Методическая статья

Эффективная изоляция стволовых клеток, полученных из адипоза, и адипоцитов из жировой ткани свинины

DOI:

10.3791/70464

⸱

26 мая 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Swine and Poultry Breeding Industry, College of Animal Science and Technology, Sichuan Agricultural University, 2Faculty of Pharmacy, Paris Cité University, 3Chengdu DosSense Biotech Co., LTD, 4TCM Prevention and Treatment of Metabolic and Chronic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Department of Pig Production, Chongqing Academy of Animal Science, 6College of Animal Science and Technology, Southwest University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь представлен стандартный метод эффективной изоляции стволовых клеток и адипоцитов, полученных из жира, характеризующийся сокращением времени обработки на >90%, высокой жизнеспособностью клеток и широкой совместимостью.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Стволовые клетки, полученные из адипоза (ADSC), стали идеальными семянными клетками в регенеративной медицине благодаря своим обильным источникам, минимально инвазивному сбору, многолинейному дифференциационному потенциалу и иммуномодуляционным свойствам. Их применения охватывают восстановление тканей, моделирование заболеваний и клеточную терапию; однако эффективная изоляция высокожизнеспособных ADSC остаётся критически важной для продвижения исследований и клинической трансляции. Традиционные методы изоляции, такие как ферментативное переваривание в сочетании с механической диссоциацией с помощью пипетирования, ограничены длительными сроками обработки (1–3 часа), низкой жизнеспособностью клеток (часто <70%) и значительной вариабельностью от партии к партии, что ухудшает последующие эксперименты.

Здесь представлена система SoniConvert (механическая система разделения клеток на основе волн), которая сочетает механическую волновую и ферментативную расщепление для решения этих задач. Система интегрирует микропроцессорный управляющий блок, регулирующий механическую волновую диссоциацию с помощью цифровой обратной связи, а также тканеспецифический реагент, оптимизированный для жировой ткани (инкубация 5–15 мин). Этот подход позволяет быстро превратить ткань в одноклеточную суспензию, при этом механическая диссоциация завершается за 3–9 секунд.

Система обладает тремя преимуществами: (1) сверхбыстрая обработка, при этом процесс выделения ядра — от ферментативного переваривания до начального разделения клеточной фракции — завершается примерно за 30 минут (>90% снижение по сравнению с традиционными методами); (2) высокая жизнеспособность сохранения, при этом трипан-синий окрашивание подтверждает жизнеспособность клетки 80–95%, превышающее традиционные протоколы; и (3) широкой совместимости, поскольку полученные суспензии из одной клетки соответствуют требованиям первичной клеточной культуры, проточной цитометрии, анализов цитотоксичности и конструкции жировых органоидов. Сокращая время обработки, повышая целостность клеток и ограничивая вариабельность, эта система предоставляет практическую платформу для исследований, связанных с жирами.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Стволовые клетки, полученные из адипозов (ADSC), критически важным подмножеством мезенхимальных стволовых клеток (MSC), выделенных из жировой ткани, обладают значительным терапевтическим потенциалом благодаря своей доступности, минимально инвазивному забору, устойчивой пролиферативной способности, многолинейному дифференциационному потенциалу и мощным паракриновым и иммуномодуляторнымсвойствам 1,2,3,4 . Эти характеристики сделали ADSC перспективными кандидатами для регенеративной медицины, тканевой инженери....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все исследования на животных проводились в соответствии с Правилами управления делами, касающимися экспериментальных животных (Министерство науки и технологий Китая, пересмотренное в марте 2017 года) и утверждены Комитетом по этике и благополучию животных Сычуаньского сельскохозяйственного университета (номер разрешения: 20230089). Этот протокол требует использования системы SoniConvert — коммерчески доступного устройства для механической волновой диссоциации тканей (далее — механическая диссоциация). Протокол оптимизирован для жировой ткани свиней, и его зависимость от этого специализированного оборудования является ключевым....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Схематическая иллюстрация процесса изоляции клеток, полученных из жира. Диаграмма изображает традиционный метод и настоящий метод как иллюстративные рабочие процессы. Для выделения клеток, полученных из жира, проходят три основных этапа: первый — предварительная обработка; второй — диссоциация жиро.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В данном исследовании представлен новый интегрированный подход к выделению клеток, полученных из жира (в основном адипоцитов и ADSC), который учитывает критические ограничения традиционных методов. Сочетая тканево-специфическое ферментативное расхлабывание с точной механической волновой диссоциацией, эта система достигает быстрого (общее время обработки ~30 мин), высокой жизнеспособности (80–95%) и воспроизводимой изоляции клеток.

Традиционное ферментное пищев.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы Цзыи Чжао и Цзяин Ю сотрудничают с компанией Chengdu DosSense Biotech Co., Ltd, которая производит систему SoniConvert (SC-L1W) и набор для диссоциации жировой ткани (TM008), используемый в этом протоколе. Остальные авторы не заявляют о конкурирующих интересах.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (Ли М: 32421005 и 32225046, Лу Л: 32472857); научно-технические проекты автономного района Сицзан Китая (XZ202501ZY0147 до М.Л.); Китайский фонд постдокторских наук (Lu L: 2024M763881); специальное финансирование постдокторских исследований в Чунцине (Lu L: 2023CQBSHTB3098); Национальную/провинциальную программу подготовки студентов бакалавриата по инновациям и предпринимательству (Lu L: 202510626001); и основной проект по сельскохозяйственной науке и технике.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Набор для диссоциации типовых тканейDocsenseTM001Содержит типовый тканевой диссоциационный агент (раствор типа A) и типовый буфер для диссоциации тканей (A-буфер).
Набор для адипогенной дифференциационной средыOriCellGUXMD-90031Используется для адипогенной дифференцировки, включая высокосодержательную глюкозу — модифицированную среду Eagle's Eagle (немодифицированную) и поддерживающую среду Dulbecco
Ализарин Ред СOriCellA5533ALIR-10001Окрашивание минерализации для остеогенной дифференцировки (pH 5.2)
Аскорбиновая кислотаСигма-ОлдричA4544L-аскорбиновая кислота, тестированная клеточная культура, для остеогенной индукции
Минисвинки БамаКомпания Chengdu Dossy Experimental Animals Co., LtdОднолетние, самцы, животные класса SPF, содержащиеся в соответствии со стандартизированными процедурами вакцинации, дегельминтивы и чистки.https://www.cd-dossy.cn/animalpl_detail/12606067609851863
04.html
Автоматический счётчик клеток Bio-Rad TC20Био-Рад Лаборатории1450011Автоматический счётчик ячеек для оценки жизнеспособности и дохода
БОДИПИТермо Фишер СайентификD3922Нейтральная липидная морилка
BSA (5%)Сигма-ОлдричA9418Бычий сывороточный альбумин, лиофилизированный порошок, для блокировки
КальцитриолСигма-ОлдричC97561&альфа;,25-дигидроксивитамин D<суб>3 для остеогенной индукции
Клеточное сито (70 & Mu; m)Корнинг352350Falcon 70 &m; Сито m-ячей, стерильное, для подготовки образца FACS
Клеточное сито (200 μ m)pluriSelect43-50200-03pluriStrainer, PET-сетка, подходит для трубок объемом 50 мл, стерильно и bbsp;
центрифугная трубка (50 мл)Корнинг352098Коническая трубка Falcon 50 мл высокой прозрачности, стерильная, полипропилен
Счётный слайд (для Bio-Rad TC20)Био-Рад Лаборатории1450011Двухкамерный счётный слайд для автоматического счётчика ячейок TC20 и nbsp;
Культурное блюдо (100 мм)Корнинг430167Стерильная полистироловая тарелка для подвесной формации капель-органоидов
ДексаметазонСигма-ОлдричD4902≥ 98% для адипогенной и остеогенной индукции
Сбалансированный сольный раствор D-Hanks или PBSGibco10010015Предварительное охлаждение до 4 градусов; C, pH 7,4.
DMEMGibco11965084Это используется для выращивания свежей изолированной SVF
DNase IBeyotimeD7073Необязательно, рекомендуется при наблюдаемом скуплении.
этанолСигма-Олдрич45983675% — для дезинфекции поверхности.
Сыворотка для плода быка (FBS)GibcoA4736201Утверждена система Tet, американского происхождения, стерильная  
Потоковый цитометрBD BiosciencesBD FACSCanto II3 лазера (405 нм, 488 нм, 633 нм), 8 флуоресцентных каналов для анализа поверхностных маркеров (CD73, CD90, CD11b, CD45), соответствует 70 figure-materials-1 m требуется сопло при давлении 20 psi
Флуоресцентный микроскопОлимпИнвертированная или вертикальная модель, способная использовать наборы фильтров FITC и DAPI.
Флуоресцентные вторичные антителаТермо Фишер СайентификA-11001 (против мышей), A-11008 (против кролика)Конъюгированная Alexa Fluor для иммунофлуоресценции
Антитела, конъюгированные с фторхромом (CD73, CD90, CD11b, CD45)BD Biosciences561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)Для проточного цитометрического анализа фенотипа ADSC
HoechstТермо Фишер СайентификH3570Ядерное окрашивание для оценки живых/мёртвых клеток.
IBMXСигма-ОлдричI5879≥ 99% (ВЭЖХ), для адипогенной индукционной среды
Ледяной стерильный физиологический растворБакстер2F7124Инъекция хлорида натрия 0,9%, USP, для промывания салфеток
ИнсулинСигма-ОлдричI9278Рекомбинант, выраженный в дрожжах, для адипогенной индукции
ЙодофорСигма-Олдрич251042% дезинфицирующий раствор.
МатригельКорнинг354230Фактор роста снижен, фенол без красного цвета, для вложения сфероидов и bbsp;
Металлическая ваннаServicebioSMB-HИспользуется для инкубации при 37°C.
Oil Red OOriCellOILR-10001Липидное окрашивание для дифференцировки адипоцитов
Оптический микроскопОлимпСтандартный яркий микроскоп с 10x– 40-кратных целей.
Набор для остеогенной дифференциационной средыOriCellGUXMD-90021Используется для остеогенной дифференцировки, включая высокоглюкозный средний материал Dulbecco (немодифицированный) и поддерживающий материал Dulbecco
Пипетка P1000 с широкими наконечникамиБекман КоултерB01113Biomek P1000 Span-8 широкие наконечники, стерильные
Параформальдегид (4%)Термо Фишер СайентификJ61899Водный раствор для фиксации органоидов  
Пипетка ПастераКорнинг7095S-5CСтерильный, одноразовый.
Пенициллин-стрептомицинGibco1507006310 000 U/mL пенициллина, 10 000 и мл; g/mL стрептомицин, стерильный и nbsp;
Пентобарбитал натрийHikma Pharmaceuticals USA Inc.24201-010-20Инъекционный для эвтаназии (100 мг/кг массы тела, внутривенно). ANDA 203619 
Первичные антитела (CD73, CD90, CD11b, CD45)BD Biosciences561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)Для органоидного иммунокрашивания
Буфер лизиса эритроцитов (эритроцитов)SolarbioR1010Если требуется для последующих приложений.
Рефрижераторная центрифугаЭппендорф5702RИспользуется для этапов центрифугации при 4°C.
РозиглитазонCayman Chemical71740≥ 98%, PPAR и гамма; агонист для адипогенной индукции
Контейнер для острых предметовБектон Дикинсон305270Устойчивый к проколам контейнер для использованных лезвий и ножниц
Система подготовки подвески с одной ячейкой SoniConvertDocsenseSC-L1WИспользуется для механической диссоциации тканей.
Буфер для окрашивания (буфер для окрашивания проточной цитометрии)eBioscience (Thermo Fisher Scientific)00-4222-57200 мл, готовый к использованию, содержит FBS и 0,09% натриевый азид в качестве консерванта для разбавления антител и клеток, поверхностного окрашивания и промывки в проточной цитометрии 
Стерильная трубка Эппендорфа объёмом 1,5 млЭппендорф30121.517Стерильная микроцентрифугная трубка с безопасным замком для измельчения тканей
Стерильная культурная тарелкаКорнинг430167Стерильная посевная чаша размером 100 мм x 20 мм, для сбора тканей
Стерильные щипцыСклар96-1719Стерильные щипцы для большого пальца, зубчатые, для обработки тканей 
Стерильная марляКорпорация Dukal7060033Стерильные марлевые прокладки для дезинфекции и протирания
Стерильные офтальмологические ножницыСклар10023-580Пружинные ножницы в стиле Ваннаса для измельчения тканей на 1-2 мм и sup3; Произведения
Стерильная бритва3M9681Хирургическая подготовка бритвы для удаления волос из операционной зоны
Стерильный скальпельIntegra Miltex4-415Стерильный одноразовый скальпель для нанесения разреза
Стерильные хирургические ножницыСклар10022-580Merit Sterile Iris Scissors, для вскрытия кровеносных сосудов и соединительной ткани  
Фляжка с культурой клеток T25Корнинг430639Колба для культуры клеток Falcon T25, вентиляционная крышка, стерильная
Triton X-100 (0,1%)Сигма-ОлдричT8787Лабораторный класс, для проницаемости 
Trypan BlueGibco, Thermo Fisher Scientific15250061Решение 0,4% для подсчёта жизнеспособности клеток.
Трипсин-ЭДТА (0,25%)Gibco252000560,25% трипсина, 1 мМ EDTA, для отсоединения ADSC
&бета;-глицерофосфатСигма-ОлдричG9422Пентагидрат соли динатрия для остеогенной индукции

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Qin, Y., et al. An update on adipose-derived stem cells for regenerative medicine: where challenge meets opportunity. Adv Sci. 10 (20), 1-27 (2023).
  2. Wang, L., et al.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Adipose Derived Stem CellsAdipocyte IsolationPorcine Adipose TissueMechanical DissociationEnzymatic DigestionStromal Vascular FractionCell ViabilitySingle Cell SuspensionFluorescence MicroscopyAutomated Cell Counter

Похожие статьи