Методическая статья

Мультимодальная оценка эффективности электроакупунктурного лечения остеоартрита коленного сустава у мышей

13 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/71901

⸱

6 октября 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Acupuncture and Moxibustion, Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Institute of Science and Technology for Brain-Inspired Intelligence, Fudan University, 4Renji Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В данном исследовании сочетаются поведенческие методы и методы визуализации для мультимодальной лонгитюдной оценки состояния мышей с остеоартритом после применения электроакупунктуры, включая окрашивание хряща и оценку по шкале Международного общества по исследованию остеоартрита (OARSI).

Аннотация

Остеоартрит представляет собой хроническое дегенеративное заболевание суставов, которое чаще всего поражает коленный сустав и вызывает боль, отек, скованность и ограничение функций. Синовиальное воспаление и изменения в периартикулярных мышцах способствуют возникновению и прогрессированию заболевания. Клинические данные свидетельствуют о том, что электроакупунктура может уменьшать местное воспаление и модулировать метаболизм хрящевой ткани. В данном исследовании остеоартрит коленного сустава у мышей индуцировали путем хирургической дестабилизации медиального мениска. Результаты оценивали с помощью мультимодального протокола, включающего тест на ротароде, ультразвуковое исследование, инфракрасную термографию, магнитно-резонансную томографию и гистологическое окрашивание. Объем суставной полости и температура кожи контролировались в динамике; для оценки изменений сигнала в периартикулярных мышцах и патологии хряща в конечной точке использовали магнитно-резонансную томографию и окрашивание Safranin O-Fast Green. Электроакупунктура была связана с улучшением двигательных функций, уменьшением отека сустава, повышением местной температуры кожи, менее выраженными изменениями сигнала в периартикулярных мышцах на снимках магнитно-резонансной томографии и более низкими баллами дегенерации хряща. Эти результаты подтверждают целесообразность использования данного мультимодального протокола для оценки эффектов электроакупунктуры на доклинической модели мышей.

Введение

Остеоартрит коленного сустава (ОАКС) является наиболее распространенным остеоартикулярным заболеванием в мире, которым страдают, по оценкам, 250 миллионов человек1. Его патологические признаки включают прогрессирующую дегенерацию хряща и пролиферацию синовиальной оболочки; клинически заболевание проявляется болью, отеком и нарушением функций2,3.

Остеоартрит (ОА) долгое время считался невоспалительным заболеванием суставов, однако в настоящее время признано наличие воспалительного компонента, при этом синовит выявляется у большинства пациентов. Считается, что в патологический процесс вносят вклад провоспалительные цитокины, такие как интерлейкин (IL)-1β и IL-18, в сочетании с активными формами кислорода и биомеханическим стрессом4. Воспаление часто сопровождается усилением местного кровотока, что клинически проявляется в виде покраснения, повышения температуры и отека5. Помимо ускорения деградации хряща и функционального ухудшения, воспаление может быть особенно активным на ранних стадиях заболевания. Таким образом, мониторинг воспалительного статуса в динамике может помочь в разработке стратегий лечения, направленных на основной механизм заболевания, и обеспечить подбор терапии в зависимости от стадии6,7. Предыдущие исследования с использованием ультразвукового (УЗ) сканирования коленных суставов мышей позволили выявить треугольную область между большеберцовым и бедренным мыщелками. Гистологический анализ подтвердил, что эта область содержит мягкие ткани, включая синовиальную оболочку, мениск и жировую подушку, а также пространства, заполненные синовиальной жидкостью. Эта область, обнаруживаемая при ультразвуковом исследовании, определяется как межсуставной объем, охватывающий вышеупомянутые участки мягких тканей8.

Кроме того, температура является ключевым физическим параметром, который напрямую отражает прогрессирование воспаления суставов. Повышение локальной температуры — один из четырех основных признаков воспаления, и термографическая визуализация позволяет точно обнаруживать и количественно оценивать эти термические изменения9. Недавний систематический обзор подчеркнул корреляцию между температурой поверхности кожи и как воспалительными, так и дегенеративными заболеваниями суставов10, что дополнительно подтверждает полезность инфракрасной термографии (IRT) в исследованиях артрита и клиническом ведении пациентов11. Более того, IRT обеспечивает косвенную оценку, связанную с перфузией тканей и метаболической активностью, и может быть полезна для мониторинга терапевтического ответа.

В данном исследовании мы объединили тест на ротароде, УЗИ, ИК-термографию и магнитно-резонансную томографию (МРТ) для оценки эффектов электроакупунктуры (ЭА) на мышиной модели ОА. Этот мультимодальный подход позволил одновременно оценить двигательную функцию, морфологию суставов, тепловые изменения и воспаление мягких тканей — показатели, которые невозможно получить только с помощью гистологии. Важно отметить, что данная панель предоставляет взаимодополняющую информацию на нескольких биологических уровнях при минимальных дополнительных затратах и трудозатратах. Таким образом, она особенно хорошо подходит для доклинических исследований, требующих повторного неинвазивного мониторинга во времени, особенно когда ожидается, что исследуемое вмешательство окажет лишь умеренный эффект или когда временной профиль ответа неопределен. Насколько нам известно, это первое исследование, в котором используется именно такая комбинация методов, охватывающая объем полости сустава, воспаление мышц и локальную температуру, для отслеживания терапевтического ответа на электроакупунктуру при ОА. Описанный нами протокол является практичным и воспроизводимым, и мы полагаем, что он может служить полезным ориентиром для будущих лонгитюдных оценок эффективности в режиме реального времени в аналогичных экспериментальных условиях.

Протокол

Все экспериментальные процедуры были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике работы с лабораторными животными компании Wuchuang Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. (номер этического одобрения: WTPZ20260209001). Все животные, использованные в данном исследовании, представляли собой мышей линии C57BL/6 в возрасте 8 недель с массой тела примерно 20 g, приобретенных у коммерческого поставщика (см. Таблицу материалов). В эксперименте приняли участие 24 мыши. После периода акклиматизации в течение 1 недели животные были распределены случайным образом, по шесть мышей в каждую из четырех экспериментальных групп. Эти группы включали: имитацию операции (sham), дестабилизацию медиального мениска (DMM), имитацию иглоукалывания (SA) и электроакупунктуру (EA). Количество используемых животных было определено без предварительного расчета размера выборки; размер группы был выбран на основе предыдущих исследований электроакупунктуры с использованием сопоставимых моделей остеоартрита и конечных точек, а также в соответствии с принципом 3R.

1. Предоперационный уход и моделирование

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры моделирования выполнялись опытным хирургическим техником. Возвращайте животных в клетки только после восстановления сознания на подогреваемой подложке.

  1. Акклиматизируйте мышей к условиям эксперимента в течение как минимум 7 дней до начала исследования.
  2. Стерилизуйте все хирургические инструменты перед операцией. Тщательно продезинфицируйте операционное поле.
  3. Включите оборудование для газового наркоза. Поместите мышь в индукционную камеру и проведите общую анестезию 2–3% изофлураном в течение 5 min.
  4. После завершения индукции анестезии перенесите мышь на операционный стол. Поддерживайте наркоз путем непрерывной подачи 1–1.5% изофлурана через анестезиологическую маску до завершения хирургической процедуры.
  5. Положите мышь на спину так, чтобы коленный сустав был обращен вверх. Убедитесь, что положение стабильно, а операционное поле полностью открыто. Используйте метод DMM для создания модели на правой задней конечности12. Для группы Sham сделайте разрез в том же месте, а затем зашейте его.
    1. Процесс хирургического вмешательства DMM
      1. Сделайте продольный медиальный парапателлярный разрез длиной 1 cm для обнажения коленного сустава.
      2. Через медиальный парапателлярный разрез, выполненный на этапе 1.5.1.1, сделайте продольное отверстие в капсуле сустава. С помощью пинцета достаточно сильно отделите капсулу от окружающих тканей. Затем придерживайте дистальную часть задней лапы левой рукой, не оказывая избыточного давления, и с помощью пинцета сместите надколенник и связку надколенника латерально, тем самым обнажая коленный сустав. В ходе всей процедуры осторожно обращайтесь с лапой во избежание травм.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Достаточное освобождение суставной капсулы позволяет сместить надколенник с минимальным усилием.
      3. В ходе операции капайте стерильный физиологический раствор на поверхность суставного хряща для предотвращения высыхания.
      4. Найдите медиальный мениск в пространстве между медиальным мыщелком бедренной кости и медиальным плато большеберцовой кости. С латеральной стороны проследите за медиальной менискотибиальной связкой до ее прикрепления к межмыщелковому возвышению большеберцовой кости. Аккуратно зафиксируйте заднюю лапу рукой и пересеките связку хирургическим лезвием № 10, стараясь не задеть хрящ, расположенный под медиальным мениском. ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что суставной хрящ и другие связки не повреждены. Во многих случаях вышележащую жировую подушку необходимо отодвинуть, но не удалять, чтобы идентифицировать связку.
      5. Сведите края капсулы коленного сустава и зафиксируйте их с помощью рассасывающегося шовного материала 6-0.
      6. Зашейте кожу шелковой нитью 6-012.
  6. Для послеоперационного ухода закапайте одну каплю 0.25% бупивакаина в место разреза для местной анальгезии; обеспечьте мышам свободный доступ к пище и воде (ad libitum).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Во время анестезии поддерживайте скорость потока кислорода в диапазоне 0.5–1 NL/min. Успешность анестезии подтверждалась потерей рефлекса выпрямления, отсутствием реакции отдергивания на сжатие пальца и стабильным, регулярным дыханием. На протяжении всей операции используйте стерильный фосфатно-солевой буфер (PBS) в качестве ирригационного раствора для поддержания гидратации хряща. Конкретные размеры и характеристики рассасывающегося шва для закрытия суставной капсулы и шелковой нити для закрытия кожи подробно описаны в Таблице материалов.

2. Электроакупунктурное лечение

ПРИМЕЧАНИЕ: Вмешательства в группах SA и EA начинались через 1 неделю после создания модели (Рисунок 1A). Обе группы получали лечение через день, три раза в неделю, по 15 мин за сеанс в течение 4 недель. Группы Sham и DMM подвергались тем же процедурам анестезии и иммобилизации по тому же графику, но без введения игл или электростимуляции. Все операторы прошли обучение перед экспериментом для обеспечения единообразия при выборе акупунктурных точек, угла и глубины введения игл.

  1. Поместите мышей в индукционную камеру и извлеките их после введения в состояние анестезии изофлураном.
  2. В течение всего сеанса электроакупунктуры поддерживайте мышей в положении на спине под непрерывной ингаляционной анестезией изофлураном (1,5–2,0% в 100% O₂), чтобы обеспечить спокойное и стабильное состояние.
  3. Точно определите точки акупунктуры у мышей. Введите две одноразовые стерильные иглы (0,16 mm × 25 mm) в точки ST36 (Цзусаньли) и SP10 (Сюэхай) на нижних конечностях на глубину 5 mm13 (Рисунок 1B).
    ​ПРИМЕЧАНИЕ: Точка ST36 расположена в 1 mm латеральнее переднего бугорка большеберцовой кости, в 3 mm ниже головки малоберцовой кости и непосредственно под коленным суставом. Точка SP10 расположена на медиальной поверхности бедра, в 3 mm выше верхне-медиального края надколенника в области медиального выступа четырехглавой мышцы при согнутом колене.
    1. В группе SA введите иглы поверхностно, примерно на глубину 1 mm, в прилегающие области, не являющиеся точками акупунктуры (вместо ST36 или SP10), и подключите их к устройству ЭА без подачи тока14.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Таким образом, группа SA отличается от группы ЭА местом введения игл, глубиной введения и отсутствием электрической стимуляции, но совпадает по всем остальным параметрам процедуры. По сравнению с группой DMM, группа SA получает поверхностное иглоукалывание в неаккупунктурные точки и подключение к устройству без подачи тока, в то время как группа DMM получает только анестезию и иммобилизацию.
  4. Подключите иглы к устройству для электронной акупунктуры и примените стимуляцию с частотой 2/100 Hz и силой тока 2 mA для создания легкого мышечного тремора. Проводите стимуляцию ЭА в течение 15 min, 3 раза в неделю, начиная через 7 дней после создания модели, и продолжайте в течение 4 недель.
  5. После процедуры поместите мышь на грелку и верните ее в клетку после восстановления сознания.

3. Динамическая оценка эффективности электроакупунктуры (ЭА)

ПРИМЕЧАНИЕ: Все оценки (тест на ротароде, УЗИ, ИК-термография, МРТ и оценка по шкале OARSI) проводились исследователями, которые не знали о распределении по группам; идентификаторы групп оставались скрытыми до завершения всего анализа данных. Сбор изображений и анализ данных осуществлялись разными специалистами, а гистологическая оценка проводилась независимо двумя патологоанатомами, не знавшими о группах лечения. Ни один из оценивающих специалистов не участвовал в распределении животных или проведении сеансов электроакупунктуры.

  1. Тест на утомляемость на ротароде
    1. Проведите предварительное обучение мышей для ознакомления с экспериментальной установкой перед началом основного тестирования.
    2. В ходе основного теста каждую мышь по отдельности помещают на ротарод, который ускоряется со скоростью 4 об/мин до тех пор, пока животное не упадет.
    3. Незамедлительно зафиксируйте время удержания каждой мыши на стержне. Соблюдайте 30-минутный интервал между испытаниями для каждой мыши и рассчитайте среднее значение по результатам трех повторных испытаний.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте тест на ротароде для оценки координации движений до создания модели ОА и после завершения курса ЭА-терапии. Чтобы минимизировать послеоперационную боль, ограничьте сбор данных на ротароде в течение первой недели после операции.
  2. УЗИ-исследование мелких животных
    ​ПРИМЕЧАНИЕ: Пошаговая процедура ультразвукового исследования и определения границ полости сустава представлена в Рисунок 2.
    1. Перед началом формального сбора данных поместите мышь в анестезирующую камеру до потери двигательной функции, после чего с помощью депиляционного крема удалите шерсть в области правого коленного сустава. При удалении шерсти действуйте максимально осторожно; аккуратно протрите кожу теплой водой, чтобы минимизировать раздражение у животного.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для обеспечения слепого метода анализа до завершения всех измерений объема и раскрытия информации о группах для статистического анализа отображайте только коды животных и временные точки.
    2. Включите систему ультразвукового исследования, установите датчик для малых животных и выберите соответствующий протокол обследования мыши. Одновременно с этим поместите мышь в камеру для непрерывной анестезии.
    3. После завершения анестезии перенесите мышь на контрольную платформу и проведите ингаляционную анестезию изофлураном с помощью назальной маски. Расположите мышь так, чтобы голова была обращена от оператора, а хвост — к оператору.
    4. Согните коленный сустав, зафиксируйте мышь и нанесите ультразвуковой контактный гель на кожу над связкой надколенника.
    5. Отрегулируйте положение датчика так, чтобы он был параллелен коленному суставу.
    6. Установите расстояние сканирования к 4 мм и the шаг сканирования к 0,04 ммОпределите положение суставной полости на изображении, исходя из ее анатомического расположения. Не перемещайте животное во время сканирования датчиком.
    7. Получите изображения. Определите полость сустава: треугольную область с четкими границами между бедренной костью, большеберцовой костью, а также вышележащим кожным покровом и мышцами.
    8. Присвойте имя результатам сканирования и сохраните их, затем экспортируйте на компьютер для анализа с сохранением исходной структуры папок.
    9. Проанализируйте объем полости коленного сустава с помощью программного обеспечения. Введите Исследование модуль, затем нажмите на Импорт функция
    10. Обзор и выбор папки с данными, проверка файлов данных для импорта и двойной щелчок для их открытия.
    11. В экран режим, выбрать Обработка изображений | Загрузка в 3D | Поперечный срез | Измерение объема | Старт последовательно.
    12. Используйте колесико мыши или ползунок срезов для прокрутки срезов от проксимального к дистальному, чтобы найти срез, на котором впервые появляется полость сустава (обычно она выглядит как треугольная область с четкими границами между бедренной костью, большеберцовой костью, а также перекрывающими их кожей и мышечной тканью).
    13. Начните трассировку на срезе, где впервые появляется полость сустава. Нажмите левую кнопку мыши, чтобы начать отрисовку контура.
    14. Постепенно обведите край полости сустава точка за точкой, чтобы создать замкнутый контур, пока полость сустава полностью не исчезнет.
    15. Нажмите Завершитьсистема создаст сегментированную 3D-модель объема и выведет результаты измерения объема.
    16. Выберите желаемый тип файла, чтобы экспортировать изображение в виде файла области изображения в формате TIFF (.tif).
  3. Инфракрасная термография мелких животных
    ​ПРИМЕЧАНИЕ: Измерения проводились за 1 день до операции, через 7 дней после операции и по окончании лечения у мышей с ОА. Проводите ИК-термографию через 6 ч после лечения в помещении с контролируемой температурой (22–24 °C), при этом мышей акклиматизировали в течение 30 мин перед проведением визуализации.
    1. Положите животное на спину, вытянув задние конечности, и зафиксируйте все конечности на столе с помощью ленты, чтобы обеспечить стабильный доступ к коленному суставу. Поместите мышь в индукционную камеру и непрерывно подавайте изофлуран до полного наступления анестезии.
    2. Зафиксируйте анестезированную мышь на операционном столе в положении на спине и поддерживайте постоянную температуру окружающей среды.
    3. Осторожно захватите заднюю конечность мыши, чтобы разогнуть правый коленный сустав, после чего с помощью инфракрасного тепловизора сделайте снимки и измерьте температуру в этой области.
    4. Используйте значение коэффициента излучения кожи по умолчанию (0,98). Получите изображения через 3 мин после введения в состояние глубокой анестезии. Определите область интереса (ROI) коленного сустава как медиальную линию сустава в месте сочленения бедренной и большеберцовой костей, а ROI голеностопного сустава — как дорсальную поверхность большеберцового таларного сустава. Все области интереса должны быть очерчены вручную одним обученным оператором на основании этих ориентиров.
    5. Проанализируйте полученные изображения с помощью прилагаемого к устройству программного обеспечения для считывания данных о температуре коленного сустава и окружающих кожных покровов, а также установите контрольные точки измерения в области голеностопного и коленного суставов, где наблюдается снижение температурных градиентов.
  4. МРТ мелких животных
    ​ПРИМЕЧАНИЕ: После проведения электроакупунктурного воздействия была использована МРТ для мелких животных с целью оценки локального воспаления в коленных суставах мышей в каждой группе.
    1. Поместите мышь в анестезирующую камеру для проведения наркоза. После потери двигательных функций нанесите крем для депиляции на оба коленных сустава.
    2. Через 1 минуту удалите крем для депиляции марлей, смоченной в теплой воде, чтобы завершить процедуру удаления волос на обоих коленных суставах.
      ​ПРИМЕЧАНИЕ: необходимо удалить максимально возможный объем шерсти мыши и проводить сбор материала под анестезией.
    3. Настройте соответствующий протокол, используя гентри для мышей.
      1. Убедитесь, что при использовании позиционирующего устройства применяется трехплоскостная последовательность быстрого градиентного эха (TR/TE = 50/3 мс, поле обзора (FOV) = 30 × 30 мм, толщина среза 1 мм) для центрирования коленного сустава на изображении; для сканирования коленного сустава мыши используйте Т2-взвешенную последовательность быстрого спинового эха (T2WI).
      2. Используйте следующие параметры сканирования: время повторения (TR) 2 500 мс, время эха (TE) 8 мс, поле обзора (FOV) 20 × 20 мм, матрица 256 × 256, толщина среза 0,5 мм, без межсрезового интервала, 10 последовательных срезов, охватывающих область от мыщелков бедренной кости до плато большеберцовой кости; ожидаемая продолжительность одного сканирования составляет примерно 8 мин 20 с.
      3. Исследовать полученные Т2-взвешенные изображения для наблюдения за морфологическими изменениями в хряще коленного сустава, синовии, суставной полости и окружающих мягких тканях, а также оценить выпот в суставе, утолщение синовиальной оболочки и локальное воспаление.
    4. Поместите мышь на станину, проведите ингаляционную анестезию изофлураном с помощью маски и зафиксируйте конечности медицинским пластырем, чтобы обеспечить стабильное положение коленей, направленное вверх.
    5. Задвиньте портальную раму в МРТ-сканер для проведения визуализации.
      1. На трехплоскостном локализаторе убедитесь, что суставная щель коленного сустава параллельна корональной плоскости, центр среза совпадает с суставной щелью, а петли кишечника или воздушные полости исключены из поля обзора (FOV) для предотвращения появления артефактов магнитной восприимчивости; если позиционирование неверно, проведите повторную локализацию и сканирование.
    6. Экспортируйте полученные Т2-взвешенные изображения с несколькими эхо-сигналами в формате DICOM или NIfTI для качественной оценки.
    7. Оцените МР-изображения путем визуального анализа интенсивности сигнала и распределения гиперинтенсивных зон в коленном суставе и присуставных мягких тканях, а затем сравните признаки воспаления между группами на основании этих экспортированных изображений.

4. Патологические и морфологические наблюдения

  1. Фиксация и секционирование коленных суставов мыши
    1. Зафиксируйте оба образца коленного сустава мышей в 10% параформальдегиде в течение 48 ч. После этого погрузите образцы в фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) на 30 мин и промойте.
    2. После удаления излишков влаги с помощью фильтровальной бумаги образцы следует незамедлительно перенести в свежеприготовленный раствор для декальцинации (pH 7,2–7,4) и заменять раствор каждые 3 дня;
    3. Продолжайте декальцинацию в течение 2 недель, промойте образцы под проточной водой, а затем погрузите их в 75%-ный этанол на 2 ч.
    4. Проведите автоматическую градиентную дегидратацию в гистологическом процессоре в течение 18 ч.
    5. После обезвоживания поместите образец в предварительно нагретую парафиновую восковую среду на 2 ч в установке для заливки парафином, затем приступайте к заливке;
    6. При сагиттальной заливке коленного сустава расположите медиальную поверхность сустава снизу, чтобы эта поверхность срезалась первой.
    7. Закрепите блок ткани в микротоме и выполните серию последовательных срезов с шагом 4 µmПосле достижения середины разделения мениска соберите 21 последовательный срез.
    8. Разложите срезы на устройстве для расправления срезов. Используя пинцет, разделите образцы на поверхности воды и перенесите их на покровные стекла, собирая по два образца на каждое стекло;
    9. Поместите предметные стекла горизонтально в сушилку для стекол более чем на 1 час, чтобы обеспечить полное испарение влаги. Поместите стекла в контейнер для образцов и удалите парафин в печи при 60 °C в течение 8 ч. Отставить для последующего использования.
      ​ПРИМЕЧАНИЕ: Весь фиксирующий раствор параформальдегида, раствор для декальцинации и этанольные промывки должны собираться как опасные отходы и утилизироваться в соответствии с правилами учреждения.
  2. Окрашивание сафранином О и быстро-зеленым красителем (Fast Green)
    1. Поместите неокрашенные срезы на штатив для окрашивания и прогрейте их в печи в течение 5 мин. В это время приготовьте окрашивающий раствор в вытяжном шкафу.
    2. Дайте срезам достичь комнатной температуры, затем проведите стандартную процедуру удаления парафина и перевода в воду.
    3. Перенесите срезы в увлажненную кювету и окрасите свежим раствором Вейгерта (часть А + часть Б) в течение 5 минут.
    4. Промыть водой 3 раза по 1 с.
    5. Проведите дифференцировку в 1% растворе соляной кислоты в этаноле в течение 15 с, затем промойте дистиллированной водой в течение 10 мин.
    6. Окрашивайте раствором Fast Green в течение 4 мин 55 с.
    7. Быстро промойте срезы 1% раствором уксусной кислоты в течение 10–15 с для удаления остатков красителя Fast Green, затем высушите на воздухе.
    8. Погрузите в сафранин Окрашивайте в течение 4 мин 35 с.
    9. Быстро обезводят срезы в 95% этаноле в течение 3–5 с, после чего промывают в абсолютном этаноле 2 раза по 1 мин.
    10. Проведите просветление ксилолом, заключайте в нейтральную смолу и выдержите в вытяжном шкафу в течение 4 ч для испарения ксилола.
    11. Выполните предварительный просмотр и сканирование препарата с помощью сканера полнослойных изображений.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Ксилол, кислотно-спиртовой раствор, уксусная кислота, параформальдегид и окрашивающие растворы, используемые в данном исследовании, включая раствор Вайгерта, Fast Green и сафранин О, являются опасными веществами. Все манипуляции следует проводить в вытяжном шкафу с использованием соответствующих средств индивидуальной защиты, включая нитриловые перчатки, лабораторный халат и защитные очки. Опасные отходы, в том числе отработанные реагенты и промывочные растворы, должны сортироваться; отходы ксилола следует хранить отдельно от водных отходов, собирать в специальные контейнеры и утилизировать в соответствии с правилами учреждения.

5. Статистический анализ

  1. Представляйте непрерывные данные в виде среднего значения ± стандартного отклонения (SD), если не указано иное; баллы OARSI представляются в виде медианы (P25, P75).
  2. Для результатов, представленных как среднее ± SD, проводите сравнение нескольких групп с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующими апостериорными тестами Тьюки. Баллы OARSI анализировали с помощью критерия Краскела-Уоллиса с последующими post hoc-тестами с использованием одностороннего критерия Манна-Уитни для попарных сравнений между двумя группами15.
  3. Значения P < 0,05 считаются статистически значимыми ("ns" означает отсутствие значимой разницы).

Результаты

Тест на ротароде показал большее время удержания на стержне в группе EA по сравнению с группой DMM (P < 0.05), в то время как группа SA значимо не отличалась от группы DMM (Рисунок 1C и Таблица 1). До моделирования продольное ультразвуковое сканирование коленного сустава (дистанция сканирования 4 mm; шаг 0.04 mm) не выявило значимых различий в объеме полости сустава между группами (Рисунок 3A,B и Таблица 2). Через одну неделю после моделирования трехмерная реконструкция показала значимо больший объем полости сустава в группах DMM, SA и EA по сравнению с группой Sham (P < 0.05), при этом значимых различий между группами DMM, SA и EA не наблюдалось (P > 0.05) (Рисунок 3A,C). После 4 недель лечения электроакупунктурой (EA) объем полости сустава в группе EA был значимо ниже, чем в группе DMM (P < 0.05) (Рисунок 3A,D), что согласуется с уменьшением отека полости сустава.

ИК-термография (IRT) — это метод, используемый для сбора информации о температуре в фокальной плоскости в пределах поля зрения и отображения распределения поверхностной температуры в формате псевдоцвета16. До моделирования или через 1 неделю после моделирования значимых различий в температуре поверхности кожи между группами не наблюдалось (Рисунок 4A-C и Таблица 3). Однако после проведения электроакупунктурной терапии (EA) температура поверхности кожи в группе DMM была значительно ниже, чем в группе Sham. Напротив, температура поверхности кожи в группе EA была значительно выше, чем в группе DMM (Рисунок 4A,D), что свидетельствует о том, что EA была связана с более высокой локальной температурой поверхности кожи, чем DMM, в то время как SA не оказывала такого эффекта.

МРТ-изображения не выявили видимых отклонений сигнала от околосуставных мышц в группе Sham, более выраженные изменения сигнала наблюдались в группе DMM, менее выраженные изменения — в группе EA, а в группах SA и DMM изменения были схожими (Рисунок 5A). После лечения EA правые коленные суставы были извлечены, залиты в парафин и разрезаны в сагиттальной плоскости на срезы толщиной 4 µm. Срезы окрашивали сафранином О и фаст-грином (Safranin O-Fast Green) и оценивали с помощью гистопатологической системы OARSI. По сравнению с группой Sham, в группе DMM наблюдался более выраженный износ суставного хряща и более высокий балл по шкале OARSI. В группе EA наблюдалась меньшая дегенерация хряща и более низкий балл OARSI по сравнению с группой DMM (P < 0.05), в то время как группа SA существенно не отличалась от группы DMM (Рисунок 5B,C и Таблица 4).

figure-results-1
Рисунок 1: График эксперимента, схема точек акупунктуры и тест на ротароде у мышей с ОА. (A) График эксперимента. (B) Схема точек акупунктуры. (C) Тест на ротароде. n = 6 в группе. Каждая мышь прошла три испытания. Данные представлены как среднее ± SD. ### Sham по сравнению с DMM, P < 0.001; ns, SA по сравнению с DMM, P > 0.05; ** EA по сравнению с DMM, P < 0.01. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

figure-results-2
Рисунок 2: Пошаговое проведение ультразвукового исследования. (A) Поместите мышь в индукционную камеру для проведения анестезии. (B) Нанесите депиляционный крем на заднюю конечность. (C) После равномерного нанесения крема подождите 1 min. (D) Удалите излишки депиляционного крема и волоски с помощью марли. (E) Осмотрите депилированную заднюю конечность. (F) Перед получением изображений верните мышь в индукционную камеру для анестезии. (G) Нанесите ультразвуковой контактный гель на заднюю конечность и поворачивайте датчик до тех пор, пока он не станет параллелен продольной оси конечности. (H) Получите ультразвуковые изображения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть этот рисунок в большем размере.

figure-results-3
Рисунок 3: Репрезентативные изображения и количественные результаты ультразвукового исследования мелких животных на мышах с ОА. (A) Трехмерные ультразвуковые реконструкции коленного сустава до операции, через 1 неделю после операции и после лечения электроакупунктурой (EA) (дистанция сканирования, 4 mm; размер шага, 0.04 mm). Масштабные отрезки = 2 mm. (B) Объем полости сустава до операции (n = 6 на группу). (C) Объем полости сустава через 1 неделю после операции (n = 6 на группу). (D) Объем полости сустава после вмешательства EA (n = 6 на группу). ### Sham против DMM, P < 0.001; ns, SA против DMM, P > 0.05; *** EA против DMM, P < 0.001. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

figure-results-4
Рисунок 4: Репрезентативные инфракрасные термограммы и количественные результаты температуры кожи у мышей с ОА. (A) Термограммы нижних конечностей до операции, через 1 неделю после операции и после лечения электроакупунктурой (EA). Каждая термограмма отображена с использованием автоматического температурного диапазона программного обеспечения инфракрасной камеры; следовательно, цвета на разных панелях не являются напрямую сравнимыми. Количественное сравнение следует проводить на основе диаграмм рассеяния на панелях B–D.(B–D) Количественный анализ температуры кожи в области интереса (ROI) в коленном суставе, определенной как медиальная линия бедренно-большеберцового сустава.(B) Температура кожи нижних конечностей до операции (n = 6 в группе). (C) Температура кожи нижних конечностей через 1 неделю после операции (n = 6 в группе). (D) Температура кожи нижних конечностей после вмешательства EA (n = 6 в группе). Данные представлены как среднее ± SD. ### Sham против DMM, P < 0.001; ns, SA против DMM, P > 0.05; ** EA против DMM, P < 0.01. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

figure-results-5
Рисунок 5: Репрезентативные МРТ-изображения изменений сигнала в периортикулярных мышцах, гистологические срезы коленного сустава и количественные результаты у мышей с ОА. (A) Репрезентативные МРТ-изображения каждой группы. (B) Репрезентативные срезы коленного сустава, окрашенные сафранином О и быстрым зеленым (Fast Green). Масштабная линейка = 1 mm. (C) Баллы патологии хряща по шкале OARSI (n = 6 на группу). Баллы OARSI представлены как медиана (P25, P75). ### Sham vs DMM, P < 0.001; ns, SA vs DMM, P > 0.05; ** EA vs DMM, P < 0.01. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

ГруппаNНеделя 5
Ложный контроль (Sham)6101.300 ± 5.416
DMM670.280 ± 3.363###
SA670.060 ± 7.796
EA684.390 ± 9.504**
Примечание: ### Sham в сравнении с DMM, P < 0.001; ** EA в сравнении с DMM, P < 0.01.

Таблица 1: Тест на ротароде (среднее ± SD; n = 6 в группе). ### Ложнооперированные (Sham) против DMM, P < 0.001; ** EA против DMM, P < 0.01.

ГруппаNНеделя 0Неделя 1Неделя 5
Ложный контроль62.029 ± 0.0552.056 ± 0.0712.061 ± 0.079
Цифровой мультиметр62.058 ± 0.0682.591 ± 0.056###2.926 ± 0.088###
SA62.056 ± 0.0452.592 ± 0.0762.915 ± 0.112
Электроактивация62.032 ± 0.0592.548 ± 0.0742.177 ± 0.110***
Примечание: ### Ложный контроль против DMM, P < 0,001; *** EA против DMM, P < 0.001.

Таблица 2: Объем полости сустава (среднее ± SD; n = 6 в группе). ### Ложный контроль по сравнению с DMM, P < 0,001; *** Электроакупунктура по сравнению с DMM, P < 0,001.

ГруппаNНеделя 0Неделя 1Неделя 5
Ложнооперированная (Sham)635.517 ± 1.36635.717 ± 0.54635.650 ± 0.701
DMM635.783 ± 1.29235.033 ± 0.78132.967 ± 1.223###
SA635.583 ± 1.78035.283 ± 0.86133.267 ± 0.501
EA635.500 ± 1.51035.417 ± 0.88234.533 ± 0.929**
Примечание: ### Sham по сравнению с DMM, P < 0.001; ** EA по сравнению с DMM, P < 0.01.

Таблица 3: Температура кожи (среднее ± SD; n = 6 в группе). ### Ложнооперация против DMM, P < 0,001; ** ЭА против DMM, P < 0,01.

ГруппаNНеделя 5Медиана
Sham60.000 (0.000, 0.250)0
DMM64.000 (3.000, 4.250)###4
SA64.000 (3.000, 4.250)4
EA62.500 (1.750, 3.000)**2.5
Примечание: ### Sham по сравнению с DMM, P < 0.001; ** EA по сравнению с DMM, P < 0.01.

Таблица 4: Баллы по шкале OARSI [медиана (P25, P75); n = 6 в группе]. ### Ложная операция против DMM, P < 0.001; ** EA против DMM, P < 0.01.

Обсуждение

Остеоартрит коленного сустава (ОАКС) представляет собой прогрессирующее дегенеративное заболевание, и современные терапевтические методы обладают ограниченной эффективностью в остановке его основного прогрессирования17. Нарушение мышечной функции и снижение физической работоспособности являются клинически значимыми предикторами тяжести симптомов. Следовательно, активный контроль модифицируемых факторов риска имеет важное значение для замедления прогрессирования ОАКС18. Используя мультимодальную систему оценки, в данном исследовании было показано, что электроакупунктура (EA) ассоциирована с улучшением двигательных функций, уменьшением объема суставной полости, повышением локальной температуры поверхности кожи, менее выраженными изменениями МРТ-сигнала околосуставных мышц и более низкими баллами по шкале OARSI у мышей с ОА.

Результаты ИКТ дополнительно подтверждают этот комплексный взгляд. Через 1 неделю после операции температура кожи не различалась между группами, включая группу плацебо (Sham), что, вероятно, отражает единообразную реакцию на хирургическую травму, характеризующуюся транзиторной вазоконстрикцией и поверхностным отеком, которые временно снижали теплоизлучение с поверхности кожи. Напротив, значительное термическое расхождение, наблюдаемое после лечения, позволяет предположить, что противовоспалительное и микроциркуляторное действие электроакупунктуры (ЭА) носит скорее кумулятивный, чем мгновенный характер, становясь заметным только после повторных сеансов. Эти показатели исходов могут быть взаимосвязаны. Припухлость суставной полости обычно отражает степень синовиального воспаления и выпота, в то время как состояние местной микроциркуляции тесно связано с изменениями проницаемости сосудов при воспалении19. В наших экспериментах уменьшение объема сустава после применения ЭА совпадало с повышением местной температуры. Хотя ИКТ не измеряет кровоток напрямую, одновременные изменения позволяют предположить, что усиление местного кровотока может способствовать выведению медиаторов воспаления, тем самым уменьшая воспалительную инфильтрацию в синовиальной оболочке и окружающих мышцах. Последующее улучшение двигательной функции может быть следствием комбинированного эффекта уменьшения отека и купирования воспаления. В целом, наблюдаемые изменения этих параметров представляются взаимосвязанными реакциями, а не изолированными событиями. Такая закономерность указывает на то, что ЭА может модулировать несколько патологических процессов комплексно, а не действовать через один единственный механизм20.

По сравнению с традиционным гистологическим анализом конечных точек, мультимодальная система динамического мониторинга, использованная в данном исследовании, обладает явными практическими преимуществами. Ультразвуковое исследование (УЗИ) мелких животных позволяет проводить продольное неинвазивное отслеживание выпота в суставе без радиационного облучения, что позволяет избежать межидивидуальной вариабельности, характерной для забора тканей в конечной точке21. МРТ мелких животных дополняет УЗИ, обеспечивая детальную визуализацию изменений сигнала в периартикулярных мышцах. Это позволяет провести качественную оценку воспаления мышц, которую УЗИ в одиночку может не зафиксировать в полной мере. В сочетании с инфракрасной термографией (ИКТ) для измерения температуры кожи в реальном времени данный подход дает косвенный показатель разрешения воспаления. Наличие этих методов визуализации делает возможным проведение повторных измерений на протяжении всего курса лечения. Помимо соблюдения принципов 3R, такой продольный дизайн позволяет проводить повторные наблюдения у каждого животного, что минимизирует влияние межиндивидуальной вариабельности. Насколько нам известно, ни одно предыдущее исследование на животных по оценке эффективности иглоукалывания при остеоартрите не объединяло УЗИ, МРТ, термографию, поведенческое тестирование и гистопатологию в рамках единой экспериментальной схемы. Такой многоуровневый подход дает взаимодополняющие данные в функциональной, морфологической и гистологической областях, обеспечивая более комплексную оценку, чем может дать любой отдельный показатель в конечной точке.

Следует признать несколько ограничений. Во-первых, данная работа опирается на данные наблюдений в экспериментах на животных и не содержит механистических доказательств, полученных в исследованиях in vitro. Остается неизвестным, задействует ли электроакупунктура (EA) путь NLRP3/каспаза-1/IL-1β (семейство NOD-подобных рецепторов, пирин-домен 3). IL-1β и IL-18 являются ключевыми медиаторами воспаления синовиальной оболочки и мышц, а их созревание требует активации инфламмасомы NLRP322. Мы также не можем определить, коррелируют ли наблюдаемые улучшения кровообращения с изменениями в экспрессии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS)23. Во-вторых, мы применили единый параметр EA (2/100 Hz), установленный для двух акупунктурных точек (ST36 и SP10). Вопрос о том, могут ли другие настройки или альтернативные комбинации точек дать лучшие результаты, требует дальнейшего изучения24. В-третьих, все данные визуализации были получены одним оператором. Хотя такой подход обеспечил техническую согласованность, надежность межэкспертной оценки не анализировалась, что может ограничивать обобщаемость результатов визуализации. В-четвертых, мы исключили контрольную группу, подвергавшуюся только фиксации, что затрудняет полное отделение эффектов анестезии, иммобилизации и манипуляций от терапевтического действия EA. В-пятых, процедура имитации (SA) была разработана как минимальный контроль для снижения эффектов, специфичных для акупунктурных точек, глубоких тканей и электрической стимуляции. Однако разница в глубине введения игл между истинным и имитационным вмешательством не позволяет нам изолировать вклад только глубины. Следовательно, наши результаты следует интерпретировать как сравнение полного протокола EA с минимальной процедурой имитации, а не как строгую оценку электрической стимуляции в отдельности. Шестым ограничением является отсутствие формальной документации расстояния до камеры, угла визуализации и абсолютной площади ROI, что представляет собой технический недостаток. Последним ограничением является использование отдельных анализов ANOVA для каждой временной точки, что игнорирует корреляции повторных измерений и взаимодействие времени и группы, тем самым снижая чувствительность к динамическим изменениям.

Таким образом, электроаккупунктура (ЭА) была связана с противовоспалительными и функциональными результатами на мышиной модели остеоартрита коленного сустава (KOA), индуцированного методом дестабилизации медиального мениска (DMM). Несмотря на такие ограничения, как вариабельность разрешения различных модальностей, зависимость результатов УЗИ и ИК-термографии от оператора, высокая стоимость МРТ и потенциальный стресс от повторных измерений, данный протокол остается практически осуществимой платформой для лонгитюдной мультимодальной оценки. Интегрированная система предоставляет основу для доклинического исследования. В будущих работах следует оптимизировать электрические параметры и использовать органоиды, системы «орган-на-чипе» и платформы ИИ для выяснения механизмов действия и разработки индивидуализированной терапии25,26. Для улучшения клинической трансляции также необходимы более совершенные группы ложного контроля (sham-контроль), стандартизированные протоколы и более длительный период последующего наблюдения.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Данное исследование было поддержано Планом действий по инновациям в области науки и технологий в Шанхае (23YF1447900 для JMC) и Национальным фондом естественных наук Китая (U23A20508 для LQY, 82575196 для HSC и U24A6013 для HX).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1% раствор уксусной кислотыSolarbioCat# G1371Раствор для дифференцировки/промывки при окрашивании
1% раствор соляной кислоты в этанолеSolarbioCat# G1371Кислотно-спиртовой раствор для дифференцировки
МРТ для мелких животных 7TShanghai Chenguang7T MRI NOVALСистема магнитно-резонансной томографии для мелких животных
Акупунктурные иглы (0.16 mm × 25 mm)Wuxi Jiajian Medical Instrument, Wuxi, Chinalot no. 491226Стерильные акупунктурные иглы
Адгезивные предметные стеклаJiangsu ShitaiMH0662Предметные стекла для срезов тканей
Безводный этанолShanghai Titan Technology Co., Ltd.64-17-5Этанол для дегидратации
Мыши C57BL/6Shanghai Silaike Laboratory Animal Co., Ltd.https://www.slaccas.com/Экспериментальные животные
Покровные стеклаJiangsu ShitaiNot providedСбор и закрепление срезов тканей
Раствор для декальцинацииSerivebioG1105-500mlРеагент для декальцинации костей и суставов, pH 7.2-7.4
Аппарат для электротерапииSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.SD-ZСтимулятор для электроакупунктуры
Этилендиаминтетрауксусная кислотаShanghai Titan Technology Co., Ltd.60-00-4Хелатирующий реагент
Fiji (ImageJ)National Institutes of Health (NIH)ImageJ bundled with 64-bit Java 8.Программное обеспечение для анализа изображений
МарляWeizhe MedicalType A1: Standard Gauze Pads (Sterile)Материал для удаления волос и очистки
Крем для удаления волосVEETNot providedДепиляционный крем
ПО для анализа инфракрасных изображенийFLIRVersion not providedПрограммное обеспечение, поставляемое с инфракрасным тепловизором
Инфракрасный тепловизорFLIR435-0007-03 (Early Batch)Система инфракрасной термографии
Система ингаляционной анестезии для мелких животныхMatrx07149Газовая система анестезии для мелких животных
Изофлуран (ингаляционный анестетик)RWD217140901Ингаляционный анестетик
Медицинский водонепроницаемый эластичный пластырь Naisikang (3.81 cm × 4.57 m)Naisikang™732Материал для позиционирования конечностей при МРТ
Модифицированный набор для окрашивания сафранином О и быстрым зеленым (для кости)SolarbioCat# G1371Набор для окрашивания хряща и кости
ИглодержательRWDF21001-12Интраоперативное зажимное и шовное оборудование
Нейтральная смоляная среда для заключенияbiosharp23338664Гистологическая среда для заключения
КислородNot providedNot providedГаз-носитель для ингаляционной анестезии
Аппарат для заливки парафиномLEICAEG1150CСистема заливки парафином
Парафиновый микротомLEICARM2235Ротационный микротом
Парафинepredia151534Среда для заливки
ПараформальдегидSinopharm Reagents Co., Ltd.80096618Фиксатор тканей
PBSServicebioG0002Фосфатно-солевой буферный раствор
Аппарат RotarodPanlabLE8205Система тестирования на выносливость Rotarod
Платформа ультразвуковой визуализации для мелких животныхFujiVevo 3100Ультразвуковая система для мелких животных
Гидроксид натрияShanghai Titan Technology Co., Ltd.G19852HЛабораторный реагент
СтереомикроскопOlympusSZ61Диссекционный микроскоп
Шовные иглы с нитью (рассасывающаяся нить 6-0 и шелковая нить 6-0)Ningbo Medical Suture Co., Ltd.Cosmetic Needles 1/2 4X12 40Послеоперационное наложение швов
Хирургические лезвия (№10)Hangzhou Nuoyang Biotechnology Co., Ltd.20090120Рассечение связки медиального мениска
Дегидратор тканейLEICATP1020Автоматический процессор тканей
Сушилка для тканейLEICAHI1220Сушилка для предметных стекол
Кассеты для заливки тканейJiangsu ShitaiREF31050102WРасходные материалы для заливки
Растягиватель тканейLEICAHI1210Система для растягивания срезов
ПО для ультразвукового анализа (Vevo Lab 3.1.0)OpticVersion 3.1.0Программное обеспечение для трехмерного ультразвукового анализа
Контактный гель для УЗИHu Qingyu TangYY0299-2008Ультразвуковой контактный гель
Сканер целых предметных стеколOlympusVS200Система цифрового сканирования стекол
КсилолSinopharm Reagents Co., Ltd.10023418Прозрачивающий реагент

Ссылки

  1. Lee BJ et al. Association between metabolic syndrome and knee osteoarthritis: a cross-sectional nationwide survey study. J Rehabil Med. 2019;51(6):464-70.
  2. Glyn-Jones S et al. Osteoarthritis. Lancet. 2015;386(9991):376-87.
  3. Hunter DJ, Bierma-Zeinstra S. Osteoarthritis. Lancet. 2019;393(10182):1745-59.
  4. Rahmati M, Mobasheri A, Mozafari M. Inflammatory mediators in osteoarthritis: a critical review of the state-of-the-art, current prospects, and future challenges. Bone. 2016;85:81-90.
  5. Fokam D, Lehmann C. Clinical assessment of arthritic knee pain by infrared thermography. J Basic Clin Physiol Pharmacol. 2019;30(3):20170218.
  6. Ren G et al. Serum and synovial fluid cytokine profiling in hip osteoarthritis: distinct from knee osteoarthritis and correlated with pain. BMC Musculoskelet Disord. 2018;19(1):39.
  7. Siqueira MB et al. Comparison of synovial fluid cytokine levels between traumatic knee injury and end-stage osteoarthritis. J Knee Surg. 2017;30(2):128-33.
  8. Xu H et al. Utilization of longitudinal ultrasound to quantify joint soft-tissue changes in a mouse model of posttraumatic osteoarthritis. Bone Res. 2017;5:17012.
  9. Tattersall GJ. Infrared thermography: a non-invasive window into thermal physiology. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2016;202:78-98.
  10. Schiavon G et al. Infrared thermography for the evaluation of inflammatory and degenerative joint diseases: a systematic review. Cartilage. 2021;13(2_suppl):1790S-801S.
  11. De Marziani L et al. Infrared thermography in symptomatic knee osteoarthritis: joint temperature differs based on patient and pain characteristics. J Clin Med. 2023;12(6):2319.
  12. Zhao Y, Liu B, Liu CJ. Establishment of a surgically-induced model in mice to investigate the protective role of progranulin in osteoarthritis. J Vis Exp. 2014;(84):e50924.
  13. Jiang Y et al. Electroacupuncture ameliorates cerebrovascular impairment in Alzheimer’s disease mice via melatonin signaling. CNS Neurosci Ther. 2023;29(3):917-31.
  14. Wang Z et al. Effect of electroacupuncture on the kisspeptin system in a pubertal rat model of polycystic ovary syndrome. Acupunct Med. 2021;39(5):491-500.
  15. Brochard S, et al. A single intraarticular injection of a tranexamic acid-modified hyaluronic acid (HA/TXA) alleviates pain and reduces OA development in a murine model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis. Front Pharmacol. 2024;15:1456495.
  16. Mi B et al. A preliminary study on the diagnostic value of infrared thermography in children with idiopathic thrombocytopenic purpura. Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2020;37(4):652-60.
  17. Bannuru RR et al. OARSI guidelines for the non-surgical management of knee, hip, and polyarticular osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 2019;27(11):1578-89.
  18. Oliveira MC, Vullings J, van de Loo FAJ. Osteoporosis and osteoarthritis are two sides of the same coin paid for obesity. Nutrition. 2020;70:110486.
  19. Ramezanpour S et al. Impact of sustained synovitis on knee joint structural degeneration: 4-year MRI data from the Osteoarthritis Initiative. J Magn Reson Imaging. 2023;57(1):153-64.
  20. Zhao M et al. Electroacupuncture alleviates osteoarthritis and is associated with activation of the Nrf2/HO-1 pathway and reduced ferroptosis-related changes. Front Mol Biosci. 2026;13:1764620.
  21. Blackshear CP et al. Three-dimensional ultrasound versus computerized tomography in fat graft volumetric analysis. Ann Plast Surg. 2018;80(3):293-6.
  22. Karmakar V et al. Targeting the NLRP3 inflammasome as a novel therapeutic target for osteoarthritis. Inflammopharmacology. 2025;33(2):461-84.
  23. Wilson TG et al. Circulating miR-126-3p is a mechanistic biomarker for knee osteoarthritis. Nat Commun. 2025;16(1):2021.
  24. Wang J et al. Effects of electroacupuncture on knee osteoarthritis in rats through suppressing p38 MAPK/ERK/CREB pathway. J Inflamm Res. 2026;19:581985.
  25. Cao JC, et al. Electrostrategies in orthopaedic research. Biomater Transl. 2025;6(3):294-313.
  26. Wei Y, et al. Organoids in aging research: Bridging cutting-edge biotechnology with the wisdom of traditional Chinese medicine.Organoid Res. 2026;2(1):025460035.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Мышиная модельвоспаление синовиальной оболочкитест на ротародемагнитно-резонансная томографияинфракрасная термографияпатология хрящагистологическое окрашивание
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.