Это ретроспективное исследование было рассмотрено и одобрено Комитетом по медицинской этике больницы Баоцюаньлин группы Бэйдахуан 9 мая 2025 года (Одобрение No BQH-BDHG-EC-2025-056), и информированное согласие было отменено. Исследование было проведено в соответствии с Декларацией Хельсинки и политикой управления конфиденциальностью данных больницы, и вся личная информация была снята с идентификации перед анализом. Исследовательские инструменты, использованные в этом исследовании, перечислены в Таблице материалов.
1. Дизайн исследования
Это было одноцентровое ретроспективное исследование с ретроспективным сечением, проведённое в отделении эндокринологии и метаболизма больницы Баоцюаньлин группы Бэйдахуан, включавшее 126 подходящих пациентов с диабетом 2 типа, которые посещали больницу с 1 января 2022 года по 31 декабря 2024 года. Дата амбулаторного визита или госпитализации определялась как дата индекса, а результаты лабораторных анализов, полученные в эту дату, использовались в качестве базового уровня. Измерения экспозиции и результатов были получены в один момент времени или в течение 7 дней до или после даты индекса. Все данные были получены из исторических медицинских записей без какого-либо вмешательства.
Отчет был подготовлен в соответствии с заявлением «Укрепление отчетности о наблюдательных исследованиях в эпидемиологии» (STROBE)11 для поперечных исследований, а исследовательский вопрос, переменные, статистические методы и стратегии анализа чувствительности были заранее определены, а результаты представлены согласно заранее заданному плану.
2. Исследуемая популяция
Исследуемая группа была проверена последовательно в системе электронных медицинских карт согласно заранее установленным критериям включения и исключения. Критерии включения включали возраст 18–80 лет, задокументированный диагноз сахарного диабета 2 типа в медицинской карте, доступные результаты по анализу глюкозы натощак, инсулина натощак, HS-CRP, альбумина мочи, креатинина мочи и креатинина в сыворотке в течение 7 дней до или после даты индекса, eGFR ≥ 60 мл/мин/1,73м 2 (CKD-EPI 2021), свежесобранный образец мочи, обработанный согласно стандартной процедуре тестирования, а также полные клинические данные и ключевые ковариаты или отсутствующая пропорция, соответствующая заранее заданным критериям обработки.
Критерии исключения включали признаки острого воспаления или инфекции, HS-CRP > 10 мг/л, инфекции мочевыводящих путей, гематурии или пиурии, беременности или лактации, точный анамнез недиабетических заболеваний почек или визуализационные признаки структурного заболевания почек, UACR ≥ 300 мг/г, системную глюкокортикоидную терапию в течение предыдущих 3 месяцев, острые сердечно-сосудистые или цереброваскулярные события или крупные операции в течение предыдущих 3 месяцев, и злокачественные опухоли, проходящие химиотерапию или иммунотерапию.
После исключения записей, не соответствующих критериям, был получен окончательный образец. При двухстороннем α = 0,05 и мощности 80% итоговый размер выборки 126 в этом исследовании соответствовал фиксируемому абсолютному коэффициенту корреляции примерно 0,25. Это утверждение было лишь пост-хок описанием обнаруживаемого диапазона эффектов и не представляло собой априорную оценку размера выборки. Анализы, включающие расчёты HOMA-IR, были ограничены участниками, не получающими экзогенную инсулиновую терапию, и размер выборки этой подгруппы был зафиксирован как наблюдается.
3. Источники данных и процедуры сбора
Согласно единому словару данных, исследователи извлекли демографическую информацию (возраст, пол), продолжительность диабета, рост, вес, статус курения, употребление алкоголя, систолическое артериальное давление (SBP) и диастолическое артериальное давление (DBP) (второе измерение после двух измерений на дате индекса), записи о сопутствующих заболеваниях и информацию о лекарствах из электронных медицинских записей.
К переменным медикаментов относились ингибиторы системы ренинангиотензина (RASi), ингибиторы натрий-глюкозных котранспортеров 2 (SGLT2i), агонисты рецепторов пептида-1 глюкагона (GLP-1RA) и статины; непрерывное использование в течение ≥ 3 месяцев до того, как дата индекса была зарегистрирована как «использование». Продолжительность диабета определялась как количество лет от диагноза до даты индекса. Индекс массы тела (ИМТ) рассчитывался как вес (кг)/рост 2 (м2).
Лабораторные испытания проводились на единой платформе и подлежали внутреннему контролю качества и внешней оценке. hs-CRP измерялся с помощью высокочувствительной иммунотурбидиметрии с пределом обнаружения ≤ 0,1 мг/л; FINS измерялся хемилюминесценцией с калибровкой внутрипартийной системы с использованием калибраторов; FPG измерялась методом гексокиназы; гликированный гемоглобин (HbA1c) измерялся с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии; Альбумин мочи измерялся с помощью иммунотурбидиметрии, креатинин мочи — ферментативным методом, а соотношение экспрессировалось в мг/г; Креатинин в сыворотке измерялся ферментативным методом с отслеживаемой калибровкой по IDMS.
Все образцы тестировались в течение 2 часов после сбора или после краткосрочного хранения при 4 °C. Если для одного визита было доступно несколько результатов, приоритет становился результатом, полученным в тот же день, что и дата индекса.
4. Определения переменных и измерения
Переменные экспозиции включали hs-CRP и HOMA-IR. HS-CRP экспрессировался в мг/л, включался в первичные анализы как непрерывная переменная и классифицировался на выборочные тертилы для анализа трендов. FINS выражался в μU/mL, FPG — в ммоль/л, а формула расчёта для HOMA-IR быласледующей: 6:
HOMA - IR = (ПЛАВНИКИ FPG)/22,5
Анализы с HOMA-IR ограничивались участниками, не использующими экзогенный инсулин, и которые имели результаты FPG и FINS в тот же день. В этой подгруппе HOMA-IR и hs-CRP были включены вместе в многомерную модель. UACR рассчитывался с использованием альбумина мочи и креатинина мочи в том же образце и экспрессировался в мг/г 12. Креатинин мочи был гармонизирован с граммами для расчета соотношения при необходимости. В этом наборе данных ни одно значение UACR не было равным нулю. Для уровней альбумина мочи ниже нижнего предела обнаружения (<2,0 мг/л) лаборатория сообщала результат как <2,0 мг/л, и эти значения ниже обнаружения были заменены на половину нижнего предела обнаружения (1,0 мг/л) до анализа данных. Для уменьшения влияния правого смещения применялось естественное логарифмическое преобразование, и в качестве основного результата использовалась ln(UACR).
Если в течение 7 дней до или после даты индекса у одного участника было доступно несколько тестов мочи, сохранялся только образец, ближе всего к дате индекса, обозначенный как утренняя моча или первая пустота. Если был доступен только случайный образец мочи, тип выборки регистрировался, а анализ чувствительности ограничивался утренним подмножеством мочи. Микроальбуминурия определялась как UACR ≥ 30 мг/г и использовалась как бинарный суррогатный исход в логистической регрессии.
eGFR рассчитывался с использованием уравнения креатинина CKD-EPI2021 13. Когда креатинин в сыворотке сообщался в мкмоль/л, он преобразовывался в мг/дл (мкмоль/л ÷ 88,4) до расчёта. eGFR экспрессировался в mL/min/1,73m² и использовался как непрерывный вторичный результат в анализах чувствительности. Согласованность результатов была изучена в подгруппе eGFR 60–89 мл/мин/1,73м2 . Первичная модель была предварительно определена с учётом возраста, пола, продолжительности диабета, SBP и HbA1c, а модели чувствительности дополнительно включали ИМТ, статус курения, употребление алкоголя, применение RASi, применение SGLT2i, GLP-1RA и использование статинов.
5. Управление данными и предварительная обработка
После деидентификации данные экспортировались как аналитический набор данных, а краткий словарь данных с суммированием названий переменных, определений, единиц и правил кодирования аналитических переменных был представлен в дополнительной таблице 1 . Дублирующиеся записи объединялись по дате индекса, а ключевые переменные проверялись на логическую согласованность.
Когда были доступны и временные метки EMR, и LIS, время сбора образцов LIS использовалось как основная метка для выравнивания времени; если это было невозможно, использовалось время отчёта/верификации по LIS, тогда как дата посещения EMR использовалась только для определения даты индекса. Когда в заранее заданном окне было доступно несколько подходящих результатов, сохранялся результат, ближайший к дате индекса; Если два результата были одинаково близки, приоритет отдавался результату в тот же день, а образцы мочи дополнительно отбирались согласно заранее заданному правилу типа образца.
Недостающие значения обрабатывались согласно заранее заданной иерархической стратегии: если пропущенная доля любого отдельного ковариата составляла ≤ 10%, первичный анализ использовал подход с полным случаем; Если показатель превышал 10%, выполнялось многократное импутирование с помощью цепных уравнений с 20 импутациями, при этом модель импутации включала экспозиции, исход и все ковариаты, а впутенные результаты сравнивались с результатами полного случая.
Участники с HS-CRP > 10 мг/л или признаками острого воспаления были исключены из первичных анализов. Непрерывные переменные оценивались для распределения с помощью графиков теста Шапиро-Уилка и Q-Q, и UACR был естественно преобразован в логарифми. Если hs-CRP или HOMA-IR показывали выраженную смещённость, в анализе чувствительности проводились преобразования ранга или логарифмата. Категориальные переменные кодировались как бинарные или порядковые переменные согласно заранее заданным правилам. Влиятельные наблюдения были выявлены по абсолютным студентизированным остаткам > 3 или расстоянию Кука > 4/n, а первичные модели повторялись после исключения этих наблюдений в анализе чувствительности.
Заранее определённые анализы подгрупп включали половые подгруппы и подгруппы на основе HbA1c < 7% и ≥ 7%. Заранее определённые анализы чувствительности включали ограничение утренних образцов мочи, добавление медикаментозных переменных в первичные модели, исключение влиятельных наблюдений, использование устойчивых стандартных ошибок вместо стандартных и ограничение участниками с eGFR 60–89 мл/мин/1,73м 2.
6. Статистический анализ
Все статистические анализы проводились в версии R 4.3.2. Непрерывные переменные оценивались для распределения с помощью графиков теста Шапиро-Уилка и Q-Q. Нормально распределенные данные выражались как среднее ± стандартное отклонение, ненормально распределенные данные — как медиана (межквартильный диапазон), а категориальные переменные — как частота и процент.
Исходные характеристики описывались в зависимости от того, был ли достигнут порог микроальбуминурии, а сравнения между группами проводились с помощью независимого теста t, теста Манна-Уитни U, теста хи-квадрата или точного теста Фишера, в зависимости от типа переменных и распределения. Был проведён анализ корреляции ранга Спирмана между ln-UACR и hs-CRP, а также между ln-UACR и HOMA-IR, при этом были рассчитаны коэффициенты корреляции и их 95% доверительные интервалы, при этом доверительные интервалы оценивались по преобразованию Фишера z. Корреляционные графики были представлены как рассеяные диаграммы, наложенные на локально взвешенные регрессионные линии, чтобы показать тенденцию.
Были построены многомерные линейные регрессионные модели с использованием ln-UACR в качестве зависимой переменной. В подгруппе, не использующей экзогенный инсулин, в модель были включены hs-CRP и HOMA-IR вместе с корректировкой по возрасту, полу, продолжительности диабета, SBP и HbA1c; в общей выборке была установлена отдельная модель, включающая только HS-CRP, для изучения общей корреляции. Были представлены стандартизированные коэффициенты регрессии, 95% доверительные интервалы и значения p, а также изменение коэффициента определения до и после включения переменных воздействия. Коллинеарность оценивалась с использованием коэффициентов инфляции дисперсии с порогом 5.
После того как HS-CRP и HOMA-IR были классифицированы на выборочные тертили, определяемые эмпирическими 33,3-м и 66,7-м процентилями соответствующей аналитической выборки (hs-CRP: общая выборка для общего анализа и неинсулиновая подгруппа для подгрупп/совместного анализа; HOMA-IR: только неинсулиновая подгруппа), при T1 ≤ нижней пороге, T2 > нижней пороге ≤ верхней пороговой, а T3 > верхней пороговой, медианное значение каждого тертильного значения вводилось как непрерывная переменная для проверки линейного тренда, а также были представлены скорректированные предельные средние LN-UACR по тертилям и p-значение для тренда.
В исследовательском анализе высокий HS-CRP и высокий HOMA-IR были определены верхними третильными пороговыми значениями, полученными из неинсулиновой подгруппы для анализа суставов 2 × 2, а также была построена группировка 2 × 2 для сравнения скорректированных предельных средних LN-UACR между группами. Был добавлен термин взаимодействия для проверки статистического взаимодействия, и была зафиксирована скорректированная средняя разница между группами «высокий × высокий» и «низкий × низкий»; Этот анализ не интерпретировался причинно.
Для анализа результатов суррогатной матери была построена многомерная логистическая регрессия с достижением порога микроальбуминурии в качестве зависимой переменной, при этом соотношение шансов и 95% доверительный интервал, соответствующие каждому 1 стандартному увеличению HS-CRP или HOMA-IR.
Многомерная линейная регрессия была построена с eGFR в качестве зависимой переменной для изучения направления связи между воздействиями и скоростью фильтрации клубочков.
Анализ чувствительности включал ограничение утренних образцов мочи, дополнительную корректировку на ИМТ, статус курения, употребление алкоголя и четыре категории лекарств в первичных моделях, исключение влиятельных наблюдений, использование стандартных ошибок Хубера-Уайта и повторение первичных моделей в ограниченной популяции с UACR < 300 мг/г и eGFR ≥ 60 мл/мин/1,73м 2. Модельная диагностика использовала остаточные и фитированные графики, Q-Q-графики и тест Шапиро-Уилка для оценки остаточной нормальности и линейности, а также тест Бройша-Пагана для оценки гомоскедастичности. Если присутствовала гетероскедастичность, фиксировались устойчивые стандартные ошибки; Если была обнаружена чёткая нелинейность, в анализе чувствительности вместо непрерывных переменных использовались тертильные индикаторные переменные.
Корреляционные и регрессионные анализы проводились с помощью пакета статистики, коллинеарность оценивалась с помощью пакета автомобиля, надёжные стандартные ошибки получались с помощью пакетов сэндвича и lmtest, многократная импутация была выполнена с помощью пакета мышей, а показатели генерировались с помощью пакета ggplot2. Все тесты были двусторонними, порог значимости был установлен на уровне α = 0,05, а также зафиксированы 95% доверительные интервалы.