Этот протокол оценивает лимфатический дренаж после перелома путём сочетания индокианинового (ICG) ближнего инфракрасного изображения с ультразвуком для количественной оценки клиренса подошвенного ICG и увеличения подколенных лимфатических узлов у мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка лимфатического дренажа с помощью ICG ближнего инфракрасного изображения и ультразвука после перелома
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Травматические переломы часто сопровождаются нарушением функции лимфатического дренажа. Снижение лимфатического дренажа и увеличение лимфатических узлов после перелома указывают на продолжающиеся динамические процессы острого воспалительного ответа и привлечения иммунных клеток. В этой статье описывается метод, при котором 6 мкл 0,2 мг/мл индокианина зелёного было внутрикожено введено в подошвенную область мышей, проходящих фиктивную или большеберцовую операцию. Ближняя инфракрасная флуоресцентная визуализация количественно оценила плантарный ICG-сигнал на 0 и 24 часа для вычисления 24-часовой скорости клиренса как показания лимфатического дренажа мышей. Ультразвук использовался одновременно для 3D-реконструкции подколенных лимфатических узлов (PLN), сравнения их объёмов и оценки увеличения, вызванного переломом. Результаты показали, что после перелома скорость клиренса лимфатического отклонения значительно снизилась, интенсивность флуоресценции ICG в подошвенной области значительно увеличилась, а объём PLN значительно увеличился. По сравнению с предыдущими методами измерения лимфатической системы, такими как гистопатологические срезы или лимфосцинтиграфия, которые часто не достигают in vivo, динамического и непрерывного наблюдения, этот метод демонстрирует высокую стабильность и воспроизводимость. В частности, он позволяет проводить динамический in vivo мониторинг функции лимфатического дренажа, обеспечивая надёжную техническую поддержку для изучения изменений лимфатического рефлюкса в моделях переломов.
Введение
Травматические переломы часто вызывают значительные повреждения тканей и отёки, увеличивая риск осложнений, таких как инфекция, некроз и несрослениекостей 1,2. Гжегож Щесны и др. показали, что дисфункция лимфатического дренажа, приводящая к отёку тканей, связана с задержкойзаживления 3. Исследования показывают, что в процессе заживления после перелома, помимо восстановления костной ткани, важную роль играет лимфатическая система в месте перелома. Лимфатические сосуды отвечают не только за отток интерстициальной жидкости и предотвращение
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Шанхайского центра модельных организмов (Одобрение No NMB-SMP-IACUC-01-0002-R02-03). В этом исследовании использовались мыши-самцы C57 с моделью перелома (возраст 6–8 недель). Реагенты и используемое оборудование перечислены в Таблице материалов.
1. Предоперационный уход
- Акклиматизируйте мышей как минимум на неделю с импровизированным доступом к еде и воде. Случайным образом отнесите животных к группе «Fracture» или «sham» с помощью компьютерно сгенерированного списка рандом....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На 1, 7 и 14 дни после установления модели перелома интенсивность флуоресценции ИКГ за 24 часа (FI 24h) в группе перелома стабильно была выше, чем в группе фиктивной хирургии (см. рисунок 3). Относительный количественный анализ интенсивности флуоресценции ИКГ по собранным плантарным изображениям показал, что уровень клиренса лимфатического ИКГ в группе переломов был значительно ниже, чем в группе фиктивной хирургии (p < 0,05) (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Протокол включает несколько легко упускаемых из виду деталей. Например, время экспозиции не является фиксированным и должно определяться исходя из удельной интенсивности флуоресценции. Однако время воздействия для одной и той же группы мышей на 0 и 24 часа должно оставаться неизменным; в противном случае результаты могут быть ненадёжными. При использовании ультразвука для наблюдения крайне важно полностью покрыть нижние конечности мыши соединяющим агентом, так как любые открытые участки .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, которые можно было бы заявлять.
Благодарности
Это исследование было профинансировано Национальным фондом естественных наук (82174407 в YJZ), Программой подготовки дисциплинарных лидеров Шанхайской новой комиссии по здравоохранению Пудун (PWRd2020-05), Проектом дисциплинарного лидера Комитета по здравоохранению Пудуна (PWRq2020-56) и проектом медицины Саньмин в Шэньчжэне (No SZZYSM202311006).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10 Microliter Microsyringe | Hamilton Company | 80330/00 | Микроспринцовка Hamilton 80330/00 – это точный инструмент с емкостью 10 мкл, оснащенная иглой с калибром 26s, длиной 51 мм и стилем кончика 2. Она предназначена для точной доставки малых объемов в хроматографии, подачи образцов и аналитической химии. |
| 3D Ультразвуковая система исследований Vevo 3100 | Vevo 2100 | Vevo 2100 – это высокочастотная ультразвуковая система исследований для предклинических исследований, предоставляющая реальное 3D-визуализирование маленьких животных. Она предлагает высокую разрешающую способность для исследований в области кардиологии, онкологии и развития биологии, интегрированная с программным обеспечением Vevo LAB для анализа данных. | |
| 75% этанол | Shanghai Titan Scientific Co., Ltd. | G73537O | 75% этанол – это дезинфицирующий раствор, широко используемый в лабораториях для стерилизации поверхностей, очистки оборудования и антисепсиса. Он эффективно убивает бактерии, вирусы и грибки путем денатурации белков и широко применяется в биологических и клинических условиях. |
| Ватушка | Hebei Kangji Medical Equipment Co., Ltd. | 20250303 | Ватуши – это стерильные, поглощающие аппликаторы, используемые для точного взятия образцов, нанесения растворов или очистки в медицинских, диагностических и лабораторных процедурах. Они имеют деревянные или пластиковые палочки с ватными наконечниками для гигиенической работы. |
| Сцепляющее средство | Tianjin Jinya Technology Development Co., Ltd. | 20241029 | Сцепляющее средство, обычно известное как ультразвуковой гель, – это водная среда, используемая для улучшения акустической передачи между ультразвуковым преобразователем и кожей. Оно исключает воздушные включения для четкого изображения, не раздражает кожу и поставляется в контейнере объемом 250 мл для медицинских и диагностических целей. |
| Graphpad Prism | GraphPad Software | Prism 10 | Научное программное обеспечение для графического и статистического анализа, используемое для анализа данных, визуализации и презентации. |
| Image J | National Institutes of Health | ImageJ 1.54d | Публичная программа обработки и анализа изображений на Java, широко используемая для биологического и медицинского анализа изображений. |
| индоцианиновый зеленый | Dandong Yichuang Pharmaceutical Co., Ltd. | 8305128 | Индоцианиновый зеленый – это водорастворимый анионный краситель, используемый в медицинской диагностике для определения сердечного выброса, функции печени, кровотока в печени и ангиографии глаз. Он поставляется во флаконах по 25 мг для внутривенного введения и проявляет флуоресценцию в ближней инфракрасной области для целей визуализации. |
| изофлуран | RWD | R650-IE | Изофлуран – это ингаляционный общий анестетик. У него малый коэффициент разделения кровь/газ. При использовании для анестезии животных он может плавно, быстро и комфортно ввести анестезию, с быстрым восстановлением, хорошей мышечной релаксацией и без воздействия на симпатическую нервную систему. Скорость метаболизма изофлурана в печени низка, поэтому он мало токсичен для печени, и при повторном применении нет явных побочных эффектов. Для предотвращения неблагоприятного воздействия отходящих газов анестетика на окружающую среду и персонал лаборатории рекомендуется использовать его вместе с системой восстановления газов. |
| Микробаланс | Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd. | FA1004B | Микробаланс FA1004B – это высокоточный аналитический инструмент, предназначенный для точного взвешивания малых образцов, предлагающий точность до 0,0001 г и подходящий для лабораторных приложений, требующих точных измерений в исследованиях и контроле качества. |
| Система ближнеинфракрасного исследования | Olympus | MVX10 | Olympus MVX10 – это макро-зум система флуоресцентного микроскопа, оптимизированная для ближнеинфракрасного исследования. Она предлагает высокоразрешающее визуализирование больших образцов с широким диапазоном зума, современной оптикой для глубокого проникновения в ткани и совместимость с флуоресцентными методами в исследованиях биологии и материалов. |
| Vevo lab | \ | Vevo LAB | Пакеты программного обеспечения для анализа изображений, используемые для анализа изображений Vevo, включая измерения, вычисления и создание отчетов. |
Ссылки
- Zhang, S., Sheng, H., Xu, B., Lao, Y. Acute external iliac artery thrombosis following pelvic fractures: Two case reports. Medicine (Baltimore). 100 (6), e24710(2021).
- Szczesny, G., Olszewski, W. L., Gewartowska, M., Zaleska, M., Gorecki, A. The heali....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
