Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Цитокины и полиморфизмы воспалительных генов, связанные с нозокомиальной легочной инфекцией после спонтанного внутримозгового кровоизлияния

27 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70761

⸱

4 августа 2026 г.

 ,  ,  , 
1Department of Clinical Laboratory, Affiliated Hospital of Jiaxing University, The First Hospital of Jiaxing

В этой статье

Краткое содержание

В этом ретроспективном исследовании представлен воспроизводимый рабочий процесс для раннего сбора плазмы после госпитализации, измерения сывороточных цитокинов и рецепторов-подобных Толл, генотипирования полиморфизмов воспалительных генов и оценки риска инфекции у пациентов с спонтанным внутримозговым кровоизлиянием.

Аннотация

Нозокомиальная легочная инфекция является частым осложнением после спонтанного внутримозгового кровоизлияния и может ухудшить неврологическое восстановление, продлить госпитализацию и увеличить клиническую нагрузку. Это ретроспективное клинико-лабораторное исследование представляет воспроизводимый рабочий процесс для оценки воспалительных биомаркеров и иммуногенетических профилей хозяина, связанных с нозокомиальной легочной инфекцией после первичного самоизлияния внутримозгового кровоизлияния. Пациенты классифицируются в зависимости от того, возникает ли нозокомиальная легочная инфекция после поступления. Периферическая венозная кровь собирается в раннем постгоспитализированном периоде при стандартизированных доаналитических условиях. Сыворотка отделяется, алицитируется и хранится для ферментно-связанного иммуносорбентного анализа IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ, TNF-α, TLR2, TLR4 и TLR9. Параллельно геномная ДНК извлекается из антикоагулянтной цельной крови и используется для генотипирования полиморфизма по длине фрагментов полимеразной цепной реакции и рестрикции фрагментов по отборным локусам, связанным с цитокином и рецепторами-подобными Толлом. Рабочий процесс также включает процедуры контроля качества для обращения с образцами, дублирующих измерений ELISA, оценки чистоты ДНК, вызова генотипов и повторного генотипирования. Статистический анализ включает сравнение клинических характеристик и уровней биомаркеров между группами, тестирование равновесия Харди-Вайнберга, логистический регрессионный анализ для генотипов и аллельных ассоциаций, корректировку для соответствующих клинических ковариатов и коррекцию частоты ложного открытия для множественных генетических сравнений. Этот комбинированный клинический, воспалительный и иммунногенетический процесс может помочь охарактеризовать профили риска инфекции после спонтанного внутримозгового кровоизлияния, хотя для рутинного клинического применения всё ещё требуется перспективная многоцентровая валидация.

Введение

Спонтанное внутримозговое кровоизлияние (ИХГ) — это тяжёлый подтип инсульта, вызванный нетравматическим разрывом сосудов головного мозга, и остаётся основным источником неврологической смерти и инвалидности. Клинически НК обычно классифицируется как первичная или вторичная. Первичная НГГ объясняется в большинстве случаев и в основном связана с гипертонической артериопатией или церебральной амилоиднойангиопатией 1. В отличие от этого, вторичная НГГ связана со структурными или гематологическими причинами, включая аневризмы, артериовенозные мальформации, болезнь Моямоя и нарушения свертываемости. Хотя НКН составляет меньшую долю всех случаев инсульта, чем ишемический инсульт, он несёт непропорционально высокую краткосрочную смертность и долгосрочную функциональнуюнагрузку 2,3,4,5.

Среди основных осложнений в больнице после НКВ особенно часто и клинически важна инфекция лёгких. Предыдущие исследования показали, что легочная инфекция может возникать у значительной части госпитализированных пациентов после инсульта или внутримозгового кровоизлияния и связана с более длительной госпитализацией, увеличением медицинской нагрузки, худшим неврологическим восстановлением и увеличением смертности 6,7,8. Клиническая значимость этого осложнения выходит за рамки одного респираторного лечения. Снижение сознания, нарушение глотания и кашельных рефлексов, иммобилизация, механическая поддержка дыхательных путей и инвазивные процедуры дренажа могут увеличить риск инфекции в острой фазе после ИХГ. В то же время легочная инфекция может усугублять системное воспаление, затруднять подачу кислорода и усложнять нейрокритическую помощь, тем самым усиливая процессы вторичного повреждения.

Эта связь биологически правдоподобна, поскольку НКВ является не только очаговым цереброваскулярным событием, но и триггером системной дисрегуляции иммунитета. Острое кровоизлияние в мозг может активировать воспалительные каскады, изменять врождённую иммунную сигнализацию и нарушать баланс между нейровоспалениями и защитой периферического хозяина. В этом контексте некоторые пациенты могут стать более восприимчивыми к инфекциям, приобретённым в больнице, даже при аналогичном клиническом лечении. Поэтому легочная инфекция после КГГ не должна рассматриваться исключительно как следствие контакта у постели пациента или поддерживающего ухода; Он также может отражать различия в активации воспалительных органов хозяина и иммунной реакции.

Несмотря на клиническую значимость этого осложнения, практические подходы к ранней стратификации рисков остаютсяограниченными 9. Существующие клинические подходы к стратификации риска при пост-НКГГ-инфекции лёгких обычно опираются на переменные у постели и при госпитализации, такие как неврологическая тяжесть, возраст, нарушения глотания, сопутствующие заболевания, инвазивные процедуры и длительность воздействия устройства. Эти инструменты клинически полезны, так как их можно быстро применять в неотложной помощи, интенсивной терапии или нейрокритических учреждениях. Однако одних лишь клинических переменных могут не полностью объяснить, почему пациенты с сопоставимой тяжёлостью неврологической тяжести и аналогичным воздействием ухода показывают разные исходы инфекции. Воспалительные биомаркеры и иммуногенетические факторы хозяина могут предоставлять дополнительную информацию о биологической восприимчивости, особенно в ранний период после госпитализации, когда принимаются решения по профилактическому надзору и респираторному лечению.

Цитокины являются центральными медиаторами иммунных и воспалительных ответов, а пути рецепторов, подобных Toll (TLR), играют ключевую роль в распознавании патогенов и активации врождённого иммунитета. Измерения цитокинов в сыворотке и белка TLR могут дать снимок ранней системной воспалительной активации, тогда как выбранные полиморфизмы иммунных генов могут отражать более стабильные различия хозяина в производстве цитокинох, сигнализации рецепторов или воспалительной регуляции. По сравнению с только клинической оценкой, комбинированный рабочий процесс биомаркера и полиморфизма позволяет отражать как текущее воспалительное состояние, так и подлежащий иммунный ответ каждого пациента. Этот подход не предназначен для замены клинической оценки у постели пациента, а для дополнения её добавлением лабораторной и генетической информации о хозяине, которая может помочь выявить пациентов, требующих более тщательного наблюдения за инфекцией после спонтанного НКГ.

Исходя из этого, мы выдвинули гипотезу, что пациенты с спонтанной КГГ, у которых развиваются нозокомиальная легочная инфекция, будут иметь выраженный воспалительный профиль с иным распределением выбранных иммунно-связанных генетических полиморфизмов по сравнению с пациентами, которые остаются свободными от инфекции. Для проверки этой гипотезы в данном ретроспективном клиническо-лабораторном исследовании проанализировали ранние цитокины сыворотки после госпитализации, уровни белков в сыворотке TLR2, TLR4 и TLR9, а также отобрали полиморфизмы воспалительных генов у пациентов с первичным спонтанным ИХК. Рабочий процесс использует периферическую информацию, собранную во время острой госпитализации, количественное определение белков на основе ИФЗ, генотипирование на основе ПЦР-РФЛП и статистическое сравнение пациентов с и без нозокомиальной инфекции лёгких. Целью было предоставить воспроизводимую основу для характеристики воспалительных и генетических профилей хозяина, связанных с риском инфекции, тем самым поддерживая более раннее выявление пациентов с высоким риском в острой больничной среде.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование было одобрено Этическим комитетом аффилированной больницы Университета Цзясин, Первой больницы Цзясина, Цзясин, Чжэцзян, Китай (Одобрение No 2025-LP-599). Все процедуры с участием людей проводились в соответствии с институциональными требованиями и принципами Хельсинкской декларации. Письменное информированное согласие на забор крови и использование данных было получено от всех участников и/или их законных представителей перед сбором образцов.

Все коммерческие наборы, реагенты, расходные материалы, приборы, программное обеспечение, производители, каталожные номера и ключевые эксплуатационные характеристики, используемые в этом рабочем процессе, перечислены в Таблице материалов.

Объём исследования, право на участие и группировка пациентов

Это исследование было проведено в виде ретроспективного клинично-лабораторного когортного анализа пациентов с первичным спонтанным внутримозговым кровоизлиянием (ICH), поступивших в Центр неотложной и интенсивной терапии или отделение интенсивной терапии аффилированной больницы Университета Цзясин — Первая больница Цзясина, Цзясин, Чжэцзян, Китай, в период с мая 2019 по сентябрь 2024 года. Диагноз КГГ был подтверждён с помощью компьютерной томографии черепа или магнитно-резонансной томографии в соответствии с Китайскими руководящими принципами по диагностике и лечению кровоизлияния в мозг (2019)10.

Пациенты имели право на получение пациентов, если у них первичный спонтанный ИХС, подтверждённый визуализацией, госпитализация в течение 3 дней после появления симптомов и наличие полных ключевых клинических переменных, а также доступных периферических образцов крови для измерения воспалительных биомаркеров и генетического анализа. Пациенты исключались, если у них были травматическое внутричерепное кровоизлияние, вторичная КГГ, легочная инфекция до госпитализации или в течение 48 часов после госпитализации, выписка вопреки медицинским рекомендациям или смерть в течение 48 часов после поступления, анамнез злокачественных заболеваний или аутоиммунных заболеваний, либо неполные ключевые клинические, лабораторные или генотипные записи. После скрининга 360 пациентов соответствовали критериям и были включены в итоговый анализ. Среди них 180 пациентов развили нозокомиальную легочную инфекцию во время госпитализации, а у 180 — нет. Пациентов относили к группе с легочной инфекцией или без легочных инфекций в зависимости от того, возникла ли нозокомиальная легочная инфекция после госпитализации.

Перед окончательной группировкой проверялись диагностика визуализации, время поступления, время заражения, наличие образцов крови и полнота клинических и лабораторных записей. Этот шаг был использован для снижения неправильной классификации и обеспечения полных данных для клинического сравнения, измерения воспалительных биомаркеров и генотипирования.

Определение нозокомиальной легочной инфекции

Нозокомиальная легочная инфекция была определена на основе радиологических данных в сочетании с клиническимикритериями 11. Радиологическое подтверждение требовало нового или прогрессирующего инфильтративного, консолидирующего или измельчённого стеклянного поражения на рентгенографии грудной клетки или компьютерной томографии. Кроме того, должны были быть соблюдены как минимум два из следующих критериев: температура тела > 38 °C, гнойные дыхательные выделения или аномальный уровень периферических лейкоцитов с лейкоцитами < 4 × 109/л или > 10 ×10 9/л.

Легочная инфекция, выявленная до поступления или диагностированная в течение первых 48 часов после поступления, не классифицировала как нозокомиальную легочную инфекцию. Классификация инфекций верифицировалась с помощью рентгенологических отчетов, записей температуры тела, документации респираторных выделений, результатов периферических анализов крови и клинических диагностических записей.

Биобезопасность и утилизация отходов

Человеческая кровь, сыворотка и ДНК, полученная из организма, обрабатывались в соответствии со стандартными мерами биобезопасности уровня 2. Сотрудники лаборатории носили перчатки, лабораторные халаты, маски и защитные очки во время обработки крови, анализа сыворотки, тестирования на ИФАС, экстракции ДНК, подготовки ПЦР, гель-электрофореза, рестрикционного пищеварения и визуализации ультрафиолета. Кровяные трубки проверялись на наличие протечек или повреждений перед обработкой. Центрифугирование проводилось с использованием закрытых трубок или, где было возможно, герметичных центрифугных ковш.

Острые предметы сразу же выбрасывались в утверждённые контейнеры. Загрязнённые кровью пробирки, наконечники пипеток, перчатки, пластины ELISA и другие одноразовые расходники были выброшены как биологические лабораторные отходы. Жидкие биологические отходы дезинфицировались в соответствии с институциональными процедурами перед утилизацией. Агарозные гели, полиакриламидные гели, окрашивающие реагенты и материалы, связанные с электрофорезом, были утилизованы в соответствии с институциональными требованиями по химическим и лабораторным отходам.

Подготовка ПЦР-реагентов, добавление ДНК-шаблонов, обработка амплифицированных продуктов, рестрикционное переваривание и гель-электрофорез были разделены максимально возможно для снижения загрязнения. Для обработки ПЦР и обработки ДНК использовались аэрозольностойкие наконечники пипеток. УФ-визуализация проводилась только с помощью защитного щита или гелевого документирования, при этом избегалось прямого воздействия глаз или кожи под ультрафиолетовым излучением.

Периферийный анализ крови и обработка образцов

Для снижения преданалитической вариации в 08:00 утра после госпитализации было взято 10 мл периферической венозной крови после ночного голодания не менее 12 часов. 5 мл крови было взято в простую вакуумную трубку для приготовления сыворотки, а оставшиеся 5 мл — в гепаринизированную трубку для экстракции геномной ДНК.

Перед обработкой каждую трубку проверяли на идентификатор пациента, время сбора, тип трубки, объём крови, протечение, видимое свертывание свертываемости и грубый гемолиз. Образцы с неправильной маркировкой, недостаточным объёмом крови, протечкой трубки или видимым свертываемостью в антикоагулянной трубке были исключены из дальнейшего анализа. Кровь в обычной трубке оставляли свертываться при комнатной температуре в течение 60 минут, затем центрифугировали при 1 500 × г в течение 10 минут при 4 °C. Сывороточный супернатант был перемещён в стерильные полипропиленовые трубки с низким содержанием белка без нарушения клеточного слоя, алицитирован на фракции по 0,5 мл и хранился при −80 °C до анализа.

Образцы с видимым умеренным или тяжёлым гемолизом были исключены из количественной оценки на основе ELISA. Были записаны слабо гемолизованные образцы, которые не использовались для первичного анализа цитокином. Образцы с видимой мутностью, явной липемией, недостаточным остаточным объёмом или повторяющимся воздействием заморозки и оттаивания были отмечены перед тестированием. Ни одна сыворотка аликвот не проходила более одного цикла замораживания и оттаивания до анализа.

Количественная оценка цитокинов с помощью ELISA

Концентрации в сыворотке IL-1β, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ и TNF-α измерялись с помощью коммерчески доступных наборов для ИФА для человека, валидированных для образцов сыворотки. Сывороточные аликвоты были разморажены, аккуратно смешаны и проверены на гемолиз, мутность, липемию, недостаток объёма и историю заморозки и оттаивания перед загрузкой.

Стандарты, пустые скважины и образцы сыворотки загружались в дубликате. Стандартные кривые генерировались на каждой пластине с помощью последовательных разбавлений стандартных концентраций и пустого контроля, согласно инструкциям комплекта. Оптическая плотность измерялась на 450 нм с опорной коррекцией 570 нм, с помощью калиброванного считывателя микропластин. Концентрации рассчитывались с помощью четырёхпараметрического логистического подгона.

Результаты анализов принимались только тогда, когда стандартная кривая показала соответствующую динамику концентрации-отклик, пустые скважины показали низкий фон, а коэффициент вариации дублирующейся выборки составлял ≤ 10%. Образцы с дублирующим CV > 10% были переанализированы из исходной сыворотки аликвот, когда объём был доступен. Образцы, выходящие за пределы надёжной стандартной кривой, разбавлялись или повторялись согласно инструкциям комплекта. Пластины с непоследовательными стандартами, чрезмерным фоном или явными эффектами краёв повторялись.

Нижние аналитические пределы обнаружения, используемые для принятия данных: 2,0 пг/мл для IL-1β, 1,5 pg/mL для IL-6, 2,0 pg/mL для IL-10, 3,0 pg/mL для IL-17, 4,0 pg/mL для IFN-γ и 2,5 pg/mL для TNF-α. Окончательные значения цитокинов проверялись по идентификаторам образцов, картам пластин, записям дубликатов и записям по качеству образца перед проведением статистического анализа.

Количественная оценка сыворотки TLR2, TLR4 и TLR9 методом ELISA

Уровни белков TLR2, TLR4 и TLR9 в сыворотке измерялись с помощью коммерчески доступных наборов для ИФА человека, проверенных для образцов сыворотки. Образцы сыворотки были разморажены, аккуратно смешаны и проверены по тем же критериям качества образца, что и для измерения цитокином.

Стандарты, пустые скважины и образцы сыворотки анализировались в дубликате. Пластины считывались на 450 нм с эталонной коррекцией на 570 нм, а концентрации рассчитывались с использованием четырёхпараметрической логистической регрессии. Результаты принимались, когда стандартная кривая была корректной, пустые скважины находились в ожидаемом фоне, а дублирующая CV составляла ≤ 10%. Образцы, превышающие этот порог дублирования CV, были повторно протестированы, когда осталось достаточное количество образцов.

Нижние аналитические пределы обнаружения, используемые для принятия результатов, составляли 0,10 нг/мл для TLR2, 0,12 нг/мл для TLR4 и 0,15 нг/мл для TLR9. Окончательные значения TLR2, TLR4 и TLR9 проверялись по идентификаторам образцов, картам пластин, записям дублирующих показаний и заметкам по качеству выборки перед статистическим анализом.

Геномная экстракция ДНК

Геномная ДНК была извлечена из гепарино-антикоагулянной цельной крови с помощью набора для экстракции геномной ДНК крови на основе кремнеземных колонок. Перед извлечением антикоагулянты анализы крови проверялись на правильную маркировку, достаточный объём, видимое свертываемость, протечку и условия хранения.

Чистота и концентрация ДНК оценивались с помощью спектрофотометрии. Для дальнейшего ПЦР-усиления допускались только сэмплы с соотношением A260/A280 от 1,80 до 2,00. Образцы за пределами этого диапазона были переизмерены после аккуратного смешивания. Если аномальное соотношение чистоты сохранялось, экстракция ДНК повторялась, когда оставалось достаточно цельной крови.

ДНК разбавлялась водой без нуклеазы до рабочей концентрации 50 нг/мкл и хранилась при -20 °C до амплификации ПЦР. Перед установкой ПЦР каждый образец ДНК проверялся на концентрацию, чистоту, идентификатор образца и историю заморозки и оттаивания.

Генотипирование PCR-RFLP и вызов генотипов

Генотипирование проводилось с использованием полиморфизма длины фрагментов полимеразной цепной реакции-рестрикции (PCR-RFLP) для IL-1B +3954 C/T, IL-10-1082 G/A, IL-10-819 T/C, TNF-α-308 G/A, TLR2-196–174 дюймов/дел, TLR4 Asp299Gly, TLR4 Thr399Ile, TLR9 rs187084, IFN-γ +874 A/T и IFN-γ +2108 A/G. Локусоспецифические последовательности праймеров, ожидаемые размеры ампликонов, рестрикционные ферменты и генотип-специфические паттерны пищеварения приведены в дополнительной таблице 1.

ПЦР-амплификация проводилась в итоговом реакционном объёме 25 мкл, содержащем 2,5 мкл 10 × буфера, 2,0 мкл смеси dNTP по 2,5 мМ каждая, 1,0 мкл прямого праймера при 10 мкМ, 1,0 мкл обратного праймера при 10 мкМ, 0,25 мкл полимеразы Taq ДНК при 5 Ед/мкл, 2,0 мкл геномной ДНК при 50 нг/мкл, и 16,25 мкл воды без нуклеаз. Мастер-микс ПЦР был приготовлен в чистой области до ПЦР, а ДНК-шаблон был добавлен последним. В каждом запуске ПЦР был включен отрицательный контроль без шаблона.

Тепловой профиль включал начальную денатурацию при 95 °C в течение 5 минут, затем 35 циклов денатурации при 95 °C в течение 30 с, отжиг при 58–62 °C в течение 30 с в зависимости от пары праймеров, и удлинение при 72 °C в течение 30 секунд, с окончательным удлинением при 72 °C в течение 7 минут. ПЦР-продукты сначала были подтверждены на геле агарозы 1,5% перед рестрикционным перевариваемостью.

ПЦР-усиление допускалось только при видимости ожидаемой ампликонной полосы, а контроль без шаблона не показывал усиления. Реакции, показывающие слабые полосы, неспецифическое усиление, интерференцию праймер-димер или загрязнение в отрицательном контроле, повторялись из исходного шаблона ДНК.

Продукты ПЦР переваривались с соответствующей рестрикционной эндонуклеазой при 37 °C в течение 3 часов при общем объёме переваривания 15 мкл согласно инструкциям производителя. Переваренные фрагменты растворялись на 2,5% агарозном геле для большинства локусов. Локус TLR2-196 до -174 дюймов/дел был разрешён на 8% полиакриламидном геле для улучшения различия фрагментов.

Рестрикционное расщепление было принято только при условии, когда фрагментные паттерны соответствовали ожидаемому, специфическому генотипу профилю пищеварения. Реакции с неполным пищеварением, размазанными полосками, неожиданным размером фрагментов или неясным разделением повторялись. Полосы визуализировались под ультрафиолетовым освещением после окрашивания нуклеиновой кислотой. Гелевые изображения сохранялись с идентификатором образца, названием локуса, датой запуска и номером геля.

Присвоение генотипов выполнялось независимо двумя слепыми лабораторными исследователями. Диссонантные или неоднозначные генотипные вызовы рассматривались с использованием исходного гелевого изображения и повторялись с помощью ПЦР-амплификации при необходимости. Десять процентов случайно отобранных выборок были регенотипированы для контроля качества, и уровень согласованности составил 99,2%. Окончательные данные генотипов вводились в набор анализов только после проверки идентификаторов выборок, названий локусов, вызовов генотипов и записей контроля качества.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием соответствующего программного обеспечения для статистического анализа. Клинические, ELISA и генотипные наборы данных были объединены с использованием деидентифицированных кодов пациентов. Коды пациентов проверялись на дублирование, несоответствие и отсутствующие значения перед анализом. Использовалась стратегия полного случая, поскольку все включенные пациенты имели доступные ключевые клинические, воспалительные и генотипные данные.

В соответствующем программном обеспечении статистического анализа статус легочной инфекции кодировался как группировочная переменная, а группа без легочных инфекций использовалась в качестве эталонной категории. Сплошные переменные впервые были проверены на нормальность с помощью теста Шапиро-Вилка. Нормально распределённые непрерывные переменные выражались как среднее ± стандартное отклонение и сравнивались с помощью независимого теста Стьюдента t. Ненормально распределенные непрерывные переменные были представлены как медианы с межквартильными диапазонами и сравнивались с помощью теста Манна-Уитни U. Категориальные переменные выражались в виде счётов и процентов, а также сравнивались с помощью теста хи-квадрата или точного теста Фишера, по мере необходимости.

Распределение генотипов в группе без легочной инфекции оценивалось для равновесия Харди-Вайнберга перед ассоциативным анализом. Частоты генотипов и аллелей суммировались как n (%). Коэффициенты шансов и 95% доверительные интервалы риска инфекции лёгочных инфекций оценивались с помощью многомерных логистических регрессионных моделей. Статус легочной инфекции был введён как зависимая переменная. Переменные генотипа, аллеля или биомаркеров вводились как независимые переменные, в соответствии с указанием для каждого анализа.

Возраст и пол были включены в основную модель априори. ИМТ, хроническая обструктивная болезнь лёгких, сердечно-сосудистые заболевания, утечка спинномозговой жидкости, время пребывания дренажа и категория по шкале комы в Глазго были включены одновременно в полностью скорректированную модель, поскольку эти переменные были клинически значимы или показывали исходный дисбаланс между группами. Мультиколлинеарность оценивалась с использованием коэффициентов инфляции дисперсии (VIF), и VIF <5.0 считались приемлемыми.

Поскольку были протестированы многочисленные полиморфизмы, коррекция коэффициента ложного открытия Бенджамини-Хохберга была применена к анализу генетическихассоциаций 12. P-значения из генетических ассоциативных тестов ранжировали от наименьшего к наибольшему, а скорректированная значимость определялась по процедуре Бенджамини-Хохберга. Все тесты были двусторонними, и P <0,05 считался статистически значимым, если не было указано иное после многократной корректировки.

Конечные результаты проверялись по исходному набору данных, записям контроля качества ELISA, записям вызова генотипов и значениям таблиц перед подготовкой рукописи. Результаты интерпретировались как ассоциации, а не как причинные эффекты, поскольку исследование использовало ретроспективный наблюдательный дизайн.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Клинические показатели

Исходные клинические характеристики приведены в таблице 1. В итоговом анализе было включено 360 пациентов со спонтанным внутримозговым кровоизлиянием, из которых 180 пациентов развили нозокомиальную легочную инфекцию во время госпитализации и 180 пациентов, у которых этого не произошло. Не было выявлено значимых различий между группами в возрасте (62,4 года ± 6,8 года против 63,6 лет ± 7,0 лет, P

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Спонтанное внутримозговое кровоизлияние (ИХГ) остаётся одним из самых тяжёлых подтипов инсульта и продолжает навязывать значительные ранние смертности и долгосрочные трудоспособности13. В клинической практике пациенты с НК особенно уязвимы к осложнениям в больнице, поскольку неврологические повреждения могут ослаблять защиту дыхательных путей, снижать эффективность при кашле, ограничивать подвижность и увеличивать воздействие инвазивных поддерживающих процедур. Ср...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов или других конфликтов интересов, связанных с этой работой.

Благодарности

Авторы благодарят клинический персонал, участвующий в уходе за пациентами, а также тех, кто помогал с поиском литературы и организацией данных. Это исследование было поддержано Проектом по планированию науки и технологий здравоохранения города Цзясин (грант No JWKJ-25005).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Human TNF-α ELISA KitInvitrogen / Thermo Fisher ScientificKHC3011ELISA kit for quantitative measurement of human TNF-α in serum.
Human TLR2 / Toll-like Receptor 2 ELISA KitSigma-Aldrich / MerckRAB0744-1KT96-well ELISA kit for measurement of human TLR2 in serum or plasma samples.
Human TLR4 ELISA Kit, colorimetricNovus Biologicals / Bio-TechneNBP3-11807Colorimetric sandwich ELISA kit for measurement of human TLR4 in serum, plasma, or other biological fluids.
Human TLR9 ELISA Kit, colorimetricNovus Biologicals / Bio-TechneNBP2-76574Colorimetric ELISA kit for measurement of human TLR9 in serum samples.
Absorbance microplate readerAgilent BioTek800 TSMicroplate reader for ELISA optical-density measurement at 450 nm with reference correction at 570 nm.
QIAamp DNA Blood Mini KitQIAGEN51104Silica membrane-based kit for genomic DNA extraction from anticoagulated whole blood.
NanoDrop One Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermo ScientificND-ONE-WMicrovolume spectrophotometer for DNA concentration and A260/A280 purity assessment.
SimpliAmp Thermal CyclerApplied Biosystems / Thermo Fisher ScientificA24811Thermal cycler used for endpoint PCR amplification in PCR-RFLP genotyping.
PCR Master Mix, 2XThermo ScientificK0171Premixed PCR reagent containing Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, and reaction buffer; used for conventional PCR amplification.
Recombinant Taq DNA PolymeraseThermo ScientificEP0401Alternative enzyme source for locus-specific PCR reactions when separate PCR components are used instead of 2X master mix.
Nuclease-free waterThermo ScientificR0581Molecular-biology-grade water used for PCR setup, DNA dilution, and no-template controls.
Custom DNA primersSangon BiotechCustom synthesisLocus-specific primers for PCR-RFLP genotyping; primer sequences are listed in Supplementary Table S1.
Restriction endonucleases for PCR-RFLPThermo Scientific / New England BiolabsLocus-specific enzymes listed in Supplementary Table S1Restriction enzymes used for genotype-specific digestion of PCR products. The enzyme selected for each locus should match the digestion pattern listed in Supplementary Table S1.
Agarose I, molecular biology gradeThermo Scientific17850Agarose for preparation of 1.5% and 2.5% gels used to confirm PCR products and resolve most RFLP fragments.
GeneRuler 50 bp DNA LadderThermo ScientificSM0371DNA size marker for PCR amplicons and RFLP fragment-size estimation.
SYBR Safe DNA Gel StainInvitrogen / Thermo Fisher ScientificS33102Nucleic-acid gel stain for visualization of DNA in agarose or acrylamide gels; used as a reduced-hazard alternative to ethidium bromide.
Horizontal agarose gel electrophoresis systemBio-RadMini-Sub Cell GT system / 1704360 baseElectrophoresis system for agarose gel separation of PCR and RFLP products.
Vertical PAGE electrophoresis systemBio-RadMini-PROTEAN Tetra Cell / 1658001Vertical electrophoresis system for 8% polyacrylamide gel separation when higher-resolution fragment discrimination is required.
Gel documentation system with UV or blue-light transilluminationBio-Rad / equivalent laboratory systemGel Doc XR+ or equivalentImaging system for documenting stained DNA bands after gel electrophoresis. Use UV shielding or blue-light mode where available.
Refrigerated centrifugeEppendorf / equivalent laboratory centrifuge5424 R or equivalentRefrigerated centrifuge used for serum separation at 1,500 × g and 4 °C.
−80 °C ultra-low temperature freezerThermo Scientific / equivalent laboratory freezerForma 900 Series or equivalentStorage of serum aliquots before ELISA analysis.
IBM SPSS StatisticsIBMVersion 25.0Statistical software used for descriptive statistics, normality testing, group comparisons, logistic regression, and model-output export.
Spreadsheet softwareMicrosoftExcel for Microsoft 365Used for data checking, plate-map organization, duplicate-value review, and preparation of merged analysis files before SPSS analysis.

Ссылки

  1. O'Carroll CB, Brown BL, Freeman WD. Intracerebral hemorrhage: a common yet disproportionately deadly stroke subtype. Mayo Clin Proc. 2021;96(6):1639-1654.
  2. Hostettler IC, Seiffge DJ, Werring DJ. Intracerebral hemorrhage: an update on diagnosis and treatment. Expert Rev Neurother. 2019;19(7):679-694.
  3. Al-Kawaz MN, Hanley DF, Ziai W. Advances in therapeutic approaches for spontaneous intracerebral hemorrhage. Neurotherapeutics. 2020;17(4):1757-1767.
  4. Garg R, Biller J. Recent advances in spontaneous intracerebral hemorrhage. F1000Res. 2019;8:F1000 Faculty Rev-302.
  5. Kuohn LR et al. Cause of death in spontaneous intracerebral hemorrhage survivors: multistate longitudinal study. Neurology. 2020;95(20):e2736-e2745.
  6. Maramattom BV et al. Pulmonary complications after intracerebral hemorrhage. Neurocrit Care. 2006;5(2):115-119.
  7. Wilson RD. Mortality and cost of pneumonia after stroke for different risk groups. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2012;21(1):61-67.
  8. Hinduja A et al. Nosocomial infections in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. Am J Crit Care. 2015;24(3):227-231.
  9. Ji R et al. Risk score to predict hospital-acquired pneumonia after spontaneous intracerebral hemorrhage. Stroke. 2014;45(9):2620-2628.
  10. Cao Y et al. Chinese Stroke Association guidelines for clinical management of cerebrovascular disorders: executive summary and 2019 update of clinical management of intracerebral haemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2020;5(4):396-402.
  11. Kalil AC et al. Management of adults with hospital-acquired and ventilator-associated pneumonia: 2016 clinical practice guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society. Clin Infect Dis. 2016;63(5):e61-e111.
  12. Benjamini Y, Hochberg Y. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing. J R Stat Soc Series B Methodol. 1995;57(1):289-300.
  13. van Asch CJJ et al. Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurol. 2010;9(2):167-176.
  14. Alsumrain M et al. Predictors and outcomes of pneumonia in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. J Intensive Care Med. 2013;28(2):118-123.
  15. Lindner A et al. Early predictors for infectious complications in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage and their impact on outcome. Front Neurol. 2019;10:817.
  16. Grossmann I et al. Stroke and pneumonia: mechanisms, risk factors, management, and prevention. Cureus. 2021;13(11):e19912.
  17. Yan J et al. ICH-LR2S2: a new risk score for predicting stroke-associated pneumonia from spontaneous intracerebral hemorrhage. J Transl Med. 2022;20(1):193.
  18. Grimes DA, Schulz KF. Bias and causal associations in observational research. Lancet. 2002;359(9302):248-252.
  19. Tapia-Pérez JH et al. Assessment of systemic cellular inflammatory response after spontaneous intracerebral hemorrhage. Clin Neurol Neurosurg. 2016;150:72-79.
  20. Yu T, Liu H, Liu Y, Jiang J. Inflammatory response biomarkers nomogram for predicting pneumonia in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage. Front Neurol. 2023;13:1084616.
  21. Smith AJ, Humphries SE. Cytokine and cytokine receptor gene polymorphisms and their functionality. Cytokine Growth Factor Rev. 2009;20(1):43-59.
  22. Kawai T, Akira S. Toll-like receptors and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity. Immunity. 2011;34(5):637-650.
  23. Sepahi S et al. Haplotype analysis of interleukin-10 gene promoter polymorphisms in chronic hepatitis C infection: a case control study. Viral Immunol. 2014;27(8):398-403.
  24. Areeshi MY et al. IFN-gamma +874 A>T (rs2430561) gene polymorphism and risk of pulmonary tuberculosis: a meta-analysis. Arch Med Sci. 2021;17(1):177-188.
  25. Teuffel O, Ethier MC, Beyene J, Sung L. Association between tumor necrosis factor-alpha promoter -308 A/G polymorphism and susceptibility to sepsis and sepsis mortality: a systematic review and meta-analysis. Crit Care Med. 2010;38(1):276-282.
  26. Ollier WE. Cytokine genes and disease susceptibility. Cytokine. 2004;28(4-5):174-178.
  27. Moons KGM et al. Prognosis and prognostic research: what, why, and how? BMJ. 2009;338:b375.
  28. Collins GS, Reitsma JB, Altman DG, Moons KG. Transparent reporting of a multivariable prediction model for individual prognosis or diagnosis: the TRIPOD statement. BMJ. 2015;350:g7594.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

234234
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.