Этот протокол позволяет подготовить и характеризовать наночастицы CD47- и интегрина α4/β1-ко-модифицированных макрофагов с мембранным покрытием поли(молочно-когликолевая кислота) наночастиц для целенаправленной доставки лекарств.
Method Article
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 7-аминоактиномицин D (7-AAD) | Thermo Fisher Scientific (США) | A1310 | Краситель жизнеспособности для различения живых и мёртвых в потоковой цитометрии |
| Alexa Fluor 488-конъюгированный козёл против кроликов IgG | Thermo Fisher Scientific (США) | A-11008 | Вторичное антитело для иммунофлуоресцентного окрашивания CD68 |
| Антитела к CD47 к мышам | Abcam (США) | ab214453 | Используется для анализа вестерн-блот для проверки экспрессии CD47 |
| Антимышиный интегрин и альфа; 4 антитела (B-2) | Santa Cruz Biotechnology (США) | SC-376334 | Используется для анализа вестерн-блот для проверки интегрина и альфа; 4 выражение |
| Антимышиный интегрин и бета; 1 антитело (A-4) | Santa Cruz Biotechnology (США) | SC-374429 | Используется для анализа западных блотов для проверки интегрина и бета; 1 выражение |
| ApoE-/- мыши | Лаборатория Джексона (США) | Н/Д | Используется для модели атеросклероза in vivo |
| Набор для анализа BCA | Thermo Fisher Scientific (США) | 23225 | Используется для определения концентрации белка |
| Чёрная силиконовая пластина | Н/Д | Н/Д | Раньше устанавливал аорту для ex vivo визуализации |
| Плазмида CD47 (pcDNA3.1(+)) | Generay Biotech (Китай) | G0177361-1 | Содержит ген Cd47 мыши для гиперэкспрессии |
| Колхицин | Sigma-Aldrich (США) | C9754 | Терапевтическая нагрузка в наночастицах |
| Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп | Leica Microsystems | TCS SP8 | Используется для флуоресцентной визуализации и анализа ко-локализации |
| Цитратный буфер (pH 6,0) | Thermo Fisher Scientific (США) | Н/Д | Используется для извлечения антигена при иммунофлуоресцентном окрашивании |
| Диализная трубка (MWCO 3 500 Da) | Sigma-Aldrich (США) | PURD35030 | Используется для очистки наночастиц |
| Диметилсульфоксид (DMSO) | Sigma-Aldrich (США) | D2447 | Растворитель для подготовки наночастиц |
| DiI (1,1′-диоктадецил-3,3,3′,3′-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат) | Бейотиме (Китай) | C1036 | Флуоресцентная маркировка ядра наночастиц |
| DiO (3,3′-диоктадециклоксакарбоцианин перхлорат) | Бейотиме (Китай) | C1038 | Флуоресцентная маркировка мембраны макрофагов |
| DiR | Бейотиме (Китай) | Y239280 | Используется для флуоресцентной визуализации in vivo |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific (США) | D3571 | Ядерная контрокрашивание для флуоресцентной визуализации |
| Дульбекко Модифицированный Eagle Medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific (США) | 11965092 | Среда для культивирования клеток |
| Динамический анализатор рассеяния света (Zetasizer Nano ZS) | Malvern Panalytical (Великобритания) | Н/Д | Используется для измерений размера наночастиц, PDI и зета-потенциала с помощью динамического рассеяния света (DLS) |
| Комплект ELISA | R& D Systems (США) | Зависит от целевого цитокина | Используется для количественной оценки воспалительных цитокинов |
| Эндотелин-1 (ET-1) | Sigma-Aldrich (США) | E7764 | Используется для стимуляции интегрина и альфа; 4/и бета; 1 выражение |
| Сыворотка плода крупного рогатого скота (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific, США) | 10091148 | Добавка для среды для культивирования клеток |
| Потоковый цитометр | BD Biosciences (США) | FACSCalibur | Используется для приёма флуоресцентного сигнала |
| Программное обеспечение для анализа потоковой цитометрии (FlowJo v10.8.1) | BD Biosciences (США) | Н/Д | Используется для анализа данных потоковой цитометрии |
| Эндотелиальные клетки пуповиной вены человека (HUVEC) | FuHeng Biotechnologies (Китай) | FH1122 | Используется для наведения in vitro |
| Программное обеспечение для анализа изображений (ImageJ) | Национальные институты здравоохранения (США) | Н/Д | Используется для количественного анализа изображений |
| Система in vivo визуализации | ПеркинЭлмер (США) | IVIS Lumina III | Используется для флуоресцентной визуализации всего тела |
| Изопропанол (60%) | Sigma-Aldrich (США) | 34863 | Используется для дифференцировки при окрашивании маслом Red O |
| Липофектамин 3000 | Thermo Fisher Scientific (США) | L3000001 | Трансфекционный реагент |
| Магнитная мешалка и перекладина для перемешивания | Н/Д | Н/Д | Используется для подготовки наночастиц |
| Массон s Trichrome Colour Kit | Abcam (США) | ab150686 | Используется для окрашивания коллагена |
| Мини-экструдер | Avanti Polar Lipids (США) | 610000 | Используется для мембранной экструзии |
| Клеточная линия мыши RAW 264.7 | FuHeng Biotechnologies (Китай) | FH0328 | Источник макрофагов |
| Линия гладкомышечных клеток мыши | FuHeng Biotechnologies (Китай) | FH-Y063 | Используется для оценки безопасности |
| Oil Red O | Sigma-Aldrich (США) | O0625 | Используется для липидного окрашивания |
| Opti-MEM | Thermo Fisher Scientific (США) | 31985062 | Редуцированная сывороточная среда для трансфекции |
| Окисленный липопротеин низкой плотности (Ox-LDL) | Yiyuan Biotechnologies (Китай) | YB-002 | Используется для индуцирования образования пенопластовых элементов |
| Penicillin– стрептомицин | Thermo Fisher Scientific (США) | 15140122 | Антибиотик для культивирования клеток |
| Фенилметилсульфонилфторид (ПМСФ) | Sigma-Aldrich (США) | 78830 | Ингибитор протеазы |
| Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS) | Thermo Fisher Scientific (США) | 10010023 | Буфер промывания и разбавления |
| Поли(молочно-когликолевая кислота) (PLGA, 50:50; МВт 90 000) | Далянь Мэйлунь Биотехнология (Китай) | MB5649-1 | Полимер для производства наночастиц |
| Поликарбонатные мембранные фильтры (200 нм, 400 нм) | Whatman (Великобритания) | 800282 | Используется для экструзии |
| Хлорид калия (KCl) | Sigma-Aldrich (США) | P9333 | Компонент буфера лизиса |
| Реагент P3000 | Thermo Fisher Scientific (США) | L3000001 | Усилитель трансфекции |
| Ротационный микротом | Leica Biosystems (Германия) | RM2235 | Используется для парафинового сечения |
| Шприцовый насос | Гарвардский аппарат (США) | 70-3007 | Используется для контролируемого образования наночастиц |
| Трансмиссионный электронный микроскоп (TEM) | Thermo Fisher Scientific (США) | Talos F200S | Используется для наночастичной визуализации |
| Tris-HCl | Sigma-Aldrich (США) | T2663 | Компонент буфера |
| Фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) | R& D Systems (США) | 410-MT | Используется для активации эндотелиальных клеток |
| Ультрачистая вода | Milli-Q (Merck, США) | ZMQSV0T01 | Используется для подготовки наночастиц и диализа |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission