Окисление Фентона с помощью витамина C улучшает окислительное уничтожение Helicobacter pylori in vitro

Краткое содержание

В этом исследовании рассматривается, как витамин C регулирует кинетическое поведение реакции Фентона при условиях in vitro . Химические красительные зонды и бактериальные анализы показывают, что контролируемое дозирование витамина C изменяет окисляющее поведение реакции и связано с повышением антибактериальной активности против Helicobacter pylori в упрощённой модельной системе.

Аннотация

Инфекция Helicobacter pylori остаётся серьёзной глобальной нагрузкой для здоровья, и растущая распространённость устойчивости к антибиотикам подчёркивает необходимость альтернативных антибактериальных стратегий. В этом исследовании изучалось, может ли дозировка витамина C модулировать окисление Фентона и усилить окисляющую антибактериальную активность против H. pylori в условиях определённой кислотности in vitro. Окислительная активность оценивалась с использованием обесцветления кислотного оранжевого 7 в качестве косвенного химического показания и теста флуоресценции терефталовой кислоты как относительного индикатора образования продуктов, ассоциированных с гидроксил-радикалом, в реакциях железо-перекись с добавлением витамина C. Антибактериальная эффективность оценивалась путём экспозиции стандартизированного H. pylori суспензии в физиологическом растворе с мочевиной при pH 3 до перекиси водорода и железного железа с поэтапным добавлением витамина C или без, после чего следует перечисление колониообразующих единиц. Приём витамина C изменял окислительные показатели и был связан с большим снижением жизнеспособных бактерий по сравнению с традиционной химией Фентона. Спасательные эксперименты с использованием дефероксамина и тиомочевины снижали антибактериальную активность, что подтверждает гипотезу о том, что антибактериальная активность связана с железо-опосредоваными и радикально связанными окислительными процессами. Окрашивание живой/мертвой флуоресценцией и сканирующая электронная микроскопия предоставили качественные визуальные наблюдения, соответствующие результатам перечисления колониообразующих единиц (CFU). В совокупности эти результаты показывают, что контролируемое дозирование витамина C может модулировать окислительные реакции на основе Фентона и усиливать антибактериальную активность против H. pylori в упрощённой, кислотной модели in vitro.

Введение

H. pylori, грамотрицательная бактерия со спиралевой формой, относящаяся к роду Helicobacter, в ходе исследований здоровья популяций показала высокую распространённость инфекций в разных географических регионах, полу и возрасте, с глобальным уровнем распространённости примерно 50%¹. Международное агентство по изучению рака (IARC) классифицировало H. pylori как канцероген первой группы, что подчёркивает его тесную связь с раком желудка и лимфомой лимфоидной ткани, ассоциированной с слизистой слизистой (MALT). В настоящее время клиническое лечение инфекции H. pylori в основном основано на фармакологических схемах. Наиболее широко изученные агенты включают ингибиторы протонной помпы (ИПП), которые подавляют секрецию желудочной кислоты; соединения висмута, повышающих эффективность антибиотиков; а также антибиотики, такие как амоксициллин, кларитромицин и метронидазол. Однако монотерапия оказалась недостаточной для полного искоренения, что привело к широкому применению комбинированных схем, обычно называемых тройной терапией. Этот подход обычно включает ИПП, кларитромицин и амоксициллин или метронидазол, которые вводятся примерно в^{течение двух недель 3}. С ростом распространения антибиотикорезистентных штаммов H. pylori эффективность тройной терапии значительно снизилась, что побудило применить четверную терапию, сочетающую ИПП, висмут и два^{антибиотика 3}. Тем не менее, эти схемы по-прежнему фундаментально зависят от антибиотиков, и устойчивость к антибиотикам остаётся серьёзной проблемой в клиническом^{лечении 4,5}. В результате исследование альтернативных, независимых от антибиотиков антибактериальных стратегий привлекает растущий интерес.

Помимо прямых патологических эффектов, инфекция H. pylori также связана с изменениями гомеостаза желудочных микронутриентов. Клинические и эпидемиологические исследования сообщали о снижении концентрации витамина C в желудочном соке и сыворотке у инфицированных^{пациентов 6}, что может быть связано с воспалением слизистой слизистой жидкости, нарушением секреции или увеличенным потреблением^{окисления 7,8,9}. Параллельно инфекция H. pylori связана с дефицитом железа через различные механизмы, включая снижение кислотности желудка, ухудшение усвоения железа в рационе и бактериальную конкуренцию за доступный^{железо-10}. Эти наблюдения подчёркивают сложную биохимическую среду, сопровождающую инфекцию H. pylori, и подчёркивают значимость процессов, связанных с редокс и железом, в кислых желудочных условиях.

Реактивные виды кислорода (ROS) получили значительный интерес к исследованиям антимикробных средств благодаря окисляющим свойствам этих видов. ROS относится к классу химически реактивных молекул, образующихся в ходе частичного восстановления кислорода, таких как супероксидный анион (O₂•⁻), перекись водорода (H₂O₂), синглетный кислород (¹O₂) и гидроксильные радикалы (•OH), среди прочих. В биологических системах ROS активно участвует в нормальном физиологическом метаболизме и необходим для различных клеточных регуляторных^{функций 11}. Примечательно, что многочисленные исследования показали, что чрезмерная ROS может нарушать мембраны бактериальных клеток посредством перекисления липид, что приводит к изменениям в структуре и функции мембраны, что в конечном итоге приводит к инактивации^{бактерий 12}. Соответственно, антимикробные подходы на основе ROS привлекли интерес как потенциальный путь для изучения неантибиотиковых антибактериальных эффектов против H. pylori 13,14,15,16. Среди различных методов генерации ROS реакция Фентона привлекла значительное внимание благодаря высокоэффективному производству радикалов. Реакция Фентона — это продвинутый процесс^{окисления 17}, при котором железные ионы (Fe²⁺) реагируют с H₂O₂ в кислых условиях, образуя гидроксильные радикалы (•OH), обладающие сильным окислительным потенциалом и способные окислять внутриклеточные биомолекулы.

Fe²⁺ +H→Fe³⁺+•OH+^OH-

Fe³⁺+ H→Fe²⁺+•OOH+ H⁺

H₂O→OH+•OOH+H₂O

В частности, при pH примерно 2,8–4,5 H₂O₂ подвергается каталитическому разложению Fe²⁺, образуя •OH, в то время как Fe²⁺ окисляется до^{Fe 3}⁺. Fe³⁺ затем реагирует с H₂O₂, регенерируя Fe²⁺, создавая цикл окислительно-окислительного цикла Fe²⁺/^{Fe 3}⁺, который поддерживает непрерывное производство^{ROS 18}. Однако снижение Fe³⁺ до Fe²⁺ происходит относительно медленно, что является ограничивающим шагом и, следовательно, снижает общую эффективность реакции Фентона. Исследования показывают, что введение подходящего восстановительного агента в систему реакции Фентона может ускорить восстановление Fe²⁺ до^{Fe 2}⁺, тем самым усиливая генерацию ROS. Витамин C играет окислительно-восстановительную роль, зависящую от контекста. В системах, содержащих железо, он может способствовать снижению Fe²⁺ до Fe²⁺ и тем самым поддерживать цикл Фентона, тогда как при высоких концентрациях или при других условиях реакции он также может функционировать как антиоксидант или поглощатель^{радикалов 19}.

На основе этого исследования рассматривается система реакции Фентона с помощью витамина C как химически регулируемый подход для модуляции окислительной активности при определённых кислотных in vitro ^{условиях 20,21}. Витамин C использовался в качестве восстанавливающего агента для облегчения регенерации^{Fe 2}⁺ и тем самым изменения эффективного окислительного поведения реакции Фентона. Экспериментальная система, использованная здесь, представляла собой упрощённую модель кислого солевого раствора и мочевины и не предназначалась для полного воспроизведения физиологической микросреды желудка, содержащей слизь, буферные компоненты, клетки хозяина, иммунные факторы и разнообразные органические субстраты. В рамках этой контролируемой модели окислительная активность характеризулась с помощью химических показаний и оценивалась параллельно с фенотипическими ответами бактерий, что стало экспериментальной основой для исследования ROS-ассоциированных антибактериальных эффектов против H. pylori in vitro.

Протокол

Этическое заявление
Это исследование было бактериальным in vitro и не включало участников человека, животных или материалов, полученных пациентами. Поэтому одобрение институционального контрольного совета и этики животных не требовались.

Оценка деградации AO7 в системе Фентона с поддержкой витамина C
Для оценки влияния витамина C на наблюдаемое окислительное поведение реакции Фентона деградация кислотного оранжевого 7 (AO7) была использована как косвенный химический показатель окислительной активности. Этот анализ не конкретно количественно определяет отдельные реактивные виды кислорода. Приготовили 100 мл раствора AO7 при 5 мг/л и отрегулировали до pH 3. Добавлены H₂O₂ и FeSO₄ к конечным концентрациям 2,2 мМ и 0,055 мМ соответственно. Добавлял витамин C либо в виде одного болюса при начале реакции, либо в трёхступенчатом режиме дозирования. Для эксперимента с дозой-ответом использовались молярные соотношения Vc: Fe²⁺ 0, 0,12, 0,24, 0,48, 2, 4, 6 и 8, соответствующие конечным концентрациям витамина C 0, 0,0066, 0,0132, 0,0264, 0,110, 0,220, 0,330 и 0,440 мМ соответственно, при использовании FeSO₄ при 0,055 мМ. Для трёхступенчатого условия добавления разделили одинаковое общее количество витамина C на три равных аликвота и добавили один аликвот через 3, 5 и 7 минут после начала реакции. Например, при соотношении Vc:^{Fe 2}⁺ 0,48 добавлен витамин C с концентрацией 0,0088 мМ на аликвот, что даёт итоговую общую концентрацию 0,0264 мМ.

Раствор реакции непрерывно помешивали в темноте в течение 10 минут, поддерживая температуру ниже 30 °C. Собрали 2 мл образцов до и после реакции. Измерил поглощение на 483 нм с помощью UV-Vis спектрофотометра и рассчитал скорость деградации AO7 с помощью уравнения 1:

Скорость деградации (%) = [(A₀ − A₁) / A₀] × 100% (1)

Здесь A₀ обозначает поглощение образца до реакции, а A₁ — поглощение образца после реакции.

Оценка флуоресцентного сигнала, ассоциированного с •OH, с помощью зонда TA
Для оценки флуоресцентных сигналов, связанных с гидроксильными радикалами, в тех же кислотных in vitro условиях, что и в антибактериальных экспериментах, была создана химическая система без клеток, используя терефталат динатрия (TA, 1 мМ) в качестве флуоресцентного зонда. Этот анализ использовался как относительный индикатор образования продукта, ассоциированного с •OH, и не интерпретировался как абсолютная количественная оценка генерации гидроксильных радикалов. Были включены семь групп: (1) пустой (1 мМ TA только в реакционном буфере), (2) H₂O₂ самостоятельно, (3) Fe²⁺ самостоятельно, (4) Vc самостоятельно (поэтапное сложение), (5) традиционный Фентон (Fe²⁺ + H₂O₂), (6) Фентон с помощью витамина C с добавлением болюса Vc (Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, болюс) и (7) Фентон с помощью Vc с поэтапным добавлением Vc (Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc, пошагово). В условии пошагового сложения Vc вводился через 3, 5 и 7 минут после начала реакции равными аликвотами, тогда как болус получал такое же количество Vc, как при одном сложении.

Аликвоты собирались в течение 10-минутного реакционного периода, немедленно щелочили с помощью NaOH для подавления дальнейших радикальных реакций и стабилизации флуоресценции, а затем хранили при температуре 4 °C перед измерениями. Интенсивность флуоресценции продукта, полученного из ТА, измерялась с помощью считывателя микропластин (Ex/Em: 315/425 нм). Генерация радикалов выражалась в виде интенсивности флуоресценции после вычитания пустых элементов и использовалась как относительный индикатор генерации радикалов. Было проведено как минимум три независимых эксперимента, а данные представлены в виде профилей временных потоков и сравнения конечных точек с интервалом 10 минут.

Оценка антибактериальной эффективности с помощью подсчёта колоний
Штаммы H. pylori хранились при −80 °C в бульоне с инфузией мозга, сердцем (BHI), содержащем 25% глицерила. Основным штаммом, использовавшимся для основного анализа подсчёта колоний, спасательного анализа, матричного интерференционного анализа, окрашивания живой/мёртвой флуоресценцией и анализа сканирующей электронной микроскопии, был H. pylori G27. Перед каждым экспериментом бактерии выводили на пластины кровяного агара Колумбии и инкубировали в течение 3 дней при 37 °C в микроаэрофильных условиях, состоящих из 5% O₂, 10% CO₂ и 85% N^₂2.

Анализ подсчёта колоний в первичном штаме
Использовали переписку колониообразующих единиц (CFU) для оценки антибактериальной активности при различных условиях лечения. Включали следующие группы: нелеченный контроль, только H₂O₂, витамин C один, традиционная реакция Фентона и реакция Фентона с помощью витамина C. Если группа только с Fe^{2⁺ не} была включена в исходный эксперимент, избегайте интерпретации первичного анализа как полного отделения эффектов только железа от окислительных, опосредованных реакцией Фентона. Собрали культивированный H. pylori и суспензировали бактерии в физиологическом физиологическом растворе. Отрегулировали оптическую плотность при 600 нм (OD₆₀₀) до 0,5 и перевели суспензию в физиологический физиологический раствор с 3 мМ мочевины с уходом на pH 3. Добавляли H₂O₂, FeSO₄ и витамин C в зависимости от назначенной группы лечения. Использовали конечные концентрации 2,2 мМ H₂O₂ и 0,055 мМ FeSO₄. Для лечения с помощью витамина C Фентона добавляли витамин C в три равных аликвоты через 3, 5 и 7 минут, с итоговой общей концентрацией 0,0264 мМ.

После 10 минут обработки каждый образец немедленно разбавлялся в 100 раз в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS, pH 7,4) для нейтрализации кислой суспензии и уменьшения переноса остаточных окислителей и железа на этапе покрытия. Разбавленную бактериальную суспензию покрыт на пластины Columbia blood agar и инкубировал при 37 °C в течение 3 дней в микроаэрофильных условиях 5% O₂, 10% CO₂ и 85% N₂. Подсчитали CFU и рассчитали антибактериальную активность как редукция log₁₀ CFU относительно необработанного контроля с использованием уравнения 2:

log₁₀ КМО уменьшение = log₁₀(_{контроль} ХФУ) − log10(_{обработан} КФУ) (2)

Спасательный анализ
Для изучения связи антибактериальной активности системы Фентона с поддержкой витамина C с доступностью железа и связанными с радикалами процессами были проведены спасательные эксперименты с использованием дефероксамина (DFO) в качестве хелатора железа и тиомочевины как падальщика гидроксильных радикалов. DFO или тиомочевина добавлялась в бактериальную суспензию за 5 минут до добавления FeSO₄ и H₂O₂. DFO и тиомочевина использовались при конечных концентрациях 100 мкм и 5 мМ соответственно.

Вошли шесть экспериментальных групп: нелечённая контрольная, Фентон с помощью витамина C, Фентон с помощью витамина C с DFO, Фентон с помощью витамина C с тиочевницей, DFO и только тиочевина. Все остальные экспериментальные параметры, включая pH, фон солевого раствора/мочевины, концентрацию H₂O₂, концентрацию FeSO₄, график дозировки витамина C, продолжительность обработки, разбавление/нейтрализацию перед нанесением и условия инкубации, были идентичны тем, что использовались в первичном анализе подсчёта колоний. Антибактериальная активность количественно оценивалась с помощью перечисления КФУ и выражалась как редукция log₁₀ CFU относительно необработанной контрольной группы.

Валидация мультиштамм
Для обеспечения ограниченной поддержки перекрёстного штамма для антибактериального эффекта, наблюдаемого у первичного штамма, анализ подсчёта колоний был дополнительно применён к двум дополнительным референсным штаммам H. pylori — ATCC 43504 и ATCC 26695. Для каждого штамма были включены три экспериментальные группы: нелечённый контроль, традиционная реакция Фентона и реакция Фентона с помощью витамина C с поэтапным добавлением витамина C. Экспериментальные условия и процедуры были идентичны тем, что использовались в первичном анализе подсчёта колоний. Антибактериальная активность выражалась в виде снижения log₁₀ CFU относительно необработанного контроля для каждого штамма. Каждый эксперимент проводился с n = 3 независимыми биологическими репликами, а данные представлены как отдельные точки данных со средним ± стандартным отклонением.

Анализ матричной интерференции
Для оценки того, могут ли компоненты органического матрикса снижать антибактериальную активность системы Фентона, поддерживаемой витамином C, была создана модель интерференции белков с использованием бычьего сывороточного альбумина (BSA). BSA включался при конечных концентрациях 0, 1 и 3 г· L⁻¹. При каждой концентрации BSA были включены три экспериментальные группы: (1) нелечённая контрольная группа, (2) традиционный Фентон (Fe²⁺ + H₂O₂) и (3) Фентон с поэтапным добавлением витамина C. Анализ проводился с использованием первичного штамма по тому же протоколу, что и в первичном анализе подсчёта колоний, при одинаковых условиях pH, содержании физиологического раствора/мочевины, концентрации реагентов, продолжительности обработки (10 мин) и процедурах нанесения пластин. Антибактериальная активность проявилась в виде снижения log₁₀ CFU относительно необработанного контроля при каждой концентрации BSA. Каждый эксперимент проводился не менее трёх раз независимо от этого. Основное сравнение было сосредоточено на том, остаётся ли улучшенное заболевание Фентона лучше или, по крайней мере, не слабее, чем обычное состояние Фентона при условиях, содержащих белок.

Бактериальные живые/мертвые флуоресцентные окрашивания
После обработки бактериальная суспензия была разведена в PBS в 100 раз, как описано выше, чтобы уменьшить остаточную кислотность и окислительную переноску. Центрифугировал подвеску при 1800 × г в течение 10 минут при комнатной температуре и выбросил супернатант. Бактериальную гранулу суспензировали в 200 мкл физиологического физиологического раствора. Добавили SYTO9 и йодид пропидия (PI) к конечным концентрациям 6 мкм и 30 мкм соответственно. Инкубировал подвеску в темноте 20 минут при комнатной температуре. Поместил 5–10 мкл окрашенной бактериальной суспензии на чистый стеклянный стекло и накрыл её накрытием. Полученные флуоресцентные изображения с помощью флуоресцентного микроскопа с зелёными и красными флуоресцентными каналами при одинаковых условиях экспозиции для всех групп лечения. Захватили как минимум три случайно выбранных поля для каждой группы. Использовал изображения как качественное визуальное доказательство живых/мёртвых окрашиваний, а не как количественную оценку жизнеспособности бактерий.

Анализ морфологии бактерий с помощью сканирующей электронной микроскопии
После обработки образцы бактерий были собраны и зафиксированы в 2,5% глутаральдегиде, приготовленном в буфере фосфатов 0,1 М (pH 7,4) при 4 °C в течение 12 часов. После фиксации образцы промывали фосфатным буфером для удаления остаточного фиксатора. Образцы затем последовательно обезвоживались в сортированных этаноловых растворах размером 50%, 70%, 90% и 100%. После обезвоживания проводилась критическая точка сушки. Высушенные образцы монтировались на остатки SEM и покрыты тонким слоем золота диаметром примерно 10 нм. Морфология бактерий изучалась с помощью сканирующей электронной микроскопии при ускоряющемся напряжении 5 кВ. Репрезентативные изображения были получены при низком и высоком увеличении для каждой группы лечения. Изображения SEM использовались как качественные морфологические наблюдения, а не как количественное доказательство определённого механизма повреждения.

Статистический анализ
Статистический анализ проводился с использованием GraphPad Prism версии 10.0. Все количественные эксперименты проводились с n = 3 независимыми биологическими репликатами, а данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Для анализов флуоресценции ТА проводились статистические сравнения между несколькими группами лечения с использованием одностороннего анализа дисперсии (ANOVA), за которым последовал тест с множественными сравнениями Тьюки. Для анализов подсчёта колоний в первичном штамме с несколькими условиями лечения проводились статистические сравнения с использованием одностороннего ANOVA, а затем тест с множественными сравнениями Тьюки. Для спасательных тестов сравнения между группами проводились с использованием одностороннего ANOVA, за которым следовал тест с множественными сравнениями Даннетта, с эталоном по группе Фентона с поддержкой витамина C. В экспериментах с ограниченной проверкой кросс-штаммов снижение лог₁₀ КФУ сравнивалось между традиционными группами Фентона и Фентона с поддержкой витамина C внутри каждого штамма с помощью непарного двуххвостого t-теста. Для матрично-интерференционных анализов проводился двусторонний ANOVA с факторами обработки и концентрацией BSA, включая термин взаимодействия. Парные сравнения методов обработки при каждой концентрации BSA проводились с использованием теста Шидака с множественными сравнениями. Статистическая значимость была определена как P < 0,05. Уровни значимости обозначены как *p < 0,05, ** P < 0,01, ***P < 0,001 и ****p < 0,0001.

Результаты

Оценка деградации AO7 в системе Фентона с поддержкой витамина C
Деградация AO7 была использована как химический зонд для изучения того, как витамин C влияет на наблюдаемое окислительное поведение реакции Фентона в кислых условиях. При отсутствии витамина C традиционная система Фентона приводила к частичной деградации AO7 в течение 10-минутного реакционного периода. Когда был введён витамин C, степень разложения красителя увеличилась, и эффект зависел от молярного соот...

Обсуждение

В настоящем исследовании рассматривалось, может ли дозировка витамина C модулировать окисляющее поведение и антибактериальные показатели системы на основе Фентона при определённых кислотных in vitro условиях. В ходе химических и микробиологических анализов поэтапное приём витамина C изменял наблюдаемое поведение реакции и был связан с большей антибактериальной активностью против H. pylori по сравнению с традиционной реакцией Фентона в исследуемых условиях. Важно, что эт...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Acid Orange 7 (AO7)	Aladdin Reagent (Shanghai) Co., Ltd.	O113230	Используется в качестве модельного красителя для анализа деградации AO7.
Белок сыворотки бычьей крови (BSA)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	B885114	Используется для матричного анализа вмешательства.
Питательный бульон Brain Heart Infusion (BHI) в порошке	Sichuan Hapyear Bio-engineering Co., Ltd.	N/A	Используется для культивирования бактерий и их криохранения.
Агаризованная кровистая пластинка Columbia (5% овчая кровь)	Changde Bkmam Biotechnology Co., Ltd.	110701028.0	Используется для культивирования бактерий и подсчета КОЕ.
Сушилка критической точки (EM CPD300)	Leica Microsystems	EM CPD300	Используется для подготовки образцов для СЭМ после градуированной дегидратации этаном.
Дефероксамин (DFO)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	D873692	Используется в качестве хелатора железа в анализе спасения.
Динатриевый терефталат	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	D835937	Используется в качестве флуоресцентного зонда TA для обнаружения сигналов, связанных с •OH.
Этанол, абсолютный	Sigma-Aldrich	E7023	Используется для приготовления градуированного ряда этанола для дегидратации образцов для СЭМ.
Флуоресцентный микроскоп (DMi8)	Leica Microsystems	DMi8	Используется для флуоресцентного изображения живых/мертвых клеток.
Раствор глутаралядегида	Sigma-Aldrich	G5882	Используется для фиксации бактериальных образцов перед СЭМ.
Глицерин	Sigma-Aldrich	G5516	Используется для криохранения бактерий в бульоне BHI.
GraphPad Prism 10	GraphPad Software, LLC	Prism 10	Используется для статистического анализа и построения графиков.
Helicobacter pylori штамм ATCC 26695	American Type Culture Collection (ATCC)	700392	Дополнительный референтный штамм, используемый для ограниченной взаимной валидации.
Helicobacter pylori штамм ATCC 43504	American Type Culture Collection (ATCC)	43504	Дополнительный референтный штамм, используемый для ограниченной взаимной валидации.
Helicobacter pylori штамм G27	Центр инфекционных заболеваний, Западно-Китайская больница, Сичуаньский университет	N/A	Основной штамм, используемый для подсчета колоний, анализа спасения, матричного анализа вмешательства, флуоресцентного окрашивания живых/мертвых клеток и СЭМ.
Раствор перекиси водорода	Sigma-Aldrich	H1009	Используется в качестве субстрата пероксида в анализах реакции Фентона.
Сульфат железа(II) моногидрат (FeSO4·H2O)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	F904376	Используется в качестве источника ионов железа в реакции Фентона.
Микроскоп с микропластинками (Synergy H1)	Agilent BioTek	Synergy H1	Используется для измерения флуоресценции, полученной из TA (Ex/Em = 315/425 нм).
Фосфатно-буферный раствор соли (PBS), pH 7,4	Sigma-Aldrich	P4417	Используется для разбавления/нейтрализации после обработки перед определением КОЕ и промывкой образцов.
Физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия)	Millipore	567442	Используется для суспензии бактерий и приготовления модели кислого солевого мочевины.
Сканирующий электронный микроскоп (INSPECT F)	FEI Company	INSPECT F	Используется для анализа морфологии бактерий.
Гидроксид натрия	Sigma-Aldrich	S5881	Используется для алкалинизации аликотов анализа TA и стабилизации флуоресценции.
Осадочный покрыватель (EM ACE200)	Leica Microsystems	EM ACE200	Используется для нанесения тонкого золотого покрытия перед изображением в СЭМ.
Комплект для флуоресцентного окрашивания живых/мертвых бактерий SYTO 9/PI	Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd.	MX4234	Используется для флуоресцентного окрашивания живых/мертвых бактерий.
Тиомочевина	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	T81602	Используется в качестве радикального захватывателя в анализе спасения.
Мочевина	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	U820349	Используется для приготовления модели кислого солевого мочевины.
УФ-Вис спектрофотометр (UV-2600i Plus)	Shimadzu Corporation	UV-2600i Plus	Используется для измерения поглощения AO7 при 483 нм.
Витамин C (L-аскорбиновая кислота)	Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.	A800295	Используется в качестве восстановителя в системе Фентона с участием витамина С.