Методическая статья

Одна внутривенная доза атенуированной бруцеллы , продуцирующей индол, у мышей с NOD: оценка начала сахарного диабета 1 типа и иммунной реконструкции островков

124 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/71193

⸱

26 мая 2026 г.

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этом протоколе описывается внутривенное введение индолообразующего атенуированного штамма Brucella melitensis мышам NOD/ShiLtJ, затем продольный мониторинг диабета, гистология поджелудочной железы и опциональное высокоплексорное пространственное протеомическое и секвенирование одноклеточной РНК для оценки иммунного перепрограммирования островков.

Аннотация

Диабет 1 типа (ТД1) возникает из-за аутоиммунного разрушения клеток β поджелудочной железы, и современные методы терапии не способны восстановить устойчивую иммунную толерантность. Метаболически модифицированные бактерии, производящие иммуномодуляторы, представляют собой перспективную однодозовую терапевтическую стратегию. В этой статье представлен комплексный протокол, в котором для оценки влияния на начало аутоиммунного диабета у преддиабетических самок мышей с NOD/ShiLtJ используется однозначное внутривенное введение индолообразующего атенуированного штамма Brucella melitensis BmΔvjbR::tnaA.

Протокол начинается с подготовки BmΔvjbR::tnaA из замороженных запасов глицерола, выращивания в селективных средах до среднелогарифмической фазы и расчёта единиц формирования колоний на основе оптической плотности. Самки мышей NOD <5 недель фиксируют без анестезии и вводят внутривенно через боковую хвостовую вену с определённой бактериальной дозой в фосфатно-буферном физиологическом растворе при хранении на грелках. Уровень глюкозы в крови измеряется 2 раза в неделю после двухчасового голодания в течение 70–105 дней, при этом диабет определяется как глюкоза ≥250 мг/дл по двум последовательным измерениям. На экспериментальных конечных точках собранная поджелудочная железа фиксируется в нейтрально буферированном формалине на 72 часа, встраивается в парафин и секцируется для окрашивания гематоксилина и эозина, иммуногистохимии инсулина и количественной оценки общей площади островка. Формалин-фиксированные парафин-вложенные срезы подаются для пространственной протеомики с панелью антител с 25 маркерами для визуализации регуляторных и эффекторных иммунных популяций. Наконец, свежая ткань поджелудочной железы проходит отдельную изоляцию, 3′-библиотечную подготовку, секвенирование и биоинформатику на основе Сёра для профилирования транскрипционных изменений в иммунных и стромальных популяциях.

Этот интегрированный протокол позволяет воспроизводимую однодозовую бактериальную терапию и мультимодальную характеристику ремоделирования иммунного ремоделирования островков, предоставляя основу для тестирования микроорганизмов, связанных с метаболитной инженерией, в аутоиммунных моделях и анализа тканеспецифических иммунных механизмов с разрешением одной клетки.

Введение

Сахарный диабет 1 типа (Т1Д) — это хроническое аутоиммунное заболевание, характеризующееся иммунно-опосредованным разрушением клеток поджелудочной железы, вырабатывающих инсулин, β что приводит к пожизненной зависимости от инсулина и повышению риска сосудистыхосложнений 1. Мышь NOD/ShiLtJ повторяет ключевые особенности аутоиммунного диабета человека, включая спонтанный инсулит и прогрессирование явного диабета, и широко используется как доклиническая модель для механистических и терапевтических исследований 1,2,3. Современные методы терапии T-клеток (Treg) — включая иммуносупрессивные препараты, моноклональные антитела и адсекционную регуляторную Т-клеточную (Treg) терапию — могут временно замедлять прогрессирование заболевания, но часто не обеспечивают устойчивого восстановления иммунной толерантности или устойчивого сохранения массы βклеток 1,2,4,5,6,7,8,9,10, 11.

Нацеление на Tregs и другие регуляторные популяции является основным направлением новых терапий T1D, включая аутологичные поликлональные инфузии Treg, инженерные антиген-специфические Tregs и схемы на основеIL-2 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 . Однако провоспалительная микросреда внутри островков поджелудочной железы может подорвать эффективность этих подходов, подчёркивая необходимость локального перепрограммирования иммунных сетей, проживающих втканях 2,7. Метаболиты триптофана, полученные из микробов, особенно индол и родственные соединения, могут модулировать как врождённый, так и адаптивный иммунитет, способствуя регуляторной дифференцировке Т-клеток, индуцируя противовоспалительную поляризацию макрофагов и подавляя ответыTh17 12,13. Таким образом, живые микробные терапевтические средства и метаболически модифицированные бактерии представляют собой перспективную стратегию доставки иммуномодуляторных метаболитов in situ и формирования иммунитета тканей 12,13,14,15,16,17,18.

Ранее мы разработали метаболически модифицированный штамм Brucella melitensis, BmΔvjbR::tnaA, который последовательно производит индол и контролирует аутоиммунный артрит путём расширения Tregs и ремоделирования воспалительныхмикроокружений 14,15,16. Ослабленные штаммы Brucella, такие как BmΔvjbR, широко охарактеризованы как платформы для вакцин и могут быть генетически модифицированы для несения иммунорегуляторных полезныхнагрузок 14,15,16.

Здесь мы представляем подробный протокол оценки одной-единственной внутривенной дозы BmΔvjbR::tnaA в модели NOD/ShiLtJ, включая бактериальный препарат, стандартизированное внутривенное введение, мониторинг диабета и мультимодальный анализ ткани поджелудочной железы с помощью гистологии, высокоплексорной пространственной протеомики и одноклеточных РНК-последователей. Этот рабочий процесс предоставляет практическую основу для тестирования микробов, созданных на основе метаболитов, как однодозовых иммунотерапий при органоспецифическом аутоиммунном процессе. Предыдущий анализ дозы и реакции показал безопасность и переносимость до 1 × 1010 КМО ослабленного штамма.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с этическими нормами и одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Техасского университета A&M (номер протокола: 2021-0123).

1. Подготовка и характеристика BmΔvjbR::tnaA

  1. Фон и хранение бактериальных штаммов
    ПРИМЕЧАНИЕ: BmΔvjbR::tnaA производится из Brucella melitensis 16M с удалением регулятора вирулентности vjbR и вставкой гена Escherichia coli tnaA для конститутивного производства индола, как описаноранее 14,15,16.
    1. Поддерживайте запасы глицерила при −80 °C в 20% глицерила.
  2. Бактериальная культура на селективном агаре
    1. Извлечь замороженный запас глицерина из хранилища при температуре −80 °C. Полосы 10–20 мкл на триптические пластины соевого агар (TSA), дополненные хлорамфениколом (25–30 мкг/мл).
    2. Инкубировать пластины при 37 °C при условиях CO₂ в течение 48–72 часа, пока не появятся отдельные колонии (диаметром 2–3 мм).
      ВНИМАНИЕ: Работа со штаммами Brucella требует соответствующих условий биобезопасности (минимум BSL2). Соблюдайте институциональные протоколы биобезопасности и необходимые одобрения.
  3. Подготовка жидкой культуры
    1. Выберите свежую пластину TSA (≤1 неделя). Выберите 2–3 изолированные колонии с помощью стерильной петли.
    2. Инокуляция в 10 мл триптического соевого бульона (TSB) с добавлением хлорамфеникола (25–30 мкг/мл) в стерильной трубке объёмом 15 мл. Инкубировать при 37 °C с встряхиванием при 250 об/мин при условиях CO₂.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для масштабирования используйте колбу Erlenmeyer объёмом 250 мл.
  4. Мониторинг роста и сбор урожая
    1. Заготовьте спектрофотометр с помощью стерильного TSB с добавлением хлорамфеникола.
    2. Измеряйте OD₆₀₀ каждые 2–3 часа.
    3. Продолжайте инкубацию до тех пор, пока OD₆₀₀ не достигнет 2,0 ± 0,2 (примерно 18–24 часа).
      КРИТИЧЕСКИЙ ЭТАП: Сбор при OD₆₀₀ = 2,0 ± 0,2 для стабильной концентрации бактерий и жизнеспособности.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При этих условиях OD₆₀₀ ≈ 2.0 соответствует средне-поздней логарифмической фазе.
  5. Оценка CFU
    1. Оцените концентрацию бактерий по следующим соотношениям:
      OD₆₀₀ = 1 соответствует 5 × 109 CFU/mL.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Культура объемом 10 мл при OD₆₀₀ = 2.0 содержит примерно 1 × 1011 CFU.
    2. ПО ЖЕЛАНИЮ: Приготовьте 10-кратное последовательное разбавление (от 10⁻6 до 10⁻9) в стерильной PBS. Пластина 100 мкл на TSA с добавлением хлорамфеникола. Инкубировать при 37 °C в течение 48–72 часа. Подсчитайте колонии для подтверждения CFU.
  6. Сбор и концентрация бактерий
    1. Перенесите культуру 10 мл в стерильную коническую трубку объёмом 15 мл.
    2. Центрифуга при 3 000–4 000 × г в течение 10 минут при комнатной температуре.
    3. Аккуратно аспирируйте и сбрасывайте супернатант, не нарушая гранулу.
  7. Подвеска для впрыска
    1. Добавьте 1 мл стерильного, без эндотоксинов 1× фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS, pH 7,4) в бактериальную гранулу. Аккуратно повторно подвесите с помощью пипетирования 10–15x до достижения однородной суспензии без видимых комков.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Конечная концентрация составляет примерно 1 × 1011 CFU/мл.
  8. Хранение и использование
    1. Храните бактериальную суспензию на льду в закрытой трубке. Используйте суспензию для внутривенных инъекций в течение 4 часов после подготовки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не замораживайте и не храните на ночь, так как жизнеспособность бактерий снижается.
      ТОЧКА ПАУЗЫ: Бактерии могут оставаться на льду до 4 часов; рекомендуется использовать в тот же день.

2. Закупка, содержание и подготовка мышей NOD/ShiLtJ

  1. Получите самок мышей NOD/ShiLtJ. Акклиматизируйте мышей не менее 7 дней перед экспериментами.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте самок мышей из-за более высокой и стабильной заболеваемости диабетом.
  2. Домашние мыши находятся в индивидуально вентилируемых клетках в условиях без патогенов. Держите до пяти мышей в клетке.
  3. Обеспечьте постельное бельё, обогащение окружающей среды, еду и воду ad libitum. Поддерживайте температуру 20–24 °C, влажность 40–60% и 12-часовой цикл свет/тьма.
  4. Используйте мышей младше 5 недель. Фиксируйте базовый вес тела.
  5. Рандомизуйте мышей на уровне клетки на группы лечения и контроля. Присваивать каждой мыши уникальные идентификаторы (татуировка на ушной бирке или хвосте).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ведите основной учет всех мышей и групповых заданий.
  6. Переносите клетки в процедурную комнату не менее чем за 30 минут до инъекции. Размещайте клетки на грелках, установленных на 37–40 °C для расширения хвостовых вен.

3. Внутривенное введение через боковую хвостовую вену

  1. Используя стерильную технику, впитайте 100 мкл бактериальной суспензии в стерильные инсулиновые шприцы (29G–30G). Маркируйте каждый шприц соответствующим идентификатором мыши.
  2. Подготовьте контрольные шприцы с 100 мкл стерильного PBS.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовьте шприцы непосредственно перед инъекцией.
  3. Поместите каждую мышь в ремекер, чтобы получить доступ к хвосту.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не используйте анестезию для инъекций в хвостовую вену.
  4. Протрите хвост 70% этанола и дайте высохнуть на воздухе.
  5. Визуализируйте боковые вены хвоста при достаточном освещении.
    СОВЕТ: Прогревайте хвост, если вены не видны.
  6. Держите дистальную треть хвоста с мягким натяжением. Введите иглю под малым углом (10–15°) в боковую вену.
  7. Вводите 100 мкл медленно в течение 5–10 секунд. Вынимите иглу и мягко надавите стерильной марлей.
    КРИТИЧЕСКИЙ ШАГ: Подтвердить успешную внутривенную инъекцию при отсутствии резистентности, отёка или бланширования.
  8. Верните мышь в клетку на грелке. Наблюдайте за признаками стресса в течение 5–10 минут. Записывайте все побочные события.
  9. Проведите инъекции всем мышам в рандомизированном порядке в течение 2 часов.

4. Мониторинг уровня глюкозы в крови и определение диабета

  1. Начинайте мониторинг глюкозы через 7 дней после инъекции. Измеряйте уровень глюкозы в крови 2 раза в неделю до окончания исследования.
  2. Убирайте корм за 2 часа до измерения, сохраняя доступ к воде.
  3. Сдержите мышь. Очистите кончик хвоста 70% этанолом.
  4. Порежьте хвост стерильным ланцетом или иглой. Сбросьте первую каплю крови. Соберите вторую каплю на тест-полоске глюкометра. Запишите значения глюкозы в крови вместе с идентификатором мыши и датой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте новый сайт, если кончик хвоста остаётся шрамом.
  5. Определите диабет как уровень глюкозы в крови ≥ 250 мг/дл по двум последовательным измерениям, разделённым не менее 24 часами.
  6. Эвтаназия мышей с тяжёлыми признаками болезни согласно институциональным рекомендациям.

5. Сбор, фиксация и обработка поджелудочной железы

  1. Эвтаназия мышей согласно утверждённым протоколам. Аккуратно рассекайте и соберите поджелудочную железу, включая все дошки.
  2. Поместите поджелудочную железу в 10% нейтральный буферный формалин с минимальным соотношением фиксатива к объёму ткани 10:1. Фиксируйте 72 часа при комнатной температуре.
    ВНИМАНИЕ: Обрабатывайте формалин в вытяжке с химическими парами и соответствующей СИЗ.
  3. После фиксации перенесите ткани на 70% этанола.
  4. Отправьте фиксированные ткани в гистологический центр для вложения парафина, сечения толщиной 5 мкм на положительно заряженных препаратах, окрашивания гематоксилином и эозином, а также иммуногистохимии инсулина.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Запрашивайте незапятнанные срезы, если планируются дополнительные дальнейшие анализы.

6. Гистологическая оценка и количественная оценка площади островков

  1. Получите изображения целого слайда с помощью слайд-сканера или микроскопа.
  2. Открытые изображения в приложенном программном обеспечении. Аннотируйте островки вручную, используя соответствующие инструменты.
  3. Измеряйте площадь островка с помощью инструментов аннотирования.
  4. Экспортные измерения для анализа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Общая площадь островка включает эндокринные и инфильтрирующие клетки.

7. Различные последующие анализы

  1. Рассчитайте среднюю площадь островка на мышь. Сравнивайте группы с помощью соответствующих статистических тестов.
  2. Опционально: анализ пространственной протеомики (см. дополнительную таблицу S1)
    1. Подготовьте секции FFPE на положительно заряженных затворах. Отправьте образцы поставщику услуг пространственной протеомики. Предоставьте спецификации панели антител.
  3. Опционально: секвенирование одноклеточной РНК (см. дополнительную таблицу S2)
    1. Соберите поджелудочную железу и поместите её в холодную среду.
    2. Отправьте образцы в центр геномики для выделения и подготовки библиотеки.
    3. Обработка данных секвенирования с использованием соответствующих конвейеров (например, Cell Ranger, Seurat).
    4. Храните данные секвенирования в публичном хранилище перед публикацией.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Хотя более широкий протокол, описанный в этой рукописи, впоследствии был оптимизирован до профилактической схемы с одной дозой, эти пилотные результаты представлены здесь исключительно для иллюстрации ожидаемых гистологических и гликемических показателей, достижимых с помощью этого рабочего процесса.

Общий контекст заболевания и контраст между здоровой и поджелудочной железой с диабетом 1 типа схематически изображены на рисунке 1A...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Критическим ограничением репрезентативных результатов, представленных здесь, является то, что данные, иллюстрированные для иллюстрации аналитических конечных точек (рисунок 3), были получены из ранней пилотной когорты с использованием двухдозового графика. Поскольку этот протокол был усовершенствован до однодозовой профилактической схемы, для установления формальной статистической эффективности необходимы проведение будущих крупномасштабных исследований с ис...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

У авторов нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения R01CA273002 и R21AI167793 для J.S. и P.D.F., а также премией NIH Institutional National Research Service Award (T32), поддерживающей K.D. Мы благодарим Центр медицинских наук Техасского университета A&M за институциональную поддержку. Благодарим доктора Яву Джонс-Холл за слепые оценки гистопатологии, лабораторию Song за пилотную и техническую поддержку на животных, Институт геномных наук и общества Техасского университета A&M (TIGSS) по молекулярной геномике для подготовки и секвенирования библиотек секвенации РНК-секвенсоров отдельных клеток, Bioinformatics Core TIGSS за анализ и интерпретацию данных, а также Akoya Biosciences за услуги пространственной протеомики. Мы выражаем признательность за поддержку Института геномных наук и общества Техасского университета A&M (TIGSS) по биоинформатике (TBC) за их помощь.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
10% нейтральный буферизованный формалин (NBF)VWR10790-714
10x хромовый контроллер GenomicsРабочее пространство молекулярной геномики TIGSS, Техас A& Университет М
70% этанолVWR89125-164
Клеевые микроскопические стекли для FFPELeica Biosystems3800084E
Панель антител FFPE у мыши Akoya (~25 маркеров)Akoya Biosciences[Идентификатор панели/кастомная панель]
Биоанализатор или TapeStation с наборами ДНК HSРабочее пространство молекулярной геномики TIGSS, Техас A& M/ Agilent
BmΔ vjbR::tnaБактериальный штаммЛабораторный запас (лаборатории Song/de Figueiredo)
Конвейер Cell Ranger10x Genomicsv7.1
ХлорамфениколResearch Products International56-75-7
Набор Chromium Next GEM Single Cell 3'10x Genomics через ядро TIGSS
Коллагеназа из Clostridium histolyticumМиллипор СигмаC7657-100MG
Ядерное окрашивание DAPIAkoya Biosciences[Предоставлено услугой]
Встраивание FFPE, H& Окрашивание электроэлектрона, инсулиновый ИГК и сканирование слайдовГистологическая лаборатория VMBS, Техасский университет A& Университет Мhttps://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
Тест-полоски для глюкозыEKF Diagnostics / Fisher Scientific22-022-649
Тест-полоски для глюкозы (альтернативные)Ascensia Diabetes CareТест-полоски CONTOUR NEXT
Глицерин (объём, 500 мл)Миллипор СигмаG7893-500ML
Глицерин (стерильный, 100 мл)Сигма Олдрич (G Biosciences)G5516-100 мл
GraphPad Prism (или пакет выживания R)Программное обеспечение GraphPad / Rv10.2
Портативный глюкометрAscensia Diabetes CareCONTOUR NEXT EZ
Секвенсор Illumina NextSeq 2000Рабочее пространство молекулярной геномики TIGSS, Техас A& Университет М
Инсулиновые шприцы, 29– 30 G (U-100)VWR10002-702
Ланцеты для тестирования на диабетБектон, Дикинсон и Компания (BD)366594
Либераза TL Исследовательская оценкаМиллипор Сигма5401020001
Грелки для низких температурНаука о проведенииRWD-69025
Набор для изоляции ядер/клеток MiltenyiРабочее пространство молекулярной геномики TIGSS, Техас A& M/ Miltenyi Biotec
Грелка для мыши (альтернатива)Кент СайентификRightTemp
Ограничители мышейBraintree ScientificTV-RED 150-STD
Мыши NOD/ShiLtJ (самки, 5 недель)Лаборатория ДжексонаСорт #001976
Комплект P2 XLEAP 100-тактового потокового элементаIllumina через сердечник TIGSS
Сбор данных и обслуживание контроля качества PhenoCyclerAkoya Biosciences
Реагенты и рабочий процесс визуализации PhenoCyclerAkoya Biosciences[Предоставлено услугой]
Система PhenoCycler-FusionAkoya Biosciences
Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS), 1xТермо Фишер10010023
Протекторный ингибитор РНазыМиллипор Сигма3335402001
Кубитный флуорометр и набора для анализа HS dsDNAРабочее пространство молекулярной геномики TIGSS, Техас A& М/ Термо Фишер
QuPathОткрытый исходный кодv0.4.3
Программное обеспечение RПроект Rv4.0+
Seurat (пакет R)Лаборатория Сатия / CRANv4.3
StarDistОткрытый исходный кодv0.8.3
Триптон соевый агар (TSA)VWRCA90002-706

Ссылки

  1. Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
  7. Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
  11. Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
  12. Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
  13. Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
  14. Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
  15. Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
  16. Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
  17. Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
  18. Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
  19. Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
  20. Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Brucella
Видео скоро будет доступно

Похожие статьи