Стандартизированный протокол метаболомики для анализа метаболических сдвигов, вызванных физическими упражнениями, у элитных боксеров с помощью жидкой хроматографии-масс-спектрометрии

Peng Sun; Dong Zhang; Qinyi Chen; Mengyang He; Biao Li

doi:10.3791/70719

Методическая статья

Стандартизированный протокол метаболомики для анализа метаболических сдвигов, вызванных физическими упражнениями, у элитных боксеров с помощью жидкой хроматографии-масс-спектрометрии

DOI:

10.3791/70719

⸱

22 мая 2026 г.

Peng Sun¹ , Dong Zhang² , Qinyi Chen¹ , Mengyang He³ , Biao Li⁴

¹Anhui Institute of Sports Science and Technology, ²Institute of Artificial Intelligence in Sports, Capital University of Physical Education and Sports, ³Department of Psychology, School of Sports Medicine, Wuhan Sports University, ⁴Wuhan Sports University, Hefei Normal University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает стандартизированный рабочий процесс сывороточной метаболомики, основанный на жидкой хроматографии в сочетании с квадрупольной тандемной масс-спектрометрией с временем полёта (LC-QTOF-MS/MS) и многомерным анализом данных для профилирования острых и краткосрочных метаболических сдвигов, связанных с восстановлением, у элитных мужчин-боксеров.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Элитный бокс вызывает быстрые метаболические изменения, которые не полностью отражаются обычными физиологическими измерениями. Стандартизированный нецеленаправленный процесс сывороточной метаболомики, основанный на жидкой хроматографии-квадрупольной тандемной масс-спектрометрии с временем полёта (LC-QTOF-MS/MS), был применён к образцам, собранным перед спаррингом, сразу после спарринга и через 24 часа после спарринга у семи элитных боксёров. Рабочий процесс включал стандартизированный сбор образцов, объединённый мониторинг контроля качества, профилирование метаболитов, многомерный статистический анализ и интерпретацию путей. Острый спарринг был связан с изменениями метаболитов, связанных с гликолизом и глюконеогенезом, тогда как 24-часовая точка времени была связана с обменом серы.

Фосфатидилинозитол PI (16:0/18:2(9Z,12Z)) показал сильную дискриминацию состояния непосредственно после спарринга, а тиосульфат был связан с 24-часовым состоянием восстановления. Эти результаты подтверждают использование этого рабочего процесса для воспроизводимого профилирования метаболических изменений, связанных с физическими упражнениями, в этой когорте из семи элитных мужчин-боксеров. Протокол предназначен для контролируемых небольших когортных исследований острых упражнений и краткосрочного восстановления и делает акцент на воспроизводимой обработке образцов, объединённом контроле качества и интерпретируемом анализе в дальнейшем процессе.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Элитный бокс, характеризующийся тремя раундами по 2 минуты высокоинтенсивных спаррингов, основан на сочетании анаэробного и аэробного метаболизма и вызывает быстрые изменения энергетических субстратов, медиаторов окислительного стресса и метаболитов, связанных с восстановлением тканей. Традиционные оценки (лактат в крови и частота сердечных сокращений) фиксируют только отдельные физиологические конечные точки, не разрешая системные, взаимосвязанные метаболические изменения, охватывающие «исходный уровень до спарринга → острый стресс после спарринга → 24-часовое восстановление».

Нецелевая метаболомика, обеспечиваемая жидкой хроматографией и квадрупольной тандемной масс-спектрометрией с временем полёта, решает это ограничение путём всестороннего профилирования маломолекулярных метаболитов в биологических образцах. Обычно он обнаруживает тысячи метаболических пиков и аннотирует сотни, а то и тысячи метаболитов через интеграцию с отображёнными базами данных ^1,2,3. Такой подход может выявить тонкие метаболические динамики, которые традиционные методы упускают, но существующие метаболомные исследования, ориентированные на бокс, не имеют стандартизации: часто отсутствуют контролируемые протоколы спарринга, шаги строгого контроля качества (QC) или долгосрочные сроки восстановления, что приводит к невоспроизводимым результатам и ограниченному применению к стратегиям тренировок или восстановления ^4,5.

Представлен стандартизированный метаболомный рабочий процесс, основанный на жидкой хроматографии-квадрупольной тандемной масс-спектрометрии с временем полёта и оптимизированный для элитных боксёров, чтобы фиксировать как острые реакции на нагрузку, так и задержку восстановления. Протокол включает три ключевых временных точки (до спарринга [T0], непосредственно после спарринга [T1], через 24 часа после спарринга [T2]), чтобы отличать временное напряжение от устойчивой ^{адаптации} ^6,7,8. Ключевые технические особенности включают: (1) контролируемый спарринг (максимальная частота сердечных сокращений 80–85%) для обеспечения стабильной интенсивности^{упражнений} ^7,9; (2) высокоразрешающий LC-QTOF для чувствительного обнаружения метаболитов сыворотки^{с низким содержанием} ^2,3,10; (3) многомерный и одномерный анализ, включая анализ основных компонентов (PCA), ортогональный частично-дискриминантный анализ наименьших квадратов (OPLS-DA) и парное статистическое тестирование для выявления метаболитов, чувствительных к физической^{нагрузке} ^6,8,11; и (4) один объединённый образец качества сыворотки (равномерное смешивание образцов исследования) с несколькими инъекциями для оценки устойчивости прибора при дрейфе^{сигнала 12}.

Этот протокол может быть адаптирован для других высокоинтенсивных, кратковременных видов спорта (например, спринта и борьбы), но такая переносимость требует валидации в специализированных группах спорта. В настоящем исследовании рабочий процесс предоставляет предварительную основу для выявления метаболических маркеров стресса и восстановления у элитных мужчин-боксеров. Этот рабочий процесс наиболее подходит для контролируемых исследований острых упражнений и краткосрочного восстановления в небольших, хорошо охарактеризованных спортивных когортах с использованием нецелевых метаболомных методов на основе сыворотки. Он может быть менее пригоден для прямой экстраполяции на другие виды спорта, женщин-спортсменов, более крупные гетерогенные популяции или долгосрочные адаптационные исследования без дополнительной валидации.

Целью исследования было охарактеризовать метаболические изменения в сыворотке, вызванные элитным боксерским спаррингом, а также отличить острые постспарринговые реакции от изменений, связанных с восстановлением за 24 часа. Выдвигалась гипотеза, что острый спарринг в основном влияет на энергетический обмен, тогда как восстановление за 24 часа связано с метаболитами, связанными с редокс-балансом и восстановлением тканей. Общий рабочий процесс показан на рисунке 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Выполнять все процедуры в соответствии с одобрением Институционального комитета по этике по человеческим исследованиям Университета физического воспитания и спорта Капитала (одобрение No 2025A005).

ВНИМАНИЕ: Рассматривайте все образцы человеческой крови как потенциально заразные. Наденьте перчатки, лабораторный халат и защиту для глаз. Проводить сбор венозной крови, обработку сыворотки и утилизацию отходов в соответствии с институциональными процедурами биобезопасности. Обезвредить рабочие поверхности после обработки образцов.

ВНИМАНИЕ: Метанол, ацетонитрил и муравьиная кислота — опасные химикаты. Выполняйте этапы подготовки, экстракции и восстановления растворителя в сертифицированной вытяжке с химическим дымом. Избегайте контакта кожи и вдыхания. Собирайте отходы растворителей в утверждённых контейнерах.

1. Набор и подготовка участников исследования

Заберите семь элитных мужчин-боксёров в возрасте от 20 до 28 лет, выступающих в весовых категориях 60–75 кг.
Подтвердите, что у каждого участника не менее 5 лет профессионального опыта обучения и нет истории метаболических заболеваний.
Исключить участников с травмой опорно-двигательного аппарата за последние 6 месяцев.
Инструктировать участников соблюдать стандартизированную диету, содержащую 55% углеводов, 25% белков и 20% жиров, в течение 3 дней перед тестированием.
Инструктировать участников избегать интенсивных физических нагрузок при частоте или выше 60% от максимального пульса в течение 48 часов перед тестированием.
Инструктировать участников голодать 12 часов перед забором крови. Разрешить употребление воды во время голодания.
Определите максимальную частоту сердечных сокращений с помощью постепенного тестирования упражнений за неделю до спарринга.
Увеличивайте скорость беговой дорожки на 1 км/ч каждые 3 минуты до усталости. Используйте измеренную максимальную частоту сердечных сокращений, чтобы определить интенсивность цели для спарринга.

2. Протокол спарринга и сбор образцов сыворотки

Подготовьте стандартный боксерский ринг длиной 6 × 6 м, перчатки на 16 унций и пульсометр на грудном ремне.
Проведите стандартизированную 10-минутную разминку, включающую 5 минут бега на скорости 8 км/ч, 3 минуты динамической растяжки и 2 минут теневой бокса.
Выполните протокол спарринга следующим образом.
1. Проведите три раунда спарринга по 2 минуты каждый.
2. Соперников соперники по весовой категории и техническому уровню.
3. Разрешьте интервал отдыха в 1 минуту между раундами.
4. Отслеживайте пульс каждые 30 секунд на протяжении всей сессии.
5. Регулируйте интенсивность спарринга, чтобы поддерживать частоту сердечных сокращений на уровне 80–85% от MHR.
6. Прерывайте спарринг, если частота сердечных сокращений превышает 90% от MHR. Продолжайте спарринг только после того, как пульс вернётся в целевой диапазон.
Собирайте образцы сыворотки в три времени следующим образом.
1. Возьмите 5 мл венозной крови из предкубитальной вены через 30 минут после разогрева для T0, используя одну 8 мл сывороточной сепарационной трубки (SST).
2. Соберите 5 мл венозной крови в течение 5 минут после финального раунда для T1, используя новый SST.
3. Собирайте 5 мл венозной крови в то же время суток, что и T0 для T2, используя новый SST. Убедитесь, что участники соблюдают те же ограничения голодания и активности, что и при Т0.
Обрабатывайте образцы крови следующим образом.
1. Центрифугуйте каждый SST при 11000 × г в течение 15 минут при 4 °C в течение 1 часа после сбора.
2. Перенесите 2–3 мл верхнего слоя сыворотки в криовиалы объёмом 1,5 мл.
3. Криовиалы храните сразу при -80 °C.
4. Ограничите каждый образец не более чем двумя циклами заморозки и оттаивания.
Подготовьте объединённую пробу контроля качества.
1. Разморозить все 21 образец сыворотки исследования (T0, T1 и T2 семи участников) на льду перед совместной подготовкой к контролю качества.
2. Перенесите одинаковый аликвот из каждого образца в одну пробирку объёмом 1,5 мл.
3. Перенесите 20 мкл из каждого образца, чтобы получить итоговый объединённый объём контроля качества 420 мкл.
4. Вихрь пулированную пробу качества в течение 10 секунд.
5. Используйте объединённый образец контроля качества для повторных инъекций во время анализа LC-QTOF-MS, чтобы отслеживать стабильность инструмента и дрейф сигнала.

3. Извлечение метаболитов из образцов сыворотки

Удалите замороженные образцы сыворотки (T0, T1, T2 и QC) при температуре -80 °C. Разморозьте образцы на льду 30 минут и используйте вихрь каждого образца на 10 секунд.
Пипетта 100 мкл сыворотки в микроцентрифугную трубку с низким содержанием белка объемом 1,5 мл. Добавьте 500 мкл ледяного растворителя для экстракции, состоящего из метанола:ацетонитрила (1:1, v/v). Вихрь на 30 секунд.
1. Не добавляйте внутренний стандарт во время экстракции. Не применяйте коррекцию извлечения на основе внутреннего стандарта или нормализацию по последующей линии в финальном рабочем процессе.
Соникуйте трубку в ледяной водяной бане при 4 °C в течение 10 минут при 300 Вт и 40 кГц. Инкубировать трубку при -20 °C в течение 1 часа для осаждения белка.
Центрифугуйте трубку при 13200 × г в течение 20 минут при 4 °C. Перенесите примерно 450 мкл супернатанта в новую микроцентрифугную трубку и убрать гранулы в качестве опасных биологических отходов.
Сушите супернатант в вакуумном концентраторе при 37 °C и -0,09 МПа в течение 45 минут или до полной сухости.
Восстановить высушенный экстракт в 100 мкл ацетонитрила:воды (1:1, v/v). Вихрь на 30 секунд.
Примечание: Ацетонитрил:вода (1:1, v/v) использовался потому, что он был совместим с колонкой обратнофазной хроматографии, применяемой в этом процессе, и не вызывал видимых осадков в предварительных испытаниях.
Центрифугировать восстановленный раствор при 13200 × г в течение 15 минут при 4 °C. Перенесите примерно 90 мкл супернатанта в стеклянный флакон LC-MS с вставкой на 200 мкл и запечатайте флакон.

4. Обнаружение жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии

Установите колонку обратной фазы хроматографии, подходящую для метаболомики сыворотки (см. таблицу материалов), в систему жидкой хроматографии. Установите колонную духовку на 40 °C.
Подготовьте подвижную фазу A в виде 0,1% (v/v) муравьиной кислоты в сверхчистой воде. Подготовьте подвижную фазу B в виде 0,1% (v/v) муравьиной кислоты в ацетонитриле.
Фильтруйте обе подвижные фазы через мембрану диаметром 0,22 мкм.
Установите расход на 400 мкл/мин, а объём впрыска — на 5 мкл.
Применяйте следующий градиент: 0,0–0,5 мин, 95% A и 5% B; 0,5–5,5 мин, линейный градиент до 50% A и 50% B; 5,5–9,0 мин, линейный градиент до 5% A и 95% B; 9,0–10,5 мин, 5% A и 95% B; 10,5–12,0 мин, возврат к 95% A и 5% B и восстановление равновесия
Соедините систему жидкостной хроматографии с высокоразрешающим масс-спектрометром, оснащённым источником ионизации с электроспреем.
Собирайте данные в положительных и отрицательных ионных режимах в отдельных сериях.
В режиме положительных ионов установите капиллярное напряжение на 2500 В, а на конусе — на 30 В.
В отрицательном ионном режиме установите капиллярное напряжение на -2000 В, а конусное напряжение на 25 В.
Установите температуру десольвационного газа на 500 °C, поток десольвационного газа на 800 л/ч, а поток конусного газа на 50 л/ч.
Получайте данные по m/z 50–1200 с временем сканирования 0,2 с.
Получение данных тандемной масс-спектрометрии, используя низкую энергию столкновения при 0 В и высокую энергию столкновения при 10–40 В.
Пропустите образцы в следующем порядке: одна пустая инъекция растворителя для восстановления; Три последовательных инъекции объединённой образцы контроля качества; Все образцы исследования с одной пустой инъекцией и одной инъекцией контроля качества после каждых пяти образцов; Последняя инъекция контроля качества; и ещё одна последняя инъекция холостого
Оценивать качество данных и аналитическую устойчивость в обоих ионных режимах с помощью анализа корреляции с объединённым QC и кластеризации основного анализа компонентов (PCA).
Интерпретировать объединённые коэффициенты корреляции QC более 0,8 как указывающие на приемлемую аналитическую устойчивость по всей аналитической последовательности.

5. Предварительная обработка данных и статистический анализ

Импортировать сырые файлы жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии в программное обеспечение для обработки данных для выравнивания времени удержания, деконволюции, выравнивания пиков и извлечения признаков (см. таблицу материалов).
1. Выберите первую пулированную инъекцию QC в качестве эталонного ориентира выравнивания.
2. Выполните выравнивание по времени удержания, деконволюцию и пиковое выравнивание, используя стандартный рабочий процесс выбранного программного обеспечения. Используйте допуск по времени удержания ± 0,1 минуты и массовый допуск ± 5 ppm.
3. Выполнять пиковый пик и сохранять признаки с интенсивностью более 1000 счётов, присутствующих как минимум в 80% выборок хотя бы в одной группе.
4. Не применяйте дополнительную нормализацию постобработки ни в одном из ионных режимов.
5. Экспортировать обработанную таблицу признаков, содержащую значения m/z, время удержания и пиковые значения.
6. Преобразование log2 — все сохраненные пиковые интенсивности.
7. Присвоить отсутствующие значения с одной пятой от минимального положительного значения для каждой признаки.
8. Определите среднее по центру каждой особенности и делите на её стандартное отклонение перед многомерным анализом.
9. Используйте трансформированную и масштабированную матрицу для анализа главных компонентов (PCA), анализа частных наименьших квадратов и дискриминантного анализа (PLS-DA), ортогонального анализа с дискриминированием с частичными наименьшими квадратами (OPLS-DA), кластеризации и корреляционного анализа. Используйте оригинальные обработанные интенсивности признаков для графиков изобилия.
Аннотировать метаболиты путём сопоставления характеристик с публичными базами данных метаболомики, включая Human Metabolome Database (HMDB), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) и LIPID MAPS, где это применимо.
1. Оценивайте каждую аннотацию по ошибке массы ионов прекурсора, распределению изотопов и сопоставлению фрагментов в тандемной масс-спектрометрии. Каждому критерию присвоите максимум 20 очков.
2. Примените окно массы-ошибки прекурсорного иона 100 ppm и окно массы-ошибки иона фрагмента 50 ppm. Не применяйте фиксированное окно времени удержания.
3. Сохраняйте аннотации с общим баллом не менее 40 из 60. Исключить аннотации с низкими баллами.
Определим группы сравнения явно следующим образом: A = T0 (до спарринга), B = T1 (сразу после спарринга) и C = T2 (24 часа после спарринга).
Выполнять последующие статистические анализы с использованием программного обеспечения для статистических вычислений и соответствующих аналитических пакетов (см. Таблицу материалов).
1. Запустите анализ главных компонентов (PCA) после масштабирования дисперсии по единицам и визуализуйте графики оценок.
2. Постройте модели частичного дискриминантного анализа наименьших квадратов (PLS-DA) и ортогонального анализа с дискриминированием наименьших квадратов (OPLS-DA) для A против B, B против C и A против C.
3. Используйте 7-кратную перекрестную валидацию, если количество выборки не менее 7. Если число выборки меньше 7, установите количество сгибаний, равное числу образцов.
4. Проведите 200 тестов перестановок для оценки валидности модели.
5. Дифференциальные метаболиты анализируются с помощью следующих порогов: изменение складки (FC) ≥ 2 или FC ≤ 0,5, переменная важность при проекции (VIP) ≥ 1 и t-тест P. < 0,05.
6. Генерируйте вулканические графики и связанные статистические графики для парных сравнений.
7. Генерируйте тепловые отображения с помощью лог2-преобразованной и матрицы с масштабированием дисперсии единиц.
8. Создать тепловые карты корреляции с порогом значимости P ≤ 0,05 и отобрать до 20 метаболитов.
9. Определите оптимальное количество кластеров до кластеризации k-средних. Выполнить кластеризацию k-средних после масштабирования дисперсии по единицам.
10. Генерируйте графики с барами изобилия на основе исходных интенсивностей обрабатываемых признаков.
11. Генерируйте диаграммы Венна для суммирования пересечений между парными сравнениями.
12. Провести анализ характеристик работы приёмника (ROC) для выбранных метаболитов. Оценивайте диагностические показатели по площади под кривой (AUC).
Сопоставьте дифференциальные метаболиты с путями KEGG с помощью функции обогащения путей в соответствующем биоинформационном пакете (см. таблицу материалов).
1. Интерпретировать пути с P. < 0.05. В окончательном анализе коррекции по многократным тестам не было зафиксировано.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Проверка данных LC-QTOF-MS/MS по контролю качества (QC)

Для оценки стабильности и воспроизводимости сигнала анализировались повторные инъекции объединённого образца QC в обоих ионных режимах. Коэффициенты корреляции Спирмана при объединённых инъекциях QC превысили 0,8 в обоих ионных режимах, что свидетельствовало о стабильной работе прибора по всей аналитической последовательности. PCA всех образцов исследований и инъекций QC показали плотную ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот стандартизированный рабочий процесс характеризовал изменения метаболита, связанные с элитным боксерским спаррингом и кратковременным восстановлением в небольшой контролируемой когорте. Объединённые инъекции QC, анализ корреляции на основе QC, кластеризация PCA и многомерный анализ вместе поддерживали приемлемую аналитическую устойчивость. Успех протокола основывался в первую очередь на четырёх факторах: поддержании интенсивности спарринга в пределах 80%–85% от максимальной частоты с...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все авторы заявляют, что у них нет конфликтов интересов, относящихся к содержанию данного исследования.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование было поддержано Хэфэйским педагогическим университетом (грант No KYSR2025032 и 2025rcjj07) и совместный проект Хубэйского фонда естественных наук провинции (грант No JCZRLH202500697).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Реагенты	Ацетонитрил	Merck	Класс LC-MS, CAS 75-05-8
Реагенты	Метанол	Merck	Класс LC-MS, CAS 67-56-1
Реагенты	Муравьиная кислота	TCI	Класс LC-MS, CAS 64-18-6
Расходные материалы	ВАКУЭТНАЯ ТРУБКА CAT Активатор сыворотки для тромба	Greiner Bio-One	Трубка с активатором тромба объемом 8 мл сыворотки
Расходные материалы	Криогенный флакон Nalgene	Термо Фишер Сайентифик	1,5 мл, внешняя резьба
Расходные материалы	Белоковая трубка LoBind	Эппендорф	Кэт. No 0030108442, 1,5 мл
Стеклянная посуда	Стеклянный флакон с винтовой крышкой и вставками	Agilent	флакон 2 мл с 200 и мю; L-образная стеклянная вставка; Вставьте Кэт. No 5183-2090
Расходные материалы	Фильтр Millex-GP	Merck	Кэт. Нет. SLGP033RS, 0,22 и мю; мембрана m
Инструменты	Кастомный боксерский ринг 6x6 м	Спорт муай-тай	6 и больше раз; Тренировочное кольцо на 6 м
Расходные материалы	Pro Style 2 Боксерские перчатки	Everlast	16 унций
Инструменты	Polar H10	Polar	Датчик сердечного ритма с грудным ремнем
Инструменты	Квазар	h/p/cosmos	Моторизованная беговая дорожка
Инструменты	Центрифуга 5425 R	Эппендорф	Охлаждённая микроцентрифуга
Инструменты	Bransonic CPX2800	Эмерсон / Брансон	Цифровая ультразвуковая ванна с частотой 40 кГц
Инструменты	Savant SpeedVac SPD1030	Термо Фишер Сайентифик	Интегрированный вакуумный концентратор
Инструменты	VWR Mini Vortex Mixer	Avantor / VWR	Кэт. No 10153-688
Инструменты	Морозильник TSX ULT	Термо Фишер Сайентифик	Модель TSX50086A
Инструменты	ACQUITY UPLC I-Class PLUS	Воды	Система UHPLC
Инструменты	Xevo G2-XS QTof	Воды	Масс-спектрометр QTOF
Инструменты	Колонка ACQUITY UPLC HSS T3	Воды	P/N 176001132, 1.8 μ m, 2.1 и times; 100 мм
Программное обеспечение	MassLynx	Воды	Версия 4.2
Программное обеспечение	Прогенез QI	Воды	Версия 2.3
Программное обеспечение	R	R Foundation для статистических вычислений	Версия 3.6.1
Программное обеспечение	PRCOMP	базовая R	Базовая функция R
Программное обеспечение	ropls	Биопроводник	Пакет R
Программное обеспечение	pheatmap	CRAN	Пакет R
Программное обеспечение	corrplot	CRAN	Пакет R
Программное обеспечение	kmeans	базовая R	Базовая функция R
Программное обеспечение	NbClust	CRAN	Пакет R
Программное обеспечение	Венн	CRAN	Пакет R
Программное обеспечение	MetaboAnalystR	CRAN / Xia Lab	Версия 1.0
Программное обеспечение	pROC	CRAN	Версия 1.15.0
Программное обеспечение	clusterProfiler	Биопроводник	Корпус биопроводников
Базы данных	База данных метаболомов человека (HMDB)	HMDB	Онлайн-база данных
Базы данных	Киотская энциклопедия генов и геномов (KEGG)	КЕГГ	Онлайн-база данных
Базы данных	ЛИПИДНЫЕ КАРТЫ	ЛИПИДНЫЕ КАРТЫ	Онлайн-база данных

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Graca, G., et al. Automated annotation of untargeted all-ion fragmentation LC-MS metabolomics data with MetaboAnnotatoR. Anal Chem. , (2022).
Chen, L., et al. Metabolite discovery through global annotation of untargeted metabolomics data. Nat Methods. , (2021).
Chen, C. J., Lee, D. Y., Yu, J., Lin, Y. N., Lin, T. M. Recent advances in LC-MS-based metabolomics for clinical biomarker discovery. Mass Spectrom Rev. , (2023).
Nemkov, T., et al. Metabolic signatures of performance in elite World Tour professional male cyclists. Sports Med. , (2023).
Khoramipour, K., et al. Metabolomics in exercise and sports: a systematic review. Sports Med. , (2022).
Nelson, A. B., et al. Acute aerobic exercise reveals that FAHFAs distinguish the metabolomes of overweight and normal-weight runners. JCI Insight. , (2022).
Schoumacher, M., et al. Longitudinal NMR-based metabolomics analysis of male mountain ultramarathon runners: new perspectives for athletes monitoring and injury prevention. Sports Med Open. , (2025).
Morville, T., Sahl, R. E., Moritz, T., Helge, J. W., Clemmensen, C. Plasma metabolome profiling of resistance exercise and endurance exercise in humans. Cell Rep. , (2020).
Robbins, J. M., et al. N-Palmitoyl glutamine is a candidate mediator of cardiorespiratory fitness. Circulation. , (2026).
Hu, J., et al. Investigating metabolic pathways of ankylosing spondylitis via compound similarity network-assisted metabolomics analysis. Anal Chem. , (2025).
Rodas, G., Ferrer, E., Sanjuan, J. D., Quintas, G. UPLC-MS and multivariate analysis reveal metabolic pathway adaptations to training in professional football players. Talanta. , (2025).
Sumner, L. W., et al. Proposed minimum reporting standards for chemical analysis: Chemical Analysis Working Group (CAWG) Metabolomics Standards Initiative (MSI). Metabolomics. , (2007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

В этой статье

Краткое содержание

Аннотация

Введение

Протокол

Результаты

Обсуждение

Раскрытие информации

Благодарности

Материалы

Ссылки

Перепечатки и разрешения

Теги

Похожие статьи