Это исследование было одобрено Комитетом по этике клинических исследований Университета Орду (номер одобрения: 09/11/2017–138). Исследование проводилось в соответствии с соответствующими институциональными и национальными этическими нормами, включая Хельсинкскую декларацию. Письменное информированное согласие было получено от всех участников исследования. Полученное согласие прямо включает проведение домашних визитов и сбор образцов пыли из жилых домов.
1. Дизайн исследования
Это поперечное, описательное исследование распространённости домашних пылевых клещей, проведённое в провинции Орду, Турция. Образцы бытовой пыли были собраны с определённых внутренних поверхностей, где обычно ожидается накопление клещей. Проба проводилась с матрасов, материалов постельного белья (подушки и одеяла), ковров и мягкой мебели, расположенной в спальнях и гостиных. Пыль собиралась с помощью портативного пылесоса, а образцы из разных мест в одном доме объединялись для создания составного домашнего образца пыли.
2. Определение популяции и клинической когорты исследования
В исследовании участвовали люди, посетившие амбулаторные клиники уха, носа, горла и внутренней медицины в образовательной и исследовательской больнице факультета медицины Орду из-за астмы и/или аллергических жалоб. Критерии включения участников заключались в возрасте 18 лет и старше, согласия на сбор образцов пыли из домашней среды и согласии ответить на анкету. Лица, не давшие согласия на домашний визит, не предоставившие письменное согласие или для которых не удалось получить достаточные образцы домашней пыли, были исключены из исследования. Клинические диагнозы оценивались на основе самоотчетов пациентов и причин обращения в амбулаторную клинику; Клиническая проверка или диагностическое тестирование не проводилось. Каждому пациенту сопоставили домашнее хозяйство, и анализы проводились на уровне домохозяйств. Провинция Орду расположена в регионе Восточного Чёрного моря в Турции и характеризуется влажным умеренным климатом с высокой влажностью круглый год, что может способствовать выживанию и распространению домашних пылевых клещей.
3. Блок отбора проб и метод выборки
Основной единицей выборки в этом исследовании была домохозяйство. Были собраны многочисленные образцы субпыли из разных помещений внутри каждого дома, с особым вниманием к спальням и жилым зонам. Хотя эти подобразцы были собраны отдельно, их объединили и проанализировали как единый композитный образец бытовой пыли в лаборатории для отражения общего воздействия клещей в помещении. Для оценки плотности клещей примерно 1 г пыли из каждого композитного домашнего образца было обработано с помощью молочнокислого осадка. Все клещи, обнаруженные в подготовленных микроскопических стеклах, полученных из этого образца пыли, были подсчитаны. Общее количество обнаруженных клещей затем выражалось как количество клещей на грамм домашней пыли.
Каждое домохозяйство было взято пробу только один раз, и повторный отбор не проводился. Бытовые образцы пыли собирались с помощью одноразовых мешков, назначенных для каждой зоны отбора проб, и переносного пылесоса с всасывающей мощностью 1200 Вт. Отбор проб проводился со стандартизированной скоростью примерно 2 мин/м² для обеспечения стабильности и воспроизводимости во всех домохозяйствах.
4. Лабораторные процедуры и идентификация клещей
После доставки образцов в лабораторию их просеивали для удаления крупных частиц. Образцы были изучены методом молочнокислотного осадка. Метод молочнокислотного осадка использовался для очистки образцов пыли путём растворения органических остатков, что облегчило разделение и визуализацию клещей, а также обеспечило надёжное микроскопическое обнаружение и морфологическую идентификацию. Один грамм домашней пыли был добавлен к 5 мл 90% молочной кислоты в пробирках. Трубки аккуратно смешивали и инкубировали в течение 1 часа. После инкубации образцы, собранные как с поверхности, так и со дна жидкости устанавливались между стеклом и накладным слоем и исследовались под световым микроскопом при 100×, 200× и 400×увеличениях 15. Впоследствии была проведена идентификация видов на образцах пыли, в которых были обнаружены клещи.
Образцы, в которых были обнаружены клещи, были определены как «положительные к клещам». Наличие хотя бы одного клеща на любом этапе развития (личинка, нимфа или взрослая особня) в жилище считалось достаточным, чтобы жилище считалось положительным к клещам. Для идентификации видов в положительных образцах клещи, видимые под стереомикроскопом, были собраны с помощью иглы инсулинового шприца с тонким наконечником после фильтрации от супернатанта на фильтрующую бумагу и установлены в среду Хойера. Подготовленные образцы изучались под световым микроскопом для морфологической идентификации. Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения для статистического анализа16, 17, 18, 19, 20. Образцы идентифицировались по виду, роду или более высоким таксономическим уровням в зависимости от стадии развития и наличия диагностических признаков. Dermatophagoides spp. включает стадии личинки, протонимфы и дейтонимфы, которые не удалось быть достоверно идентифицированы на уровне вида. Орибатида представляет клещей, идентифицированных на уровне отряда. Неопознанные личинки и нимфы относятся к незрелым экземплярам, а неопознанный имаго — к взрослым особлям, которые не могли быть таксономически классифицированы из-за недостаточности или повреждения морфологических характеристик. Общее число соответствует совокупному счёту всех особей клещей, обнаруженных в положительных образцах.
5. Применение обследований и определения переменных
Участникам был проведён опрос с вопросами демографических характеристик, жилищной структуры, экологических факторов и аллергических жалоб. Данные оценивались на основе заявлений участников и не были клинически подтверждены.
6. Статистический анализ
Связь между категориальными переменными изучалась с помощью теста хи-квадрата, а изменение плотности клещей в зависимости от демографических и жизненно важных характеристик изучалось с помощью тестов Манна-Уитни U или Крускаля-Уоллиса. Бинарная логистическая регрессия была использована для изучения связи между зависимой переменной (позитивностью клещей) и независимыми переменными. Были рассчитаны коэффициенты шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (CI).