Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Морфометрический анализ формы: инструментарий для анализа для количественного определения черепно-лицевой формы у данио-рерио.

929 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70345

⸱

27 февраля 2026 г.

 ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Genetics, Alcohol Research Center, University of Louisville, 2Department of Pediatrics, Section of Developmental Biology, University of Colorado School of Medicine, Anschutz Medical Campus

В этой статье

Краткое содержание

В данной работе описывается протокол количественной оценки формы краниофациального хряща с помощью бесплатного программного обеспечения (tpsDigs2, MorphoJ и PAST) для измерения изменений структуры лица у личинок данио-рерио.

Аннотация

Расстройства фетального алкогольного спектра (FASD) характеризуются различными физическими, когнитивными и поведенческими нарушениями, вызванными пренатальным воздействием этанола, включая те, что затрагивают скелет лица. Чувствительные к этанолу генетические локусы способствуют высокой вариации FASD, что усложняет анализ формы лица. Ранее мы показали, что можем анализировать эти изменения формы лица в результате взаимодействия генов и этанола у данио-рерио. Данио-рерио является идеальной моделью для анализа этой вариации по нескольким причинам; (i) 70% генов являются ортологами между человеком и данио-рерио; (ii) внешнее оплодотворение позволяет исследователям контролировать время и дозировку обработки этанолом; (iii) структура скелета лица сохраняется у позвоночных; (iv) полупрозрачные личинки позволяют непосредственно наблюдать изменения в краниофациальной скелетной структуре во время развития. Однако полностью оценить форму черепно-лицевой кости с помощью простых линейных измерений сложно, так как они не отражают общие изменения формы. Кроме того, изменения размера головки могут усложнять интерпретацию данных. Для решения этой проблемы мы применили морфометрический подход, анализируя общую форму лица с помощью основных компонентов с помощью бесплатного программного обеспечения tpsDigs2, MorphoJ и PAST. Сочетание этого программного обеспечения позволяет парно сравнивать общую морфологию лица. Здесь мы излагаем наш подход и анализ формы лица у мутантов-данио-рерио, обработанных этанолом, используя эти программы для проведения серии дополнительных многомерных статистических анализов.

Введение

Расстройства фетального алкогольного спектра (FASD) характеризуются широким спектром нарушений развития, включая поведенческие, неврологические ифизические 1,2. К этим физическим дефектам относятся краниофациальные дефекты, такие как гипоплазия челюсти 3,4,5,6. Хотя время и дозировка воздействия этанола влияют на сложную этиологию FASD, генетический вклад играет значительную роль в этиологииFASD 6,7,8,9,10,11,12. Это сочетание факторов затрудняет изучение дефектов лица у человеческих когорт. Для изучения влияния пренатального воздействия этанола на развитие мы используем модель данио-рерио. Данио-рерио служит сильной моделью FASD, так как у них 70% генных ортологов с человеком, 82% известныхзаболеваний-вызывающих гены 13,14,15,16. Помимо генетической консервации, данио-рерио: (i) обладают высокой плодовитостью, что позволяет одновременно производить несколько личинок данио, (ii) проходят внешнее оплодотворение, что позволяет непосредственно изучать чувствительные к этанолу процессы развития, (iii) имеют высококонсервативное и стереотипное черепно-лицовое развитие позвоночных, и (iv) являются полупрозрачными эмбрионами/личинками, позволяющими визуализировать скелетныеструктуры 17. Ранее мы показали, что мутации во многих генах данио-рерио-рерио повышают чувствительность эмбрионов к дефектам лица, вызванным этанолом, и эти дефекты могут быть тонкими и трудно выявляемымиглазом 10,18. Кроме того, мы наблюдали, что у личинок дикого типа, обработанного этанолом, также наблюдаются незначительные изменения в краниофациальной области по сравнению с необработанными личинками дикого типа, хотя эти изменения трудно определитьглазом 10. Хотя эти изменения остаются незамеченными при визуальном наблюдении, мы смогли продемонстрировать эти изменения формы лица, вызванные этанолом, с помощью морфометрических анализов, доступных на двумерных снимках висцерокрания10.

Грань представляет собой сложную трёхмерную структуру, которую трудно измерить с помощью традиционных линейных измерений. Эти единичные линейные показатели не учитывают относительное положение каждой измеряемой конструкции и их влияние на другие измеряемые структуры поверхности. Морфометрический анализ устраняет эти недостатки, используя конфигурации форм через ориентиры, учитывающие относительное положение всех измеренных структур, включая общие различия вразмерах 18,19,20. Такой подход приводит к более точным данным, с большим разрешением и гораздо проще визуализируемыми, что может дать результаты, которые невозможно наблюдать при использовании обычных линейныхизмерений 18, 19 и 20. Кроме того, морфометрические подходы могут проводить прямые сравнения между группами и внутри них с помощью многомерных статистических методов. Здесь мы описываем использование бесплатного морфометрического программного обеспечения tpsUtil, tpsDigs221, MorphoJ20 и Paleontological Statistics (PAST)22 в сочетании с двумерными изображениями висцерокрания в необработанных и обработанных этанолом гетерозиготных диких и личинках для гена Bone Morphogenetic Protein (Bmp) bmp7a. Хотя эти программы используются преимущественно в палеонтологии и экологических областях, в сочетании они обеспечивают тщательный анализ формы лица. В конечном итоге в этом протоколе мы показываем, как использовать эти свободно доступные программные приложения для количественной оценки изменений формы черепно-лицевой хряща в модели данио-рерио.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все личинки данио-рерио, используемые в этой процедуре, были выращены и выведены в соответствии с установленными протоколами IACUC, одобренными УниверситетомЛуисвилля 23.

ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовались штамм данио-рерио bmp7aty68a24 и дикие родственники (все на фоне AB), при этом взрослая рыба поддерживалась при температуре 28,5 °C с циклом светлого и тёмного 14/10 часов. Используйте соответствующие линии в соответствии с желаемыми экспериментальными результатами. Используйте воду, стерилизированную с помощью обратного осмоса. Пол как биологическая переменная не относится к изучаемым стадиям развития, так как пол впервые обнаруживается у данио-рерио примерно через 20–25 дней после оплодотворения (dpf)25, после всех анализов.

1. Лечение этанолом

  1. Собирать яйца от гетерозиготных скрещиваний и формировать эмбрионы морфологически, какописано 23.
  2. Сортируйте эмбрионы по группам по 100 человек и выращивайте при температуре 28,5 °C до желаемого времени развития. Инкубировать все группы в эмбриональной среде (EM)10,18.
  3. Через 6 часов после оплодотворения (HPF) замените EM на свежую или EM с 1% этанола (v/v). При напряжении 24 hpf промывайте EM с этанолом с тремя свежими изменениями EM10,18.

2. Окрашивание лица и визуализация

  1. Зафиксируйте личинки данио-рерио-рерио на 5 dpf и покрасьте Alcian Blue, маркировав хрящ (рисунок 1), как описаноранее, 26.
  2. Возьмём целый монтаж, вентральный вид, яркие изображения висцерокрания, посадку личинок, как описаноранее, 27.
  3. Кратко поместите рыбу, вентральную поверхность вверх, в раствор 50% глицерина после завершения окрашивания Alcian Blue.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Настройки составных микроскопов могут различаться; Используйте настройки, соответствующие желаемым структурам изображения. В этом исследовании использовался составный микроскоп Olympus BX53 для получения всех анализируемых изображений. Снимки были сделаны с увеличением в 10 раз.

3. Генотипирование

  1. Удалять хвосты у личинок 5 dpf после окрашивания хряща Alcian Blue, как описановыше 18.
  2. Отдельте головы и хвосты личинок. Головки храните в хранилище 50% глицерила для дальнейшей визуализации.
  3. Лиз добавляет 5 мкл протеиназы K (10 мг/мл) для извлечения гДНК.
  4. Проведите ПЦР на гДНК для каждого образца с помощью праймеров, направленных на интересующий ген, чтобы амплифицировать области, содержащие SNP.
  5. Переварить продукт ПЦР с помощью переваривания ДНК на основе рестрикционной эндонуклеазы для дифференциации мутантов от диких аллелей на основе SNP с целью идентификации SNP. Разделите образцы по генотипам на объединённые группы и получите изображение для анализа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для этой работы SNP был усилен в bmp7a и генотипирован с помощью BslI (NEB).

4. Программное обеспечение, используемое для анализа форм

  1. Используйте tpsUtil и tpsDig221, а также MorphoJ20 (https://sbmorphometrics.org) для морфометрического анализа личинок с алциановым окрашенным покрытием, а также MorphoJ и Paleontological Statistics Software Package for Education and Data Analysis (PAST)22 (https://www.nhm.uio.no/english/research/resources/past/) для всех статистических анализов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Программное обеспечение tpsUtil доступно по ссылке «Утилитные программы», программное обеспечение tpsDig2 — по ссылке «data acquisition», а MorphoJ — по ссылке «Комплексные программы» на https://sbmorphometrics.org. Диагностика каждого программного обеспечения легко доступна как онлайн, так и на различных платформах, и внутри самого программного обеспечения. С помощью MorphoJ были сгенерированы анализ основных компонентов (PCA), канонический анализ вариаций (CVA), Procrustes ANOVA и каркасные графики изменений лиц, а также многомерный тест нормальности и многомерный анализ дисперсии (MANOVA) с использованием PAST.

5. Постоянное визуализация скелета лица для анализа всех образцов

  1. Убедитесь, что изображения скелета лица сделаны в идентичных микроскопах и сохраняются в виде .tif файлов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Настройки микроскопа варьируются в зависимости от его настройки и функциональности микроскопа, а также образцов/тканей для изображения. Главное — это согласованная установка микроскопа и подготовка образцов.
  2. Сохраняйте файлы в одной папке с метками, чтобы полностью идентифицировать эксперимент.

6. Подготовка изображений с помощью программного обеспечения TPS

  1. Откройте блокнот и выберите «Сохранить как». Отсюда нажмите на все файлы внизу. Сохраните файл как «experiment-name.tps» и поместите его в папку со всеми изображениями для анализа.

7. Ввод изображений в программное обеспечение TPS

  1. Откройте программное обеспечение tpsUtil. Далее откройте Operation и выберите файл Build tps на вкладке изображений .
  2. Из этой вкладки нажмите « Ввод » и откройте файл с изображениями. Нажмите на первое изображение в файле и выберите «Открыть».
  3. Выберите вкладку вывода , затем файл блокнота tps и сохраните. Если попросят заменить файл, выберите «да».
  4. Далее нажмите на вкладку «Настройка » и создайте. Перейдите в файл, чтобы проверить, были ли изображения добавлены.

8. Добавление ориентиров к изображениям

  1. Откройте tpsDigs2 и откройте следующие вкладки в порядке: Input source, file, затем сохранённый файл tps Notepad.
  2. Далее нажмите « Опции », чтобы визуализировать опцию «Инструменты изображения ». Здесь обязательно установите опорную длину на 100 мкм. Нажмите на заданную шкалу.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не масштабируйте относительно масштаба на изображении.
  3. При установке масштаба нажмите OK , чтобы установить параметры, затем выйдите из инструментов изображения.
  4. На этом этапе добавьте ориентиры к каждому изображению для правильного анализа морфологии, нажав на символ прицеливания.
  5. Убедитесь, что ориентиры расположены в одном и том же порядке для каждого изображения. Ориентиры были размещены на следующих суставах между элементами хряща (см. рисунок 1E, E'):
    1. Средняя линия соединения между хрящами Меккеля (ориентир #1, рисунок 1E, E').
    2. Двусторонние суставы между синдромом Меккеля и небночественным хрящем (Ориентиры #2, рисунок 1E, E').
    3. Средний сустав между цератогиальными хрящами (Ориентир #3, Рисунок 1E, E').
    4. Двусторонние суставы между небёчноквадратными и цератогиальными хрящами (Ориентиры #4, рисунок 1E, E').
    5. Дистальный конец гиомандибулярных хрящей (Ориентиры #5, рисунок 1E, E').
  6. После размещения ориентиров на изображении нажмите «Файлы » в выпадающее меню. Следуйте этому пути, чтобы сохранить данные , а затем перезаписать.
  7. Выход из tpsDigs2.

9. Использование MorphoJ для анализа формы с помощью Procrustes ANOVA

  1. Откройте программу MorphoJ.
  2. В предварительном разделе создайте и наименуйте набор данных. Выберите создать новый набор данных и назвать его. Затем нажмите tps и выберите блокнот с добавленными новыми точками данных из шага 8.4. Создайте набор данных.
  3. Изображения готовы к статистическому просмотру с помощью подгонки Прокруста. Выберите дерево проектов для чтения вкладки и нажмите на набор данных. Выберите следующие кнопки в этом маршруте: предварительные настройки, новая посадка Прокруста, выравнивание по главным осям и выполнение прилегания Прокруста.
  4. Выберите матрицу генерации ковариации в предварительных значениях; программное обеспечение будет указывать координаты Прокруста. Выполняйте функцию по запросу.
  5. Выберите создать или отредактировать вайрфрейм в предварительном разделе и свяжите точки на изображениях. Затем выберите точки ссылки и примите или создайте изображение. Редактировать классификаторы.
  6. Откройте таблицу, оставив MorphoJ открытым. Добавьте всю необходимую информацию, например: генотип, лечение, генотип и обработка, эксперимент и т.д. Сохраните таблицу в виде CSV-файла.
  7. В MorphoJ нажмите « Файл » и импортируйте переменные классификатора , чтобы выбрать CSV-файл. После открытия файла вернитесь к дереву проекта и нажмите на набор данных.
  8. После открытия набора данных нажмите на предварительные данные и отредактируйте классификаторы. Это обеспечит добавление всех изображений.
  9. Далее нажмите на дерево проекта, Covmatrix, затем на Variation вверху.
  10. Выберите «Анализ основных компонентов », чтобы увидеть результаты PC. Нажмите на PC scores , чтобы увидеть сгенерированный график.
  11. Чтобы добавить цвета в график, кликните правой кнопкой мыши и нажмите эллипсис уверенности , чтобы добавить нужный классификатор. Нажмите цветные точки для добавления цветов, и готовы принять эти изменения.
    ПРИМЕЧАНИЕ: После того как вкладка PC score будет закрыта и вновь открыта, следуя инструкциям из шага 9.10, цвета должны быть обновлены.
  12. Чтобы изменить цвета каркаса, перейдите в Предварительные этапы. Нажмите « Настроить параметры » для графика фигур, расположенного внизу экрана. Выберите каркасные графики , чтобы изменить цвета целевой формы, начальной формы и чисел.
  13. Выберите вариант, затем Прокруст ANOVA.
  14. Экспортировать результаты Procrustes ANOVA в файл таблицы с шага 9.7.

10. Канонический вариатный анализ набора данных

  1. В MorphoJ выберите исходный набор данных или проект. Для начала канонического вариационного анализа (CVA) выберите «Сравнение », затем «Канонический вариантный анализ». Выберите переменную классификатора — выберите Генотип и Лечение и выполните функцию.
  2. Чтобы экспортировать CVA, перейдите на вкладку результатов и щёлкните правой кнопкой мыши на открытой странице результатов. Выберите «Экспортировать в файл » и сохранить информацию.
  3. Нажмите «Дерево проектов» и выберите CVA, затем «Оценки». В левом верхнем углу страницы выберите «Файл». После открытия вкладки «Файл» выберите «Экспорт набора данных» и тип данных и «Генотип и лечение». Сохраняйте баллы CVA в виде .txt файла.
  4. Чтобы подготовить файл для PAST, откройте сохранённые результаты CVA в Notepad или аналогичном программном обеспечении. Измените ID в левом верхнем углу на Label , чтобы не путать программное обеспечение PAST. Сохраните отредактированные оценки CVA или их эквивалент.

11. MANOVA в программном обеспечении PAST

  1. Чтобы импортировать баллы CVA в PAST, выберите File, затем откройте , чтобы получить доступ к сохранённым оценкам CVA из Notepad или аналогичного. Когда открывается окно «Импорт текстового файла », выберите «Имена», «Данные » для строки и столбца, а также вкладку для разделителя. Выберите Импорт.
  2. На вкладке «Показать » выберите атрибуты столбца. Рядом с кнопкой «Тип » откройте выпадающее меню и выберите « Группа » для первого столбца, где должна быть переменная классификатора.
  3. Выделите данные с PC или CV. Выберите Многомерность, Тесты и Многомерная нормальность для запуска теста нормальности. Проведите этот тест на ПК и CV отдельно.
  4. Нажмите на серую пустую ячейку в левом верхнем углу, введите сверху, чтобы выбрать весь набор данных. Выберите Multivariate, Tests и MANOVA для обработки MANOVA. Экспортировать результаты MANOVA в файл таблицы с шага 9.7.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Программное обеспечение будет предоставлять как сводные , так и парные результаты. Экспортируйте или сохраняйте оба.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для выявления изменений формы лица, вызванных этанолом, у данио-рерио, мы объединили свободно доступные программные приложения для генерации и количественной оценки морфологических данных скелета лица. Эмбрионы взрослых носителей гетерозиготных bmp7a были получены и обработаны этанолом мощностью 6-24 hpf. Личинки этих скрещиваний фиксировались на уровне 5 dpf, а лицевые хрящи были окрашены в цвет Alcian Blue. Были сделаны изображения висцерокрания для каждой личинки в каждом ген...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

FASD характеризуется широким спектром дефектов развития, включая черепно-лицевые дефекты, такие как гипоплазия челюсти. Данио-рерио является сильной моделью FASD благодаря их генетической сохранности у человека, высокой плодовитости, полупрозрачным личинкам и внешнему оплодотворению. Данио-рерио используется десятилетиями для изучения как формирования черепно-лицевой скелета, так и влияния этанола на развитие 6,12,13,15,18,28,29...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Исследование, представленное в этой статье, было поддержано грантом Национального института здоровья/Национального института по борьбе с алкоголем (NIH/NIAAA) R01AA031043 C.B.L.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
tpsUtil, tpsDig2, MorphoJhttps://sbmorphometrics.orgБесплатное программное обеспечение — для скачивания может потребоваться административные разрешения
ПРОШЛОЕhttps://www.nhm.uio.no/english/research/resources/past/Бесплатное программное обеспечение — для скачивания может потребоваться административные разрешения
Составный микроскоп BrightfieldОлимпBX53

Ссылки

  1. May, P. A., Baete, A., Russo, J., et al. Prevalence and characteristics of fetal alcohol spectrum disorders. Pediatrics. 134 (5), 855-866 (2014).
  2. May, P. A., Gossage, J. P., Kalberg, W. O., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15 (3), 176-192 (2009).
  3. Klingenberg, C. P., Wetherill, L., Rogers, J., et al. Prenatal alcohol exposure alters the patterns of facial asymmetry. Alcohol. 44 (7-8), 649-657 (2010).
  4. Smeriglio, P., Zalc, A. Cranial neural crest cells contribution to craniofacial bone development and regeneration. Curr Osteoporos Rep. 21 (5), 624-631 (2023).
  5. Smith, S. M., Garic, A., Flentke, G. R., Berres, M. E. Neural crest development in fetal alcohol syndrome. Birth Defects Res C Embryo Today. 102 (3), 210-220 (2014).
  6. Vo, H. D. L., Lovely, C. B. Ethanol induces craniofacial defects in Bmp mutants independent of nkx2.3 by elevating cranial neural crest cell apoptosis. Biomedicines. 13 (3), (2025).
  7. Brooks, E. R., Islam, M. T., Anderson, K. V., Zallen, J. A. Sonic hedgehog signaling directs patterned cell remodeling during cranial neural tube closure. Elife. 9, e60234(2020).
  8. Eberhart, J. K., Parnell, S. E. The genetics of fetal alcohol spectrum disorders. Alcohol Clin Exp Res. 40 (6), 1154-1165 (2016).
  9. Fish, E. W., Murdaugh, L. B., Sulik, K. K., Williams, K. P., Parnell, S. E. Genetic vulnerabilities to prenatal alcohol exposure: Limb defects in sonic hedgehog and GLI2 heterozygous mice. Birth Defects Res. 109 (11), 860-865 (2017).
  10. Klem, J. R., Schwantes-An, T. H., Abreu, M., et al. Mutations in the bone morphogenetic protein signaling pathway sensitize zebrafish and humans to ethanol-induced jaw malformations. Dis Model Mech. 18 (4), dmm052223(2025).
  11. Swartz, M. E., Lovely, C. B., McCarthy, N., Kuka, T., Eberhart, J. K. Novel ethanol-sensitive mutants identified in an F3 forward genetic screen. Alcohol Clin Exp Res. 44 (1), 56-65 (2020).
  12. Swartz, M. E., Wells, M. B., Griffin, M., et al. A screen of zebrafish mutants identifies ethanol-sensitive genetic loci. Alcohol Clin Exp Res. 38 (3), 694-703 (2014).
  13. Fernandes, Y., Lovely, C. B. Zebrafish models of fetal alcohol spectrum disorders. Genesis. 59 (11), e23460(2021).
  14. Howe, K., Clark, M. D., Torroja, C. F., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
  15. Lovely, C. B. Animal models of gene-alcohol interactions. Birth Defects Res. 112 (4), 367-379 (2020).
  16. Lovely, C. B., Fernandes, Y., Eberhart, J. K. Fishing for fetal alcohol spectrum disorders: Zebrafish as a model for ethanol teratogenesis. Zebrafish. 13 (5), 391-398 (2016).
  17. Marrs, J. A., Sarmah, S. The genius of the zebrafish model: Insights on development and disease. Biomedicines. 9 (5), 577(2021).
  18. Gray, R., Lloyd, A., Lovely, C. B. Interactions between the bone morphogenetic protein and the planar cell polarity pathways lead to distinctive ethanol-induced facial defects. Alcohol Clin Exp Res (Hoboken). 49 (11), 2502-2519 (2025).
  19. Mutsvangwa, T., Douglas, T. S. Morphometric analysis of facial landmark data to characterize the facial phenotype associated with fetal alcohol syndrome. J Anat. 210 (2), 209-220 (2007).
  20. Klingenberg, C. P. MorphoJ: An integrated software package for geometric morphometrics. Mol Ecol Resour. 11 (2), 353-357 (2011).
  21. Rohlf, F. The Tps series of software. Hystrix. 26, 1-4 (2015).
  22. Hammer, O., Harper, D., Ryan, P. PAST: Paleontological statistics software package for education and data analysis. Palaeontol Electron. 4, 1-9 (2001).
  23. Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , 5th edition, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
  24. Dick, A., Hild, M., Bauer, H., et al. Essential role of Bmp7 (snailhouse) and its prodomain in dorsoventral patterning of the zebrafish embryo. Development. 127 (2), 343-354 (2000).
  25. Aharon, D., Marlow, F. L. Sexual determination in zebrafish. Cell Mol Life Sci. 79 (1), 8(2021).
  26. Walker, M. B., Kimmel, C. B. A two-color acid-free cartilage and bone stain for zebrafish larvae. Biotech Histochem. 82 (1), 23-28 (2007).
  27. McGurk, P. D., Lovely, C. B., Eberhart, J. K. Analyzing craniofacial morphogenesis in zebrafish using 4D confocal microscopy. J Vis Exp. (83), e51190(2014).
  28. Lovely, C. B. Quantification of ethanol levels in zebrafish embryos using head space gas chromatography. J Vis Exp. (156), e60766(2020).
  29. Klem, J. R., Gray, R., Lovely, C. B. The zebrafish Tol2 system: A modular and flexible gateway-based transgenesis approach. J Vis Exp. (189), e64679(2022).
  30. Suttie, M., Foroud, T., Wetherill, L., et al. Facial dysmorphism across the fetal alcohol spectrum. Pediatrics. 131 (3), e779-e788 (2013).
  31. Lovely, C. B., Swartz, M. E., McCarthy, N., Norrie, J. L., Eberhart, J. K. Bmp signaling mediates endoderm pouch morphogenesis by regulating Fgf signaling in zebrafish. Development. 143 (11), 2000-2011 (2016).
  32. Sheehan-Rooney, K., Swartz, M. E., Lovely, C. B., Dixon, M. J., Eberhart, J. K. Bmp and Shh signaling mediate the expression of satb2 in the pharyngeal arches. PLoS One. 8 (3), e59533(2013).
  33. Dong, X. R., Wan, S. M., Zhou, J. J., et al. Functional differentiation of BMP7 genes in zebrafish: bmp7a for dorsal-ventral pattern and bmp7b for melanin synthesis and eye development. Front Cell Dev Biol. 10, 838721(2022).
  34. McCarthy, N., Wetherill, L., Lovely, C. B., Swartz, M. E., Foroud, T. M., Eberhart, J. K. Pdgfra protects against ethanol-induced craniofacial defects in a zebrafish model of FASD. Development. 140 (15), 3254-3265 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Морфометрический анализмодель zebrafishфетальный алкогольный спектрморфометрия на основе ориентировметод главных компонентпрокрустовый ANOVAканонический вариационный анализмногомерный анализ
Морфометрический анализ формы: инструментарий для анализа для количественного определения черепно-лицевой формы у данио-рерио.
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.