Стандартизированное увеличение подвздошного мочевого пузыря для энтероцистопластики у крыс с помощью лапаротомии по средней линии

Краткое содержание

Этот протокол описывает стандартизированную модель энтероцистопластики крыс с использованием педикулярного, васкуляризированного и детубуляризированного подвздошного патча с временно внешней отклонением мочи через канюльную трубку для достижения воспроизводимого увеличения мочевого пузыря.

Аннотация

Увеличение мочевого пузыря с помощью сегментов кишечника остаётся основной реконструктивной процедурой для пациентов с низкой вместимостью или плохо подчинённым мочевым пузырём, когда консервативные методы лечения не помогают. Несмотря на клиническую значимость, прогресс экспериментов и углублённые исследования ограничены отсутствием стандартизированных, воспроизводимых протоколов, которые надежно моделируют хирургические принципы в контролируемых доклинических условиях. Здесь мы представляем пошаговый протокол энтероцистопластики крыс, который использует васкуляризированный, детубуляризированный подвздошной пластырь в качестве педикулярного лоскута для усиления родного мочевого пузыря. Процедура включает лапаротомию по средней линии, контролируемое обнажение и стабилизацию мочевого пузыря с помощью удерживающих швов, отвлечение мочи через экстерьерную канюльную трубку Фолея, выделение короткого подвздошного сегмента с целостной мезентериальной педикулой, детубуляризацию и беснатяжённый анастомоз стенки мочевого пузыря. Особое внимание уделяется поддержанию перфузии брыжейки, предотвращению перекрута педикул, обеспечению водонепроницаемости шва и обеспечению пропустотности катетера — что критически важно для успеха процедуры и воспроизводимости. Репрезентативная интраоперационная валидация с использованием гиперспектральной визуализации (HSI) у восьми крыс, не имевших выживания, показала сохранение оксигенации тканей и перфузию сегмента кишечника после ключевых этапов операции, что подтверждает жизнеспособность тканей в конце этой процедуры. Таким образом, этот протокол предоставляет стандартизированный экспериментальный подход к воспроизводимой хирургической реализации энтероцистопластики у крыс. Потенциальные дальнейшие применения модели включают изучение метаболических и электролитных изменений, восприимчивости к инфекциям, образования слизи и индуцирования дисплазии или злокачественности, и эти вопросы ещё предстоит рассмотреть в будущих исследованиях выживаемости.

Введение

Физиологическая функция мочового пузыря является основой поддержания высокого качества жизни, поскольку эффективное хранение мочи и мочеиспускание критически важны для недержания, социального благополучия и общего здоровья. Нарушения, влияющие на функцию мочевого пузыря, могут привести к значительной заболеваемости, включая недержание мочи, рецидивирующие инфекции, нарушение почек и глубокое негативное влияние на повседневную жизнь.

Как врождённые, так и приобретённые патологии мочевого пузыря могут вызывать значительные функциональные нарушения, часто требуя хирургического вмешательства, когда консервативное и фармакологическое лечение оказывается неэффективным. Врождённые аномалии, такие как задний уретральный^{клапан 1}, экстрофия мочевого пузыря и клоаки, а также^{эписпадия 2,3}, часто связаны с низкой вместимостью и плохо подтянутым мочевым пузырём, что увеличивает риск разрушения верхних мочевыводящих путей. Аналогично, неврологические заболевания, включая миелодисплазия⁴, рассеянный^{склероз 5} и повреждение^{спинного мозга 6}, часто приводят к нейрогенной дисфункции мочевого пузыря, нарушая как механизмы накопления, так и опорожнения. Кроме того, инфекционные этиологии, такие как^{туберкулез 7} и^{шистосомоз 8}, могут вызывать фиброз стенки мочевого пузыря, снижая комплаенс и предрасполагая к вторичным осложнениям. В рефрактерных случаях увеличение мочевого пузыря служит эффективной стратегией для увеличения ёмкости хранения, снижения внутривезикального давления и сохранения функции почек, что в конечном итоге повышает качество жизни и смягчает долгосрочные осложнения.

Согласно рекомендациям Американской урологической ассоциации (AUA) по гиперактивному мочевому пузыру, увеличение мочевого пузыря (энтероцистопластика) рекомендуется пациентам с ослабленной ёмкостью мочевого пузыря, плохой комплаенсностью или гиперактивностью детрузора, устойчивой к консервативному^{ведению 9}. Изначально описанная Тиццони и Фогги в 1888 году с^{использованием модели} 10 у собак, а позже адаптированная для людей фон Микуличем в 1899^{году 11}, энтероцистопластика остаётся стандартным хирургическим подходом для снижения давления в мочевом накоплении и снижения рисков повреждения почек и недержания, связанных с различными нарушениями мочевого пузыря, включая нейрогенный мочевой пузырь, экстрофию мочевого пузыря и задние уретральные^{клапаны 12, 13}.

Традиционная техника энтероцистопластики предполагает бивалирование мочевого пузыря либо в корональной, либо сагиттальной плоскости вниз к тригоне, затем включение детубуляризированного^{сегмента 12} кишечника. Подвздошная клетка — это наиболее часто используемый сегмент кишечника, обычно он извлекается на расстоянии 25–40 см проксимально от илеоцекального^{клапана 12}. Когда подвздошная кишка неподходящая, сигмовидная кишка служит предпочтительным^{вариантом 12}.

Хотя эта процедура обеспечивает долгосрочную устойчивость и высокий уровень удовлетворённости^{пациентов 14}, введение желудочно-кишечной ткани в мочевыводящие пути имеет заметные недостатки, включая метаболические нарушения, образование камней в мочевом пузыре и повышенный риск злокачественных^{заболеваний} 15,16,17.

Учитывая эти возможные осложнения, существует критическая необходимость в контролируемых исследованиях для изучения основных механизмов, совершенствования хирургических техник и оценки альтернативных материалов для усиления. Модель грызуна предоставляет структурированную и воспроизводимую атмосферу для изучения этих аспектов, позволяя исследователям анализировать метаболические адаптации после увеличения, включая кислотно-щелочный баланс и нарушения электролитов. Кроме того, он позволяет исследовать ремоделирование ткани мочевого пузыря со временем, давая представление о фиброзе, регенерации уротелиа и интеграции усиленных сегментов. Кроме того, учитывая повышенный риск злокачественных заболеваний, связанный с энтероцистопластикой, модель грызуна предоставляет возможность изучать гистопатологические изменения со временем и выявлять ранние маркеры канцерогенеза. Важно, что такая модель также способствует исследованиям применений биоматериалов и тканевой инженерии, потенциально открывая путь к альтернативным материалам для усиления с меньшими канцерогенными и иммуногенными^{рисками 12}.

Хотя были зафиксированы экспериментальные модели увеличения мочевого пузыря у грызунов и других видов, отсутствует прямо сопоставимый, стандартизированный пошаговый протокол подвздошной энтероцистопластики у крыс с помощью лапаротомии средней линии. Ранние исследования на крысам утвердили классическую цистопластику с аугментацией как экспериментальную модель и описывали такие варианты, как серомышечная и лазерно-ассистированная^{энтероцистопластика} 18,19,20. Последующие исследования были посвящены долгосрочным гистопатологическим и бактериологическим изменениям, развитию опухолей, физиологии транспорта и функциональным результатам, а также были изучены дополнительные реконструктивные модификации, такие как частичная трансплантация мочевого пузыря и фотодинамическая замена слизистой кишечника^{уротелием (21,22,23,24,25,26,27}. В совокупности эти исследования показывают, что модели увеличения крыс существуют, но они разнородны по масштабу и в основном сосредоточены на осуществимости, биологических последствиях, физиологии или специфических реконструктивных^{модификациях 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27}. Поэтому цель этой работы — представить подробное процедурное руководство по проведению стандартизированной энтероцистопластики с помощью лапаротомии средней линии у крыс. Протокол установлен в условиях без выживания. Применения, требующие длительного наблюдения, вполне реалистичны, но могут потребовать адаптации этого протокола к условиям исследования выживаемости с послеоперационным восстановлением и длительным наблюдением. Это может включать оценку функциональных результатов, механизмы послеоперационного отказа, регенерацию тканей со временем или интеграцию тканевой инженерии.

Текущая модель была разработана для воспроизведения ключевых технических принципов клинической энтероцистопластики в контролируемых крысных условиях, оставаясь при этом осуществимой для стандартизированной экспериментальной реализации. Был выбран детубуляризированный подвздошный пластырь, поскольку детубуляризация снижает внутреннюю сократимость кишечника и лучше отражает реконструктивный принцип, широко используемый в клинической аугментации. Использование педикированного, васкуляризированного сегмента позволяет сохранять перфузию брыжей и напрямую оценивать жизнеспособность тканей во время и после подготовки трансплантата. Внешняя мочевыводящая отклонение через канюльную трубку Фоли была внедрена для контролируемого дренажа мочевого пузыря во время процедуры и облегчения стандартизированной интраоперационной оценки реконструированного сегмента.

Протокол

Все процедуры, описанные в этом документе, проводились в аккредитованных учреждениях и получили одобрение институционального комитета по уходу и использованию животных (IACUC) Регионального совета Баден-Вюртемберга в Карлсруэ, Германия (35-9185.81/G-62/23). Экспериментальные животные обслуживались в соответствии с институциональными протоколами и в соответствии с немецким законодательством, регулирующим благополучие животных, а также в соответствии с руководящими принципами, установленными Советом Европейского сообщества (2010/63/EU) и руководящими принципами ARRIVE. Самцы крыс Спраг-Доули (n = 8), возрастом 8–12 недель и весом 400 г, полученные в лабораториях Жанвье, использовались после недельного периода акклиматизации.

1. Анестезия и обезболивание

1. Индуцировать анестезию, поместив животное в индукционную камеру и используя 4 объёма изофлурана, разбавленного 100% кислородом при расходе 5 л/мин.
2. Для диссоциативной анестезии, анестезии и седации вводите подкожную инъекцию 100 мг/кг кетамина (10% раствора; 0,35 мл на 400 г массы тела) и 4 мг/кг ксилазина (разбавление 2% раствора 1:10; 0,75 мл при 400 г) ^{28, 29, 30, 31}при потере рефлекса выпрямления. Вводите все анестетики и анальгетики в зависимости от мг/кг массы тела.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Любые указанные объёмы инъекций являются приблизительными примерами для крыс массой тела 400 г и должны рассчитываться индивидуально для каждого животного.
3. Подтвердите глубину обезболивающей по отсутствию сильного сжатия пальцев с помощью щипцов и нанесите мазь для роговицы для предотвращения высыхания роговицы.
4. Достичь дополнительной обезболивающей с помощью подкожной инъекции 5 мг/кг карпрофена (разбавление 5% раствора 1:10; равно 0,35 мл на 400 г).
5. Поддерживайте наркоз с помощью дополнительного изофлурана с помощью неонатальной маски для лица по мере необходимости на протяжении всей операции.
6. Проводите внутреннюю температуру, помещая животное на грелку при температуре 40°C. Кроме того, установите датчик температуры прямой кишки, но это не обязательно.
7. Обеспечить периоперационную и послеоперационную поддержку жидкости путём подкожного введения изотонного физиологического раствора при температуре 37 °C 25 мл/кг в час (10 мл на 400 г), разбиваемого на инъекции каждые 20 минут. Это должно включать финальную инъекцию после закрытия брюшной полости, рассчитанную на ожидаемый оставшийся наркоз обычно в течение 30 минут.

2. Подготовка места эксплуатации и приборов

1. Подготовьте стол для чистки с инструментами и материалами, включая:
   Атравматические щипцы для подготовки
   Тупые зажимы для оверхолта
   Ножницы для приготовления
   Двойной нересорбируемый монофиламентный шов 6-0
   Однорукий быстро ресорбируемый полифиламентный шов 4-0
   Катетер 20 калибра как импровизированный катетер Фолея
   Увлажнённые ватные палочки
   Марлевые мазки
   Изотонный раствор хлорида натрия
2. Посадите животное на хирургический аппарат для воздействия грызунов, как описано в предыдущих^{публикациях 30,31}. Сбрийте область доступа к брюшной полости и стерилизуйте её, проводя чередующиеся тройные процедуры с использованием 70% этанола и повидона-йода или хлоргексидина антисептических тампонов, работая концентрическими кругами от места разреза наружу. Повторите три раза.
3. Накройте животное стерильными шторами и оставьте открытой только хирургическое поле.

3. Хирургический доступ с помощью лапаротомии по средней линии

1. Проведите среднюю абдоминальную лапаротомию длиной примерно 5 см с помощью тонких ножниц и разрезите белую линию, продольно в средней линии, чтобы получить доступ к брюшной полости.
2. Используйте крючки для подготовки и влажные компрессы, чтобы оттянуть брюшную стенку и открыть брюшную полость.

4. Идентификация и подготовка тонкого кишечника и мочевого пузыря (рисунок 1)

1. Определите тонкий кишечник и аккуратно мобилизуйте петлю с помощью атравматических щипцов и увлажнённых ватных палочок (рисунок 1A.1).
2. Приблизительно определите петлю тонкой кишки к мочевому пузыру, чтобы определить правильно расположенный
3. сегмент тонкого кишечника длиной примерно 12 мм для увеличения (рисунок 1A.2). Это должна быть первая механически подходящая петля кишечника не менее 2 см проксимально от илеоцекального соединения.
4. Мобилизуйте мочевой пузырь, рассекая окружающую соединительной ткани с помощью подготовительных ножниц (рисунок 1B).
5. Размещайте стойки на стенке мочевого пузыря в позициях 3, 6, 9 и 12 часов с помощью одноруких нерезорбируемых монофильных швов 4-0 (рисунок 1C.1–1C.5).
6. Захватите купол мочевого пузыря с помощью атравматических щипцов и создайте примерно 4 мм поперечный дефект между швами с помощью ножниц для препарирования (рисунок 1D.1–1D.2).
7. Замените 4 шва, чтобы задействовать срезанный край: последовательно протягивайте каждый шов сквозь него. По одному шву за раз, направляйте иглу вокруг края разреза, откусывайте с световой стороны прямо по краю, затем выходите через соседний серомышечный слой, чтобы закрутить, убрать и обнажить край (рисунок 1E.1–1E.6).

5. Установка и фиксация трубки канюли Фоли для внешнего отвода мочи (рисунок 1)

1. Введите внутривенную канюлю (G20) через просвет мочевого пузыря и продвигайте её от внутрисветовой стороны через брюшную стенку к внешней стороне (рисунок 1F.1–1F.3).
2. Вынимите металлическую канюлю из трубки, стабилизируя трубку с помощью щипцов в виде импровизированного катетера Фолея (рисунок 1F.4–1F.5).
3. Чтобы закрепить фолеевую трубку канюли на коже, через просвет трубки пропустите нересорбируемый монофиламент 4-0 и закрепите его с достаточным запасом безопасности от внешнего отверстия, чтобы минимизировать риск последующего смещения (рисунок 1G.1–1G.6).
4. Промите трубку канюли Фоли физиологическим раствором для подтверждения проездности, используя трубку второй внутривенной канюли на размер больше (например, G18), чем первоначальная канюля (рисунок 1G.1–1G.9).
5. Зашивайте трубку канюли Фоли внутривезурочно к стенке мочевого пузыря с помощью быстро резорбуемого полифиламентного шва 4-0, сохраняя запас безопасности от ступицы трубки канюли для снижения риска случайного смещения (рисунок 1H.1–1H.4).
6. Захватите втулку трубки канюли щипцами и отсоедините её от трубки ножницами (рисунок 1H.5–1H.7).
7. Вставьте трубку Фолея канюли в мочевой пузырь (рисунок 1H.8–1H.9).

Рисунок 1: Подготовка тонкого кишечника и мочевого пузыря с установкой наружной трубки для отведения мочи Фоли. (A) Идентификация и приближение тонкой кишки и мочевого пузыря (A.1–A.2). (B) Мобилизация мочевого пузыря путём рассечения брюшины (B.1–B.4). (C) Размещение швов на куполе мочевого пузыря (C.1–C.5). (D) Диссекция стенки мочевого пузыря (цистотомия) (D.1–D.2). (E) Замена стоечных швов (E.1–E.6). (F) Размещение канюли для наружного отвода мочи через цистотомию (F.1–F.5). (G) Фиксация наружного сегмента канюли у брюшной стенки (G.1–G.9). (H) Фиксация и окончательное внутривезикальное размещение кончика трубки канюли (H.1–H.9). (I) Схематическая иллюстрация, обобщающая описанную подготовку и размещение трубки канюли в виде Фолея. Толстая пунктирная линия изображает тонкий кишечник. Тонкая пунктирная линия изображает мочевой пузырь. Чёрные квадраты изображают увеличенный участок изображения на следующей фотографии. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

6. Выделение сегмента тонкой кишки (рисунок 2)

1. Положите петлю из тонкого кишечника на стерильный марлевый тампон, оцените её подвижность к мочевому пузырю и выберите подходящий сегмент длиной примерно 12 мм (рисунок 2A.1–2A.4).
2. Отрезать выбранный сегмент кишечника из оставшегося кишечника, сохраняя его кровоснабжение в мезентерии, и поддерживать правильную ориентацию, чтобы предотвратить последующее скручивание сосудистого педикула (рисунок 2B.1–1B.4).
3. Аккуратно сцежьте остатки светового содержимого из обоих пересечених концов кишечника ватной палочкой (рисунок 2C.1–2C.6).
4. Отражать обе соседние ветви петли тонкого кишечника вверх так, чтобы на марлевом тампоне оставался только выбранный сегмент (рисунок 2D–2E).

Рисунок 2: Идентификация и выделение сегмента тонкой кишки для увеличения мочевого пузыря. (A) Мобилизация и идентификация подходящего сегмента тонкого кишечника для увеличения мочевого пузыря (A.1–A.4). (B) Пересечение выбранного сегмента тонкой кишки из оставшейся кишечной петли (B.1–B.4). (C) Эвакуация остаточного содержимого световых веществ (C.1–C.4). (D) Разделение и расположение орального и аборального концов оставшейся петли тонкой кишки. (E) Изолированный сегмент тонкой кишки, подготовленный для последующего увеличения. (F) Схематическая иллюстрация, обобщающая выбор и выделение сегментов. Толстая пунктирная линия изображает изолированный сегмент тонкого кишечника. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

7. Подготовка сегмента кишечника и увеличения мочевого пузыря (рисунок 3)

1. Откройте изолированный сегмент кишечника вдоль антимэнтериальной границы ножницами, создавая детубуляризированное пятно примерно 12 мм × 8 мм (рисунок 3A.1–3A.3).
2. Вырезать вновь образовавшиеся угловые края трансплантата (рисунок 3B.1–3B.3).
3. Проведите анастомоз сегмента тонкого кишечника с помощью двойного монофиламентного шва 6-0. В положении 12 часов пропустите иглу через стенку мочевого пузыря от экстралюминального к внутрилюминальной стороне (рисунок 3C.1–3C.2).
4. Проведите иглу через нижний правый угол сегмента тонкого кишечника от внутрисветовой к экстрасветовой стороне. Убедитесь, что двойной шов протянут примерно до середины, так как это определяет верхнюю точку крепления (рисунок 3C.3–3C.4).
5. Затяните шов, чтобы приблизить кишечный трансплантат к мочевому пузыру, что приведёт к примерно 45° противочасовой стрелке сегмента. Завяжите узел на экстралюминальной стороне (рисунок 3D.1–3D.2) и проведите вторую иглу вокруг брыжейки кишечного сегмента, чтобы обеспечить окружной швы трансплантата с обеих сторон (рисунок 3E.1).
6. Начните окружной анастомоз пластыря увеличения мочевого пузыря: последовательно зашивайте сегмент кишечника в дефект мочевого пузыря, используя внешний прикус на краю мочевого пузыря, затем внутренний прикус через сегмент кишечника, затем следующий шов.
7. Последовательно освобождают стойки швы (рисунок 3E.1–3E.15). Используйте чуть более крупные прикусы для участка тонкого кишечника, чем для мочевого пузыря; однако предполагается, что на участке будет значительно больше длины для покрытия, чтобы незашвываемая избыточная длина тонкого кишечника оставалась.
8. После завершения окружного закрытия дефекта мочевого пузыря закрепите один конец шва. Используя оставшийся шов, закройте свободную часть кишечного сегмента конической ("заостротой шапочкой") и завяжите шов (рисунок 3F.1–3F.6).
9. Вернуть мочевой пузырь в анатомическое положение и переместить кишечник, убедившись, что кишечник не скручен (рисунок 3G.1–3G.2).

Рисунок 3: Конструкция пластыря тонкого кишечника и анастомоз при увеличении окружного мочевого пузыря. (A) Вскрытие и подготовка сегмента тонкой кишки (подготовка трансплантата) (A.1–A.3). (B) Удаление угловых краёв трансплантата (B.1–B.3). (C) Инициация анастомоза путём размещения закрепительного шва между трансплантатом и отверстием мочевого пузыря (C.1–C.4). (D) Фиксация точки крепления для выравнивания краёв трансплантата и цистотомии (D.1–D.2). (E) Окружной анастомоз пластыря увеличения мочевого пузыря на стенке мочевого пузыря (E.1–E.15). (F) Закрытие оставшейся ткани сегмента тонкой кишки в конической форме с заострённой колпачкой (F.1–F.6). (G) Перестановка органов в анатомическое положение (G.1–G.2). (H) Схематическая иллюстрация, обобщающая подготовку трансплантата и анастомоз увеличения мочевого пузыря. Толстая пунктирная линия изображает сегмент тонкого кишечника. Тонкая пунктирная линия изображает отверстие стенки мочевого пузыря. Белая стрелка изображает иглу. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

8. Сквозный анастомоз тонкого кишечника (рисунок 4)

1. Для анастомоза используйте двухрукий нересорбируемый монофиламент 6-0, разрезанный пополам шв. Пропустите иглу через антимесентериальный край обоих концов кишечника. Не затягивайте узел пока, а используйте технику парашюта, наложив зажим на сегмент шва между концами кишечника для сохранения визуализации (рис. 4A.3–4A.6).
2. Проведите шов через брыжейку обоих концов кишечника и зажимайте аналогичным образом (рисунок 4A.7–4A.10).
3. Проведите два шва через переднюю стенку обоих концов тонкого кишечника для облегчения последующего закрытия и закрепите концы шва зажимами (рисунок 4B.1–4B.4).
4. Отражайте оба конца кишечника вверх, чтобы обнажать заднюю стенку тонкой кишки. Аналогично передней стенке, проведите два шва через заднюю стенку и закрепите концы шва зажимами (рисунок 4C.1–4C.4).
5. После того как все швы наложены, последовательно закрепляйте все швы (рисунок 4D.1–4D.6).
6. Закройте брыжейный дефект 2–3 быстро ресорбируемыми многофиламентными швами 4-0, чтобы предотвратить последующую грыжу (рисунок 4F.1–4F.8).

Рисунок 4: Анастомоз тонкого кишечника от конца до конца и закрытие дефектов брыжейки. (A) Размещение швов выравнивания на границах антимэнтериального и брыжейного (A.1–A.10). (B) Размещение двух приближённых швов на передней стенке (B.1–B.4). (C) Обнажение задней стенки и размещение двух приближённых швов задней стенки (C.1–C.4). (D) Последовательное связывание всех шести швов для завершения анастомоза (D.1–D.6). (E) Увеличенный анастомоз от конца до конца (E.1–E.2). (F) Закрытие порока брыжейки с прерванными швами для предотвращения внутренней грыжи (F.1–F.8). (G) Схематическая иллюстрация сквозного анастомоза тонкой кишки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

9. Терминальные шаги и соображения

1. Закрыть брюшную стенку многослойно в стерильных условиях в соответствии с ранее опубликованными^{протоколами 29, 30 и 31}.
2. Для процедур, не связанных с выживанием, или планового прекращения после последующего наблюдения эвтаназии животных под глубокой анестезией с помощью резкой кардиэктомии, вывиха шейки матки или обезглавливания гильотиной.
3. При необходимости удалите мочевой пузырь для последующего анатомического обследования (например, оценка участка увеличения мочевого пузыря и анастомоза кишечника), биомолекулярных анализов или гистопатологической визуализации.
4. Для этого удалите увеличенный мочевой пузырь в блоке путём аккуратной поэтапной диссекции под прямой визуализацией, с аккуратным освобождением окружающих спаек, идентификацией родного мочевого пузыря, увеличенного участка кишечника и анастомотических границ, затем пересечением дистального выхода мочевого пузыря и прилегающих мезентериальных или кишечных прикреплений по мере необходимости, при этом избегая сжатия или искажения образца для сохранения структуры тканей для последующего анализа.

Результаты

Для подтверждения жизнеспособности тканей после этого протокола во время процедуры оценивали оксигенацию тканей и перфузию у восьми крыс (Таблица 1). Перед энтероцистопластикой проводилась гиперспектральная визуализация (HSI) тонкой кишки для визуализации насыщения тканей кислородом (StO₂) и перфузии (NIR) (рисунок 5A.1). В качестве отрицательного контроля максимальная гипоперфузия была индуцирована зажимом аорты (рисунок

Обсуждение

Эта работа предоставляет воспроизводимый хирургический протокол для энтероцистопластики у крыс с использованием средней линии лапаротомии, экстракорпоральной каннуляции и включения детубуляризированного подвздошного сегмента. Техника следует принципам, описанным Тиццони и Фогги для увеличения мочевого пузыря, и адаптирует их к модели грызунов, сочетая точную анестезию, асептическую подготовку, экстерьерную каннуляцию для отведения мочи и сбор васкуляризированного пластыря тонкого кишечни...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Atraumatic preparation forceps	Aesculap	FB395R	DE BAKEY ATRAUMATA atraumatic forceps, straight
Blunt overholt clamps	Aesculap	BJ012R	BABY-MIXTER preparation and ligature clamp, bent, 180 mm
Cannula tube foley for flusing and diversion	Mdk Mart	23-CA-CD-UL-CD	Cannula G18 (only the tube is used to flush the diversion cannula)
Carprofen	cp pharma	115	Carprofen 0,5% (5% with 50 mg/mL diluted 1:10) (Carprosol)
Cotton whool swabs	Amazon	ASIN: B0FPDB8ZGS	Non-sterile cotton whool swabs (autoclave for survival experiments)
Fast resorbable polyfilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SV-494	Single-armed polyfilament surgical suture from resorbable polyglactin with one P-13 needle
Fixation rods	legefirm	‎500343896	Tuning forks used as y-shaped metal fixation rods
Foley catheter	B. Braun	4242010-02	20 Gauge 50 mm Introcan Safety 2 Catheter as diversion cannula
Gauze swabs	Medrull	ASIN: B09164D1JG	Sterile gauze swabs
Heating pad	Royal Gardineer	IP67	Royal Gardineer Heating Pad Size S, 20 Watt
Hyperspectral imaging camera system	Diaspective Vision	TIVITA Tissue Halogen	HSI system for validation
Isoflurane	Piramal Critical Care	PZN / EAN 09714675 / 4150097146757	100% isoflurane 250 mL
Isoflurane vaporizer	UNO ROESTVASTSTAAL BV	180000002	Isoflurane vaporizer
Isotonic sodium chloride solution	B. Braun	ASIN: B007PZJOQ4	0,9% sodium chloride solution
Ketamine	cp pharma	1202	Ketamine 10% (100 mg/mL)
Metal cannula	BD (Beckton, Dickinson)	301300	BD Microlance 3 cannula 20 Gauge as preparation hooks
Neontal face mask	asia connection	ME03016-0	Neontal face mask size #0 for neonate
Non-resorbable monofilament 4-0 sutures	COVIDIEN	SP-670	Single-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with one C-16 needle
Non-resorbable monofilament 6-0 sutures	COVIDIEN	VP-733-X	Double-armed monofilament surgical suture from non-resorbable poly-propylene with two CV-22 needles
Ophthalmic ointment	Bayer Vital GmbH	1578681	5% dexpanthenol
Plastic perfusor tube	M. Schilling GmbH	S702NC150	Connecting tube COEX 150 cm
Preparation scissors	Aesculap	BC177R	JAMESON preparation scissors, bent, fine model, blunt/blunt, 150 mm (6")
Rat induction chamber	wpiinc	EZ-1785	Induction chamber for narcosis
Steel plate	Maschinenbau Feld GmbH	C010206	Galvanized sheet plate, 40 x 50 cm, thickness 4.0 mm
Xylazine	cp pharma	1206	Xylazine 0,2% (2% with 20 mg/mL diluted 1:10) (Xylavet)