Старение, связанное с нейродегенерацией: одновременная оценка активности β-галлонов и окрашивания ниссля в гистологических срезах мозга грызунов.

Verónica Salas-Venegas; Ricardo J Ramírez-Carreto; Anahí Chavarría

doi:10.3791/70676

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Старение, связанное с нейродегенерацией: одновременная оценка активности β-галлонов и окрашивания ниссля в гистологических срезах мозга грызунов.

118 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70676

⸱

17 июля 2026 г.

Verónica Salas-Venegas^*¹ , Ricardo J Ramírez-Carreto^*¹ , Anahí Chavarría¹

¹Laboratorio de Neuroinmunología, Unidad de Investigación en Medicina Experimental, Facultad de Medicina-UNAM, Hospital General de Mexico "Dr. Eduardo Liceaga"

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол представлен как инструмент для выявления активности β-галактозидаз, ассоциированной с старением, проведения окрашивания по Nissl для одновременной оценки старения и целостности нейронов, а также для изучения связей между бременем старения и нейродегенерацией.

Аннотация

Клеточное старение — это физиологический процесс, характеризующийся необратимой остановкой клеточного цикла, что нарушает регенерацию и функцию тканей. Это явление стало ключевым фактором нейродегенерации, вызванной накоплением стареющих клеток в центральной нервной системе (ЦНС). Стареющие клетки приобретают фенотип, связанный с воспалительным старением секреторный фенотип (SASP), который поддерживает хроническое нейровоспаление и нарушает нейронную микросреду. В результате такие важные процессы, как нейрогенез, синаптическая пластичность и выживание нейронов, нарушаются. Обширная литература связывает клеточное старение с несколькими нейродегенеративными расстройствами, такими как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера или рассеянный склероз, а также с острыми нейронными повреждениями, такими как церебральная ишемия или черепно-мозговая травма.

Совместная оценка активности β-галактозидазы, ассоциированной с старение β м, и окрашивания Nissl в гистологических срезах обеспечивает комплексный подход к одновременной оценке клеточной старения и целостности нейронов в одном тканевом контексте. Эта стратегия обеспечивает точную пространственную корреляцию между накоплением стареющих клеток в определённых уязвимых областях (например, гиппокамп или кора) и потерей нейронов или повреждением тканей. Интегрируя функциональный маркер старения с классическим индикатором морфологии и плотности нейронов, этот подход усиливает интерпретативную устойчивость анализа. Кроме того, это позволяет более точно охарактеризовать связь между стареющей нагрузкой и нейродегенеративными изменениями, максимизируя получение информации из ограниченных образцов тканей.

Кроме того, этот протокол позволяет определить, как происходит накопление стареющих клеток в ответ на вмешательства (фармакологические, генетические манипуляции и др.) в моделях нейродегенеративных заболеваний грызунов, предоставляя тем самым мощный инструмент для анализа этого вклада в их патофизиологию.

Введение

Клеточное старение определяется практически необратимой остановкой клеточного цикла, сопровождаемой обширными макромолекулярными^{изменениями 1}. Кроме того, стареющие клетки приобретают гиперсекреторный фенотип (SASP), характеризующийся устойчивой секрецией разнообразных провоспалительных цитокинов, факторов роста и^{протеаз.} В совокупности эти факторы способствуют формированию провоспалительной микросреды, которая усиливает старение и влияет на гомеостаз тканей. В центральной центральной центральной центральной системе стареющие клетки постепенно накапливаются с возрастом, особенно в областях, уязвимых к возрастной^{патологии.} Клеточное старение играет значительную роль в функциональных изменениях, связанных со старением и нейродегенеративными заболеваниями, при этом нагрузка на стареющие клетки постепенно увеличивается в нормальном старении. Несколько типов клеток в ЦНС подвержены старению, включая астроциты, микроглии, олигодендроциты, нейроны и нейронные стволовые^{клетки 4}. Накопленные данные указывают на старение этих популяций клеток ЦНС в этиопатологии ряда нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, фронтотемпоральную деменцию, амиотрофический латеральный склероз и рассеянный^{склероз 5}. Нейродегенеративные заболевания связаны с клеточным^{старением 6}, и было показано, что стареющие клетки накапливаются рядом с амилоидными β бляшек и нейрофибриллярными клубками. Возрастные увеличения активности SA-β-gal были описаны в мозгах грызунов (например, 3, 8, 17 и 24 месяца), при этом статистически значимые повышения наиболее заметны у самой старшей когорты (24 месяца)⁷.

Различные исследования дают важные представления о взаимосвязи между гистологическими изменениями и функциональными результатами, такими как когнитивные нарушения и метаболическая дисрегуляция, в патологических животных моделях, которые рассматривают функциональные или поведенческие корреляты повреждений^мозга ^8,9.

Несмотря на обширные исследования, не существует единого универсального маркера, который бы надёжно идентифицировал стареющие клетки и отличал их от других непролиферативных состояний; однако наиболее широко используемым маркером клеточного старения является лизосомный фермент, ассоциированный с старением β-галактозидаза (SA-β-gal), который обнаруживается при pH 6 — гидролазном ферменте, катализирующем гидролиз β-галактозидов в моносахариды. Ключевым отличительным фактором является pH. SA-β-gal демонстрирует оптимальную активность при pH 6, в отличие от бактериальной β-галактозидазы, которая действует при pH 7,4, и эндогенной лизосомной β-галактозидазы, которая действует при кислотных pH от 3 до 5 ^7,10.

Плотность клеток и цитоархитектура мозга являются фундаментальными детерминантами нейронной организации и функции. Пространственное распределение и численность определённых популяций клеток критически важны для функционирования цепей, а их точная количественная оценка необходима для изучения нейропатологических состояний, связанных с селективной уязвимостью или потерей клеток. Окрашивание Ниссля, стандартный метод в нейронауке, является широко используемым гистологическим методом для оценки плотности и цитоархитектуры нейронов в нервной ткани. Путём селективного маркировки тел Nissl внутри нейронных сомат, этот метод позволяет надёжно визуализировать и количественно оценивать нейронные популяции в областях^{мозга 11}. Помимо прочности, окрашивание Nissl характеризуется технической простотой, низкой стоимостью и относительно коротким временем обработки, что делает его практичным и доступным инструментом для рутинных нейроанатомических и нейродегенерационных исследований.

Совместная оценка активности окрашивания Ниссла и ассоциированной с старением β-галактозидазы (SA-β-gal) в одном гистологическом разделе предоставляет надёжную, пространственно разрешённую основу для одновременного изучения целостности нейронов и стареющей клеточной нагрузки. Этот интегративный подход позволяет напрямую сопоставлять старение с специфическими для региона нейродегенеративными признаками, включая потерю нейронов и нарушение цитоархитектуры. Связывание классического структурного маркера с функциональным индикатором старения усиливает интерпретацию данных и выявляет механистические связи между накоплением стареющих клеток и дисфункцией тканей, при этом максимизируя аналитический результат из ограниченных образцов.

Важно отметить, что эта стратегия особенно подходит для исследований с ограниченной доступностью тканей, продольных или интервенционных конструкций (например, сенолитические или сеноморфные методы), а также для региональных анализов сложных церебральных структур, где критически важно корреляция старения с уязвимостью нейронов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Выполнять все процедуры на животных в соответствии с институциональными и национальными рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных и получать предварительное одобрение соответствующего этического комитета. Этот протокол соответствует действующему Мексиканскому официальному стандарту по уходу и использованию лабораторных животных (NOM-062-ZOO-1999(Muñoz, 2001)), предварительному пересмотру и утверждению комитетами по этике и исследованиям, а также Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (CICUAL) факультета медицины Национального автономного университета Мексики (FM/DI/039/2023, CICUAL-009-2023). Животных поставлял виварий Unidad de Medicina Experimental, факультет медицины.

ПРИМЕЧАНИЕ: Для одновременной оценки активности β-галактозидазы, ассоциированной с старение β м, и окрашивания Nissl в ткани мозга грызунов, этот протокол использует 4% мозги грызунов, фиксированных на параформальдегиде, которые криосецируются при -20 ± 1 °C. Все секции сначала оцениваются на активность SA-β-gal (шаг 1), затем окрашивают Nissl (шаг 2), а затем монтируются с помощью монтажного средства против фейда (шаг 3). После обработки стекла исследуются под оптическим микроскопом с ярким полем, что позволяет получать высококачественные изображения интересующих областей для дальнейшего анализа.

1. Подготовка срезов ткани и выявление активности β-галактозидазы, ассоциированной со старением, (SA-β-gal)

Подготовка срезов мозга
1. Получение мозга с помощью транскардиальной перфузии с параформальдегидом при 4% согласно ранее описанному протоколу Wu и др., 2021¹². Переместить мозг в фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS), содержащий 0,01% азида натрия, для длительного хранения при 4 °C.
2. Чтобы продолжить процедуру, поместите мозг в раствор сахарозы 30%, дождитесь, пока он опустится на дно, затем храните при -20–-80 °C. Этот протокол может применяться в различных тканях мозга грызунов (например, крыса, мышь, морская свинка) и замораживать в 2-метилбутане.
3. Криосекция ткани при -20 ± 1 °C для получения однородных срезов, встроенных в состав оптимальной температуры резки (O.C.T.) (толщина 20–40 мкм) и установка на стеклянные стекла с желатиновым покрытием.
4. Крепите секции на стеклянные стекли и храните в холодных условиях до использования.
Обнаружение активности, связанной с старением β-галактозидазой (SA-β-gal).
1. Приготовьте раствор для окрашивания SA-β-gal свежим в день использования, используя растворы, указанные в Таблице 1.
2. Скорректируйте решение до pH 6.0, чтобы обеспечить специфичность активности SA-β-галлон.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Перед использованием подготовьте раствор для окрашивания SA-β-галона; Избегайте предварительного смешивания в водном растворе.
  5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопираносид (X-Gal) нестабилен в водном растворе.
Уравновесить температуру тканевых слайдов.
1. Уберите стекли из холодного хранилища.
2. Поместите слайды в банку Coplin и дайте им выровняться при комнатной температуре (RT) в течение 5 минут.
3. Увлажните секции, добавив достаточно PBS, чтобы покрыть слайды в банке Coplin.
4. Поставьте слайды на низкоскоростной орбитальный встряхиватель на 5 минут в RT.
5. Повторите стирку один раз.
Подготовьте слайды для окрашивания.
1. Аккуратно удалите лишний PBS с краёв затвора с помощью впитывающей бумаги.
2. Нарисуйте гидрофобный барьер вокруг каждого участка с помощью водоотталкивающей барьерной ручки, чтобы избежать контакта с тканями.
Проведите окрашивание SA-β-gal
1. Поместите затворы в камеру с влажностью.
2. С помощью микропипетки добавляют примерно 200 мкл раствора для окрашивания на секцию, обеспечивая полное покрытие ткани.
3. Инкубировать при 37 °C в течение 48 часов.
4. После инкубации удалите раствор для окрашивания с помощью впитывающей бумаги.
5. Поместите слайды в банку Coplin, добавьте PBS для покрытия слайдов и мягко перемешивайте на низкоскоростном орбитальном шейкере в течение 5 минут на RT.
  ПРИМЕЧАНИЯ: Не используйте CO₂-инкубатор. Немедленно направляйтесь к нанесению пятен в Ниссл.

2. Пятна Nissl

Подготовьте рабочее решение Nissl.
1. Подготовьте запасные растворы, как описано в Таблице 2.
2. Из стандартных растворов приготовьте рабочий раствор Nissl, смешав 15 мл раствора кресил-фиолетового с 85 мл ацетатного буфера.
3. Фильтруйте раствор для удаления осадков с помощью фильтровой бумаги (4-й степени, поровый размер 20-25 мкм).
4. После фильтра предварительно прогрейте при 37 °C минимум 30 минут (или 40–43 °C в водяной бане).
5. Добавьте 10 капель уксусной кислоты 0,1 M непосредственно перед использованием в рабочий раствор Nissl.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте рабочее решение Nissl до четырёх раз в один день; Не храните на ночь.
6. Подготовьте подкисленный этанол, добавив 95 мл абсолютного этанола в объёмную колбу и добавив 15 капель уксусной кислоты 0,1 м. Доведите до 100 мл дистиллированной водой и тщательно перемешайте.
Предварительно кондиционируйте стеклы.
1. Поместите слайды в банку Coplin и добавьте PBS по необходимости, чтобы покрыть стекли и инкубировать при 37 °C в течение 5 минут.
Морилка на участках.
1. Аккуратно погружайте слайды в предварительно нагретый раствор Nissl, слайд за слайдом.
2. Инкубировать затворы в растворе Nissl в течение 5–20 минут.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Время зависит от толщины ткани. Следите за окраской каждые 5 минут, пока не появится глубокий фиолетовый цвет.
Помой секции.
1. Аккуратно промывайте стекла в дистиллированной воде в течение 1 минуты. Перенесите на стекли в банке Coplin с свежей дистиллированной водой ещё на 1 минуту.
2. Оцените качество окраски. Наблюдайте слайды под яркопольным микроскопом (10× объектива).
3. В микроскопе с ярким полем подтвердите интенсивное пурпурное окрашивание с минимальным фоном.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Если фон избыточный, погрузите слайды в кислотный 95% этанол на 10 секунд.
4. Немедленно переведите на абсолютный этанол на 10 секунд, чтобы остановить дифференциацию.
  ПРИМЕЧАНИЕ: При необходимости повторяйте окрашивание, повторяйте этапы окрашивания (8.1-9.3), если цвет слабый.
Обезвожить и очистить стекла.
1. Погрузите слайды в ксилол минимум на 5 минут (до 2 часов, если нужно)
  ПРИМЕЧАНИЕ: Действуйте быстро, так как ткани обезвоживаются в течение ~2 минут.

3. Посадка

Подготовка монтажной среды
1. Смешайте 8 мл монтажного материала с 2 мл ксилола.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Готовьте только необходимый объем; Монтажная среда быстро затвердевает.
2. Снимите стекли с ксилола и аккуратно промокните края. Поставьте слайды на ровную поверхность.
3. Нанесите ~120 мкл крепящего материала поверх ткани.
4. Медленно размещайте накладку с одной стороны, чтобы избежать пузырей.
Высушите слайды и получите изображения.
1. Дайте затворам высохнуть минимум 5 минут на RT.
2. Наблюдайте под микроскопом с ярким полем и получайте изображения интересующих областей.
3. После монтажа полное высыхание монтажного материала требует длительного времени (24 часа).
Храните слайды.
1. Храните слайды в RT для долгосрочного сохранения (на многие месяцы).

4. Количественная оценка бремени старения

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот подход применяется как качественная оценка; однако, если это требует дизайн исследования, его можно расширить, включив количественный анализ.

Определите бремя старения как относительную численность β-галактозидазы (SA-β-gal)–положительных клеток в определённой области интереса (ROI). Экспрессируйте эту метрику в процентах положительных ячеек относительно общего числа ячеек или как плотность положительных ячеек на единицу площади (клетки/^{мм 2}).
Выбранный регион интереса (ROI). Определите возвраты инвестиций на основе стандартизированных нейроанатомических ориентиров с помощью атласа мозга, соответствующего виду и возрасту. Рекомендуемые области включают подполя гиппокампа (CA1, CA3, зубчатая извилистость) и кортикальные области с чётко выраженной ламинарной организацией.
1. Выберите 3–5 неперекрывающихся полей на каждый раздел ROI.
2. Проанализируйте как минимум 2–3 секции на животное, расположенные на одинаковых анатомических интервалах.
3. Сохраняйте одинаковый размер и форму возврата инвестиций во всех образцах.
4. Ослепить оператора на экспериментальные условия при выборе ROI для минимизации смещения.
Получите изображения.
1. Получение изображений с помощью микроскопа с ярким полем с цифровой камерой в стандартизированных условиях:
  1. Используйте последовательные увеличения (например, 10× для регионального обзора, 20× или 40× для количественной оценки).
  2. Поддерживайте постоянное освещение, время экспозиции и баланс белого во всех образцах.
  3. Избегайте насыщения сигнала SA-β-галлон (синий) и обеспечьте чёткую визуализацию пятен Nissl (фиолетовый).
  4. Сохраняйте изображения в формате без потерь (например, TIFF) для дальнейшего анализа.
Предварительно обработайте изображения.
1. Выполните предварительную обработку с помощью программного обеспечения для анализа изображений (например, ImageJ/Fiji)¹³.
  1. При необходимости конвертируйте изображения в формат RGB.
  2. Применяйте фоновый вычитание для исправления неравномерного освещения.
  3. Нормализуйте контраст равномерно на всех изображениях без изменения относительной интенсивности сигнала.
  4. Избегайте чрезмерной обработки, которая может исказить границы сигнала.
Идентифицировать SA-β-гал-положительные клетки.
1. Определите положительные клетки на основе наличия отдельного синего преципитата, локализованного внутри цитоплазмы. Используйте пороги цвета для выделения синего сигнала (например, эмпирически определённые диапазоны оттенка/насыщенности/интенсивности).
2. Проверьте пороги с помощью отрицательных контролей (молодые или необработанные ткани), чтобы исключить фоновые окрашивания.
Подтвердить морфологическую согласованность с клеточными профилями, наблюдаемыми при окрашивании Nissl.
Подходы к количественной оценке
1. Клетковая количественная оценка: подсчитайте SA-β-гал-положительные клетки вручную или с помощью полуавтоматических инструментов. Определите общее количество клеток в рамках одной и той же ROI с помощью окрашивания Nissl.
2. Экспресс-результаты как:
  Бремя старения (%) = (SA-β-гал-положительные клетки/Всего клеток) ' 100
3. Количественная оценка на основе плотности: рассчитать количество SA-β-галлон-положительных ячеек на единицу площади:
  Плотность клетки = положительные клетки/площадь ROI (мм²)
4. Определение порогов и контроль: установите пороги обнаружения эмпирически:
5. Используйте отрицательные элементы управления для определения уровней фоновых сигналов.
6. Включайте положительные контроли (например, старение мозговой ткани или модели, вызванные стрессом) для проверки чувствительности.
7. Применяйте одинаковые пороговые настройки для всех образцов в эксперименте. Документируйте все пороговые параметры для обеспечения воспроизводимости.

5. Нормализация данных и статистический анализ

Нормализовать нагрузку старения с учётом региональных различий в плотности клеток; используйте окрашивание Nissl для оценки общего количества клеток на ROI — средние измерения по ROI, секциям и животным. Проводите статистический анализ с использованием соответствующих тестов (например, t-тест, ANOVA) в зависимости от дизайна эксперимента.
Отчёт данных как среднее ± SEM или SD, указывая количество биологических репликат (n).
Ослепление и воспроизводимость: Проводите все количественные анализы в условиях «слепых». Проверять воспроизводимость путём: (a) независимого анализа как минимум двумя наблюдателями или (b) повторного анализа подмножества изображений для оценки вариабельности внутри наблюдателя.
Ограничения стратегии количественной оценки: интерпретировать количественные результаты вместе с дополняющими маркерами, где это возможно. Кроме того, вариативность интенсивности окрашивания между секциями может влиять на количественную оценку на основе порога и должна тщательно контролироваться.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Совместное применение окрашивания, ассоциированного со старением β галактозидазой (SA-β-gal), и окрашивания по Nissl позволяет одновременно визуализировать нагрузку стареющих клеток и нейронную цитоархитектуру в одном срезе мозга.

Следуя процедуре окрашивания SA-β-гал (шаг 1), осмотрите стекла под микроскопом с ярким полем. Успешное окрашивание указывается на наличие выраженного синего осадка, локализованного внутри клеток с активностью β галактозидазы (

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В настоящее время ограниченная доступность надёжных специализированных инструментов для идентификации, изоляции и селективного удаления стареющих клеток в ЦНС остаётся серьёзным препятствием для механистических исследований. Этот методологический разрыв ограничивает нашу способность отделять причинные вклады клеточного старения в нейропатологию от простой корреляции с прогрессированием заболевания. Представленный здесь рабочий процесс сочетает ферментативное обнаружение SA-β-гал с контро...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Dirección General de Asuntos del Personal Académico, UNAM (PAPIIT IN224624), а также Secretaría de Ciencia, Humanidades, Tecnología et Innovacción (SECIHTI), программами Ciencia de Frontera CBF-2025-I-1337 и UNAM Posdoctoral Program (POSDOC). RJRC получил стипендию номер 1020262 от CONAHCyT. VSV получил постдокторскую стипендию от Программы постдокторских исследований, Генеральной дирекции Персональной академии (DGAPA), UNAM.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
2-метилбутан	SIGMA	M32631-500ML
5-бромо-4-хлор-3-индолил β-D-галактопиранозид (X-Гал)	PROMEGA	V394A	Хранить при температуре от -30 до -10 °C
Уксусная кислота	MERCK	251275-5G
Кресиловый фиолетовый ацетат	SIGMA	C5042-10G
DPX монтировочная жидкость для гистологии	SIGMA	06522-500ML
Фильтровальная бумага	Whatman	WHA1001929
Ледяная уксусная кислота	SIGMA	695092-500ML
Гидрофобная ручка	MERCK	Z672548
Гистологический ксилол	SIGMA	534056-500ML
Чаша для влажности	STAINTRAY	25501
Безводный хлорид магния	SIGMA	M8266-100G	Подстроить молярность, если используется гидратированный хлорид магния.
OCT	SAKURA FINE TEK	4583
Фосфатно-буферный раствор (PBS)	SIGMA	P4417-50TAB	Используются коммерческие таблетки.
Калий ферроцианид (Калий гексацианоферрат(III))	SIGMA	P8131-100G
Калий ферроцианид (Калий гексацианоферрат(II) тригидрат)	SIGMA	P9387-100G
Безводный ацетат натрия	SIGMA	S2889-250G	Подстроить молярность, если используется гидратированный ацетат натрия.
Хлорид натрия	SIGMA	S9888-2.5KG
Фосфат натрия (Дифосфат натрия додекагидрат)	SIGMA	71649-500G

Ссылки

Melo Dos Santos, L., et al. Cellular senescence in brain aging and neurodegeneration. Ageing Res Rev. 93, 102141(2024).
Chinta, S. J., et al. Cellular senescence and the aging brain. Exp Gerontol. 68, 3-7 (2015).
Baker, D. J., Petersen, R. C. Cellular senescence in brain aging and neurodegenerative diseases: evidence and perspectives. J Clin Invest. 128 (4), 1208-1216 (2018).
Kuźniar, J., et al. Connections between cellular senescence and Alzheimer’s disease—a narrative review. Int J Mol Sci. 26 (17), 8638(2025).
Martínez-Cué, C., Rueda, N. Cellular senescence in neurodegenerative diseases. Front Cell Neurosci. 14, 16(2020).
Wang, Y., et al. The role of cellular senescence in neurodegenerative diseases. Arch Toxicol. 98 (8), 2393-2408 (2024).
Piechota, M., et al. Is senescence-associated β-galactosidase a marker of neuronal senescence? Oncotarget. 7 (49), 81099-81109 (2016).
Zhang, H., et al. Mangiferin alleviated poststroke cognitive impairment by modulating lipid metabolism in rats with cerebral ischemia/reperfusion. Eur J Pharmacol. 977, 176724(2024).
Hussain, M. S., et al. Autophagy and cellular senescence in Alzheimer’s disease: key drivers of neurodegeneration. CNS Neurosci Ther. 31 (7), e70503(2025).
Si, Z., Sun, L., Wang, X. Evidence and perspectives of cell senescence in neurodegenerative diseases. Biomed Pharmacother. 137, 111327(2021).
Meystre, J., et al. Cell density quantification of high resolution Nissl images of the juvenile rat brain. Front Neuroanat. 18, 1463632(2024).
Wu, J., et al. Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation. Bio Protoc. 11 (5), (2021).
Lozano-Gerona, J., García-Otín, Á-L. ImageJ-based semiautomatic method to analyze senescence in cell culture. Anal Biochem. 543, 30-32 (2018).
Huang, W., et al. Cellular senescence: the good, the bad and the unknown. Nat Rev Nephrol. 18 (10), 611-627 (2022).
Zeng, W. -J., et al. A novel inflammation-related lncRNAs prognostic signature identifies LINC00346 in promoting proliferation, migration, and immune infiltration of glioma. Front Immunol. 13, 810572(2022).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Старение, связанное с нейродегенерацией: одновременная оценка активности β-галлонов и окрашивания ниссля в гистологических срезах мозга грызунов.

В этой статье

Краткое содержание

Аннотация

Введение

Протокол

Результаты

Обсуждение

Раскрытие информации

Благодарности

Материалы

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Теги