Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Стандартизированный протокол цитометрии с многоцветным потоком для измеряемой остаточной оценки заболевания при острой лейкемии

143 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/71756

⸱

7 августа 2026 г.

1Department of Clinical Laboratory, The Second People's Hospital of Neijiang

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает стандартизированный рабочий процесс многоцветной проточной цитометрии для измеряемой оценки остаточных заболеваний при остром лейкозе, интегрируя контролируемую обработку образцов, гармонизированные параметры сбора, последовательные стратегии гейтинга и интерпретацию с учётом знаменателя для повышения аналитической воспроизводимости в рутинных клинических лабораториях.

Аннотация

Измеримое остаточное заболевание (МРД) является важным прогностическим индикатором в лечении острой лейкемии. Однако рутинная многоцветная цитометрическая оценка потока (MFC) остаётся уязвимой к преданалитической и аналитической вариативности, включая гемодилюцию, несогласованную глубину приобретения и субъективную интерпретацию. В этой статье представлен стандартизированный операционный рабочий процесс для рутинной оценки МРД при острой лимфобластной лейкозе В-клеток (B-ALL) и острой миелоидной лейкемии (ОМЛ). Протокол включает строгие критерии принятия образцов с интегрированной оценкой гемодилюции и применяется метод лизисирования эритроцитов для костного мозга и периферических образцов крови. Аналитическая стандартизация достигается с помощью специфических для заболевания двухтрубочных восьмицветных панелей антител, гармонизированных мишеней для приобретения, требующих не менее 500 000 положительных событий CD45, и фиксированных последовательных стратегий гейтинга. Кроме того, рабочий процесс применяет лимиты обнаружения (LOD) и количественной оценки (LOQ) с учетом знаменателя для поддержки объективной трёхуровневой системы отчетности. Валидация по 197 клиническим образцам показала высокую повторяемость, надёжную линейность разбавления и высокую согласованность с парными ортогональными молекулярными анализами. В совокупности этот протокол предоставляет практическую основу для стандартизированного мониторинга MRD. для стандартизированного мониторинга МРД в рутинных клинических лабораториях путём интеграции контролируемого преданалитического обработки и гармонизированных аналитических параметров.

Введение

Даже после достижения морфологической ремиссии пациентам с острым лейкемией требуется постоянное наблюдение на предмет измеримого остаточного заболевания (МРД) для точной оценки риска рецидива. Традиционные морфологические и цитопатологические исследования не обладают чувствительностью, необходимой для обнаружения низкоуровневых остаточных лейкемических популяций. В результате оценка МРД стала неотъемлемой частью мониторинга заболеваний как при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ), так и при острой лимфобластной лейкозе B-клеток (B-ALL). Недавние рекомендации European LeukemiaNet подчёркивают, что надёжная оценка MRD при ОМЛ зависит от технической стандартизации и воспроизводимости между наблюдателями, а не от доступности простоготеста 1,2. При B-ALL многоцветная проточная цитометрия (MFC) остаётся особенно важной для пациентов без стабильных молекулярных мишеней. Предыдущие исследования показали, что стандартизированные многоцветные потоковые цитометрические подходы с использованием структурированных панелей антител могут обеспечить воспроизводимое и чувствительное обнаружение остаточных заболеваний3. Проточная цитометрия широко используется благодаря широкой применимости, быстрому сроку выполнения и экономической эффективности. Результаты анализов сильно зависят от стандартизированной подготовки образцов, параметров сбора и интерпретацииданных 4.

Одной из основных технических задач в оценке потоковой цитометрической MRD является обнаружение редких событий, которое сильно зависит от глубины набора и общего количества событий. Идентичные панели антител могут вызвать разную аналитическую чувствительность, если образцы собраны с непостоянными размерамизнаменателей 5. Стандартизация, таким образом, выходит за рамки отбора антител и требует гармонизированной обработки образцов, объёмного лизиса эритроцитов, компенсации инструментов, приобретения мишень и стратегий гейтинга. В образцах костного мозга гемодилюция также представляет собой значительную преданалитическую переменную, поскольку периферическое загрязнение крови может искусственно снижать кажущуюся остаточную лейкемическуюнагрузку 6,7. Кроме того, интерпретация низкочастотных событий требует чётко определённых порогов отчёта на основе специфической глубины сбора образца. Недавние исследования подчёркивали важность пределов обнаружения (LOD) и количественной оценки (LOQ) для повышения согласованности интерпретации цитометрического потокаMRD 8.

Общая цель этого протокола — обеспечить стандартизированный рабочий процесс для рутинной оценки MRD на основе MFC в B-ALL и AML. Протокол интегрирует критерии принятия образцов, оценку гемодилюции, проектирование панелей антител, специфических к болезнью, подготовку образцов с объёмом лиза, гармонизированные мишени для забора, фиксированные последовательные стратегии гейтинга и критерии отчётности, скорректированные с учётом знаменателя, в единую операционнуюструктуру 9,10. Объединяя стандартизированные преданалитические и аналитические процедуры, этот метод обеспечивает практический и воспроизводимый подход к рутинному внедрению мониторинга МРД в клинических лабораториях. Рисунок 1 иллюстрирует общий стандартизированный преданалитический и аналитический рабочий процесс, реализованный в данном исследовании. Таблица 1 суммирует характеристики когорты и образцов пациентов с острой B-клеточной лимфобластной лейкозом (B-ALL) и острым миелоидным лейкозом (ОМЛ), зарегистрированных в период валидации в заранее определённых окнах мониторинга (конец индукции, консолидации и пред-ГСКТ).

figure-introduction-1
Рисунок 1: Стандартизированный рабочий процесс для рутинной многоцветной цитометрической оценки потоковой MRD. (A) Преданалитический рабочий процесс, показывающий скрининг образцов и оценку качества на заранее определённых интервалах мониторинга. (B) Аналитический рабочий процесс — от объёмного лизиса эритроцитов и окрашивания антител через последовательное ограничение, интерпретацию с учётом знаменателя и итоговую отчетность по MRD. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.

Таблица 1: Объединённая демография пациентов, характеристики клинических образцов и показатели рутинного отбора. Эта единственная пересмотренная таблица суммирует исходные клинические особенности зарегистрированной когорты, включающей случаи острого лимфобластного лейкоза B-клеток (B-ALL) и острого миелоидного лейкоза (ОМЛ), и сочетает демографические характеристики на уровне пациента с характеристиками на уровне образца, интервалами мониторинга лечения, жизнеспособностью, баллами гемодилюции, глубиной набора и измеримыми остаточными классификациями заболеваний, скорректированными по знаменателям. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать эту таблицу.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры, связанные с человеческими образцами, проводились в соответствии с институциональными рекомендациями и утверждён Этическим комитетом Второй народной больницы Нэйцзяна (Утверждение No PXTS887192). В исследовании использовались деидентифицированные остаточные клинические образцы, полученные после планового диагностического тестирования. Информированное согласие было отказано, поскольку исследование не повлияло на уход за пациентом, распределение лечения или процедуры сбора образцов. Химикаты, реагенты и оборудование, используемые в протоколе, перечислены в Таблице материалов.

1. Сбор образцов и преданалитическая оценка

  1. Собирайте аспираты костного мозга как предпочтителенный тип образца для измеримого остаточного заболевания (MRD). Периферические образцы крови используют только тогда, когда аспирация костного мозга клинически противопоказана или во время выбранных анализов наблюдения и компаратора.
  2. Собирайте образец костного мозга во время первого аспираторного извлечения, когда это возможно. Избегайте последующих аспираторных растяжек, чтобы минимизировать периферическое загрязнение крови и недооценку низкоуровневого остаточного заболевания.
  3. Сразу после сбора образцы переносят образцы в антикоагулянтные трубки с дикалием этилендиаминететрауксусной кислотой (K2-EDTA) или натрие-гепаринового антикоагулянта. Храните и транспортируйте образцы при комнатной температуре (18–25 °C) и защищайте их от прямого солнечного света.
    ВНИМАНИЕ: Не ставьте образцы в холодильник.
  4. Обрабатывайте все образцы в течение 24 часов после сбора. Для исследований устойчивости сохраняйте аликвоты для повторного анализа в течение 24 и 48 часов при сохранении условий хранения при комнатной температуре.
  5. Проверьте идентификатор пациента, тип антикоагулянта, целостность образца и время сбора при получении образца. Отклонять образцы с выраженным свертываемостью, тяжёлым гемолизом или выраженной клеточной дегенерацией
  6. Оценить образцы костного мозга на предмет гемодилюции перед окончательной интерпретацией. Рассчитайте полуколичественный балл гемодилюции в диапазоне от 0,00 до 1,00 для оценки периферического загрязнения крови.
  7. Определите это значение, разделив долю зрелых лимфоцитов на сумму CD34-положительных предшественников, незрелых гранулоцитов и зрелых лимфоцитов, где более высокий коэффициент указывает на более сильный разбавляющий эффект.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вычислите счёт по следующей формуле:
      figure-protocol-1
    где более высокий балл указывает на более сильное периферическое загрязнение крови.
  8. Классифицируем результаты гемодилюции следующим образом: <0,20, приемлемо; 0,20–0,39, слегка гемодилированная; и ≥0,40, существенно гемодилированные.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не присваивайте окончательные MRD-отрицательные интерпретации заметно разбавленных образцам, если не подтверждены адекватный размер знаменателя и архитектура сохранившегося предшественника костного мозга.

2. Подготовка панели антител, специфичных к болезнью

  1. Подготовьте стандартизированные специализированные для заболевания двухтрубочные панели с восемью цветами антител для анализа B-ALL и AML. Достичь стандартизации панелей путём строгого соблюдения фиксированных маркеров магистрали на всех трубках для стабильного контроля популяции.
  2. Используйте последовательные флюорохромные конъюгаты для соответствующих линейных антигенов и строго соблюдайте рекомендованные производителем объемы титрации для минимизации вариабельности флуоресценции от партии к партии.
  3. См. дополнительную таблицу 1 для получения комбинаций маркеров, назначения фторхромов, клонов антител, объёмов окрашивания и параметров получения.
  4. Для оценки B-ALL используйте CD19, CD45, CD34, CD10 и CD20 в качестве основных маркеров в обеих трубках для определения популяций прекурсоров и паттернов созревания. Добавьте CD38, CD58 и CD81 в трубку 1.
  5. Добавьте CD66c, CD123 и либо CD73, либо CD304 в трубку 2 согласно диагностическому иммунофенотипу, связанному с лейкемией, установленному при начальной оценке.
  6. Для оценки ОМЛ используйте CD45, CD34, CD117, CD13, CD33 и HLA-DR в качестве основных маркеров в обеих трубах для определения популяций бластных и незрелых миелоидных групп.
  7. Добавьте CD7 и CD56 в пробирку 1 для оценки экспрессии антигена между линиями. Добавьте CD11b и CD15 в трубку 2 для оценки аномалий созревания миелоидов.

3. Подготовка и окрашивание объемного лизиса

  1. Перенесите 2,0 мл хорошо смешанного образца костного мозга или периферической крови в полипропиленовую трубку объемом 15 мл. Если объём образца ограничен, используйте минимальный входной объём 1,0 мл.
  2. Добавьте 10 мл предварительно подогретого буфера лизиса хлорида аммония. Инкубировать суспензию в течение 10 минут при комнатной температуре для лиза эритроцитов.
  3. Центрифугуйте образец при 500 × г в течение 5 минут. Аккуратно избавляйте супернатант, не нарушая гранулу с ядром.
  4. Суспензировать гранулу в 2 мл фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS), содержащем 0,5% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 2 мМ этилендиаминетрауксусной кислоты (EDTA). Повторите этап промывки один раз, если остатки гемоглобина остаются заметны.
  5. Определить концентрацию ядочных клеток с помощью автоматического гематологического анализатора или ручного гемоцитометра с исключением трипана синего. Рассмотрим минимальную концентрацию ядерных клеток в 5 × 106 клеток/мл как оптимальную для стандартного завоевания.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если клеточный выход опускается ниже этого порога, сконцентрируйте образец дополнительной центрифугой при 500 × г в течение 5 минут и аккуратно уменьшите объем буфера ресуспензии для максимизации клеточной плотности.
  6. Aliquot 5 × 106 нуклеированных клеток в пробирке для рутинного окрашивания. Увеличить вход до максимума 1 × 107 клеток на пробирку для высокочувствительного анализа, когда получение образцапозволит 6,7.
  7. Добавьте индивидуально титрированный коктейль антител и фиксируемый краситель жизнеспособности, указанный в Таблице материалов, в каждую тюбик согласно валидированной конфигурации панели окрашивания. Рутинная валидированная панель использует 5 мкл на антитело, конъюгированное с фторхромом, если только титрование, рекомендованное производителем, не указывает на другой объём, специфичный для антител.
  8. Убедитесь, что объём конечной реакции окрашивания строго поддерживается на уровне 100 мкл на тест, чтобы сохранить оптимальную стехиометрию антитела к антигену. Инкубировать образцы в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте.
  9. Промыйте окрашенные клетки один раз с помощью буфера для промывания и заново суспензируйте конечную гранулу в 500 мкл буфера для накопления.
  10. Подготовьте одноокрашенные контроли компенсации с использованием компенсационных шариков в тот же день, когда собираются образцы.

4. Настройка приборов и сбор данных

  1. Проводите ежедневный стартовый контроль качества потокового цитометра перед взятием образцов пациентов. Проверьте гидродинамику, выравнивание лазеров, работу детектора и значения флуоресцентных целей с помощью калибровочных шариков, следуя инструкциям производителя.
  2. Подготовьте одноокрашенные контроли компенсации с использованием тех же фторохромов, которые входят в панели антител. Корректируйте компенсирующую матрицу перед получением пациента и убедитесь, что маркеры магистрали остаются в пределах заранее определённых целевых диапазонов флуоресценции.
  3. Используйте один и тот же шаблон сбора, настройки детектора, стратегию компенсации и иерархию гейтинга для всех анализируемых образцов в период валидации.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Обеспечить правильную гармонизацию между приборами, устанавливая стандартизированные значения интенсивности медианной флуоресценции для всех детекторов с помощью специализированных калибровочных шариков и подтверждая, что идентичные образцы дают сопоставимые флуоресцентные профили на разных платформах до получения клинических данных.
  4. Собирайте данные с низким или умеренным расходом, чтобы снизить совпадающие события и сохранить точность обнаружения редких событий. Постоянно отслеживайте частоту событий во время приобретения.
  5. Получите не менее 500 000 CD45-положительных нуклеированных событий для каждого отчетного результата MRD. Когда качество образцов и стабильность событий позволяют, увеличивайте количество общих событий до 1,0–1,5 миллиона, особенно при подозрении на низкоуровневую остаточную болезнь.
  6. Приостановка или прекращение захвата при возникновении нестабильности жидкости, закупорок образца, резких изменений частоты событий или заметного ухудшения качества рассеяния. При необходимости перефильтруйте или перемешайте образец и забирайте образец только после восстановления стабильного потока.

5. Последовательное ограничение и интерпретация, скорректированная с учётом знаменателя

  1. Анализируйте данные потоковой цитометрии с помощью проверенного программного обеспечения для анализа потоковой цитометрии. Используйте одну и ту же последовательную стратегию гейтинга для всех образцов, чтобы снизить изменчивость между операторами.
  2. Устанавливать нормальные и регенерирующие паттерны созревания, независимо приобретая и проанализируя эталонный банк из не менее 20 нормальных или регенерирующих образцов костного мозга, которые служат базовыми шаблонами экспрессии.
  3. Исключайте мусор с помощью параметров прямого и бокового рассеяния. Изолировать отдельные ячейки, применяя гейтинг с областью рассеяния вперёд и высоту рассеяния.
  4. Исключить нежизнеспособные клетки с помощью окраски жизнеспособности, указанного в таблице материалов. Регулярно исключайте эти нежизнеспособные клетки, поскольку они демонстрируют неспецифическое связывание антител и могут искусственно повышать фоновый шум или имитировать редкие аномальные популяции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для оптимального дальнейшего анализа требуется минимальный порог жизнеспособности в 75%, учитывая, что образцы ниже этого значения требуют осторожной интерпретации относительно возможных редких артефактов. Определите знаменатель лейкоцитов, отслеживая жизнеспособные события с положительным CD45 с соответствующими характеристиками бокового рассеяния.
  5. Для образцов B-ALL ограничьте анализ CD19-положительным прекурсором. Внедрить альтернативную систему гейтинга для пациентов, получающих таргетную терапию против CD19.
  6. Переместить первичную оценку на CD22, CD24 или CD34-положительные компартменты, чтобы охватить лейкемическую популяцию независимо от экспрессии CD19. Оценить паттерны созревания CD34, CD10 и CD20 и выявить аномальные популяции с помощью паттернов экспрессии CD38, CD58, CD81, CD66c, CD123 и CD73 или CD304.
  7. Для образцов ОМЛ определите область бласта или прекурсора с помощью CD45, бокового рассеяния, CD34 и экспрессии CD117.
  8. Оценить аномрантную или асинхронную экспрессию миелоидных и кросс-линейных маркеров, включая CD13, CD33, HLA-DR, CD7, CD56, CD11b и CD15.
  9. Рассчитайте предел обнаружения (LOD) и предел количественной оценки (LOQ) по образцу, используя общее количество жизнеспособных CD45-положительных событий в качестве знаменателя:
     figure-protocol-2
      figure-protocol-3
  10. Классифицировать окончательную интерпретацию MRD в одну из трёх категорий: MRD-положительную, ниже LOD или аналитически ограниченную.
    1. Присвоить результат как MRD-положительный, если ясный, непрерывный кластер аномальных событий превышает специфичный для образца LOD и демонстрирует внутренне согласованный иммунофенотип, отличающийся от нормальных или регенерирующих гемопоэтических популяций.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не классифицируйте рассеянные, некластерные события как MRD-положительные. Использование интегрированного подхода анализа, объединяющего как иммунофенотип, ассоциированный лейкемией (LAIP), отслеживаемый из исходной диагностической выборки, так и стратегии распознавания образов, отличающихся от нормы (DfN).
    2. Присваивать результат как ниже LOD, если встречаются редкие подозрительные события, но не достигают специфического для образца порогового значения.
    3. Назначайте результат как аналитически ограниченный, когда размер знаменателя недостаточен, значительная гемодилюция, низкое качество образца или преданалитические ограничения мешают уверенной отрицательной интерпретации.
  11. Независимо проверяйте все случаи с положительными по MRD и погранично низкоуровневые случаи под руководством второго квалифицированного аналитика.
  12. Завершить интерпретацию потоковой цитометрии перед просмотром парных данных молекулярного компаратора, включая количественную полимеразную цепную реакцию или результаты секвенирования следующего поколения.

6. Методология аналитической валидации

  1. Оценивайте аналитическую повторяемость, подготовив дублирующиеся аликвоты из той же суспензии после лиза. Приобрести и проанализировать как минимум 30 парных образцов независимо друг от друга.
  2. Оценить линейность разбавления путём подготовки последовательных разбавлений на шести уровнях в ожидаемом диапазоне низкой нагрузки. Сравните наблюдаемые значения MRD с ожидаемыми значениями MRD по рядам разбавления.
  3. Оценивать воспроизводимость между операторами и между приборами, анализируя эталонные образцы у нескольких квалифицированных операторов и гармонизированных потоковых цитометров.
  4. Преобразованные цитометрические и парные молекулярные проценты MRD с использованием преобразования log10 перед статистическим сравнением. Оценить количественное согласование с помощью корреляционного анализа и анализа Бланда-Альтмана.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Характеристики набора данных для рутинной реализации

В течение периода исследования 197 последовательных образцов прошли скрининг на соответствие и преданалитическую оценку качества и вошли в подлежащий отчетности рабочий процесс. В когорту исследования вошли 98 пациентов: 62 (63,3%) с острой B-клеточной лимфобластной лейкемией (B-ALL) и 36 (36,7%) с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ). Когорта состояла из 64 мужчин (65,3%) и 34 женщин (34,7%), м...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основной целью данного исследования было создание стандартизированного рабочего процесса для многоцветной цитометрической оценки измеримого остаточного заболевания (МРД) при острой лейкемии. Надёжная оценка MRD зависит не только от выбора панели антител, но и от последовательного обращения с образцами, параметров сбора и интерпретацииданных 11. Результаты данного исследования показывают, что гармонизированная обработка образцов, контролируемая глубина сбора и крит...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Автор выражает благодарность отделу клинической лаборатории Второй народной больницы Нэйцзяна за предоставленные лабораторные возможности и техническую поддержку для этого исследования. Автор также выражает признательность сотрудникам лаборатории и клиническому персоналу за помощь в обработке образцов и сборе данных. Наконец, автор благодарит пациентов, чьи остаточные клинические образцы внесли вклад в эту работу. Это исследование не получило специального финансирования от государственных, коммерческих или некоммерческих фондов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Буфер для получения данныхЛабораторный растворПБС с 0,5% БСА и 2 мМ ЭДТА; конечный объем взвешивания 500 µLКонечное взвешивание перед регистрацией в потоковом цитометре
Трубка AML 1 анти-CD117-APC антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: 104D2; флюоресцентный краситель: APC; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяРанняя идентификация миелоидных/бластов
Трубка AML 1 анти-CD13-FITC антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: L138; флюоресцентный краситель: FITC; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяЯкорь миелоидной линии
Трубка AML 1 анти-CD33-PE антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: P67.6; флюоресцентный краситель: PE; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяЯкорь миелоидной линии
Трубка AML 1 анти-CD34-PerCP-Cy5.5 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: 8G12; флюоресцентный краситель: PerCP-Cy5.5; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяМаркер незрелости
Трубка AML 1 анти-CD45-APC-H7 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: 2D1; флюоресцентный краситель: APC-H7; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяМаркер лейкоцитарного каркаса и определение знаменателя
Трубка AML 1 анти-CD56-V500 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: NCAM16.2; флюоресцентный краситель: V500; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяАберрантное фенотипирование, связанное с бластами
Трубка AML 1 анти-CD7-V450 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: M-T701; флюоресцентный краситель: V450; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяОбнаружение межлинейной аберрации
Трубка AML 1 анти-HLA-DR-PE-Cy7 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: G46-6; флюоресцентный краситель: PE-Cy7; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяДискриминация созревания и подтипов
Трубка AML 2 анти-CD117-APC антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: 104D2; флюоресцентный краситель: APC; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяРанняя идентификация миелоидных/бластов
Трубка AML 2 анти-CD11b-V450 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: ICRF44; флюоресцентный краситель: V450; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяОценка дискордантности созревания
Трубка AML 2 анти-CD13-FITC антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: L138; флюоресцентный краситель: FITC; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяЯкорь миелоидной линии
Трубка AML 2 анти-CD15-V500 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: HI98; флюоресцентный краситель: V500; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяОценка отличного от нормального миелоидного паттерна
Трубка AML 2 анти-CD33-PE антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Клон: P67.6; флюоресцентный краситель: PE; объем окрашивания: 5 µL/тест в рутинной проверенной панели, если специфическая титрация антитела отличаетсяЯкорь миелоидной линии
Трубка AML 2 анти-CD34-PerCP-Cy5.5 антителоBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman

Ссылки

  1. Heuser M, et al. 2021 update on measurable residual disease in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2021;138(26):2753–67.
  2. Cloos J, Heuser M, Freeman SD. 2025 update on MRD in acute myeloid leukemia: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2025;147(11):1147–64.
  3. Verbeek MWC, Lucio P, Szczepański T. Minimal residual disease assessment in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia by standardized next-generation flow cytometry. eJHaem. 2024;5(2):110–20.
  4. Virk H, Jain P, Sengar M. Flow cytometric MRD assessment in acute lymphoblastic leukemia: Practical advantages and interpretive considerations. Indian J Hematol Blood Transfus. 2023;39(3):350–62.
  5. Brando B. Rules in rare event acquisition: An overview. Cytometry B Clin Cytom. 2019;96(6):448–53.
  6. EuroFlow Consortium. Standardized EuroFlow Protocols [Internet]. EuroFlow; 2025. Available from: https://euroflow.org/protocols/ (accessed 2026 Jan 15).
  7. Tettero JM, Heidinga ME, Mocking TR. Impact of hemodilution on flow cytometry-based measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia. Leukemia. 2024;38(2):297–305.
  8. Buccisano F, et al. Prognostic and therapeutic implications of measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Blood. 2012;119(2):332–41.
  9. Schuurhuis GJ, Heuser M, Freeman S. Minimal/measurable residual disease in AML: A consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party. Blood. 2018;131(12):1275–91.
  10. Terwijn M, van Putten WLJ, Kelder A. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: Data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 2013;31(31):3889–97.
  11. Smith AB, Jones CD. Computational models, and tools for future development in flow cytometry. Cancer Metastasis Rev. 2026;45(1):88–102.
  12. Jum’ah HA, Ali S, Hwang Y. Measurable residual disease analysis by flow cytometry: Assay validation and characterization of 385 consecutive cases of acute myeloid leukemia. Cancers. 2025;17(7):1155.
  13. Theunissen P, et al. Standardized EuroFlow flow cytometric method for B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (BCP-ALL) MRD assessment. Blood. 2017;129(3):347–57.
  14. Haaksma LH, Mocking TR, Kelder A. Flow cytometric and molecular measurable residual disease in acute myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2025;66(1):45–55.
  15. Das N, Yadav P, Seth T. Analytical appraisal of hematogones in B-ALL MRD assessment using multidimensional dot-plots by multiparametric flow cytometry: A critical review and update. Indian J Hematol Blood Transfus. 2024;40(1):12–24.
  16. Korkina YS, Popov AM, Tserenov DG. False-positive flow cytometric measurable residual disease in B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia. Cytometry B Clin Cytom. 2024;106(2):120–31.
  17. Mocking TR, et al. Computational measurable residual disease assessment in acute myeloid leukemia: a retrospective validation in the HOVON-SAKK-132 trial. Leukemia. 2025;39(10):2559–62.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

234234
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.