Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Регуляторное влияние моксибустии на поляризацию и миграцию макрофагов у крыс модели РА и роль TIM-3

196 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70436

⸱

27 марта 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Acupuncture and Tuina School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

В этой статье

Краткое содержание

В данном исследовании рассматриваются регуляторные эффекты моксибустии на поляризацию и миграцию макрофагов в моделях ревматоидного артрита у крыс, с акцентом на роль Т-клеточного иммуноглобулина и белка 3 (TIM-3), содержащего муциновый домен, чтобы выяснить терапевтические механизмы моксибустии при этом заболевании.

Аннотация

Целью данного исследования было изучение регуляторных эффектов моксибустии на поляризацию и миграцию макрофагов в модели ревматоидного артрита у крыс, а также роль Т-клеточного иммуноглобулина и белка 3 (TIM-3), содержащего муциновый домен, в этом процессе. В первый день эксперимента крысы Спраг–Доули (SD) были разделены на пять групп. Полный адъювант Фройнда (CFA) был введён в задние подушечки стоп для установления модели ревматоидного артрита. Кроме того, в задние подушечки стоп была введена интерференция Havcr2 (LV-Havcr2-RNAi), опосредованная лентивирусом, для ингибирования экспрессии TIM-3. Начиная с 7-го дня, крысы проходили лечение моксибустией в циклах, включающих шесть дней лечения и один день отдыха, всего три полных цикла. После завершения моксибустионной терапии воспалительный статус оценивался с помощью гистологического анализа и измерения толщины лапы. Фенотипические маркеры макрофагов M1 и M2 оценивались с помощью ферментно-связанного иммуносуорбентного анализа (ELISA) и иммунофлуоресценции. Экспрессия TIM-3 была обнаружена с помощью количественной реального времени полимеразной цепной реакции (qRT-PCR) и вестерн-блота. Кроме того, были выделены перитонеальные экссудатные макрофаги (ПЭМ) из других крыс с SD, а миграция макрофагов исследована с помощью анализа Трансвелла. Исследование показало, что после инъекции CFA у крыс наблюдалось выраженное покраснение и отёк лап, а также дисбаланс экспрессии фенотипа макрофагов. Кроме того, миграционные анализы Трансвелла показали, что у модельных крыс, индуцированных CFA, наблюдалась повышенная миграция макрофагов по сравнению с контрольными образцами. Однако лечение моксибустией смягчило эти изменения. Результаты также показали, что моксибустинг увеличивает экспрессию TIM-3, а после лентивирусного вмешательства уровень TIM-3 значительно снижается, что приводит к усугублению воспалительных проявлений и дисбалансу макрофагов. Эти результаты показывают, что TIM-3 служит ключевым медиатором в регуляции поляризации и миграции макрофагов с помощью моксибустиона.

Введение

Ревматоидный артрит (РА) — это распространённое системное аутоиммунное заболевание, клинически проявляющееся симметричным воспалительным артритом. Воспаление в первую очередь поражает синовиальную мембрану, хрящ и кость, что приводит к разрушению тканей и приводит к необратимой деформациейсуставов 1. Современное фармакологическое лечение РА в основном опирается на противоревматические препараты, модифицирующие заболевания (DMARDs), которые часто требуют пожизненного применения. Однако эти терапевтические средства связаны с различными побочными эффектами. В результате значительное число пациентов обращаются к безопасным и эффективным комплементарным терапиям для облегчения клинических симптомов и потенциального снижения зависимости от традиционных лекарственных схем. Как ключевой компонент традиционной китайской медицины, моксибусция может служить перспективной дополнительной терапией для РА. Он оказывает свои терапевтические эффекты с помощью системных противовоспалительных и иммуномодуляторныхмеханизмов 3. Данные показывают, что моксибустинг может облегчить симптомы и защититьсуставные структуры 4. Кроме того, по сравнению с потенциальной гепаторенальной токсичностью, рисками заражения и высокими затратами, связанными с ДМАРД, моксибусция обеспечивает лучшую безопасность и более низкую стоимость. Однако моксибусция не является панацеей и не может полностью заменить DMARD для управления РА. Моксибусция обычно требует повторных длительных сеансов лечения для достижения эффекта. Во время острых обострений РА он может не обеспечивать быстрого контроля симптомов. Кроме того, терапевтический результат моксибустии сильно зависит от навыков и опыта практикующего, что добавляет вариабельность. Следовательно, интеграция моксибустии с DMARDs следует рассматривать для достижения синергетического эффекта «повышенной эффективности с пониженной токсичностью», что делает эту стратегию жизнеспособной для долгосрочного управленияРА 5.

Хотя многочисленные исследования подтвердили терапевтическую эффективность моксибустии приРА 6,7,8, точные механизмы действия остаются неясными. В данном исследовании изучаются влияние моксибустии на поляризацию и миграцию макрофагов в РА, используя иммуноглобулин Т-клеток и белок 3, содержащий муцин-домен (TIM-3), в качестве механистической точки входа. Этот подход направлен на выяснение потенциального иммуномодуляторного пути, через который моксибустинг оказывает свои противоартритные эффекты.

Как ключевые иммунные клетки, макрофаги играют центральную роль в патогенезе и прогрессированииРА 9,10. При начале воспаления макрофаги, проживающие в тканях, выделяют различные цитокины и хемокины. Эти сигнальные молекулы воздействуют на сосудистые эндотелиальные клетки, способствуя дифференцировке циркулирующих моноцитов в макрофаги и их последующего набора в воспалённыеткани 11,12. Эти инфильтрирующие макрофаги ещё больше усиливают воспалительные реакции, производя дополнительные медиаторы, которые, в свою очередь, привлекают больше макрофагов и усугубляют инфильтрацию тканей, создавая тем самым порочный круг воспаления и инфильтрации тканей.

В зависимости от факторов окружающей среды макрофаги демонстрируют значительную пластичность, поляризуясь на отдельные функциональные фенотипы, главным образом состояния M1 (классически активированный) и M2 (альтернативно активированный) 13. В физиологических условиях поляризация макрофагов поддерживает динамическое равновесие между фенотипами M1 и M2. Однако при РА это равновесие нарушается, характеризуясь усилением поляризации M1 с увеличением высволения провоспалительных медиаторов, включая интерферон (IFN)-γ и индуцируемую оксидную синтазу азота (iNOS), что усугубляет воспалительные реакции. Одновременно поляризация M2 ослабевает, сопровождаясь снижением выделения противовоспалительных факторов, включая интерлейкин (IL)-4 и CD206, что снижает их способность ингибировать активацию и пролиферацию Т-клеток, тем самым усугубляя прогрессированиеболезни 14. Ряд исследований показал, что модуляция баланса макрофагов M1/M2 может смягчить прогрессированиеРА 15,16.

TIM-3, идентифицируемый как гликопротеин поверхности Т-клеток, широко экспрессируется на различных иммунных клетках, включая Т-клетки, макрофаги и природные киллеры, где он связывается с определёнными лигандами для выполнения иммунорегуляторныхфункций 17. Сигнализация TIM-3 оказывает решающее влияние на экспрессию воспалительных цитокинов макрофагов и поляризацию. Примечательно, что TIM-3 сильно экспрессируется на макрофагах M2, где он способствует развитию фенотипа M2 и подавляет фенотип M1. В то же время исследования показывают, что ингибирование TIM-3 вызывает противоположный эффект, вызывая поляризацию M1 и ослабляя поляризациюM2 18,19,20. Кроме того, данные подчёркивают TIM-3 как ключевой регулятор миграционного поведениямакрофагов 21,22. Поэтому терапевтическое вмешательство, направленное на TIM-3 для контроля поляризации и динамики миграции макрофагов, демонстрирует значительный потенциал как стратегия лечения РА.

Исходя из вышеупомянутой причины, это исследование было проведено с целью пополнения растущего объёма знаний о механизмах, с помощью которых моксибустинг оказывает терапевтическое воздействие при РА.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Этическое заявление и меры безопасности
Все эксперименты на животных одобрены Этическим комитетом Университета традиционной китайской медицины Чэнду (2024029). Во время всех процедур инъекций, включая введение CFA и лентивируса, операторы должны носить средства индивидуальной защиты (СИЗ), включающие одноразовые перчатки, очки и лабораторные халаты. Эти процедуры должны проводиться в шкафу биобезопасности или в хорошо проветриваемой среде. Все острые предметы, контактировавшиеся с реагентами, должны быть немедленно выброшены в специальные контейнеры. Во время процедуры моксибустии оператор внимательно следил за реакцией животного. Конус моксы был немедленно заменён, чтобы предотвратить термические повреждения кожи. Кроме того, горючие материалы следует держать вдали от горящей моксы, чтобы избежать пожарной опасности.

1. Создание модели RA

Тридцать самцов SD крыс (вес: 200 ± 20 г), в возрасте шести недель (номер лицензии: SCXK 2020-030), были случайным образом разделены на пять групп (n = 6): контрольная группа, группа модели РА (группа РА), группа лечения РА + моксибустией (группа Mox), группа интерференции РА + лентивируса TIM-3 (группа RA + TIM-3 — группа) и группа лечения интерференцией лентивируса РА + TIM-3 + моксибустионная группа (группа RA + TIM-3 + Mox). Перед экспериментом крыс акклиматизировали в течение семи дней в контролируемой среде с температурой 22–24 °C, влажностью 20% и естественным циклом света и темноты, с свободным доступом к еде и воде. На 23-й день эксперимента у той же компании были куплены ещё пять трёхнедельных самцов SD. Эти крысы акклиматизировались в течение пяти дней в одинаковых условиях перед использованием для экстракции ПЭМ. Схематическая схема, обобщающая экспериментальную процедуру, и репрезентативные процедурные фотографии показаны на рисунке 1.

В первый день эксперимента 0,5 мл/кг CFA было введено в подушечки задних лап всех крыс, кроме контрольной группы, для индуцирования РА. Такой же объём физиологического раствора был введён в том же месте у крыс контрольной группы. Толщина лапы использовалась в качестве критерия для успешного создания моделиRA 23.

2. Инъекция лентивируса

Крысы в группах RA + TIM-3- и RA + TIM-3- + Mox получили инъекцию LV-Havcr2-RNAi (94435-1) в подушечки задних лап (3,5 × 107 TU/mL; 10 мкл на прокладку) в первый день эксперимента. Все остальные крысы получали одинаковые инъекции обычного физиологического раствора в том же анатомическомучастке 24.

3. Моксибусция

На седьмой день эксперимента крысы из групп Mox и RA + TIM-3- + Mox получили лечение моксибустией. Для облегчения процедуры была сбрита шерсть примерно на площади 1 × 1 см вокруг акупунктурных точек BL23 и ST36 (эта процедура также проводилась у крыс в остальных группах). Во время моксибустинга каждую крысу аккуратно закрепляли к деревянному блоку, немного большему размеру её тела, с помощью двух резинок для полного открытия зон обработки (крысы в других группах также были ограничены). Впоследствии к обеим точкам были нанесены колбочки моксы в форме зерна. Для обеспечения стабильности термической стимуляции у каждого конуса мокса (диаметр: 2 мм; высота: 5 мм; содержание мокса-шерсти: 60%) готовили из стандартизированной порции мокса-шерсти в 5 мг. Каждый день к двум акупунктурам с одной стороны тела наносили пять колбочек, а на следующий день обработка чередовалась с противоположной. Этот чередующийся протокол лечения сохранялся три недели, с одним дневным отдыхом каждые седьмой день.

После трёх циклов лечения моксибустией крыс были анестезиированы с помощью изофлурана (4% индукция, 2% поддержания, ингаляция), а из брюшной аорты было взято 5 мл артериальной крови. После центрифугирования (2 000 × г, 15 мин, 4 °C) супернатантная сыворотка перемещалась в микроцентрифугные трубки и хранилась при −20 °C. После взятия крови крыс были эвтаназии с вывихом шейки матки. Суставы голеностопа были тщательно рассечени и закреплены в 4% параформальдегиде. Синовиальные ткани и селезёнка быстро замораживались с помощью жидкого азота и хранили при температуре −80 °C.

4. Измерение толщины лапы крысы

Средние точки задних лап крыс были отмечены водонепроницаемым маркером для обеспечения равномерного положения измерений. Толщина лапы измерялась с помощью верньерных суппортов до моделирования, после успешного моделирования и между каждым курсом обработки (в дни 0, 7, 14, 21 и 28 эксперимента).

5. Гистологический анализ

После фиксации в 4% параформальдегиде суставы лодыжки крыс были помещены в центрифугные трубки с достаточным объёмом раствора декальцификации (10% муравьиной кислоты). Трубки устанавливались на шейкер и подвергались мягкому перемешиванию при комнатной температуре в течение 30 часов. В этот период раствор декальцификации регулярно заменялся, а состояние тканей отслеживалось для предотвращения чрезмерной декальцификации. Затем ткани переносились в раствор тиосульфата натрия 5% для нейтрализации в течение 6 часов, после чего тщательно промывали 4 часа под проточнойводопроводной водой. Ткани затем обезвоживались и помещались в парафиновые блоки. Сечения были поперечно вырезаны толщиной 5 мкм. После депарафинизации и гидратации участки окрашивались гематоксилином в течение 3 минут, затем промывались водой, ненадолго дифференцировали (5 секунд), затем снова промывали и посиняли в течение 5 секунд, после чего тщательно промывали под проточной водопроводной водой. Впоследствии срезы были обезвожены в 95% этаноле в течение 1 минуты и контрокрашивались эозином в течение 15 секунд. В конце концов секции были обезвожены, очищены и установлены с покрытием для наблюдения под световым микроскопом. При таком окрашивании ядра выглядели синими, тогда как цитоплазма, коллагеновые волокна и эритроциты были представлены в различных оттенках розового; кератинизированный слой обычно окрашивался ярко-красным цветом.

6. ЭЛИЗА

В соответствии с производственным протоколом в назначенные скважины добавлялся аликвот 100 мкл каждого образца сыворотки (предварительно разбавленный 1:2). Параллельно включались пустые и стандартные скважины. После герметизации пластину инкубировали при 37 °C в течение 90 минут. После этапа промывки добавлялось обнаружение антитела и инкубировалось при 37 °C в течение 60 минут. После ещё одной промывки был добавлен конъюгат стрептавидин–HRP. После тщательной промывки добавляли раствор субстрата для проявления цвета, который остановился добавлением стоп-раствора. Поглощение измерялось на 450 нм (OD₄₅₀). Концентрации IL-4 и IFN-γ в образце определялись интерполяцией по стандартной кривой, а конечные концентрации — умножением на соответствующий коэффициент разбавления.

7. qRT-PCR

Общая РНК была извлечена из образцов сыворотки с помощью реагента TRIzol согласно модифицированному протоколу. Кратко, 100 мкл сыворотки было гомогенизировано с помощью 1 мл реагента TRIzol методом интенсивного пипетирования. Впоследствии добавляли 100 мкл хлороформа, и интенсивно взбавливали смесь в течение 15 секунд, после чего инкубировали при комнатной температуре в течение 3 минут. Затем образец был центрифугирован при 12 000 × г в течение 15 минут при 4 °C для достижения фазового разделения. Верхняя водная фаза аккуратно переносилась в новую трубку, смешивалась с 0,5 мл изопропанола и инкубировала при комнатной температуре в течение 10 минут. Впоследствии общая РНК была гранулирована центрифугой при 12 000 × г в течение 10 минут при 4 °C. Полученная РНК-гранула была промыта один раз 1 мл этанола 75% (центрифугирование при 8 000 × г в течение 5 минут при 4 °C) и высушена на воздухе перед окончательным растворением. Полученная РНК прошла обратную транскрипцию с помощью комплекта для синтеза кДНК. Анализ экспрессии генов проводился с помощью qRT-PCR с использованием программного обеспечения для количественной системы ПЦР в реальном времени. β-актин использовался в качестве гена, связанного с хозяйством, для нормализации. Относительная экспрессия мРНК TIM-3 была рассчитана с помощью метода 2−ΔΔCt . Детали праймеров приведены в Таблице 1.

8. Вестерн блот

Извлеченная селезёнка была промыта три раза предварительно охлаждённым фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS), нарезана на мелкие кусочки и лизирована путём добавления лизисного буфера с объёмом в десять раз больше, чем в ткани. Гомогенизация проводилась с помощью гомогенизирующей трубки. Гомогенат помещали на лёд на 30 минут для лизиса, с пятью-шестью раундами вихря для полного разрушения тканей. Образцы были центрифугированы при 12 000 × г в течение 10 минут при 4 °C, а супернатант был собран как общий белковый экстракт. Концентрации целевых белков измерялись с помощью анализа на бицинхониновую кислоту (BCA) согласно протоколу KIT.

После сепарации с помощью электрофореза гель с содержанием 10% натрия додецилсульфата и полиакриламида (SDS–PAGE) извлеченные образцы белка были перенесены в мембрану поливинилидендифторида (PVDF). Мембрана была заблокирована при комнатной температуре в течение 1 часа с помощью трисбуферного физиологического раствора с Tween 20 (TBST) и дополнительного 5% обезжиренного молока, после чего проводилась ночная инкубация при 4 °C с первичными антителами. После тщательной промывки мембрана была инкубирована с конъюгированными вторичными антителами пероксидазой хрена (HRP) при 37 °C в течение 2 часов. Наконец, изображения были получены с помощью системы хемилюминесценции и проанализированы на интенсивность оттенков серого с помощью программного обеспечения для анализа ChemiScope. Подробности первичных и вторичных антител приведены в Таблице 1.

9. Обнаружение иммунофлуоресценции

Извлеченная синовиальная ткань была погружена в 4% параформальдегид, обезвожена и погружена в парафин, прежде чем разрезать на срезы толщиной 5 мкм. Секции последовательно очищались от воска в ксилоле I, ксилоле II и ксилоле III (по 10 минут каждая), затем три промывания абсолютным этанолом (по 5 минут каждая) и финальное промывывание дистиллированной водой.

После забора антигена в этилендиаминтетрауксусной кислоте (ЭДТА) стекли были промыты три раза в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) (по 5 минут каждая) с мягким перемешиванием. Затем срезы блокировались инкубацией с 3% бычьей сывороткой альбумина (BSA) на 30 минут при комнатной температуре. После блокировки первичные антитела, включая антииндуцируемую синтезу оксида азота (iNOS) (1:500) и анти-CD206 (1:400), были введены и инкубированы при 4 °C в течение 24 часов.

После трёх 5-минутных промываний с PBS секции инкубировали 50 минут при 37 °C в темноте с использованием вторичного антитела (Cy3-конъюгированный козёл против кроликов IgG, 1:300). Ядерное окрашивание проводилось путем трижной промывки стекло PBS (5 минут на стирку), затем обработку раствором окрашивания 4′,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) и 10-минутную инкубацию при комнатной температуре в темноте. Изображения изучались под флуоресцентным микроскопом.

10. Изоляция PEM

После эвтаназии по вывиху шейки матки крыс дезинфицировали 75% этанолом в течение 10 минут и перемещали в стерильный биобезопасный шкаф. Кожа брюшной поверхности была разрезана стерильными ножницами, затем внутрибрюшнической инъекцией физиологического раствора (PBS) с помощью шприца с помощью брюшника. Брюшная полость была аккуратно массирована, после чего брюшинная жидкость была вдувана обратно в шприц и передана в центрифугные трубки для получения макрофаговых суспензий.

Суспензия клеток была промыта три раза с помощью PBS, прежде чем посеять в модифицированную среду Eagle Medium (DMEM) от Dulbecco, содержащую 10% сыворотку плода крупного рогатого скота (FBS). Клетки культивировались в течение 24 часов в увлажнённой атмосфере с 5% CO₂ при 37 °C. Клетки, полученные после этого инкубационного периода, были идентифицированы как макрофаги.

11. Трансвелл

Миграционный анализ проводился с использованием 24-колодцевых пластин. После 24 часов голодания в сыворотке в верхнюю камеру были добавлены 4 × 104 макрофагов в 300 мкл DMEM, дополненных 1% плодовой бычий сывороткой (FBS) и 1% антибиотиками (50 U/mL пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина), а в нижнюю камеру было введено 700 мкл DMEM с 10% FBS и 1% антибиотиков. Клетки предварительно обработаны сывороткой разных групп крыс в течение 24 часов. После этого пластины инкубировали при 37 °C в условиях 5% CO₂ в течение 24 часов. После окрашивания в кристаллический фиолетовый цвет верхняя камера была промита для удаления немигрировавших клеток. Мигрирующие клетки количественно оценивались вручную по четырём случайно выбранным полям зрения под оптическим микроскопом.

12. Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием версии SPSS 25.0. Наборы данных сначала были проверены на нормальность и однородность дисперсий. Когда эти параметрические предположения были выполнены, межгрупповые сравнения проводились с помощью одностороннего анализа дисперсии (ANOVA), за которым следовал пост-хок анализ наименее значимой разницы (LSD). Для данных, нарушающих эти предположения, применялся непараметрический тест Крускаля–Уоллиса, за которым следовали тесты Манна–Уитни U с соответствующей коррекцией для множественных сравнений. Все значения были выражены как среднее ± стандартное отклонение, а P < 0,05 считалось статистически значимым.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Доступность данных
Исходные данные, полученные в ходе текущего исследования, доступны в репозитории Figshare (https://doi.org/10.6084/m9.figshare.31550197)

Суставная патология и толщина лап у крыс после лечения моксибустером
У крыс, которым инъекировали CFA, появилось явное отек и покраснение лап. Окрашивание гематоксилином и эозином показало, что контрольная группа демон...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Текущее управление RA в основном опирается на DMARD. Однако эти фармакологические препараты часто дорогостоящие и сопровождаются незначительными побочными эффектами, включая нарушение гепаторенальной терапии и тяжёлыеинфекции 2, что создаёт значительную нагрузку на отдельных людей и системы здравоохранения. В отличие от этого, как внешнее лечение, моксибусция демонстрирует благоприятный профиль безопасности с минимальным зарегистрированным риском системной токсичн...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (грант No 82374587) и Фондом естественных наук провинции Сычуань (грант No 2024NSFSC2113). Благодарим Университет традиционной китайской медицины Чэнду за предоставленные лабораторные условия и техническую поддержку. Особая благодарность школе Акупунктуры и Туина за их руководство по протоколам моксибустии. Мы также благодарим команду по уходу за животными за помощь в поддержании моделей крыс. Наконец, мы выражаем признательность всем коллегам, внесшим вклад в гистологические и молекулярные анализы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Complete Freund' s Адъювант (CFA)Сигма-ОлдричF5881Используется для индуцирования модели ревматоидного артрита (РА) у крыс
Лентивирус (РНК TIM-3)GenChem Biotechnology, Шанхай3,5 раза; 107 TU/mLИспользуется для подавления экспрессии гена TIM-3
Шишки моксы (размером с пшеницу)Поставщик традиционной китайской медициныН/ДИспользуется для моксибустии в акупунктурных точках BL23 и ST36

Ссылки

  1. Gravallese, E. M., Firestein, G. S. Rheumatoid Arthritis - Common Origins, Divergent Mechanisms. N Engl J Med. 388 (6), 529-542 (2023).
  2. Di Matteo, A., Bathon, J. M., Emery, P. Rheumatoid arthritis. Lancet. 402 (10416), 2019-2033 (2023).
  3. Hao, F., et al. Effect of moxibustion on autophagy and the inflammatory response of synovial cells in rheumatoid arthritis model rat. J Tradit Chin Med. 42 (1), 73-82 (2022).
  4. Chen, Y., et al. Moxibustion of Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) Alleviates Cartilage Degradation through RANKL/OPG Signaling in a Rabbit Model of Rheumatoid Arthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2019, 6436420(2019).
  5. Shang, J., et al. The efficacy and safety of warming acupuncture and moxibustion on rheumatoid arthritis: A protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 99 (34), e21857(2020).
  6. Gong, Y., et al. Effect of Moxibustion on HIF-1α and VEGF Levels in Patients with Rheumatoid Arthritis. Pain Res Manag. 2019, 4705247(2019).
  7. Liao, C., et al. The Effects and Potential Mechanisms of Moxibustion for Rheumatoid Arthritis-Related Pain A Randomized, Controlled Trial. J Pain Res. 16, 1739-1749 (2023).
  8. Tao, S., et al. The Efficacy of Moxibustion on the Serum Levels of CXCL1 and β-EP in Patients with Rheumatoid Arthritis. Pain Res Manag. 2021, 7466313(2021).
  9. Zheng, Y., et al. Macrophage polarization in rheumatoid arthritis: signaling pathways, metabolic reprogramming, and crosstalk with synovial fibroblasts. Front Immunol. 15, 1394108(2024).
  10. Kurowska-Stolarska, M., Alivernini, S. Synovial tissue macrophages in joint homeostasis, rheumatoid arthritis and disease remission. Nat Rev Rheumatol. 18 (7), 384-397 (2022).
  11. Kemble, S., Croft, A. P. Critical Role of Synovial Tissue-Resident Macrophage and Fibroblast Subsets in the Persistence of Joint Inflammation. Front Immunol. 12, 715894(2021).
  12. Huang, Q. Q., et al. Critical role of synovial tissue-resident macrophage niche in joint homeostasis and suppression of chronic inflammation. Sci Adv. 7 (2), eabd0515(2021).
  13. Mosser, D. M., Hamidzadeh, K., Goncalves, R. Macrophages and the maintenance of homeostasis. Cell Mol Immunol. 18 (3), 579-587 (2021).
  14. Tardito, S., et al. Macrophage M1/M2 polarization and rheumatoid arthritis: A systematic review. Autoimmun Rev. 18 (11), 102397(2019).
  15. Liu, X., et al. KLF11 alleviates rheumatoid arthritis by regulating M1 macrophage polarization via downregulation of YAP1 expression. Arthritis Res Ther. 27 (1), 171(2025).
  16. Wen, Y., et al. Wuwei Ganlu and Myricetin alleviate rheumatoid arthritis by inhibiting M1 macrophage polarization through modulation of SHBG/SREBP1-mediated lipid metabolism. Phytomedicine. 146, 157167(2025).
  17. Zhao, L., Cheng, S., Fan, L., Zhang, B., Xu, S. TIM-3: An update on immunotherapy. Int Immunopharmacol. 99, 107933(2021).
  18. Du, X., et al. Increased Tim-3 expression alleviates liver injury by regulating macrophage activation in MCD-induced NASH mice. Cell Mol Immunol. 16 (11), 878-886 (2019).
  19. Ni, X., et al. Interrogating glioma-M2 macrophage interactions identifies Gal-9/Tim-3 as a viable target against PTEN-null glioblastoma. Sci Adv. 8 (27), eabl5165(2022).
  20. Yang, H., et al. Tim-3 aggravates podocyte injury in diabetic nephropathy by promoting macrophage activation via the NF-κB/TNF-α pathway. Mol Metab. 23, 24-36 (2019).
  21. Guo, Q., et al. Cancer cell intrinsic TIM-3 induces glioblastoma progression. iScience. 25 (11), 105329(2022).
  22. Li, G., et al. Peripheral Injection of Tim-3 Antibody Attenuates VSV Encephalitis by Enhancing MHC-I Presentation. Front Immunol. 12, 667478(2021).
  23. Haiyan, Z., et al. Efficacy of Moxa-burning heat stimulating Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) on expressions of macrophage migration inhibitory factor and macrophage apoptosis in rabbits with adjuvant-induced arthritis. J Tradit Chin Med. 42 (6), 980-987 (2022).
  24. Tang, Q., et al. RNAi Silencing of IL-1β and TNF-α in the Treatment of Post-traumatic Arthritis in Rabbits. Chem Biol Drug Des. 86 (6), 1466-1470 (2015).
  25. Glasson, S. S., Chambers, M. G., Van Den Berg, W. B., Little, C. B. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse. Osteoarthritis Cartilage. 18 (Suppl 3), S17-S23 (2010).
  26. Miao, W., Yan, Z., Hui, Z., Hongfang, Z. Moxibustion enables protective effects on rheumatoid arthritis-induced myocardial injury transforming growth factor beta1 signaling and metabolic reprogramming. J Tradit Chin Med. 43 (6), 1190-1199 (2023).
  27. Tao, S. Y., et al. Moxibustion as an adjunctive treatment for rheumatoid arthritis and its effects on the serum levels of SOST and β-catenin. Zhongguo Zhen Jiu. 43 (12), 1384-1389 (2023).
  28. Hao, F., et al. [Effect of moxibustion on PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in foot-pad synovium in rats with rheumatoid arthritis]. Zhongguo Zhen Jiu. 40 (11), 1211-1216 (2020).
  29. Zhong, Y. M., Zhang, L. L., Lu, W. T., Shang, Y. N., Zhou, H. Y. Moxibustion regulates the polarization of macrophages through the IL-4/STAT6 pathway in rheumatoid arthritis. Cytokine. 152, 155835(2022).
  30. Linlin, Z., et al. Moxibustion of Zusanli (ST36) and Shenshu (BL23) alleviates the inflammation of rheumatoid arthritis in rats through regulating macrophage migration inhibitory factor/glucocorticoids signaling. J Tradit Chin Med. 44 (2), 353-361 (2024).
  31. Zhu, L., et al. Effect of moxibustion at "Xinshu" (BL15) and "Feishu" (BL13) on expression of TRPV1 and CGRP in the myocardial tissue of chronic heart failure rats. Zhen Ci Yan Jiu. 49 (6), 551-557 (2024).
  32. Zhang, X. N., et al. Electroacupuncture and moxibustion-like stimulation activate the cutaneous and systemic hypothalamic-pituitary-adrenal axes in the rat. Acupunct Med. 40 (3), 232-240 (2022).
  33. Zhu, Y., et al. [Effect of moxibustion at "Zusanli"(ST36) and "Shenshu"(BL23) on miR-155-mediated TLR4/NF-κB signaling involving amelioration of synovitis in rheumatoid arthritis rats]. Zhen Ci Yan Jiu. 46 (3), 194-200 (2021).
  34. Wu, R., et al. Effects of Tim-3 silencing on the viability of fibroblast-like synoviocytes and lipopolysaccharide-induced inflammatory reactions. Exp Ther Med. 14 (3), 2721-2727 (2017).
  35. Nozaki, Y., et al. Inhibition of the TIM-1 and -3 signaling pathway ameliorates disease in a murine model of rheumatoid arthritis. Clin Exp Immunol. 218 (1), 55-64 (2024).
  36. Li, X., Zhao, Y. Q., Li, C. W., Yuan, F. L. T cell immunoglobulin-3 as a new therapeutic target for rheumatoid arthritis. Expert Opin Ther Targets. 16 (12), 1145-1149 (2012).
  37. Skejoe, C., et al. T-cell immunoglobulin and mucin domain 3 is upregulated in rheumatoid arthritis, but insufficient in controlling inflammation. Am J Clin Exp Immunol. 11 (3), 34-44 (2022).
  38. Zhang, Y., et al. Tim-3 negatively regulates IL-12 expression by monocytes in HCV infection. PLoS One. 6 (5), e19664(2011).
  39. Kun, L., et al. Moxibustion inhibits the macrophage M1 polarization toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor kappa B signaling pathway by regulating T-cell immunoglobulin and mucin-containing protein-3 in rheumatoid arthritis. J Tradit Chin Med. 44 (6), 1227-1235 (2024).
  40. Liu, X., et al. Tim-3 Regulates Tregs' Ability to Resolve the Inflammation and Proliferation of Acute Lung Injury by Modulating Macrophages Polarization. Shock. 50 (4), 455-464 (2018).
  41. Wang, F., et al. Overexpression of Tim-3 reduces Helicobacter pylori-associated inflammation through TLR4/NFκB signaling in vitro. Mol Med Rep. 15 (5), 3252-3258 (2017).
  42. Dixon, K. O., Lahore, G. F., Kuchroo, V. K. Beyond T cell exhaustion: TIM-3 regulation of myeloid cells. Sci Immunol. 9 (93), eadf2223(2024).
  43. Paul, S., Chhatar, S., Mishra, A., Lal, G. Natural killer T cell activation increases iNOS(+)CD206(-) M1 macrophage and controls the growth of solid tumor. J Immunother Cancer. 7 (1), 208(2019).
  44. Luo, M., Zhao, F., Cheng, H., Su, M., Wang, Y. Macrophage polarization: an important role in inflammatory diseases. Front Immunol. 15, 1352946(2024).
  45. Peng, Y., et al. Regulatory Mechanism of M1/M2 Macrophage Polarization in the Development of Autoimmune Diseases. Mediators Inflamm. 2023, 8821610(2023).
  46. Lazarov, T., Juarez-Carreño, S., Cox, N., Geissmann, F. Physiology and diseases of tissue-resident macrophages. Nature. 618 (7966), 698-707 (2023).
  47. Gomez Perdiguero, E., et al. Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors. Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).
  48. Chang, J. W., et al. Nesfatin-1 Stimulates CCL2-dependent Monocyte Migration And M1 Macrophage Polarization: Implications For Rheumatoid Arthritis Therapy. Int J Biol Sci. 19 (1), 281-293 (2023).
  49. Takayanagi, H. Osteoimmunology: shared mechanisms and crosstalk between the immune and bone systems. Nat Rev Immunol. 7 (4), 292-304 (2007).
  50. Harada, S., Rodan, G. A. Control of osteoblast function and regulation of bone mass. Nature. 423 (6937), 349-355 (2003).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

TIM 3Transwell
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.