Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

P. gingivalis/F. nucleatum при хроническом апикальном периодонтите связаны с гестационным укоращением через путь TLR4/MyD88/NF-κB

164 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/70793

⸱

15 мая 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cariology and Endodontics, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, The Affiliated Stomatology Hospital of Xinjiang Medical University, 2Development and Related Diseases of Women and Children Key Laboratory of Sichuan Province, 3Stomatology Disease Institute of Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Xinjiang Medical University, 4Department of Endodontics, Urumqi Stomatological Hospital, 5Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University

В этой статье

Краткое содержание

Хронические апикальные периодонтиты, связанные с оральными патогенами (P. gingivalis, F. nucleatum), оцениваются с использованием мышиных моделей CAP и анализов человеческих трофобластных инфекций. Гестационное укорачивание наблюдается вместе с воспалительной активацией плаценты, соответствующей сигнальным сигналам TLR4/MyD88/NF-κB. Бактериальная ДНК обнаруживается в тканях плаценты/сосудистых тканей, поддерживая гематогенную связь и потенциальные цели вмешательства.

Аннотация

Спонтанные преждевременные роды (sPTB; роды до 37 недели) остаются ведущей причиной неонатальной смертности, а внутриматочные инфекции связаны с значительной частью случаев. Новые данные связывают оральные патогены, такие как Porphyromonas gingivalis и Fusobacterium nucleatum , с неблагоприятными гестационными исходами; однако механистические пути, связывающие хронический апикальный периодонтит (CAP) с гестационным риском, остаются неполностью определёнными. У беременных мышей C57BL/6J CAP был установлен путём инокуляции корневых каналов и дополнен моделью испытания хвостовых вен, использующих бактериальные суспензии (1 × 108 CFU/mL). С помощью qPCR оценивались гестационная длина, гистопатология плаценты, воспалительные маркеры и бактериальные ДНК-сигналы. Параллельно человеческие трофобласты подвергались воздействию P. gingivalis или F. nucleatum (MOI = 50, 24 часа) для изучения воспалительных сигналов, соответствующих активации оси TLR4/MyD88/NF-κB. По сравнению с контрольной группой, группы, ассоциированные с CAP, демонстрировали гестационное сокращение (медиана 19,5 против 20,5 дней), сопровождаемое повышением воспалительных показателей плаценты (включая повышенный IL-1β и TNF-α) и гистопатологическими признаками, соответствующими воспалительным повреждениям. qPCR также показало наличие бактериальных ДНК-сигналов в тканях плаценты и сосудистых структур. В трофобластных анализах F. nucleatum вызвал более сильные провоспалительные реакции, чем P. gingivalis, в связи с увеличением фосфорилирования NF-κB. В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что CAP-ассоциированные пероральные патогены могут способствовать укорочению гестационного периода, вызывая воспаление плаценты через сигнализацию TLR4/MyD88/NF-κB, поддерживая орально-плацентарную микробную ось как потенциальную мишень для снижения риска беременности, связанной с инфекциями.

Введение

Спонтанные преждевременные роды (sPTB) определяются как роды, происходящие в период от 20 до 37 недель беременности без медицинскоговмешательства 1. Как критическая глобальная проблема общественного здравоохранения, заболеваемость sPTB варьируется примерно от 5%–9% в развитых странах до 12–18% в регионах с ограниченнымиресурсами 2,3. Преждевременные роды и их осложнения остаются одной из ведущих причин смертности среди детей младше 5 лет, ежегодно вызывая примерно один миллион неонатальных смертей4. Выжившие часто сталкиваются как с немедленными осложнениями, такими как синдром дыхательных недостаточностей, так и с долгосрочными последствиями, включая церебральный паралич и задержки развития 5,6, что накладывает значительные экономические нагрузки на семьи и общество 7,8.

Этиология sPTB многофакторна и отражает взаимодействия материнских, плодовых и экологических факторов, включая сокращение сокращения матки, цервикальную недостаточность, эндокринные нарушения, заболевания плаценты и внутриутробныеинфекции 9. Внутриутробная инфекция признана основным фактором и, по оценкам, составляет примерно 30–40% случаев преждевременныхродов (10,11). Патогены могут проникать в амниотическую полость по восходящим (например, цервиковагинальным) или гематогенным путям, активируя иммунные ответы хозяина и способствуя высвобождению провоспалительных цитокинов (например, IL-6, TNF-α) и простагландинов, способных вызватьроды 12. Трофобласты, как ключевые клеточные компоненты материнско-плодовой границы, способствуют иммунной толерантности и антимикробнойзащите 13.

Пероральные микроорганизмы, включая Porphyromonas gingivalis и Fusobacterium nucleatum, участвуют в воспалительных процессах, связанных с sPTB, потенциально через бактериемию и/или распространение воспалительныхмедиаторов 14. Эти виды являются признанными патогенами пародонта, и связи между пародонтитом и sPTB были зафиксированы в эпидемиологических и клиническихисследованиях 15, 16, 17. Примечательно, что P. gingivalis и F. nucleatum также часто обнаруживаются при хроническом апикальном периодонтите (CAP)18,19, однако связь между CAP и неблагоприятными гестационными исходами остаётся сравнительно недоизученной, а соответствующие биологические пути не полностьюопределены 20. Харджунмаа и др. впервые сообщили о связи между апикальной пародонтитом и уменьшением гестационной длительности и низкой массой при рождении в 2015году 21. Последующее исследование той же когорты не подтвердило прямой перенос бактерий в плаценту, что позволяет предположить, что системное воспаление может представлять правдоподобную связь между апикальной пародонтитом и исходамибеременности 22. В соответствии с этой интерпретацией, радиографически подтверждённый апикальный пародонтит связан с повышенным риском преждевременных родов с низкой массойпри рождении 23. Как устойчивая скрытая инфекция, CAP может способствовать гестационному риску через хроническое низкостепенное системное воспаление и/или гематогенное воздействие микробныхкомпонентов 24,25. Поэтому необходимо дополнительное уточнение связи между CAP и гестацией для уточнения понимания воспалительных путей перрости и плаценты и формирования стратегий профилактики риска гестационной нагрузки, связанной с инфекциями.

Недавние исследования подчеркнули значимость оси сигнализации TLR4/MyD88/NF-κB при преждевременных родах, связанных с воспалением. Робертсон и др. определили TLR4 как потенциальную терапевтическую мишень при преждевременных родах, вызванных воспалением, и сообщили о профилактических эффектах на животныхмоделях 26. Пэн и др. также показали, что miR-199a-3p ослабляет воспаление эпителия шейки матки путём подавления пути HMGB1/TLR4/NF-κB27. Кроме того, Шен и соавторы описали антиоксидантные и противовоспалительные эффекты шрингина у беременных крыс с диабетом, при этом модуляция пути TLR4/MyD88/NF-κB была связана с наблюдаемымиулучшениями 28. В совокупности эти результаты подтверждают механистическую структуру, в которой воспалительные сигналы, связанные с TLR4/MyD88/NF-κB, способствуют формированию инфекционных путей, влияющих на роды, при этом признаёт, что несколько врожденных иммунных рецепторов могут действовать параллельно в зависимости от контекста патогена.

В настоящем исследовании оцениваются гестационные эффекты, связанные с CAP, с помощью дополнительных тестов трофобластов in vitro и моделей мышей in vivo . Модель трофобластов позволяет контролируемо анализировать воспалительную сигнализацию, вызванную патогенами, тогда как модель CAP у беременных мышей связывает клеточные ответы с фенотипами беременности на уровне организма при физиологических гестационных условиях. Включена модель вызова хвостовой вены для обеспечения комплементарного гематогенного воздействия и оценки того, повторяются ли воспалительные активации, наблюдаемые в условиях оральной инфекции, при попадании бактериальных компонентов в материнский кровообращение. В частности, воздействие трофобластов на P. gingivalis и F. nucleatum используется для профилирования цитокинов и активации оси TLR4/MyD88/NF-κB, в то время как эксперименты на животных оценивают гестационную продолжительность, воспаление плаценты и qPCR обнаружение бактериальных ДНК-сигналов в бифуркации сонной артерии и тканях плаценты. Поскольку qPCR указывает на наличие бактериальной ДНК, а не на жизнеспособность или клеточную локализацию, интерпретации микробного присутствия на границе матери и плода остаются осторожными. Кроме того, различия видов и контролируемое экспериментальное воздействие могут ограничивать прямую клиническую трансляцию, что подчёркивает необходимость последующего валидации в условиях, релевантных для человека.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с этическими нормами, установленными Комитетом по этике исследований животных Первой аффилированной больницы Синьцзянского медицинского университета (номер одобрения: IACUC-20231121-13) и в соответствии с руководством Национальных институтов здравоохранения (NIH) по уходу и использованию лабораторных животных (издание 2011 года). Кроме того, это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями ARRIVE. Все материалы (реагенты, расходники, оборудование и программное обеспечение) и соответствующая информация о производителях и каталожные номера приведены в Таблице материалов для облегчения воспроизводимости.

1. Бактериальная культура

Эталонные штаммы Porphyromonas gingivalis и Fusobacterium nucleatum (идентификаторы штамма, указанные в Таблице материалов) обрабатывались в анаэробных условиях. Первичные культуры были установлены на пластинах крови Колумбии до восстановления Колумбии и инкубировали анаэробным способом (85% N₂, 10% H₂ и 5% CO₂) при 37 °C в течение 48 часов. Для экспериментальных препаратов одна хорошо изолированная колония была инъекциирована в 40-мл инфузионный бульон мозгового сердца и инкубировалась в одинаковых анаэробных условиях до средней логической фазы роста (OD660 = 0,6–0,8). Для минимизации воздействия кислорода внутри анаэробной рабочей станции проводились этапы инокуляции и переноса с использованием предварительно восстановленных сред и инструментов. Концентрации бактерий были стандартизированы до 1 × 108 CFU/mL для воздействия на животных с использованием количественной оценки на основе OD660 с специфической для штама стандартной кривой OD–CFU, полученной при тех же условиях культуры; Кривая калибровки была установлена последовательно разбавленной и колонионным учётом анаэробных агарных пластин с как минимум тремя независимыми калибровками. Для исследований трофобластной инфекции бактериальные суспензии количественно оценивались с помощью валидированного метода перечисления и разбавлялись в среде без антибиотиков полной культуры для достижения заданной множественности инфекции (MOI) непосредственно перед совместной культурой.

2. Содержание и группировка животных

Специфические мыши C57BL/6J без патогенов (n = 90; 60 самок, 30 самцов) в возрасте 6–7 недель содержались в контролируемых условиях (22 °C ± 2 °C, 60% ± влажности 10%, 12 часов светового цикла) с иммиграционным доступом к пище и воде. После 1 недели акклиматизации мышей случайным образом разделили на шесть экспериментальных групп (n = 15/группа): нормальная контрольная (NC), CAP с P. gingivalis (AP), CAP с F. nucleatum (AF), обычная инъекция в солевую вену хвоста (VN), инъекция в хвостовую вену P. gingivalis (VP) и инъекция в хвостовую вену F. nucleatum (VF). Рандомизация и распределение клеток были зафиксированы для минимизации смещения распределения и возможных эффектов клеток.

3. Создание модели CAP

Все хирургические процедуры проводились в асептичных условиях. Анестезия была индуцирована внутрибрюшным введением пентобарбитала натрия (1,62 мг/30 г массы тела) в сочетании с сульфатом атропина (12,5 мкг/30 г массы тела), а адекватная глубина анестезии подтверждалась отсутствием рефлекса отмены педалей. Мышей располагали на спине на согревающей подушечке для поддержания температуры тела, а рот аккуратно открывали для стабильного визуализации двусторонних первых верхнечелюстных коренных зубов. При увеличении пульпаные камеры первых верхнечелюстных зубов открывались стерильным круглым зарезом, после чего коронная целпельповата была удалена стерильными микроинструментами. Отверстия для корневых каналов были выявлены с помощью небольшого эндодонтического напильника (размер 06–10), а каналы аккуратно обрабатывались для достижения проходности при избегании чрезмерного усилия, чтобы минимизировать риск перфорации. Камера была промыта стерильным физиологическим раствором (стерильным PBS) и высушена стерильными бумажными наконечниками перед инокуляцией.

Бактериальная инокуляция проводилась с использованием стандартизированной суспензии при 1 × 108 CFU/mL. Для воспроизводимости дозировки объем подачи был оперативно фиксирован на уровне 2 мкл на зуб (примерно 2 × 105 КМО на зуб), доставляемый с помощью калиброванного кончика микропипетки, расположенного у входа в камеру. Стерильная поглощающая бумажная точка, предварительно пропитанная той же суспензией, затем помещалась в целлюлозную камеру для поддержания локального воздействия. Успешные роды подтверждались видимым смачиванием точки бумаги и отсутствием протечки в ротовую полость. После инокуляции камеру сушили на воздухе до отсутствия видимой жидкости, затем герметизировали светозатвердевшим стоматологическим клеем (20 с), после чего реставрировали с использованием композита из смолы с легкой затвердеющей текующей смолой (20 с). Целостность пломбы подтверждалась визуальным осмотром и аккуратным исследованием; реставрации, показывающие пробелы или ранние потери, немедленно запечатывались. Постпроцедурная анальгезия и мониторинг обеспечивались в соответствии с институциональными рекомендациями по уходу за животными.

Две недели спустя были получены периапикальные рентгенограммы для подтверждения установления CAP. Успешное установление определялось чёткой периапикальной радиолюзностью с окружающими изменениями костей, соответствующими хроническому периапикальному воспалению и разрушению костей. Спаривание началось через две недели после установления инфекции и модели.

4. Создание модели инъекции в хвостовую вену

Бактериальные суспензии были приготовлены в концентрации 1 × 108 CFU/mL в стерильном физиологическом растворе. Мышей фиксировали, а хвост нагревали на 1–2 минуты для расширения боковых вен. Инъекции проводились с использованием иглы тонкой калибровки (обычно 29–30 G), вставляемой скошенным вверх в боковую хвостовую вену под малым углом (примерно 10–15°). Правильное внутривенное введение подтверждалось вспышкой крови в втулке и плавной инфузией с низким сопротивлением; Неудачное размещение было отмечено повышением сопротивления и/или образованием подкожного блебля, при этом инфузия прекращалась и повторялась в более проксимальной зоне после кратковременного прогрева. Мыши получали ежедневные инъекции в течение трёх последовательных дней (по 100 мкл на мышь каждый раз). Через три дня женщин поселили вместе с самцами, а на следующее утро проверили вагинальные пробки. После подтверждения вагинальных пробок (GD 0,5) инъекции вводились каждые три дня (по 100 мкл на мышь каждый раз) до 15-го дня беременности.

5. Создание модели беременной мыши

Самки и самцы мышей содержались в соотношении 2:1 (самка к самец) на ночь, начиная с 20:00 каждый день. Наличие вагинальной пробки или сперматозоидного мазка в 08:00 следующего утра было обозначено как гестационный день (GD) 0,5. Для каждой мыши фиксировались исходная масса тела, вес до родов, после родов, гестационная длина, вес при рождении новорождённых, размер помёта и количество мертворорожденных. Согласно предыдущимисследованиям 29,30, роды, произошедшие до GD 18.5, оперативно определялись как преждевременные рождения у мышей. Поскольку гестационное сокращение может происходить в пределах срока, исходы беременности интерпретировались с учетом различия между истинными преждевременными родами и фенотипами гестационного сокращения.

6. Сбор и обработка образцов

На 15-й день беременности случайным образом выбирали по три беременных мыши в каждой группе для отбора образцов плаценты и сосудистых (NC/AP/AF и VN/VP/VF). После анестезии, индуцированной внутрибрюшной инъекцией пентобарбитала натрия (1,62 мг на 30 г массы тела) и сульфата атропина (12,5 мкг на 30 г массы тела), были взяты образцы крови через ретро-орбитальное кровотечение. Мышей эвтаназировали в камере с углекислым газом до подтверждения смерти при отсутствии дыхания, сердцебиения и роговицы; Доставка углекислого газа следовала постепенному заполнению, что соответствует институциональным рекомендациям по благополучию животных. Ткани разбиения сонной артерии и плаценты были быстро собраны с помощью стерильных инструментов для снижения перекрёстного загрязнения. Ткань плаценты делилась на две части: одна часть хранилась при −80 °C, а другая фиксировалась в 10% нейтральном буферном формалине на 24 часа, после чего следовала градуированная дегидраация этанола и внедрение парафина. Оставшихся мышей наблюдали за суточной массой тела, продолжительностью беременности, размером помёта и весом при рождении новорождённых.

7. Культивирование и обработка клеток

Человеческая трофобластная клеточная линия HTR-8/SVneo была культивирована в среде RPMI 1640 с добавлением 10% тепловой инактивированной сыворотки плода при 37 °C с 5% CO₂. Для экспериментов с инфекцией клетки HTR-8/SVneo (1 × 106 клеток) в логарифмической фазе роста были засеяны в пластины с 6 лунками и оставлялись прилипать на ночь. До появления бактериального вызова среда заменялась на полноценную среду без антибиотиков, чтобы избежать антибактериального эффекта во время совместной культуры. Бактериальные суспензии P. gingivalis или F. nucleatum добавлялись при MOI = 50, и каждая яма корректировалась до итогового объёма 2,5 мл с использованием полной культурной среды. Тарелки инкубировали в течение 24 часов. Супернатанты собирались через 24 часа и очищались кратковременной центрифугой для удаления мусора перед измерением цитокином. Адгерирующие клетки дважды промывались стерильным PBS для удаления неадгетирующих бактерий, а затем немедленно обработаны для экстракции РНК или белка согласно описанным ниже рабочим процессам.

8. Гистологический анализ плаценты мыши

Ткани плаценты фиксировались в 10% нейтральном буферном формалине в течение 24 часа, встраивались в парафин и секцировались толщиной 4,5 мкм. Для изучения морфологии плаценты проводилось рутинное окрашивание гематоксилином и эозином (H&E). Для иммуногистохимического окрашивания локализация антигена визуализировалась с помощью хромогенного пероксидазного субстрата, образующего коричневые отложения в положительных местах, после чего следовало контрокрашивание гематоксилином. Отрицательные контрольные тесты проводились путём замены первичных антител на неиммунные сыворотки.

Для повышения воспроизводимости и прозрачности иммуногистохимическая оценка использовала заранее определённый полуколичественный подход к оценке. Интенсивность окрашивания оценивалась как 0 (отсутствует), 1 (слабая), 2 (умеренная) или 3 (сильная), а процент положительных клеток оценивался как 0 (<5%), 1 (5–25%), 2 (26–50%), 3 (51–75%) или 4 (>75%). Балл иммунореактивности рассчитывался путём умножения интенсивности и процентных показателей для каждой области. Для каждой плаценты оценивалось как минимум пять неперекрывающихся полей высокой мощности из сопоставимых анатомических областей. Оценка оценивалась независимо двумя наблюдателями, не обращая внимания на распределение групп, а разногласия решались совместным обзором.

9. Количественное обнаружение ПЦР-сигналов бактериальной ДНК в бифуркации сонной артерии мыши и плаценте

ДНК ткани была извлечена с помощью процесса экстракции ткани на основе кремнезёмных столбцов. Тканевые лизаты очищались центрифугированием при 12 000 × г в течение 5 минут при 20–25 °C, а супернатанты наносили на кремнеземные колонки для связывания ДНК центрифугой при 12 000 × г в течение 1 минуты при 20–25 °C. Этапы промывания выполнялись в соответствии с рабочим процессом: за каждой промывкой следовала центрифугирование при 12 000 × г в течение 1 минуты при 20–25 °C. Последний сухой спин был проведён при 12 000 × г в течение 2 минут при 20–25 °C для удаления остаточного этанола. ДНК элюировалась в буфере элюции 50 мкл после 2-минутной инкубации при 20–25 °C и собиралась центрифугированием при 12 000 × г в течение 1 минуты при 20–25 °C. Бактериальная геномная ДНК была извлечена с помощью процесса экстракции бактериальной ДНК на основе кремнеземных столбов с использованием тех же параметров связывания/мойки/сухого спинирования/центрифуга, если не требуется иное в рабочем процессе.

Концентрация и чистота ДНК измерялись с помощью микрообъёмного квантора нуклеиновых кислот, а целостность оценивалась с помощью агарозного гелевого электрофореза. Квалифицированные образцы ДНК хранили при -20 °C для последующего анализа. Целевые бактериальные гены были амплифицированы и клонированы с помощью праймеров, перечисленных в Дополнительной таблице 1, при этом условия ПЦР подробно описаны в Дополнительной таблице 2 и Дополнительной таблице 3. Усиленные целевые полосы были очищены, клонированы согласно спецификациям Дополнительной таблицы 4 и преобразованы в компетентные клетки Escherichia coli DH5α. Были проверены штаммы, содержащие рекомбинантные плазмиды, для обеспечения правильности вставных последовательностей, а плазмидная ДНК была извлечена для стандартной подготовки. Стандартные кривые были получены путём проведения qPCR на последовательно разбавленных плазмидных стандартах, содержащих фрагменты гена-целей бактерий. Сигналы бактериальной ДНК P. gingivalis 16S и F. nucleatum 16S в образцах бифуркации сонной артерии и плаценты были количественно обнаружены с помощью ПЦР в реальном времени, при этом количество копий ДНК рассчитывалось по значениям CT с использованием стандартной кривой. Системы и программы реакций подробно описаны в Дополнительной таблице 5 и Дополнительной таблице 6 соответственно. Поскольку qPCR указывает на сигналы бактериальной ДНК, а не на жизнеспособность или клеточную локализацию, интерпретации присутствия микроорганизмов на границе матери и плода остаются осторожными.

10. Обнаружение воспалительных факторов по ИФА в образцах сыворотки мыши и супернатантах клеточной культуры

Все реагенты и образцы были уравновешены до комнатной температуры перед тестированием. Уровни TNF-α и IL-1β в сыворотке измерялись с помощью рабочих процессов ELISA у мышей, а уровни TNF-α и IL-1β в супернатантах клеточной культуры определялись с помощью рабочих процессов ELISA человека, следуя процедурам комплекта. Стандарты и образцы измерялись в дублирующих скважинах, а для каждой пластины формировались стандартные кривые. Технические дубликаты усреднялись для получения одного значения на биологическую реплику.

11. Другие анализы молекулярной биологии

Для qRT-PCR полная РНК извлекалась из культивированных клеток с помощью процесса экстракции РНК на основе фенол-хлороформа. После разделения фазы водная фаза очищалась центрифугированием при 12 000 × г в течение 10 минут при 4 °C, после чего РНК осаждали, промывались и вновь суспензировали в соответствии с рабочим процессом. Концентрация РНК измерялась с помощью анализатора нуклеиновых кислот, а целостность РНК оценивалась с помощью электрофореза агарозного геля. Для получения кДНК была проведена обратная транскрипция, а для количественного измерения уровней мРНК TNF-α и IL-1β использовалось количественное ПЦР в реальном времени. Последовательности праймеров приведены в Дополнительной таблице 7, реакционные смеси — в Дополнительной таблице 8, а программы реакций — в Дополнительной таблице 9.

При западном блоттинге белковые лизаты из плацентарных тканей мышей или трофобластных клеток очищались методом центрифугирования при 12 000 × г в течение 15 минут при 4 °C, количественно измерялись и подвергались обработке SDS-PAGE с последующим переносом мембраны и антитела с помощью флуоресцентного процесса визуализации. Равная загрузка белка была установлена на уровне 30 мкг на полосу. Оригинальные, не обрезанные изображения мембраны, включая молекулярные маркеры, были сохранены для всех пятен, представленных на рисунках, и доступны по данным DOI: 10.57760/sciencedb.28254. Если не указано иное, «n» относится к биологическим репликам (отдельным животным или независимым клеточным культурам), а технические повторы используются для контроля качества и не заменяют биологическую репликацию.

12. Статистический анализ

Статистический анализ проводился с помощью программного обеспечения для статистического анализа, а цифры — с помощью программного обеспечения для графиков (перечислено в Таблице материалов). Нормально распределённые непрерывные данные представлялись как среднее ± стандартное отклонение и анализировались с помощью одностороннего ANOVA с соответствующими пост-хок тестами, тогда как ненормально распределенные данные выражались как медиана (межквартильный диапазон) и анализировались с помощью теста Крускаля–Уоллиса с соответствующими парными сравнениями. Порог статистической значимости был установлен на уровне P < 0,05, P < 0,01 и P < 0,001. Если не указано иное, «n» обозначает биологические реплики, а технические репликаты (например, дублирующиеся скважины ИФС) усреднялись для получения одного значения на биологическую реплику.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Инфекция P. gingivalis или F. nucleatum связана с гестационным укоротением и повышенным воспалительным цитокином в сыворотке у мышей
Основные статистические данные по изменениям веса матери, исходам неонатального заболевания и продолжительности беременности приведены в таблице 1 и рисунке 1. Траектории веса матери и неонатальные состояния не различались существенно между группами (односторонняя ANOVA, P ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В последние годы накопленные данные свидетельствуют о тесной связи между здоровьем полости рта и исходами беременности, что привлекло внимание к возможным связям между хроническим апикальным периодонтитом (CAP) и неблагоприятными исходами беременности, включая фенотипы, связанные с преждевременнымиродами. 31 . Систематический обзор показывает, что текущая база клинических доказательств остаётся ограниченной и разнородной, но в целом поддерживает положительную связ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конкурирующих интересов, которые можно было бы заявить.

Благодарности

Эта работа была поддержана ключевой лабораторией Фонда развития и связанных заболеваний женщин и детей провинции Сычуань (грант No FYYFEJB2025002).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Chromogenic Peroxidase SubstrateAgilent DakoK3468Хромогенный пероксидазный субстрат для ИГХ
Defibrinated sheep blood, sterileThermo Fisher (Remel)R54012Дефибринированная овчая кровь, стерильнаяДобавка для кровяной агарной среды (5%)
Dental X-ray unit / radiography systemPlanmecaIntra (модель)Периапикальные рентгенографии для подтверждения CAP
DNeasy Blood & Tissue KitQIAGEN69504Экстракция ДНК из тканей/бактерий с использованием колонки с силикагелем
E. coli DH5α Competent CellsTaKaRa9057Трансформация для создания плазмидного стандарта
Eosin Y solution, alcoholicSigma-Aldrich (Merck)HT110132Окраска H&E
Fetal Bovine Serum (FBS), qualified, AustraliaGibco (Thermo Fisher Scientific)10099-141Добавка к полному средству
Flowable resin composite3MFiltek Supreme Flowable 6010Восстановление после пломбирования; световое отверждение
Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum reference strainATCC25586Анаэробная культура; CAP и экспозиция хвостовой вены
GraphPad PrismGraphPad SoftwarePrism 9 (версия)Статистический анализ и создание рисунков
Hematoxylin solutionSigma-Aldrich (Merck)HHS32Контрастное окрашивание H&E
HTR-8/SVneo human trophoblast cell lineATCCCRL-3271Исследования инфекции in vitro
Human IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)DLB50Определение IL-1β в супернатанте клеток
Human TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)DTA00DОпределение TNF-α в супернатанте клеток
Immobilon-FL PVDF membrane, 0.45 µmMillipore (Merck)IPFL00010Флуоресцентная переносная мембрана для западного блоттинга
IRDye 680RD Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR925-68071Флуоресцентное вторичное антитело
IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR926-32211Флуоресцентное вторичное антитело
IκBα (44D4) Rabbit mAbCell Signaling Technology4812Первичное антитело (WB)
K-File (endodontic file)Dentsply Sirona (Maillefer)A012D015Инструментарий канала (пример размера 15)
LED dental curing light3MElipar DeepCure-S (модель)Отверждение 20 с (по протоколу)
Mouse IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)MLB00CОпределение IL-1β в сыворотке
Mouse TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems (Bio-Techne)MTA00BОпределение TNF-α в сыворотке
MyD88 (D80F5) Rabbit mAbCell Signaling Technology4283Первичное антитело (WB)
NanoDrop One Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermo Fisher ScientificND-ONE-WКоличественное определение ДНК/РНК
Near-infrared imaging systemLI-COROdyssey CLx (модель)Флуоресцентное изображение западного блоттинга
NF-κB p65 (D14E12) Rabbit mAbCell Signaling Technology8242Первичное антитело (WB)
PBS, pH 7.4, without Ca2+/Mg2+Gibco (Thermo Fisher Scientific)10010-023Мойка клеток и приготовление реагентов
Penicillin-Streptomycin Gibco (Thermo Fisher Scientific)15140-122Антибиотики 
Pentobarbital sodium saltSigma-Aldrich (Merck)P3761Индукция анестезии (дозировка по протоколу)
Peroxidase blocking solutionAgilent DakoS2023Блокировка эндогенной пероксидазы для ИГХ
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAbCell Signaling Technology3033Первичное антитело (WB)
Porphyromonas gingivalis reference strainATCC33277Анаэробная культура; CAP и экспозиция хвостовой вены
PrimeScript RT Reagent Kit (Perfect Real Time)TaKaRaRR037AСинтез цДНК
Real-time PCR systemApplied BiosystemsQuantStudio 5 (модель)Количественное определение целей 16S в реальном времени
Round bur (sterile)Dentsply SironaH1-010Открытие доступа к камере пульпы первого моляра верхней челюсти
RPMI 1640 MediumGibco (Thermo Fisher Scientific)11875-093Базовая среда культивирования HTR-8/SVneo
SYBR-safe DNA gel stainInvitrogenS33102Визуализация ДНК
TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0TaKaRa9760Миниприпарация плазмид для стандартов
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)TaKaRaRR820AМастер-микс для qPCR (на основе красителя)
TLR4 (D8L5W) Rabbit mAbCell Signaling Technology14358Первичное антитело (WB)
TRIzol ReagentInvitrogen15596-026Экстрак

Ссылки

  1. American College of Obstetricians and Gynecologists’ Committee on Practice Bulletins—Obstetrics. Practice bulletin no. 171: Management of preterm labor. Obstet Gynecol. 128, e155-e164 (2016).
  2. Vogel, J. P., Chawanpaiboon, S., Moller, A. B., Watananirun, K., Bonet, M., et al. The global epidemiology of preterm birth. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 52, 3-12 (2018).
  3. Svenvik, M., et al. Early prediction of spontaneous preterm birth before 34 gestational weeks based on a combination of inflammation-associated plasma proteins. Front Immunol. 15, 1415016-1415028 (2024).
  4. Liu, L., et al. Global, regional, and national causes of under-5 mortality in 2000–15: An updated systematic analysis with implications for the sustainable development goals. Lancet. 388, 3027-3035 (2016).
  5. Saigal, S., Doyle, L. W. An overview of mortality and sequelae of preterm birth from infancy to adulthood. Lancet. 371, 261-269 (2008).
  6. Liang, S., et al. Development of a spontaneous preterm birth predictive model using a panel of serum protein biomarkers for early pregnant women: A nested case-control study. Int J Gynaecol Obstet. 168, 701-708 (2025).
  7. Bradley, E., et al. Born too soon: Global epidemiology of preterm birth and drivers for change. Reprod Health. 22, 105-119 (2025).
  8. Hodek, J. M., von der Schulenburg, J. M., Mittendorf, T. Measuring economic consequences of preterm birth: Methodological recommendations for the evaluation of personal burden on children and their caregivers. Health Econ Rev. 1 (1), 6 (2011).
  9. Romero, R., Dey, S. K., Fisher, S. J. Preterm labor: One syndrome, many causes. Science. 345, 760-765 (2014).
  10. Goldenberg, R. L., et al. Epidemiology and causes of preterm birth. Lancet. 371, 75-84 (2008).
  11. Combs, C. A., et al. Amniotic fluid infection, inflammation, and colonization in preterm labor with intact membranes. Am J Obstet Gynecol. 210, 125.e1-125.e15 (2014).
  12. Mendz, G. L., Kaakoush, N. O., Quinlivan, J. A. Bacterial aetiological agents of intra-amniotic infections and preterm birth in pregnant women. Front Cell Infect Microbiol. 3, 58-64 (2013).
  13. Semmes, E. C., Coyne, C. B. Innate immune defenses at the maternal-fetal interface. Curr Opin Immunol. 74, 60-67 (2022).
  14. Han, Y. W., Wang, X. Mobile microbiome: Oral bacteria in extra-oral infections and inflammation. J Dent Res. 92, 485-491 (2013).
  15. Ide, M., Papapanou, P. N. Epidemiology of association between maternal periodontal disease and adverse pregnancy outcomes—systematic review. J Periodontol. 84, S181-S194 (2013).
  16. Offenbacher, S., et al. Periodontal infection as a possible risk factor for preterm low birth weight. J Periodontol. 67, 1103-1113 (1996).
  17. Jeffcoat, M. K., et al. Periodontal infection and preterm birth: Results of a prospective study. J Am Dent Assoc. 132, 875-880 (2001).
  18. Siqueira, J. F., Rôcas, I. N. Microbiology and treatment of acute apical abscesses. Clin Microbiol Rev. 26, 255-273 (2013).
  19. Marchesan, J., et al. TLR4, NOD1 and NOD2 mediate immune recognition of putative newly identified periodontal pathogens. Mol Oral Microbiol. 31, 243-258 (2016).
  20. Georgiou, A. C., Crielaard, W., Armenis, I., de Vries, R., van der Waal, S. V. Apical periodontitis is associated with elevated concentrations of inflammatory mediators in peripheral blood: A systematic review and meta-analysis. J Endod. 45 (11), 1279-1295.e3 (2019).
  21. Harjunmaa, U., et al. Association between maternal dental periapical infections and pregnancy outcomes: Results from a cross-sectional study in Malawi. Trop Med Int Health. 20, 1549-1558 (2015).
  22. Harjunmaa, U., et al. Periapical infection may affect birth outcomes via systemic inflammation. Oral Dis. 24, 847-855 (2018).
  23. Leal, A. S., et al. Association between chronic apical periodontitis and low-birth-weight preterm births. J Endod. 41, 353-357 (2015).
  24. León, R., et al. Detection of Porphyromonas gingivalis in the amniotic fluid in pregnant women with a diagnosis of threatened premature labor. J Periodontol. 78, 1249-1255 (2007).
  25. Sanz, M., et al. Periodontitis and cardiovascular diseases: Consensus report. J Clin Periodontol. 47, 268-288 (2020).
  26. Robertson, S. A., et al. Targeting Toll-like receptor-4 to tackle preterm birth and fetal inflammatory injury. Clin Transl Immunol. 9, e1121-e1139 (2020).
  27. Peng, J., et al. miR-199a-3p suppresses cervical epithelial cell inflammation by inhibiting the HMGB1/TLR4/NF-κB pathway in preterm birth. Mol Med Rep. 22, 926-938 (2020).
  28. Shen, Z., et al. Protective effects of syringin against oxidative stress and inflammation in diabetic pregnant rats via TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Biomed Pharmacother. 131, 110681-110690 (2020).
  29. McCarthy, R., et al. Mouse models of preterm birth: Suggested assessment and reporting guidelines. Biol Reprod. 99, 922-937 (2018).
  30. Ao, M., et al. Dental infection of Porphyromonas gingivalis induces preterm birth in mice. PLoS One. 10 (8), e0137249-e0137265 (2015).
  31. Jakovljevic, A., et al. The association between apical periodontitis and adverse pregnancy outcomes: A systematic review. Int Endod J. 54 (9), 1527-1537 (2021).
  32. Khalighinejad, N., Aminoshariae, A., Kulild, J. C., Mickel, A. Apical periodontitis, a predictor variable for preeclampsia: A case-control study. J Endod. 43 (10), 1611-1614 (2017).
  33. Venugopal, B., Narasimman, H., Mahalingam, A., Naren Kishore, R., Jayavel, K., et al. Systemic health associations of apical periodontitis: A systematic review of observational studies. Cureus. 17 (10), e95273 (2025).
  34. Liang, S., et al. Periodontal infection with Porphyromonas gingivalis induces preterm birth and lower birth weight in rats. Mol Oral Microbiol. 33 (4), 312-321 (2018).
  35. Lin, D., et al. Porphyromonas gingivalis infection in pregnant mice is associated with placental dissemination, an increase in the placental Th1/Th2 cytokine ratio, and fetal growth restriction. Infect Immun. 71 (9), 5163-5168 (2003).
  36. Han, Y. W., et al. Fusobacterium nucleatum induces premature and term stillbirths in pregnant mice: Implication of oral bacteria in preterm birth. Infect Immun. 72 (4), 2272-2279 (2004).
  37. Liu, H., et al. Fusobacterium nucleatum induces fetal death in mice via stimulation of TLR4-mediated placental inflammatory response. J Immunol. 179 (4), 2501-2508 (2007).
  38. Chan, E., et al. Identification of Fusobacterium nucleatum in formalin-fixed, paraffin-embedded placental tissues by 16S rRNA sequencing in a case of extremely preterm birth secondary to amniotic fluid infection. Pathology. 51 (3), 320-322 (2019).
  39. Habelrih, T., Augustin, T. L., Mauffette-Whyte, F., Ferri, B., Sawaya, K., et al. Inflammatory mechanisms of preterm labor and emerging anti-inflammatory interventions. Cytokine Growth Factor Rev. 78, 50-63 (2024).
  40. Gomez-Lopez, N., Romero, R., Plazyo, O., Panaitescu, B., Furcron, A. E., et al. Intra-amniotic administration of HMGB1 induces spontaneous preterm labor and birth. Am J Reprod Immunol. 75 (1), 3-7 (2016).
  41. Wang, S., Ma, L., Ji, J., Huo, R., Dong, S., et al. Protective effect of soy isolate protein against streptozotocin induced gestational diabetes mellitus via TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Biomed Pharmacother. 168, 115688 (2023).
  42. Reyes, L., et al. Porphyromonas gingivalis and adverse pregnancy outcome. J Oral Microbiol. 10 (1), 1374153 (2017).
  43. Aagaard, K., et al. The placenta harbors a unique microbiome. Sci Transl Med. 6 (237), 237ra65 (2014).
  44. Kuperman, A. A., et al. Deep microbial analysis of multiple placentas shows no evidence for a placental microbiome. BJOG. 127 (2), 159-169 (2020).
  45. Einenkel, R., et al. Less is more! Low amount of Fusobacterium nucleatum supports macrophage-mediated trophoblast functions in vitro. Front Immunol. 15, 1447190 (2024).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Porphyromonas gingivalisFusobacterium nucleatumпуть TLR4сигналинг MyD88активация NF-kappaBвоспаление плацентыпреждевременные родыоральные патогены
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.