Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Обмен опытом по долгосрочной выживаемости в неартериализированной модели трансплантации печени крыс

152 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/71650

⸱

22 мая 2026 г.

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Цель этого представленного протокола — поделиться оптимизированным хирургическим опытом для создания неартериализированной модели трансплантации печени крыс, с акцентом на технические усовершенствования, обеспечивающие долгосрочную выживаемость животных сверх 100 дней.

Аннотация

В экспериментальной трансплантации печени модель крыс является золотым стандартом для изучения иммунологии и метаболических процессов трансплантации; Однако реконструкция чрезвычайно тонкой печёночной артерии (~0,5 мм) представляет собой серьёзную техническую задачу. Для обхода этого широко используется упрощённая модель неартериализированной трансплантации печени крыс (NArLT). К сожалению, тяжёлые желчные осложнения — такие как вытекание желчи и ишемический холангит — возникающие вследствие артериальной депривации, часто ограничивают долгосрочную выживаемость реципиентов. Это препятствие значительно ограничивает исследования по ключевым темам, включая долгосрочную иммуносовместимость хозяина и трансплантат и хроническое отторжение. Здесь мы представляем оптимизированный протокол для модели NArLT, который включает критические технические доработки для успешного преодоления этих ишемических желчных повреждений. Ключевые улучшения включают значительно укорочённую анепатическую фазу, технику безприкосновенной дисекции желчных путей, тщательное промывление желчных путей и оптимизированный внутренний метод стентирования желчных путей. После внедрения этой улучшенной процедуры уровень выживаемости реципиента превысил 94% в течение 100-дневного периода наблюдения. В конечном итоге этот оптимизированный протокол предоставляет высоковоспроизводимую и надёжную платформу для изучения механизмов, лежащих в основе долгосрочной толерантности к трансплантации, тем самым поддерживая разработку новых терапевтических стратегий в трансплантационной медицине.

Введение

Модель трансплантации печени крысы является самой широко используемой экспериментальной платформой для фундаментальных исследований трансплантации. Однако его более широкое применение часто затрудняется известной крутой кривой обучения, которая может значительно замедлить прогресс экспериментальных исследований 1,2. Кроме того, традиционные модели трансплантации печени крыс часто страдают от неоптимального успеха хирургического вмешательства и низких долгосрочных показателей выживаемости. Благодаря критическому оптимизированию хирургических процедур, тщательному уточнению опер....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты и операции на животных в данном исследовании были одобрены Комитетом по этике экспериментальных животных Университета Циндао (No 20260301SD5020260401065). Прилагайте все усилия, чтобы минимизировать страдания животных.

1. Предоперационная подготовка

  1. Экспериментальные животные
    1. В качестве доноров используйте взрослых самцов крыс типа Sprague–Dawley (SD) возрастом 8–10 недель и весом 220–250 г. Убедитесь, что вес реципиента немного больше веса донора, с разницей в пределах 50 г.
    2. Домашние крысы в определённых условиях, свободных от патогенов, пр....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для обеспечения стабильного хирургического качества и воспроизводимости во всех моделях NArLT все процедуры выполнялись одним и тем же опытным микрохирургом. Всего за период исследования было проведено 50 трансплантаций печени крыс. Средняя продолжительность хирургических процедур была следующей: средняя продолжительность донорской операции составляла 25,3 ± 2,6 мин, подготовка трансплантата ex vivo — 13,1 ± 2,1 мин, операция реципиента — 43,0 ± 1,6 мин, а анепатическая фаза — 15,7 ± 1,2.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Модель NArLT является краеугольным камнем экспериментальных исследований трансплантации благодаря избеганию сложного микрососудистого артериальногоанастомоза 11. Однако традиционные методы NArLT исторически страдают от высокого уровня осложнений желчных заболеваний — до 30% — которые серьёзно ограничивают долгосрочную выживаемость и мешают проведению хроническихиммунологических исследований 2. Значимость предлагаемого метода заключается в е.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют о конфликтах интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (No 82370666), Ключевой научно-исследовательской программой провинции Шаньдун, Китай (No 2025KJHZ016) и проектом по технологии здравоохранения провинции Фуцзянь (No 2023CXA014).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Всыпаемый шов 4-0EthiconW9109HИспользуется для закрытия мышечно-фасциального слоя (linea alba)
4-0 Шёлковый шовEthiconVCP304HИспользуется для закрытия кожи
7-0 или 8-0 Швы / Шёлковый галстукEthiconZ1711EИспользуется для перевязки сосудов (например, левой френической вены)
Внутривенный катетер 22GБ. Браун4252098BОбрезано до 5– 7 мм с наклонными концами для подготовки желчного стента
23G игла для вены кожи головыShandong Qinkai Medical Industry Co., Ltd.MDLSSVSИспользуется для установки в брюшную аорту для перфузии печени
БупренорфинТяньцзиньский институт фармацевтических исследований Pharmaceutical Co., Ltd.H12020275Введение в виде подкожной анальгезии после операции
Ватная палочкаAoocn216-236Используется для мягкого поднятия печени во время вскрытия
Дроблённый лёдН/ДН/ДИспользуется для поддержания температуры трансплантата во время подготовки ex vivo
Эластичные ретракторыН/ДН/ДИспользуется для втягивания брюшной стенки во время лапаротомии
Оболочки для эпидурального катетераJiangsu Maichuang Medical Device Co., Ltd.20173084015Размеры 5F и 6F; использовался как манжеты для PV и IHIVC
МарляЦентральная медицинская технологическая компания, Ltd.CH-1001Пропитанный солевым раствором; Используется для защиты кишечника
Раствор глюкозы (5%)Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.H20044307Использовался для промыва внутрипеченочной крови во время гепатэктомии реципиента
Гепарин физиологический растворShenzhen Life Biotechnology Co., Ltd.H2012003100 МЕ/мл; используется для замачивания желчного стента
Indwelling NeedleБ. Браун4254074BИспользовался для промывания SHIVC для удаления воздуха перед завершением анастомоза
ИзофлуранJinan Guangshengyuan Biotechnology Co., Ltd.153107015концентрация 5%; используется для индукции анестезии 
Микроваскулярные зажимыShanghai Medical Devices Co., Ltd.JCZ200Используется для окклюзии сосудов во время операции
Комарные щипцыShanghai Medical Devices Co., Ltd.J31010Используется для тонкой обработки и подготовки манжет
Нормальный физиологический раствор (0,9%)Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.H20044304Используется для орошения и замачивания марлей (37°; C)
Пентобарбитал (1%)Shanghai Yuansi Technology Co., Ltd.P050000040– 45 мг/кг; Используется для хирургической анестезии
Периферически введённый венозный катетер (PIVC)Ковидьен8888145015Используется для промывки зафиксированных PV и подтверждения педентности 
Повидон-йодShanxi Trinda Biotechnology Co., Ltd.41836054Используется для дезинфекции хирургических участков
Резинка (из Surgical Glove)АнселлН/ДИспользуется для тяги SHIVC во время операции реципиента
Спраг и Ндаш; Доули РэтсHuafukang (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.22001AВзрослые самцы крыс, 8– 10 недель, 220– 250 г
Стерильная чашка Петри (10 см)Shandong Enyou Biotechnology Co., Ltd.H905001Использовался для удержания трансплантата в растворе UW во время подготовки ex vivo
Шприц (20 мл)Shandong Weigao Group Medical Polymer Products Co., Ltd.20163141593Используется для контролируемой перфузии печени (3– 3,5 мл/мин) 
Решение по сохранению UWМост к жизниBTL-UW-1LПоддерживается при 4&°; C; Используется для донорской перфузии печени и сохранения трансплантата

Ссылки

  1. Hirata, M., et al. Stepwise approach for acquisition of microsurgical skills through rat orthotopic liver transplantation experiments. Eur Surg Res. , (2023).
  2. Zhao, H., et al. Revisiting orthotopic rat liver transplant. Exp Clin Transplant.....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Неартериализированная модельбилиарные осложненияиммунология трансплантациихроническое отторжениестентирование желчных путейангепатическая фазадиссекция желчных путейтолерантность к трансплантату

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно