Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изготовление регулируемых полиакриламидных гидрогелей для изучения влияния жесткости матрицы на стволовые клетки Лейдига

165 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/71387

⸱

5 июня 2026 г.

 ,  ,  ,  , 
1Scientific Research Center, The Seventh Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, 2School of Medicine, Shenzhen Campus of Sun Yat-sen University, 3Department of Urology, The Sixth Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, 4Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering, Key Laboratory for Stem Cells and Tissue Engineering, Sun Yat-sen University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает изготовление полиакриламидных гидрогелей с регулируемой жесткостью для изучения влияния матричной механики на поведение стволовых клеток Лейдига в контролируемой двумерной культурной системе.

Аннотация

Жёсткость внеклеточного матрикса (ECM) критически регулирует поведение стволовых клеток. Ранее мы показали, что патологическое повышение жёсткости матрикса при старении нарушает гомеостаз стволовых клеток Лейдига (SLC), что приводит к снижению уровня тестостерона. Опираясь на это открытие, мы представляем подробный протокол — изначально разработанный в нашей лаборатории — для изготовления полиакриламидных (PA) гидрогелей с регулируемой жесткостью для моделирования микросреды яичек in vitro. Этот метод позволяет воспроизводимо литье гелей в диапазоне жесткости от 1 до 100 кПа, охватывая физиологические и патологические состояния. Ключевые этапы включают точное смешивание акриламида/бис-акриламида, уравновесение набухования геля, активацию поверхности с помощью сульфо-SANPAH и покрытие коллагена для поддержки адгезии и культурирования SLC. Мы предоставляем оптимизированные формулы для жёсткости мишень и рекомендации по устранению неполадок при распространённых проблемах, таких как неполная полимеризация и плохое крепление клеток. Эта система позволяет систематически изучать, как жёсткость субстрата модулирует пролиферацию, дифференцировку и стероидогенную функцию SLC при определённых двумерных условиях. Помимо репродуктивной биологии, она также служит ценной платформой для механобиологических исследований других типов клеток и для скрининга терапевтических средств, направленных на дисфункцию, связанную с жесткостью.

Введение

Механические свойства внеклеточного матрикса (ECM) играют ключевую роль в регулировании судьбы стволовых клеток, включая пролиферацию, дифференцировку и функциональноеподдержание 1,2,3,4. В яичке возрастное усиление ЭКМ связано с снижением выработки тестостерона. Однако лежащие в основе механобиологические механизмы остаются плохо изученными, отчасти из-за отсутствия стандартизированных in vitro моделей, которые точно воспроизводят физиологический диапазон жесткости нишей яичек. Физиологическая жесткость ткани яичков молодых мышей составляет примерно 1–15 кПа, тогда как у старой или фиброзной ткани может достигать 20–30 кПа и выше.

Гидрогели полиакриламида (PA) стали универсальной платформой для изучения взаимодействия клетки и матрицы, поскольку их жёсткость можно точно настроить, изменяя отношение акриламида к бисакриламиду 5,6. По сравнению с другими субстратами, такими как стекло с коллагеном или коммерческие гидрогели, гели PA обеспечивают независимый контроль жёсткости и биохимической плотности лигандов, что позволяет систематически вскрывать механические сигналы. Хотя существует несколько протоколов для изготовления геля PA 7,8,9, они часто отсутствуют детальной оптимизации для конкретных типов клеток, особенно для редких первичных клеток, таких как SLC.

Здесь представлен надёжный и воспроизводимый протокол подготовки гидрогелей PA с определённой жесткостью (1–100 кПа), адаптированный для культивирования SLC мышей. Метод включает пошаговые инструкции по литью геля, уравновешению набуха, функционализации поверхности с помощью Sulfo-SANPAH и покрытию коллагеном для стимулирования клеточной адгезии. Следуя этому протоколу, исследователи могут создавать субстраты с регулируемой жёсткостью (от 1 до 100 кПа), имитирующие механическую среду молодых (мягких) и старых (жёстких) яичек, что позволяет количественно исследовать жёсткие реакции SLC, зависящие от жёсткости. Система также адаптируется к другим механочувствительным типам клеток и предоставляет платформу для скрининга лекарств, направленных на патологии, связанные с жесткостью.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры для животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Университета Сунь Ятсена (Одобрение No SYSU-IACUC-2026-B1278) и проводились в соответствии с институциональными рекомендациями.

1. Изоляция и культивирование первичных мышиных SLC

  1. Вскрыть яички мышей C57BL/6 и аккуратно удалить тунику альбугину.
  2. Измельчите яички на мелкие кусочки.
  3. Диссоциировать интерстициальные клетки от семенных канальцочек путём инкубации в коллагеназе IV типа 1 мг/мл в DMEM/F12 при 37 ºC в течение 15 минут.
  4. Добавьте DMEM/F12 с 10% плодовой сывороткой для остановки активности коллагеназы.
  5. Центрифугу при 1500 × г в течение 3 минут при комнатной температуре.
  6. Суспензируйте гранулу в PBS и фильтруйте через фильтр диаметром 70 мкм.
  7. Обогащать клетки CD51⁺ с помощью флуоресцентно-активируемой сортировки клеток (FACS) с помощью сортировщика клеток инфлюкса.
  8. Семена обогащённых клеток в SLC-культурной среде, состоящей из DMEM/F12, дополненной: 1 нМ дексаметазона, 1 нг/мл LIF, 5 мкг/л инсулинтрансферрин-натрия селенита, 5% экстракта куриного эмбриона, 0,1 мМ β-меркаптоэтанола, 1% незаменительных аминокислот, 1% N2, 2% B27, 20 нг/мл фактора роста основного фибробласта, эпидермального фактора роста, фактора роста, получаемого из тромбоцитов, и онкостатина M.
  9. Культивируйте SLC в стандартных условиях (37 °C, 5% CO₂) до достижения нужной плотности для посева на гидрогелях.

2. Сборка гелевого стеклянного контейнера

  1. Тщательно осмотрите и очистите специализированные стеклянные пластины и прокладки, используемые для литья гелей электрофореза с полиакриламидом (PAGE), убедившись, что они свободны от пыли, повреждений и остатков.
  2. Правильно собрать стеклянные пластины, прокладки и зажимы согласно инструкциям производителя, чтобы сборка была хорошо герметизирована и предотвратила протечку во время гель-литья.
  3. Поставьте собранный стеклянный контейнер надёжно на лабораторную подставку, готовый к отливке.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Система литья использует стандартные стеклянные пластины Western blot (додецилсульфат натрия [SDS]-PAGE) с фиксированными прокладками толщиной 1,0 мм, что обеспечивает воспроизводимую толщину геля и плоскую поверхность для культивирования клеток.

3. Подготовка раствора гелевого раствора PAGE

  1. Точно измерьте следующие реагенты согласно экспериментальной конструкции (см . Таблицу 1) в стерильную центрифугную трубку объемом 15 мл или 50 мл: 40% акриламидного раствора, 2% бисакриламидного раствора, 1M буфер HEPES (pH 8,5), стерильный ddH₂O.
    ВНИМАНИЕ: Акриламид и бис-акриламид — это нейротоксины. Всегда надевайте перчатки и маску от пыли при взвешивании сухого порошка, чтобы избежать контакта с кожей и вдыхания частиц в воздухе. Процедуры должны проводиться в вытяжной жидкости.

4. Добавление инициатора и катализатора, а также литье геля

  1. Добавляйте в смешанный раствор следующее последовательно: 10% персульфат аммония (APS): выступает инициатором для запуска реакции полимеризации. N,N,N',N'-Тетраметилэтилендиамин (TEMED): Действует катализатором для ускорения реакции полимеризации. Для общего объёма геля 6 мл добавьте 60 мкл 10% APS и 6 мкл TEMED (см. таблицу 1 для масштабирования).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Реакция полимеризации начинается сразу после добавления TEMED; Поэтому последующие шаги должны выполняться быстро.

5. Заливка смешанного раствора

  1. Немедленно выливайте раствор по пипетке или равномерно вдоль одного края стеклянной ёмкости, чтобы избежать образования пузырей.

6. Возможность полимеризации геля

  1. Оставьте контейнер для отливного геля нетронутым при комнатной температуре.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Полимеризация обычно занимает 15–30 минут при комнатной температуре (20–25 °C).
  2. Переходите к следующему этапу, когда станет видна чёткая граница между неполимеризированной гелевой смесью и полимеризированным гелем, и гель становится полностью твёрдым (гель не течёт при наклоне контейнера).
  3. Сразу после литья аккуратно наложите тонкий слой абсолютного этанола (или насыщенного водой этанола) поверх гелевой смеси, чтобы исключить атмосферный кислород, который подавляет радикальную полимеризацию. Этанол также помогает формировать плоскую верхнюю поверхность.
  4. После полимеризации удалите этанол перед разборкой пластин.

7. Разборка контейнера и сбор геля

  1. Аккуратно разберите зажимы и используйте пластиковый клин или лопатку, чтобы аккуратно разнять стеклянные пластины, чтобы полимеризированный гель PAGE оставался целым на одной пластине.
  2. Приготовьте культурное блюдо с достаточным количеством стерильного PBS.
  3. Аккуратно снимите гель со стеклянной пластины лопаткой или перчаткой и дайте ему плавно скользить в PBS.
  4. Запечатайте блюдо с гелем в PBS и инкубуйте при 4 °C на ночь.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг крайне важен. Свежеприготовленный гель обезвожен и должен полностью впитывать воду и набухать до окончательных размеров в PBS. Если этот этап пропустить и гель нарезать напрямую, он продолжит расширяться в последующей клеточной среде, вероятно, превышая площадь хорошо и делая его непригодным для использования. Толщина геля после отёка составляет 1 мм. Это критично, поскольку при падении толщины геля менее 100 мкм клетки могут ощущать жёсткость жёсткой культивирующей пластины, что мешает предполагаемым механобиологическим измерениям.

8. Нарезка и перенос геля в посевную пластину

  1. На следующий день возьмите гель при температуре 4 °C. Используя стерильный биопсийный пуансон или нож для лезвий (диаметр, соответствующий размеру пластины для посевов, например, пластину с 6 лунками), разрезают гель в стерильных условиях.
  2. В шкафу для биобезопасности используйте стерильные щипцы, чтобы аккуратно поднять разрезанный гелевый диск и поместить его в центр пустой стерильной ямы для культуры.

9. Первичная промывка и ультрафиолетовое облучение

  1. Добавьте достаточное количество стерильного PBS в скважину с гелем, обеспечивая его полную погруженность.
  2. Аккуратно покачивайте посевную пластину, чтобы промыть поверхность геля.
  3. Аспирируйте PBS с помощью пипетки.
  4. Повторите этот процесс стирки ещё раз — всего два раза, каждое длится 3 минуты.
  5. После мытья добавьте достаточно стерильного PBS, чтобы гель снова покрывался. Поместите всю посевную пластину с приоткрытой крышкой под ультрафиолетовой лампой (внутри биобезопасного шкафа или специального УФ-сшивателя) и облучите 1 час для базовой стерилизации.

10. Активация кросслинкера Sulfo-SANPAH

  1. Внутри шкафа для биобезопасности аккуратно аспирируйте PBS из скважины.
  2. Перед аспирацией аккуратно отдельте гель от стенок и низа с помощью пипетки, чтобы не повредить гель из-за жидкого поверхностного натяжения.
  3. Перенесите гель в другую чистую скважину в той же культурной пластине с помощью стерильных щипцов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: При переносе геля сначала добавление небольшого количества PBS в чистую скважину может помочь вывести воздушные пузырьки, застрявшие между дном скважины и гелем при размещении, а также служит дополнительной промывкой.
  4. Приготовьте рабочий раствор для кросслинкера: Свежеприготовьте рабочий раствор сульфо-SANPAH с концентрацией 0,2 мг/мл, разбавляя стандартный раствор (см . таблицу 1) стерильной водой или рекомендованным буфером (например, PBS).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Защитите раствор от света.
  5. Добавьте достаточное количество рабочего раствора Sulfo-SANPAH для покрытия геля (например, 250 мкл для пластины на 12 лунок, 500 мкл для пластины на 6 лунок), обеспечивая полное покрытие геля.
  6. Поставьте пластину под длину волны 365 нм / 120 мДж/см, 2 УФ-света, и облучайте 1 час.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот этап активирует Sulfo-SANPAH, позволяя ему связываться с функциональными группами на поверхности геля.

11. Активация сшивателя и финальные промывки

  1. После облучения аспирируете раствор Sulfo-SANPAH из скважины внутри шкафа биобезопасности.
  2. Добавьте достаточно стерильного PBS в колодец, аккуратно покачивайте, чтобы промыть поверхность геля, и аспирировать PBS.
  3. Повторите этот процесс стирки ещё раз — всего два раза, каждое длительностью 3 минуты, чтобы тщательно удалить неотреагированный сульфо-SANPAH.

12. Подготовка рабочего раствора для коллагена типа I крысиного хвоста

  1. Используйте раствор уксусной кислоты с концентрацией 0,02 млн в качестве растворителя для разведения коллагена типа I типа «крысиного хвоста».
  2. Отрегулируйте концентрацию конечного рабочего раствора на 60–100 мкг/мл. Например, если концентрация коллагена составляет 4 мг/мл, добавьте 15–25 мкл бульона к 985–975 мкл уксусной кислоты 0,02 мл, чтобы получить 1 мл рабочего раствора.

13. Покрытие и инкубация коллагена

  1. В каждую яму, содержащую активированный гель, добавьте соответствующий объём рабочего раствора коллагена в зависимости от типа пластины: добавьте 2 мл для пластины с 6 лунками, или 1 мл для пластины с 12 лунами.
  2. Аккуратно покрутите культивную пластину, чтобы раствор коллагена равномерно покрыл гель и дно колодца.
  3. Накройте пластину и инкубуйте на ночь в инкубаторе с температурой 37 °C, 5% CO₂, чтобы коллаген закрепился на поверхности геля с помощью сшивания Sulfo-SANPAH.

14. Вторичное ультрафиолетовое излучение и фиксация

  1. На следующий день снимите пластину и снова облучите под примерно 120 мДж/см 2 УФ-лампы в течение 1 часа.

15. Удалить несвязанные коллагены и семенные клетки

  1. Внутри шкафа для биобезопасности аккуратно вдых раствор коллагена типа I типа «крысиный хвост» из колодцев.
  2. Добавьте стерильный PBS в колодцы, аккуратно покачивайте, чтобы промыть гелевую поверхность, и аспирировать PBS.
  3. Повторите стирку ещё раз — всего два раза, каждое длится 3 минуты.
  4. После стирки гелевая матрица готова. Подготовить подготовленные стволовые клетки Лейдига в полном культурном среде SLC (состав описан на шаге 1).
  5. Засеять суспензию клетки непосредственно на поверхность геля. Рекомендуемая плотность посева составляет 2 × 104 ячейки/см² (например, примерно 2 × 105 ячеек на скважину для стандартной пластины с 6 колодцами).
  6. Инкубировать посевные пластины при 37 °C в увлажнённом 5% CO₂ инкубаторе.
  7. Для поддержания оптимальной жизнеспособности клетки и стероидогенной функции меняйте культурную среду каждые 48 часов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Успешное выполнение этого протокола даёт полиакриламидные гидрогели с определённой жесткостью (от 1 до 100 кПа), которые остаются прочно прикреплёнными к культивирующей пластине и поддерживают прочную адгезию и распространение SLC. Рисунок 1 представляет собой схематический обзор всего рабочего процесса — от гель-литья до засева ячеек, позволяя пользователям визуализировать ключевые этапы протокола.

Механическая валидация полиакри...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Механические свойства внеклеточного матрикса играют фундаментальную роль в регуляции поведения стволовых клеток, однако инструменты для систематического изучения этих эффектов в репродуктивных клетках остаются ограниченными. Наши предыдущие исследования показали, что патологическое ужесточение матрикса при старении нарушает гомеостаз стволовых клеток Лейдига (SLC) по оси Piezo1/ROS/Gli1, что приводит к снижениютестостерона 10. Опираясь на это открытие, мы разработ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Финансирование этого проекта было предоставлено Национальной программой ключевых исследований и разработок по исследованию стволовых клеток и трансляции Китая (2021YFA1100601), Национальным фондом естественных наук Китая (82371608), Гуандунским фондом фундаментальных и прикладных исследований (2023B1515020016) и Шэньчжэньской фундаментальной исследовательской программой (JCYJ20240813150417024, JCYJ20240813150422030).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Уксусная кислотаСигма-ОлдричCat#A6283Разбавитель для коллагена хвоста крысы (0,02 м)
Acryiamide     Sangon BiotechКот#A100341-0500Мономер для приготовления полиакриламидного геля
Персульфат аммония (APS) Sangon BiotechКот#A100486-0100Инициатор для гелевого полимеризации
Дополнение B27ИнвитрогенКот#A1486701Определённая добавка, обогащённая антиоксидантами и гормонами; Поддерживает выживание нейронных и стволовых клеток (2% v/v)
Базовый фактор роста фибробластов (bFGF)ИнвитрогенКот#13256029Митогенный фактор роста; способствует пролиферации SLC и стебельности (20 нг/мл)
Бис-акриламид Шанхайская биотехнология юаньеCat#S14002Сшиватель для полиакриламидных гелей
Экстракт куриного эмбрионаUS BiologicalsCat#C3999Богатый источник факторов роста и питательных веществ; Поддерживает рост и жизнеспособность SLC (5% v/v)
Коллаген, тип I, из крысиного хвостаYEASENCat#40125ES50Покрывает поверхность гидрогеля полиакриламида, активируемого сульфо-SANPAH, для стимулирования адгезии и культуры SLC.
Коллагеназный тип IVGibcoCat#17104-0191 мг/мл при DMEM/F12 для пищеварения тканей яичек
CYP11A1 антителаGeneTexКот#GTX56293Для западного блотинга
ДексаметазонСигма-ОлдричCat#D1756Агонист глюкокортикоидных рецепторов; поддерживает пролиферацию SLC и поддержание ствола (1 нм)
DMEM/F12 mediumGibcoКот#11320033Базальная среда для пищеварения, промывания и культуры SLC
Эпидермический фактор роста (EGF)PeproTechКот#AF-100-15Стимулирует пролиферацию SLC и поддерживает недифференцированное состояние (20 нг/мл)
Сыворотка для плода быка (FBS)VISTECHКот#SE100-011Используется при 10% для прекращения активности коллагеназы
ФиджиН/Дhttps://imagej.net/FijiПрограммное обеспечение для анализа изображений
Антитела к GADPHProteintechCat#60004-1-IgДля западного блотинга
Ферменты гелевого пищеварения Точная биотехнологияКот#GXDLFAФерментная смесь для переваривания тканей яичек и выделения SLC
HEPES ЦитиваCat#SH30237.01Буфер для поддержания pH 7.0– 7.4
HSD3 и бета; АнтителаСанта-КрусCat#sc-515120Для западного блотинга
Сортировщик ячеек ИнфлюксBDhttps://www.bdbiosciences.com/content/dam/bdb/marketing-documents/BD_Influx_tech_specs.pdf
Инсулин-трансферрин-натрий селенит (ITS)Сигма-ОлдричКот#11074547001Способствует выживанию клеток, усвоению глюкозы и антиоксидантной защите (5 и мю; g/L)
Замена сыворотки KnockOut (KSR) GibcoCat#10828-028Заменитель сыворотки для культурной среды SLC
LIF (ингибирующий фактор лейкемии)МиллипорКот#LIF1010Цитокин, поддерживающий плюрипотентность стволовых клеток и самообновление (1 нг/мл)
Мышиные яичкиЭта статьяН/ДВыделены из мышей C57BL/6
Набор ELISA для мышей с тестостерономFine BiotechCat#40203ES80Для количественной оценки тестостерона в культурных супернатантах
Мышь: C57BL/6 Shenzhen TopBiotechН/ДШтам, используемый для сбора яичек
мыши: стволовые клетки Лейдига (SLC) и bbsp;Эта статьяН/ДПервичные клетки, выделенные из мышиных яичек
Дополнение N2ИнвитрогенКот#17502001Определенные добавки без сыворотки, поддерживающие культуры нейронных и стволовых клеток (1% v/v)
Незаменительные аминокислотыHyCloneКот#SH30050.03Обеспечивает источники азота для синтеза белка и метаболизма клеток (1% v/v)
Онкостатин М (OSM)PeproTechCat#300-10TЦитокин, участвующий в дифференцировке SLC и созревании клеток Лейдига (20 нг/мл)
Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS)GibcoКот#10010023Мойка и буфер подвески
Фактор роста, полученный из тромбоцитов (PDGF)PeproTechCat#100-14BПоддерживает размножение клеток, миграцию и выживание (20 нг/мл)
Prism 9.0GraphPadhttps://www.graphpad.com/Программное обеспечение для статистического анализа и построения графиков
Антитела StARProteintechCat#67130-1-IgДля западного блотинга
Сульфо-SANPAH МАКЛИНКот#102568-43-4Гетеробифункциональный кросслинкер для активации поверхности геля
TEMED ФайджинКот#PH0341Катализатор полимеризации
β-меркаптоэтанолИнвитрогенКот#21985023Снижает окислительный стресс и поддерживает рост клеток в культуре (0,1 мМ)

Ссылки

  1. Gjorevski, N., et al. Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture. Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).
  2. Smith, L. R., Cho, S., Discher, D. E. Stem cell differentiation is regulated by extracellular matrix mechanics. Physiology. 33 (1), 16-25 (2018).
  3. Chaudhuri, O., et al. Hydrogels with tunable stress relaxation regulate stem cell fate and activity. Nature Mater. 15 (3), 326-334 (2016).
  4. Nellinger, S., Kluger, P. J. How mechanical and physicochemical material characteristics influence adipose-derived stem cell fate. Int J Mol Sci. 24 (4), 3551(2023).
  5. Pelham, R. J., Wang, Y. L. Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate flexibility. Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (25), 13661-13665 (1997).
  6. Tse, J. R., Engler, A. J. Preparation of hydrogel substrates with tunable mechanical properties. Curr Protoc Cell Biol. , (2010).
  7. Sanzari, I., et al. Parylene C topographic micropattern as a template for patterning PDMS and polyacrylamide hydrogel. Sci Rep. 7 (1), 5764(2017).
  8. Kandow, C. E., Georges, P. C., Janmey, P. A., Beningo, K. A. Polyacrylamide hydrogels for cell mechanics: steps toward optimization and alternative uses. Methods Cell Biol. 83, 29-46 (2007).
  9. Aratyn-Schaus, Y., et al. Preparation of complaint matrices for quantifying cellular contraction. J Vis Exp. 46, e2173(2010).
  10. Huang, J., et al. High matrix stiffness triggers testosterone decline in aging males by disrupting stem Leydig cell pool homeostasis. Cell Rep. 44 (9), 116207(2025).
  11. Syed, S., Karadaghy, A., Zustiak, S. Simple polyacrylamide-based multiwell stiffness assay for the study of stiffness-dependent cell responses. J Vis Exp. 97, e52643(2015).
  12. Zheng, Y. C., et al. Islet transplantation ameliorates diabetes-induced testicular interstitial fibrosis and is associated with inhibition of TGF-β1/Smad2 pathway in a rat model of type 1 diabetes. Mol Med Rep. 23 (5), 376(2021).
  13. Trottmann, M., et al. Shear-wave elastography of the testis in the healthy man - determination of standard values. Clin Hemorheol Microcirc. 62 (3), 273-281 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.