Маннозный рецептор C типа 2 предсказывает плохой исход при глиоме и связан с инвазивными фенотипами и изменениями, связанными с β-катенином/EMT

Краткое содержание

Публичные когортные анализы и эксперименты на основе клеток глиомы выявили MRC2 как плохой маркер прогноза, связанный с усиленной пролиферацией, миграцией, инвазией и изменениями, связанными с β-катенином/EMT.

Аннотация

Глиома остаётся смертельной злокачественной опухолью центральной нервной системы, и дополнительные биомаркеры, улучшающие прогностическую стратификацию и информирующие терапевтические исследования, всё ещё необходимы. В этом исследовании оценивали маннозный рецептор C-типа 2 (MRC2/Endo180) путём интеграции публичных транскриптомических когорт с валидацией in vitro . Профили экспрессии и совпадающие клинические аннотации были получены из Атласа генома рака (TCGA) и проекта Genotype-Tissue Expression (GTEx) для сравнения опухолей и нормального и панракового скрининга, а прогностические ассоциации дополнительно исследованы в когорте Китайского атласа генома глиомы (CGGA). Экспрессия MRC2 оценивалась в линиях клеток глиомы с помощью обратной транскрипции, количественного ПЦР (RT-qPCR) и иммуноблотирования, а стабильный нокдаун MRC2 был установлен в клетках U87 и U251 с использованием лентивирусных короткокосовых РНК (shRNA). Рост и клоногенность клеток оценивались с помощью CCK-8 и анализов формирования колоний, тогда как миграция и инвазия оценивались с помощью вставных тестов с пористыми мембранами. Маркеры, связанные с переходом CDK4, CDK6 и β-катенин/эпителиально-мезенхимальный переход (EMT), были проанализированы с помощью иммуноблоттинга. Во всех наборах данных MRC2 был повышен при глиоме, а более высокая экспрессия была связана с более низкой общей выживаемостью, выживаемостью, специфичной для заболевания, и интервалом без прогрессирования. In vitro истощение MRC2 снижало пролиферацию, клоногенность, миграцию и инвазию, сопровождаясь снижением уровня белков CDK4 и CDK6, а также изменениями β-катенина и связанных с EMT маркерами. В совокупности эти результаты подтверждают MRC2 в качестве кандидата на прогностический биомаркер, связанный с агрессивными фенотипами глиомы, и требуют дальнейших механистических и in vivo исследований.

Введение

Глиомы представляют собой наиболее распространённые первичные опухоли, возникающие в центральной нервной системе, и составляют значительную долю внутричерепных^{новообразований 1,2}. Эпидемиологические исследования оценивают частоту заболеваемости порядка нескольких случаев на 100 000 человек в год, при этом географические и половые различия сообщаются по^{популяциям 3,4}. Клинически глиомы охватывают широкий спектр поведения: глиомы низкой степени могут продолжаться длительно, тогда как заболевание высокой степени — особенно глиобластома — остаются быстро смертельными для большинства^{пациентов 5,6,7,8}. Современные классификации ВОЗ интегрируют гистологию с ключевыми молекулярными признаками (например, мутацией IDH, изменением промотора TERT, метилированием промоторов MGMT и ко-делецией 1p/19q), которые уточняют диагностику и формируют прогноз ^9,10. Несмотря на мультимодальное лечение, сочетающее хирургию, лучевую терапию и химиотерапию, рецидиви распространены, а долгосрочные результаты при высокостепенных опухолях остаются слабыми. Поэтому выявление дополнительных прогностических маркеров и целенаправленных уязвимостей остаётся неотложной задачей.

MRC2 (маннозный рецептор C-типа 2; также известный как Endo180/CD280/uPARAP) — трансмембранный член семейства лектиновых рецепторов^{C-типа 11}. Он обогащается стромными и иммунными компартментами, такими как фибробласты и макрофаги, и участвует в переменах внеклеточного матрикса (ЭКМ), ремоделировании, связанном с фиброзом, и взаимодействиях опухоли с^{микроокружением 12,13}. Структурно MRC2 содержит N-конечную область, богатую цистеином, домен фибронектина типа II, связывающий коллаген, несколько доменов, похожих на лектин, трансмембранный сегмент и цитоплазматический^{хвост 14,15}. Благодаря интернализации и ремоделированию коллагена MRC2 способствует подвижности клеток и вторжению тканей, а повышенный уровень MRC2 связан с агрессивным поведением в ряде видов рака, включая молочную железу, поджелудочную железу, простату, меланому и^{глиобластому} 11,14,16,17,18 . Предыдущие исследования также указывают на связи между MRC2 и проинвазивными сигнальными программами (например, путями, ассоциированными с TGF-β), активностью матрикс-металлопротеиназы и фенотипическими изменениями, похожими на EMT, а также роль в состояниях фибробластов и макрофагов, связанных с^раком, 17,18,19,20,21 . Однако клиническая значимость MRC2 при глиоме и функциональные последствия дисрегуляции MRC2 в клетках глиомы остаются неясными.

Хотя MRC2 был связан с ремоделированием внеклеточного матрикса и инвазивным поведением при ряде злокачественных опухолей, его клиническая значимость при глиоме не была систематически установлена в независимых транскриптомических когортах, а его фенотипно-связанные эффекты в клетках глиомы не оценивались в рамках интегрированной структуры, сочетающей анализ публичных наборов данных с функциональной валидацией. В этом исследовании, таким образом, выдвинула гипотезу, что MRC2 связан с неблагоприятными клиническими последствиями и злокачественными фенотипами при глиоме. Для решения этого вопроса были интегрированы панраковые скрининги, независимая валидация когорт глиомы и стабильные эксперименты с нокдауном в клеточных линиях глиомы для оценки прогностической значимости MRC2 и его связи с пролиферацией, миграцией, инвазией и изменениями маркеров, связанных с β-катенин/EMT. Поскольку MRC2 принадлежит к семейству маннозных рецепторов, а прогрессирование глиомы также формируется микроокружением опухоли, был включён дополнительный исследовательский анализ экспрессии MRC1 по статусу IDH для получения контекстуальной информации об иммунно-связанных различиях между подтипами глиом.

Новизна этой работы заключается в совместной оценке MRC2 на основе публичных наборов данных по глиоме и in vitro функциональных анализов, что обеспечивает дополняющие клинические и экспериментальные доказательства её значимости при глиоме. По сравнению с однокогортными анализами или исследованиями только с клетками, этот интегрированный рабочий процесс обладает рядом практических преимуществ. Включение TCGA, GTEx и CGGA позволяет проверять между когортами и снижает зависимость от одного набора данных. Кроме того, совмещение публичных когортных анализов с анализами на устранение клеток глиомы связывает клинические ассоциации с доказательствами на уровне фенотипа. Наконец, использование дополнительных показаний, включая RT-qPCR, иммуноблоттинг, CCK-8, формирование колоний и анализы с помощью пористых мембран, позволяет параллельно оценивать транскрипционные, белковые изменения, пролиферативные и связанные с подвижностью. Общий дизайн исследования и аналитический рабочий процесс изложены на рисунке 1. В совокупности эта стратегия повышает надёжность и биологическую интерпретируемость результатов по сравнению с биоинформатикой или одноразовыми методами.

Протокол

В этом исследовании использовались общедоступные, деидентифицированные наборы данных (TCGA, GTEx и CGGA) и установленные коммерческие линии соток. Не было задействовано новых человеческих участников, идентифицируемой информации о пациентах или образцов, полученных от пациентов. Все анализы проводились в соответствии с соответствующими институциональными и международными рекомендациями по использованию общедоступных данных. Поэтому для этого исследования не требовалось дополнительное институциональное этическое одобрение или информированное согласие.

1. Биоинформатический рабочий процесс и предварительная обработка данных

Профили экспрессии генов и сопоставленные клинические аннотации были получены из общедоступных ресурсов, включая Атлас генома рака (TCGA), проект Genotype-Tissue Expression (GTEx) и Китайский атлас геномного глиомы (CGGA). Матрицы экспрессии и клинические метаданные импортировались в R и гармонизировались согласно идентификаторам выборки. Дублирующиеся или несоответствующие записи были удалены, а образцы без необходимой информации о выживаемости исключены из анализа выживаемости. Для дальнейших анализов были извлечены значения экспрессии MRC2 и соответствующие клиникопатологические переменные. Для сравнения опухолевых норм экспрессия MRC2 сравнивалась между типами рака с использованием данных только TCGA, когда были доступны соответствующие нормальные ткани, и с использованием интегрированных данных TCGA–GTEx при необходимости дополнительных нормальных контролей. Для анализов, ориентированных на глиому, пациенты в когортах TCGA-LGG и CGGA были стратифицированы на группы с высокой и низкой экспрессией в зависимости от медианного уровня экспрессии MRC2 в когорте. Затем были проведены анализ выживаемости Каплана-Мейера, анализ временно-зависимых характеристик приемника (ROC) и регрессия пропорциональных опасностей Кокса для оценки прогностической значимости MRC2. Модели Кокса включали доступные ковариаты, такие как возраст, пол, степень ВОЗ и другие клиникопатологические переменные, в зависимости от полноты данных внутри каждой когорты. Анализ подгрупп проводился с учётом таких переменных, как возраст, гистологический подтип, степень ВОЗ, статус мутации IDH, статус коделяции 1p/19q и информация, связанная с лечением, где была доступна. Фигуры генерировались с использованием стандартных рабочих процессов статистического построения графиков в R и GraphPad Prism.

2. Анализ экспрессии и выживаемости панраковых препаратов

Экспрессия MRC2 сравнивалась между опухолями и нормальными тканями по типам рака с использованием наборов данных TCGA и GTEx. Различия визуализировались с помощью коробочных графиков и резюмировались с помощью радарных графиков. Для оценки связи между экспрессией MRC2 и общей выживаемостью (OS), специфической для заболевания выживаемостью (DSS) и интервалом без прогрессирования (PFI) между типами рака были проведены пропорциональные регрессионные анализы рисков. Коэффициенты опасности и соответствующие уровни значимости визуализировались с помощью лесных участков и тепловых карт.

3. Прогностическая валидация и анализ подгрупп в когортах глиомы

В когорте глиомы низкой степени TCGA (TCGA-LGG) пациенты были распределены на группы с высоким и низким уровнем экспрессии MRC2. Были проведены анализы выживаемости Каплана–Мейера для сравнения OS, DSS и PFI между группами. Для оценки прогнозной эффективности были сгенерированы кривые операционной характеристики приёмника (ROC), зависящие от времени. Для оценки независимого прогностического значения MRC2 были проведены одномерные и многомерные регрессионные анализы Кокса. Внешняя валидация проводилась с использованием набора данных CGGA, включая анализ выживаемости Каплана–Майера, анализ ROC и регрессию Кокса. Анализы подгрупп были проведены для оценки экспрессии MRC2 по клиникопатологическим переменным, включая возраст, степень опухоли, гистологический подтип, статус мутации IDH, статус кодирования 1p/19q и переменные, связанные с лечением.

4. Экспрессия MRC1 при глиомах IDH-мутантов и IDH-дикого типа

Связь между экспрессией MRC1 и статусом мутации IDH была оценена с помощью веб-платформы GlioVis и набора данных TCGA GBMLGG. Случаи были сгруппированы на основе аннотированного статуса IDH на глиомы IDH-мутантного и IDH-дикого типа. Экспрессия мРНК MRC1 была запрошена в выбранном наборе данных, а уровни экспрессии между двумя группами сравнивались с помощью встроенной функции статистического анализа платформы. Распределения выражений по группам отображались как сгенерированные платформой, а статистическая значимость определялась как P < 0,05.

5. Клеточная культура

Человеческие линий глиомы и нормальные человеческие астроциты были получены из установленных клеточных хранилищ. Клетки культивировались в модифицированной среде Eagle's Medium (DMEM) от Dulbecco, дополненную 10% сывороткой плода крупного рогатого скота (FBS) и поддерживаемые при 37 °C в увлажнённом инкубаторе, содержащем 5% CO₂ и примерно 95% относительной влажности. Клетки U87 и U251 были отобраны для экспериментов по потере функции, поскольку исходный скрининг в тестируемой панели клеток глиомы показал, что эти две линии экспрессировали относительно более высокие уровни MRC2 и, следовательно, подходят для функциональных анализов на основе knockdown.

6. Лентивирусное уничтожение MRC2

Короткие шпильки (шРНК), направленные на MRC2 и нетаргетируемую контрольную группу, были клонированы в лентивирусные векторы. Лентивирусные частицы получались путём котрансфекции HEK293T клеток с переносными плазмидами и упаковки плазмид с использованием стандартного трансфекционного реагента. Вирусные супернатанты собирались через 48 и 72 часа после трансфекции, центрифугировали при 2100 × г в течение 5 минут для удаления упаковочных клеток и остатка, а затем проходили через фильтр 0,45 мкм перед немедленным использованием или хранением при −80 °^{C 19}. Вируссодержащие супернатанты использовались сразу или алицитированы и хранятся при −80 °C. Повторяющиеся циклы замораживания и оттаивания были избежаны. Клетки глиомы были инфицированы лентивирусными частицами в присутствии полибрена. После заражения клетки были отобраны с помощью пуромицина для создания стабильных линий отстранённых клеток. Использовались следующие последовательности: sh-MRC2-1: 5′-GAAATGAATGAGCAGCAGCAAGAA-3′; sh-MRC2-2: 5′-CCGGTATTGCTAAGGTGTT-3′; sh-NC: 5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′.

7. Валидация нокдауна MRC2 с помощью RT-qPCR и иммуноблотирования

Общая РНК была извлечена с помощью реагента TRIzol, а кДНК синтезирована с помощью комплекта обратной транскрипции согласно инструкциям производителя. Количественная ПЦР проводилась с использованием химии SYBR Green при следующих циклических условиях: начальная денатурация при 95 °C в течение 30 секунд, затем 40 циклов при 95 °C в течение 5 с и 60 °C в течение 30 с, с анализом диссоциационной кривой в конце амплификации. Последовательности праймеров были следующими: MRC2 вперёд, 5′-GGCAAGGACAAAGAAGGCGTGT-3′; MRC2 реверс, 5′-CTTTGGTGACGTTGCTGCGCT-3′; GAPDH форвард, 5′-TCCACCCATGGCAAATTCC-3′; и реверс GAPDH — 5′-TCGCCCCACTTGATTTTGG-3′. Относительная экспрессия мРНК была рассчитана с помощью сравнительного метода C_t (2^-ΔΔCt) с GAPDH в качестве внутреннего^{контроля 20}. Иммуноблоттинг проводился параллельно для подтверждения нокдауна MRC2 на уровне белка. Для RT-qPCR были проанализированы три независимые биологические реплики, и каждый образец был выполнен в техническом тройном экземпляте.

8. Анализ клеточной пролиферации

Клеточная пролиферация оценивалась с помощью анализа CCK-8. Клетки были засеяны в пластины с 96 лунками с соответствующей плотностью и культивируемы в указанные периоды времени. В каждую точку времени в каждую скважину добавлялся реагент CCK-8 и инкубировался согласно инструкциям производителя, после чего поглощение измерялось на 450 нм с помощью считывателя микропластин. Было проведено как минимум три независимых биологических реплики.

9. Анализ формирования колоний

Клетки засеивались с низкой плотностью в пластины с шестью колодцями и культивировались в течение 10–14 дней. Колонии фиксировались 4% параформальдегидом в течение 15 минут при комнатной температуре и окрашены 0,1% кристаллическим фиолетовым цветом в течение 15 минут. Колонии промывались фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS), сушили на воздухе и подсчитывали вручную или с помощью программного обеспечения для анализа^{изображений 21}. Было проведено как минимум три независимых биологических реплики.

10. Анализы миграции клеток и инвазии

Миграция и инвазия клеток оценивались с помощью анализов с вставной пористой^{мембраной 22}. Для инвазионных анализов верхние вставки предварительно покрывались внеклеточным матриксным гелем; Для миграционных тестов использовались непокрытые вставки. Клетки, взвешенные в безсывороточной среде, были добавлены в верхнюю камеру, а среда с сывороткой помещалась в нижнюю камеру в качестве химиоаттрактанта. После инкубации немигрировавшие клетки на поверхности верхней мембраны аккуратно удалялись ватной палочкой. Клетки, мигрировавшие или проникшие в нижнюю поверхность, фиксировались 4% параформальдегидом в течение 15 минут, окрашены 0,1% кристаллическим фиолетовым в течение 15 минут, промывались холодным фосфорным буфером физиологическим раствором, сушили на воздухе и снимали под перевёрнутым микроскопом с увеличением ×200. Клетки были подсчитаны в пяти случайно выбранных микроскопических полях в каждой вставке. Было проведено как минимум три независимых биологических реплики.

11. Вестерн-блот анализ

Клетки были лизированы в буфере RIPA с дополнением ингибиторами протеаз, а концентрация белка определялась с помощью анализа BCA. Равные количества общего белка были разделены SDS-PAGE и перенесены в мембраны PVDF. Мембраны блокировались в 5% обезжиренном молоке в течение 1 часа при комнатной температуре и инкубировали с первичными антителами ночью при 4 °C. Для западного блотинга использовались следующие первичные антитела и рабочие разбавления: анти-MRC2 (1:5 000), анти-CDK4 (1:1 000), анти-CDK6 (1:2 000), анти-β-катенин (1:5 000), анти-E-кадгерин (1:10 000), анти-N-кадгерин (1:3 000) и анти-β-актин (1:5 000). После промывания мембраны инкубировали с помощью козьих IgG, противомышиных IgG, конъюгированных пероксидазой хрена или козьих антител IgG (1:5 000) в течение 1 часа при комнатной температуре. Сигналы визуализировались с помощью хемилюминесценции, а интенсивность полос измерялась и нормализовывалась до β-актина. Было проведено как минимум три независимых биологических реплики.

12. Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием R и GraphPad Prism. Кривые выживаемости сравнивались с помощью логарифмичного теста. Модели регрессии пропорциональных опасностей Кокса использовались для одномерного и многомерного анализа. Для экспериментов на основе клеток данные представлены как среднее ± SD. До параметрического тестирования нормальность оценивалась с помощью теста Шапиро–Уилка. Для нормально распределённых данных различия между двумя группами оценивались с помощью t-теста Студента, а сравнение между несколькими группами проводилось с помощью одностороннего ANOVA. Если предположения о нормальности не выполнялись, использовались соответствующие непараметрические тесты. Значения P были скорректированы для многократного тестирования с использованием процедуры ложного обнаружения Бенджамини–^{Хохберга 23,24}. Двусторонний коэффициент P < 0,05 считался статистически значимым.

Результаты

Панраковая экспрессия и прогностический ландшафт MRC2
Впервые были проведены панраковые анализы для характеристики паттерна экспрессии и прогностической значимости MRC2 при злокачественных заболеваниях человека. Сравнения на основе наборов данных TCGA и GTEx показали, что экспрессия MRC2 значительно различалась между опухолями и нормальными тканями при различных типах рака (рисунок 2A, 2B). Краткое изложение радарного гра...

Обсуждение

Стандартная терапия глиомы основана на максимально безопасной резекции с последующими лучевой терапией и химиотерапией, чаще всего с^{темозоломидом 4}. Тем не менее, диффузная инфильтрация часто ограничивает полное хирургическое удаление и способствует неизбежному рецидиву, особенно при заболевании высокой^{степени 3,25}. Несколько молекулярных признаков — включая метилирование промоторов MGMT, мутацию IDH, коде...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
анти-CDK4 антитела	Proteintech Group, Inc., США	11026-1-AP	Первичное антитело против западного блотинга. РРИД: AB_2078702.
анти-CDK6 антитела	Proteintech Group, Inc., США	66278-1-Ig	Первичное антитело против западного блотинга. РРИД: AB_2881661.
анти-Е-кадгериновые антитела	Proteintech Group, Inc., США	20874-1-AP	Первичное антитело против западного блотинга. РРИД: AB_10697811.
антитела к MRC2	Proteintech Group, Inc., США	86028-1-RR	Первичное антитело против западного блотинга. РРИД: AB_2879692.
анти-N-кадгериновое антитело	Proteintech Group, Inc., США	22018-1-AP	Первичное антитело против западного блотинга. RRID: AB_2813891.
Анти-&бета;-актиновые антитела	Proteintech Group, Inc., США	66009-1-Ig	Антитела контроля нагрузки против западного блотинга. РРИД: AB_2687938.
Анти-&бета;катениновый антител	Proteintech Group, Inc., США	51067-2-AP	Первичное антитело против западного блотинга. РРИД: AB_2086128.
Белковый тест BCA	Beyotime Biotechnology, Китай	P0012	Белковый тест BCA для определения концентрации белка.
Набор для подсчёта клеток-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories, Япония	CK04-500T	Анализ жизнеспособности/пролиферации клеток.
Система хемилюминесцентной визуализации	Uvitec Limited, Франция	Продвинутое руководство Альянса Q9	Система получения изображений для обнаружения западных блотов.
CO2 инкубатор	Универсальное лабораторное оборудование	Не указано	Увлажнённый CO2 инкубатор, используемый для культивирования клеток при 37°; C и 5% CO2.
Раствор кристаллической фиолетовой (0,1%)	Beyotime Biotechnology, Китай	C0121-100 мл	Раствор для окрашивания кристаллической фиолетовой краски используется с рабочей концентрацией 0,1%.
DMEM, высокий уровень глюкозы	Gibco, Thermo Fisher Scientific, США	C11995500BT	Базальная среда для культуры клеток глиомы.
Сыворотка плода крупного рогатого скота (FBS)	ExCell Bio, Китай	FSP500	Сывороточная добавка для культивирования клеток.
GlioVis	gliovis.bioinfo.cnio.es	Не применимо	Веб-платформа для визуализации и анализа наборов данных по экспрессии опухолей мозга, особенно глиом.
GraphPad Prism	GraphPad Software, США	Версия 10.4.0	Программное обеспечение для статистического анализа и графиков. RRID: SCR_002798.
HEK293T ячейки	Коллекция типовой культуры Китайской академии наук, Шанхай, Китай	GNHu43	Упаковка клеточной линии, используемая для производства лентивируса. РРИД: CVCL_0063.
HRP-конъюгированный козёлый антимышиный IgG (H+L)	Proteintech Group, Inc., США	SA00001-1	Вторичные антитела против западного блотинга. РРИД: AB_2722565.
HRP-конъюгированный козий антикроличий IgG (H+L)	Proteintech Group, Inc., США	SA00001-2	Вторичные антитела против западного блотинга. РРИД: AB_2722564.
Человеческие астроциты	Коллекция типовой культуры Китайской академии наук, Шанхай, Китай	Публично недоступно	Нормальные человеческие астроциты, используемые в качестве неопухольного контроля; Каталожный номер недоступен.
Инвертированный микроскоп	Универсальное лабораторное оборудование	Не указано	Инвертированный микроскоп, используемый для получения изображений в анализах миграции и инвазии.
Матригелева матрица	Корнинг, США	354234	Матрица базальных мембран, используемая для покрытия вставок для инвазионных анализов.
Считыватель микропластин	Универсальное лабораторное оборудование	Не указано	Считыватель микропластин, используемый для измерения поглощения на 450 нм в анализах CCK-8.
Набор для подготовки геля PAGE, 10%	EpiZyme, Китай	PG212	Набор для подготовки геля SDS-PAGE.
Набор для приготовления геля PAGE — 7,5%	EpiZyme, Китай	PG111	Набор для подготовки геля SDS-PAGE.
Параформальдегидный раствор (4%)	Beyotime Biotechnology, Китай	P0099-100 мл	4% параформальдегид фиксирует для формирования колоний и анализов миграции/вторжения.
Раствор пенициллина-стрептомицина	Gibco, Thermo Fisher Scientific, США	15140163	Антибиотик для культивирования клеток.
Polybrene	Beyotime Biotechnology, Китай	C0351-1 мл	Раствор гексадиметрина бромида (10 мг/мл) используется для облегчения трансдукции лентивируса.
Белковый маркер с предварительным окрашиванием	Elabscience, Китай	E-IR-R331	Маркер молекулярной массы белка.
PrimeScript RT Reagent Kit	Takara Bio Inc., Япония	RR047A	Набор для обратной транскрипции для синтеза кДНК.
Пуромицин	Beyotime Biotechnology, Китай	ST551-10 мг	Пуромицин дигидрохлорид, используемый для отбора стабильных клеток для отбора.
Мембрана PVDF	Beyotime Biotechnology, Китай	FFP20	Гидрофильная мембрана PVDF (0,45 и микро; m) для переноса западного блота.
R	Фонд R по статистическим вычислениям, Австрия	Версия 4.5.1	Среда статистических вычислений, используемая для биоинформатического анализа. РРИД: SCR_001905.
Буфер лизиса RIPA	Beyotime Biotechnology, Китай	P0013B	Буфер лизиса RIPA (сильный) для экстракции белка.
Буфер загрузки SDS-PAGE (5 и раз;)	Beyotime Biotechnology, Китай	P0015L	Буфер загрузки образцов белка.
SYBR Premix Ex Taq II	Takara Bio Inc., Япония	RR066A	qPCR мастер-микс.
Вставка Transwell, 8.0-и микро; m размер пор	Корнинг, США	3422	Вставки для клеточной культуры с 8.0 & micro; мембрана поликарбоната размером с m-поры; стандартный формат на 24 лунки для анализов миграции и инвазии.
Реагент Тризол	Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, США	10296010CN	Реагент для экстракции РНК.
Глиомные клетки U251	Национальная коллекция аутентифицированных клеточных культур, Китай	SCSP-559	Линейка человеческих глиомных клеток, используемая для анализов и функциональных анализов. РРИД: CVCL_0021.
Клетки глиомы U87	Национальная коллекция аутентифицированных клеточных культур, Китай	SCSP-5432	Линейка человеческих глиомных клеток, используемая для анализов и функциональных анализов. РРИД: CVCL_0022.