1 В с 5 В до потери захвата предсердий; Минимальное напряжение, обеспечивающее стабильный захват предсердий 1:1, фиксировалось как диастолический порог пейсинга. Быстрая предсердная стимуляция (базовая длина цикла 60 мс, соответствующая частоте 1000 ударов в мин; ширина выходного импульса 2 мс; напряжение, в 4 раза превышающее диастолический порог, обычно 2–4 В) выполнялась непрерывно в течение 180 минут с помощью кардиостимулятора для индуцирования ФП, как описано^{выше 9}. Успешная индукция предсердий была подтверждена появлением устойчивых нерегулярных R-R интервалов на поверхности ЭКГ и быстрых, дезорганизованных предсердных потенциалов на внутрисердной электрограмме, сохранявшихся не менее 1 минуты после кратковременного прекращения стимуляции стимуляций. Все 12 биглей (100%) достигли устойчивого автофокуса после завершения протокола пейстинга. Средняя продолжительность устойчивого преджделения после прекращения стимуляции варьировалась от 3 до 8 минут до спонтанной кардиоверсии на синусовый ритм.

Важно отметить, что, в отличие от протоколов серьёзного стимуляции (обычно 3–10 с), используемых для оценки восприимчивости ФП, непрерывный 180-минутный быстрый стимулятор предсердий, применяемый в данном исследовании, был специально разработан для моделирования устойчивого ФП и получения ранней молекулярной ремоделирования. Этот протокол хорошо зарекомендован и широко проверен в исследованиях ФП у собак ^9,10.

4. Экспериментальное проектирование и распределение групп

Экспериментальные животные были случайным образом распределены на четыре группы (n = 6 на группу): контрольная группа, группа RI, группа AF и RI в сочетании с группой AF (RI+AF). Бигли в группе RI и RI+AF проходили процедуру эмболизации RI на начальном уровне, а бигли в контрольной и AF группе получили фиктивную инъекцию нормального физиологического раствора в почечную артерию. Три месяца спустя ФП была индуцирована в группах ФП и РИ+ФП, как описано выше. Схематический обзор всего экспериментального дизайна и хронологии представлен на рисунке 1.

5. Определение клиренса креатинина

Клиренс креатинина (CCr) был определен с помощью 30-минутного эндогенного клиренса^{креатинина 11}. Кратковременно, после анестезии, в мочевой пузырь в асептических условиях вводили катетер Фолея, и мочевой пузырь полностью опорожнялся. Затем был инициирован 30-минутный период сбора мочи, в течение которого вся выделенная моча собиралась через катетер в откалиброванный сосуд для сбора мочи. По окончании 30-минутного периода сбора мочевой пузырь снова опорожняли для полного восстановления мочи. Одновременно из яремной вены был взят промежуточный образец крови для определения креатинина в плазме. CCr рассчитывался по стандартной формуле: CCr (мл/мин/кг) = (концентрация креатинина в мочи × объём мочи) / (концентрация креатинина в плазме × время сбора), нормализовано к массе тела.

6. Сбор образцов тканей и крови

Образцы крови были взяты из яремной вены на начальном уровне и перед жертвоприношением в антикоагулянты с ЭДТА и обычные пробирки с сепаратором^{сыворотки 11}. В конечном итоге все бигли были усыплены внутривенной инъекцией смертельной дозы пентобарбитала натрия в дозе 150 мг/кг перед восстановлением после наркоза. Почки были взяты для гистологического обследования. Были собраны сердца, а левый предсердный придаток (LAA) тщательно препарирован, заморожен в жидком азоте в течение 5 минут после удаления и хранён при −80 °C до молекулярного анализа. ЛАА был выбран для анализа тканей, поскольку он является самым распространённым участком образования тромба у пациентов с ФП и, следовательно, представляет собой наиболее клинически значимую анатомическую точку для оценки функции эндотелия и риска тромбоза.

7. Гистологическое наблюдение

Ткани почек фиксировались в 10% нейтральном буферном параформальдегиде в течение 24 часа, обезвоживались с помощью серии градуированного этанола (70%, 80%, 90%, 95% и 100% этанола, по 1 час каждый), очищались ксилолом (два изменения, по 30 минут каждая), вставлялись в парафин и нарезались на срезы толщиной 5 мкм с помощью ротационного микротома. После этого срезы окрашивались HE для наблюдения гистопатологических изменений. В частности, секции депарафинизировались в ксилоле (два изменения, по 10 минут каждая), регидратированы через нисходящую серию этанола, окрашены раствором гематоксилина в течение 5 минут, дифференцированы в 1% соляной кислотой и этанолом в течение 30 секунд, промывались в проточной водопроводной воде в течение 10 минут, окрашивались раствором эозина в течение 2 минут, сушили, очищали и крепили нейтральным бальзамом. Срезы изучались под световым микроскопом при увеличениях 100× и 400×.

8. Ферментно-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA)

Образцы крови были центрифугированы при 3000 × г при 4 °C в течение 20 минут, после чего супернатант (плазма) собирался и хранился при −80 °C до анализа. Уровни креатинина, азота мочевины, фактора фон Виллебранда (vWF), тромбомодулина (TM), асимметричного диметилангинина (ADMA), оксида азота (NO), ингибитора активатора плазминогена-1 (PAI-1), активатора плазминогена ткани (t-PA), фактора некроза опухоли-α (TNF-α), высокочувствительного C-реактивного белка (hs-CRP), интерлейкина-6 (IL-6), ренина и альдостерона (ALD) были исследованы с использованием коммерческих наборов ELISA согласно инструкциям производителя. Кратко: 100 мкл плазменного образца или стандарта добавлялось к 96-лучным микропластинам, покрытым антителами, инкубировалось при 37 °C в течение 2 часа, четыре раза промывалось буфером для промывания, инкубировалось с биотинилированным антителом при 37 °C, затем снова промывалось, инкубировалось со стрептавидином-HRP конъюгатом 30 минут при 37 °C, после чего развивалось субстрат TMB в течение 15–20 минут в темноте. Реакцию остановили с помощью 50 мкл стоп-раствора, а поглощение измерялось на 450 нм с помощью считывателя микропластин. Все образцы анализировались в дубликате.

9. Количественная ПЦР в реальном времени (qRT-PCR)

Экстракция полной РНК из тканей LAA проводилась с использованием реагента TRIzol, после чего с помощью спектрофотометра была обнаружена чистота и концентрация РНК при коэффициенте поглощения 260/280 нм (допустимый диапазон 1,8–2,0). Всего 1 мкг РНК был обратно транскрипирован в комплементарную ДНК (кДНК) с помощью комплекта реагентов PrimeScript RT. Реакция обратной транскрипции проводилась при 37 °C в течение 15 минут, после чего следовала инактивация при 85 °C в течение 5 секунд. Затем на системе ПЦР с использованием SYBR Green Master Mix проводилось количественное измерение в реальном времени. Программа термического циклирования включала начальную денатурацию при 95 °C в течение 5 минут, затем 40 циклов денатурации при 95 °C в течение 10 секунд и отжиг/продолжение при 60 °C в течение 30 секунд. Флуоресцентный сигнал фиксировался в конце каждого шага расширения с помощью зелёного канала SYBR. Значения порогового цикла (Ct) определялись автоматически программным обеспечением прибора. Изменения уровней мРНК в складках были определены с помощью метода 2^−ΔΔCt . β-актин служил внутренним контролем. Все образцы проводились в тройном экземпляре.

10. Вестерн-блоттинг

Общий белок был извлечен из тканей LAA с помощью буфера лизиса радиоиммунопреципитационного анализа (RIPA) (состоящий из 50 мМ Tris-HCl, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS, дополненного коктейлем ингибиторов протеазы и фосфатазы; см. Таблицу материалов). Ткани были гомогенизированы на льду и центрифугированы при 12 000 × г при 4 °C в течение 15 минут, после чего был собран супернатант. Концентрация белка была количественно измерена с помощью набора BCA Protein Assay. Впоследствии равные количества белка (30 мкг на полосу) подвергались 12% SDS-PAGE для разделения при 80 В в течение 30 минут (стекинг геля), затем 120 В примерно 60 минут (растворяющий гель), а затем передано на мембраны поливинилиденфторида (PVDF) при 300 мА в течение 90 минут в буфере переноса (25 мМ Трис, 192 мМ глицина, 20% метанола). Мембраны блокировались 5% обезжиренным молоком, растворённым в TBST (Tris-буферный физиологический раствор с 0,1% Tween-20) при комнатной температуре в течение 2 часов, а затем исследовали первичными антителами (см. Таблицу материалов для источников антител, каталожных номеров и разбавлений) при 4 °C ночью. На следующий день мембраны были промыты трижды с помощью TBST (по 10 минут каждая) и инкубированы соответствующим вторичным антителом, конъюгированным с HRP (см. таблицу материалов) в течение 2 часов при комнатной температуре. После трёх дополнительных TBST-промывок (по 10 минут каждое) пятна визуализировались с помощью комплекта улучшенной хемилюминесценции (ECL) с использованием системы хемилюминесцентной визуализации. Глицералдегид-3-фосфатдегидрогеназа (GAPDH) служила внутренним контролем. Денситометрический анализ был проведён с помощью программного обеспечения ImageJ, и относительные уровни экспрессии белков были нормализованы до GAPDH. Приблизительная молекулярная масса обнаруженных белков была следующей: vWF (~260 кДа), TM (~60 кДа), эндотелиальная оксидоксидная синтаза (eNOS, ~130 кДа), индуцируемая оксидная азотсинтаза (iNOS, ~130 кДа), PAI-1 (~45 кДа), t-PA (~70 кДа) и GAPDH (~36 кДа). Полноразмерные, необрезанные изображения вестерн-блот приведены на Дополнительном рисунке 1 и Дополнительном рисунке 2.

11. Статистический анализ

Все значения были проанализированы с помощью статистического и графического программного обеспечения и представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Нормальность распределения данных оценивалась с помощью теста Шапиро-Уилка перед параметрическим анализом. Однородность дисперсии оценивалась с помощью теста Левена. Для данных, соответствующих предположениям нормальности и однородности дисперсии, сравнивание различий проводилось с использованием одностороннего ANOVA, а затем пост-хок тест Даннетта для множественных сравнений с контрольной группой. Для данных, не соответствующих предположении нормальности, применялся непараметрический тест Крускаля-Уоллиса, за которым следовал пост-хок тест Данна. В этом исследовании все переменные соответствовали предположениям о нормальности и равномерной дисперсии; поэтому параметрический анализ применялся на всех этапах. В программном обеспечении для анализа данные вводились в сгруппированные таблицы данных, односторонний ANOVA выбирался из меню анализа столбцов, тест Даннетта был выбран для пост-хок сравнений, а порог значимости был установлен на уровне p < 0,05.

Результаты

Животная модель хронической умеренной РИ и ФП

Схематический обзор экспериментального дизайна и хронологии представлен на рисунке 1. Репрезентативные изображения ангиографии левой почечной артерии до и после транскатетерной эмболизации, показанные на рисунке 2A,B, показали, что мелкие ветви почечной артерии были успешно окклюзированы после транскатетерной эмболизации, ...

Обсуждение

В данном исследовании была установлена in vivo модель умеренного РИ в сочетании с ФП и изучена патогенез дисфункции эндотелия левой предсердия при этих патологических условиях. Основные результаты этого исследования следующие: во-первых, эмболизация левой главной почечной артерии в течение 3 месяцев у бигли успешно вызвала умеренный РИ. Во-вторых, модель AF была фактически установлена у биглей. В-третьих, функция эндотелия левой предсердия была значительно нарушена у животных с ...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
6-0 Полипропиленовая шовная нить	Ethicon (Johnson & Johnson)	8706H	Для репарации феморальной артерии
5F Многофункциональный катетер	Cordis (Cardinal Health)	521-550S	Для канюляции почечной артерии и эмболизации
6F Квадриполярный электродный катетер	St. Jude Medical	401443	Для право-предсердного стимулятора
6F Васкулярный вводный нижняя оболочка	Terumo	RS*A60K10SQ	Для доступа к феморальной артерии
ABI 7500 система реального времени ПЦР	Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific)	4351105	Для термоциклирования qRT-PCR и флуоресцентного обнаружения
Абсорбируемые гранулированные желатиновые губки (диаметр 50 мг)	Jinling Pharmaceutical	—	Для транскатетерной почечной артериальной эмболизации; готовится в виде суспензии с контрастным средством и физиологическим раствором (1:1)
ADMA ELISA Kit (собаки)	Cusabio	CSB-E09297c	Для измерения асимметричного диметиларгинина в плазме
Альдостероновый ELISA Kit (собаки)	Cusabio	CSB-E08014c	Для измерения альдостерона в плазме
BCA набор для анализа белка	Thermo Fisher Scientific	23225	Для количественного определения концентрации белка
Бигли (мальчики, 4–5 лет, 10–12 кг)	Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd.	—	Здоровые бигли; размещаются индивидуально в стандартных условиях
Система флюорографии с С-образной рамой	GE Healthcare	OEC 9900 Elite	Для руководства флюорографией во время катетеризации и ангиографии
Система хемилюминесцентного анализа	Bio-Rad	ChemiDoc XRS+	Для визуализации полос Western blot
Креатининовый ELISA Kit (собаки)	Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute	C011-2-1	Для измерения креатинина в плазме
Маска для эндотрахеальной интубации (ID 7.0–8.0 мм)	Covidien (Medtronic)	86449	Для эндотрахеальной интубации и механической вентиляции
Кардиостимулятор DF-5A	Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute	DF-5A	Для быстрого предсердного стимулятора; настройки: BCL 60 мс, ширина импульса 2 мс, напряжение 4× порога
ECL субстрат для Western Blotting	Thermo Fisher Scientific	32106	Усиливающий хемилюминесцентный набор для визуализации блотов
Трубки с антикоагулянтом ЭДТА	BD Vacutainer	367835	Для сбора крови (сепарация плазмы)
Первичное антитело eNOS (кролики)	Cell Signaling Technology	32027	Разбавление 1:1000; для Western blotting (~130 кДа)
Раствор эозина Y (водный)	Solarbio	G1100	Для контростирования H&E (2 мин)
Мочевой катетер Фоли (8 Fr)	C.R. Bard	0165SI08	Для сбора мочи по времени во время определения CCr
Первичное антитело GAPDH (кролики)	Cell Signaling Technology	5174	Разбавление 1:1000; внутренний контроль для Western blotting (~36 кДа)
GraphPad Prism (версия 8.0)	GraphPad Software	—	https://www.graphpad.com; для статистического анализа (однофакторный дисперсионный анализ, тест Даннета)
Гематоксилиновый раствор (Гаррис)	Solarbio	G1140	Для ядерного окрашивания H&E (5 мин)
Гепариновые натриевые инъекции (нефракционированные)	Changzhou Qianhong Biopharma	H32022088	4000 МЕ, разбавленные в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида; для антикоагулирования во время катетеризации
Конъюгированное с HRP козье антитело к мышиным IgG вторичное	Cell Signaling Technology	7076	Разбавление 1:5000; для Western blotting
Конъюгированное с HRP козье антитело к кроликовым IgG вторичное	Cell Signaling Technology	7074	Разбавление 1:5000; для Western blotting
hs-CRP ELISA Kit (собаки)	Cusabio	CSB-E08557c	Для измерения высокочувствительного С-реактивного белка в плазме
IL-6 ELISA Kit (собаки)	R&D Systems	CA6000	Для измерения интерлейкина-6 в плазме
Программное обеспечение ImageJ (версия 1.53)	National Institutes of Health	—	https://imagej.nih.gov/ij/; для денситометрического анализа Western blot
Первичное антитело iNOS (кролики)	Abcam	ab178945	Разбавление 1:1000; для Western blotting (~130 кДа)
Раствор Лактатового Рингера	Baxter	2B2324	Внутривенная жидкость; инфузия с интенсивностью 5–10 мл/кг/ч в течение процедур
Светловой микроскоп	Olympus	BX53	Для гистологического исследования почечных секций, окрашенных HE
Механический вентилятор (ветеринарный)	Midmark	Matrx Model 30