Повреждение слизистой оболочки желудка, вызванное клопидогрелом и связанное со стрессом эндоплазматического ретикулума у крыс

Zhenwei Li; Fengzheng Han; Wenxia Liu; Xuan Wu; Jing Zhao; Ruijie Yu; Ranran Duan; Heng Zhang; Wen Li; Xiaowei Cui

doi:10.3791/72097

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Повреждение слизистой оболочки желудка, вызванное клопидогрелом и связанное со стрессом эндоплазматического ретикулума у крыс

65 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/72097

⸱

28 августа 2026 г.

Zhenwei Li^*¹ , Fengzheng Han^*¹ , Wenxia Liu¹ , Xuan Wu¹ , Jing Zhao¹ , Ruijie Yu¹ , Ranran Duan¹ , Heng Zhang² , Wen Li¹ , Xiaowei Cui¹

¹Gastroenterology Department, Dagang Hospital of Binhai New Area, ²Clinical Laboratory, Tianjin Adicon Clinical Laboratories Co., Ltd.

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В данном исследовании изучается повреждение слизистой оболочки желудка, связанное с применением клопидогрела у крыс и в клетках эпителия желудка, с акцентом на его связь с молекулярными изменениями, вызванными стрессом эндоплазматического ретикулума, апоптозом и системным воспалением.

Аннотация

Клопидогрел широко используется в качестве антиагрегантного средства для профилактики и лечения артериальных тромбозов, однако его клиническое применение может быть ограничено побочными эффектами со стороны желудочно-кишечного тракта, включая повреждение слизистой оболочки желудка. Поскольку выживаемость эпителиальных клеток имеет решающее значение для поддержания целостности слизистой оболочки желудка, мы выдвинули гипотезу, что вызванное клопидогрелом повреждение эпителия желудка будет сопровождаться изменениями маркеров стресса ЭР и апоптоза. Для проверки этой гипотезы клетки эпителия желудка человека линии GES-1 обрабатывали различными концентрациями клопидогрела, а жизнеспособность клеток, апоптоз, распределение по фазам клеточного цикла и молекулярные изменения оценивали с помощью теста Cell Counting Kit-8 (CCK-8), проточной цитометрии, количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR) и вестерн-блоттинга. Параллельно крысам линии Sprague-Dawley вводили клопидогрел зондом для создания модели повреждения слизистой оболочки желудка in vivo. Патологические изменения слизистой оболочки желудка оценивали путем окрашивания гематоксилином и эозином, а уровни воспалительных цитокинов в сыворотке крови измеряли с помощью иммуноферментного анализа (ELISA). Клопидогрел снижал жизнеспособность клеток GES-1, стимулировал апоптоз и изменял прогрессию клеточного цикла. У крыс клопидогрел вызывал эрозию слизистой оболочки желудка, отек и инфильтрацию воспалительными клетками, что сопровождалось повышением уровней интерлейкина (IL)-1β, IL-6 и фактора некроза опухоли-α (TNF-α) в сыворотке крови. Клопидогрел также повышал экспрессию маркеров стресса ЭР — гомологичного белка C/EBP (CHOP) и активирующего фактора транскрипции 5 (ATF5), увеличивал экспрессию белка Bax (Bcl-2-associated X protein), снижал экспрессию Bcl-2 (B-cell lymphoma 2) и повышал соотношение Bax/Bcl-2 как в тканях желудка, так и в клетках GES-1. Эти результаты позволяют предположить, что вызванное клопидогрелом повреждение слизистой оболочки желудка связано с повышенной экспрессией маркеров стресса ЭР и нарушением баланса Bax/Bcl-2, хотя прямая причинно-следственная связь между стрессом ЭР и митохондриальным путем апоптоза в данном исследовании установлена не была.

Введение

Врожденная и адаптивная иммунные системы слизистой оболочки желудка, состоящие из эпителиальных клеток, иммунных клеток и сигнальных молекул, взаимодействуют для поддержания целостности слизистой и служат критическим физиологическим барьером против вредных факторов¹^,². Эта защитная функция имеет решающее значение для гомеостаза желудочно-кишечного тракта, и ее нарушение может способствовать развитию заболеваний желудка, включая гастрит³. В клинической практике лекарственно-индуцированное повреждение слизистой оболочки желудка является частым осложнением, при этом нестероидные противовоспалительные препараты и антиагреганты относятся к числу наиболее частых причин⁴. Целостность слизистой оболочки желудка зависит от динамического баланса между пролиферацией и апоптозом клеток⁵. Хроническое воздействие факторов окружающей среды, включая лекарственные средства, может нарушить этот баланс, стимулировать апоптоз и привести к повреждению слизистой оболочки⁶^,⁷. Эндоплазматический ретикулум играет центральную роль в поддержании внутриклеточного гомеостаза. В условиях клеточного стресса накопление неправильно свернутых или несвернутых белков активирует ответ на несвернутые белки, включая сигнальный путь PERK/eIF2α/ATF4/CHOP, который может стимулировать апоптоз и изменять экспрессию белков семейства B-cell lymphoma 2 (Bcl-2)⁸. ATF5 также участвует в реакциях на митохондриальный стресс и в перекрестном взаимодействии между митохондриальной дисфункцией и стрессом эндоплазматического ретикулума⁹. Современные клинические данные свидетельствуют о том, что продолжающаяся антиагрегантная терапия, включая клопидогрел, связана с прогрессирующим повреждением слизистой оболочки желудка и тонкого кишечника¹⁰.

Клопидогрел представляет собой широко назначаемый антиагрегантный препарат, который требует метаболической активации перед необратимым связыванием с P2Y12-рецепторами тромбоцитов, тем самым ингибируя опосредованную аденозиндифосфатом агрегацию тромбоцитов и оказывая антитромботический эффект¹¹. Эта биоактивация происходит преимущественно с помощью печеночных ферментов цитохрома P450. Следовательно, прямое воздействие исходного соединения клопидогрела на культивируемые эпителиальные клетки желудка не воспроизводит полный метаболический и фармакокинетический контекст терапии клопидогрелом in vivo. Однако имеющиеся данные свидетельствуют о том, что лечение клопидогрелом может быть связано с рецидивирующими язвами желудка и желудочно-кишечными кровотечениями, что подчеркивает важность баланса между антитромботической эффективностью и безопасностью для желудочно-кишечного тракта¹²^,¹³^,¹⁴. Несмотря на сообщения об этих нежелательных эффектах, механизмы, лежащие в основе вызванного клопидогрелом повреждения слизистой оболочки желудка, остаются изученными не полностью, что ограничивает разработку целевых профилактических и терапевтических стратегий. В настоящем исследовании мы изучили воздействие клопидогрела на слизистую оболочку желудка с использованием крыс линии Sprague–Dawley и клеток GES-1. Крысы получали клопидогрел путем зондирования, а дополнительные эксперименты in vitro проводились с использованием клеток GES-1. Для выяснения того, связано ли вызванное клопидогрелом повреждение слизистой оболочки желудка со стрессом эндоплазматического ретикулума и апоптозом, были проведены гистопатологический, молекулярный и клеточный анализы. Соответственно, настоящее исследование было сосредоточено на характеристике молекулярных изменений, связанных с поражением желудка при воздействии клопидогрела, а не на установлении причинно-следственного сигнального пути. Наши результаты дают дополнительные сведения о молекулярных изменениях, связанных с повреждением слизистой оболочки желудка, вызванным клопидогрелом, и могут способствовать будущим исследованиям, направленным на предотвращение и купирование этих нежелательных эффектов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все экспериментальные процедуры с животными были рассмотрены и одобрены Лабораторией этического контроля за экспериментами на животных компании Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. Исследование проводилось в соответствии с институциональными рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных. Номер одобрения комитета по этике работы с животными — DRK-20251015210.

Животные и клеточные линии

Этическое одобрение охватывало использование 20 крыс линии Sprague–Dawley класса SPF. В настоящее исследование было включено в общей сложности 12 самцов крыс линии Sprague–Dawley класса SPF в возрасте 6–8 недель и весом 280–300 g на начало эксперимента. Крысы были приобретены в Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Ханчжоу, Китай; лицензия на производство № SCXK [Zhejiang] 2024-0004) и рандомизированы в контрольную группу и группу, получавшую клопидогрел, по шесть крыс в каждой группе. Животных содержали в контролируемой среде при температуре около 22°C с 12-часовым циклом свет/темнота и свободным доступом к стандартному корму и стерильной питьевой воде. Всем крысам была предоставлена одна неделя для акклиматизации перед началом эксперимента. Гидросульфат клопидогрела суспендировали в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе натрия (CMC-Na) в концентрации 0,781 mg/mL. Крысы в группе клопидогрела получали гидросульфат клопидогрела путем перорального зондирования в объеме 10 mL/kg массы тела (что эквивалентно 1 mL/100 g массы тела и дозе 7,81 mg/kg) один раз в сутки в течение 3 последовательных дней. Крысы в контрольной группе получали равный объем 0,5% CMC-Na. Доза и 3-дневная продолжительность лечения были выбраны на основании ранее описанной краткосрочной модели перорального введения клопидогрела крысам. После последнего зондирования на 3-й день корм withholding был прекращен на 12 h, в то время как вода предоставлялась ad libitum. Крыс анестезировали в индукционной камере 3% изофлураном в кислороде; анестезию поддерживали 1,5%–2,0% изофлураном через носовую маску. Достаточная глубина анестезии подтверждалась отсутствием роговичного и подошвенного рефлексов. Кровь собирали методом терминальной пункции сердца при глубокой анестезии. При сохранении глубокой анестезии крыс подвергали эвтаназии путем обескровливания с последующей билатеральной торакотомией. Смерть подтверждали отсутствием спонтанного дыхания и сердечной деятельности в течение не менее 5 min, а также отсутствием роговичного и подошвенного рефлексов. Затем желудок быстро извлекали, вскрывали по большой кривизне и осторожно промывали ледяным физиологическим раствором.

Линия эпителиальных клеток слизистой оболочки желудка человека GES-1 была получена от iCell Bioscience Inc. (Шанхай, Китай; Cat. No. iCell-h062) и прошла аутентификацию методом анализа коротких тандемных повторов (STR), проведенную поставщиком. Клетки культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллина-стрептомицина в увлажненном инкубаторе при 37°C и 5% CO₂. В экспериментах использовали клетки ранних пассажей (от 3 до 10). При достижении конфлюэнтности примерно 80%–90% клетки пересевали в соотношении 1:3. Для последующих экспериментов использовали клетки в логарифмической фазе роста. Для анализа CCK-8 клетки высевали в 96-луночные планшеты с плотностью 6 × 10³ клеток/лунку. Для анализа апоптоза и клеточного цикла клетки высевали в 6-луночные планшеты с плотностью примерно 5 × 10⁵ клеток/лунку и оставляли для адгезии перед воздействием клопидогрела.

Реактивы и растворы

Для экспериментов на животных и клетках использовали гидросульфат клопидогрела (Cat. No. C874834; чистота ≥ 99%). Стоковый раствор клопидогрела готовили путем растворения 100 mg порошка клопидогрела в диметилсульфоксиде (DMSO) для получения стокового раствора с концентрацией 1 M. Перед использованием стоковый раствор дополнительно разбавляли до необходимых рабочих концентраций. Стоковый раствор 1 M подвергали серийному разведению в DMSO для приготовления 1000× рабочих растворов с концентрациями 10, 100, 200, 400, 600, 800 и 1000 mM. Непосредственно перед обработкой каждый 1000× рабочий раствор добавляли в полную культуральную среду в соотношении 1:1000 (v/v) для получения конечных концентраций клопидогрела 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1,0 mM соответственно. Группа контроля (плацебо) получала равный объем DMSO без клопидогрела. Таким образом, конечная концентрация DMSO во всех группах поддерживалась на уровне 0,1% (v/v). Культивируемые клетки GES-1 не воспроизводят биоактивацию клопидогрела, опосредованную печеночным цитохромом P450. Поэтому прямое воздействие клопидогрела использовали в качестве исследовательской модели воздействия исходного соединения. Диапазон концентраций был выбран для характеристики концентрационно-зависимых клеточных ответов в данных экспериментальных условиях и не должен интерпретироваться как эквивалентный клинически достижимым концентрациям в плазме или тканях желудка.

Субкультивирование клеток

Полную среду готовили путем добавления в базовую культуральную среду FBS и пенициллина-стрептомицина. При достижении клетками конфлюэнтности примерно 80% культуральную среду удаляли, а клетки трижды промывали стерильным фосфатно-солевым буфером (PBS). Затем клетки обрабатывали раствором трипсина и этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) в течение примерно 1–2 min. После частичного открепления клеток добавляли полную среду для остановки процесса дигестии. Суспензию клеток центрифугировали при 1,200 × g в течение 3 min. После удаления супернатанта осадок клеток ресуспендировали в 1–2 mL полной среды и высевали в новые культуральные чашки в соответствии с требованиями эксперимента.

Анализ жизнеспособности клеток с помощью CCK-8

Клетки GES-1 в логарифмической фазе роста высевали в 96-луночные планшеты в концентрации 6 × 10³ клеток/лунку и культивировали в течение ночи для обеспечения адгезии клеток. После прикрепления клетки обрабатывали клопидогрелом в различных концентрациях (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 и 1,0 mM) в течение 24 ч. Контрольная группа получала ту же конечную концентрацию растворителя. После обработки в каждую лунку добавляли раствор CCK-8 и инкубировали при 37°C согласно инструкции к набору. Оптическую плотность при 450 nm измеряли с помощью микропланшетного ридера. Жизнеспособность клеток рассчитывали как процент от контрольной группы. На основании результатов зависимости «концентрация — ответ» для последующего анализа апоптоза, клеточного цикла, qPCR и вестерн-блоттинга была выбрана обработка клопидогрелом в концентрации 0,1 mM в течение 24 ч.

Проточная цитометрия

Клетки GES-1 высевали в 6-луночные планшеты и обрабатывали 0.1 mM клопидогрелом в течение 24 ч после прикрепления клеток. После обработки собирали как плавающие, так и адгезивные клетки. Адгезивные клетки обрабатывали трипсином без EDTA, дважды промывали холодным PBS и ресуспендировали в связывающем буфере. Клетки окрашивали с использованием набора для определения апоптоза Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit согласно инструкциям производителя. После инкубации при комнатной температуре в темноте апоптотические клетки детектировали с помощью проточного цитометра RaiseCyte 2L6C. Сбор данных осуществляли с помощью программного обеспечения RaiseFlower, анализ проводили в программе FlowJo (версия 10.8.1). Популяции клеток на стадиях раннего апоптоза, позднего апоптоза и общее количество апоптотических клеток количественно определяли с помощью программного обеспечения FlowJo.

Проточная цитометрический анализ распределения фаз клеточного цикла

Клетки GES-1 высевали в 6-луночные планшеты и обрабатывали клопидогрелом в концентрации 0.1 mM в течение 24 h. После обработки клетки собирали, промывали PBS и фиксировали в предварительно охлажденном 70% этаноле при 4°C. Затем фиксированные клетки промывали для удаления остаточного этанола и инкубировали с раствором для окрашивания РНказой А и пропидиййодидом в темноте согласно инструкциям производителя. Распределение фаз клеточного цикла анализировали с помощью проточного цитометра. Сбор данных осуществляли с использованием специализированного программного обеспечения для сбора данных, а анализ проводили в программе FlowJo. Распределения фаз клеточного цикла аппроксимировали по модели Уотсона, после чего рассчитывали процент клеток в фазах G0/G1, S и G2/M.

Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени (кПЦР)

Общую РНК экстрагировали из клеток GES-1 и образцов тканей желудка крысы с помощью набора для экстракции РНК согласно инструкции к набору. Для образцов тканей ткани слизистой оболочки желудка быстро собирали, гомогенизировали в условиях низких температур и подвергали экстракции РНК. Концентрацию и чистоту РНК определяли по значению абсорбции при 260 и 280 nm. Равные количества РНК подвергали обратной транскрипции в комплементарную ДНК (кДНК) с использованием набора для обратной транскрипции с удалением геномной ДНК. Количественную ПЦР в реальном времени проводили с использованием мастер-микса для ПЦР на основе SYBR Green. Каждую реакцию проводили в общем объеме 20 µL, содержащем 10 µL 2× мастер-микса, 1 µL кДНК, 0,4 µL прямого праймера, 0,4 µL обратного праймера и 8,2 µL безнуклеазной ddH₂O. Режим термоциклирования был следующим: начальная денатурация при 95°C в течение 10 min, затем 40 циклов денатурации при 95°C в течение 10 s, отжига при 60°C в течение 30 s и элонгации при 72°C в течение 30 s. Определяли уровни экспрессии CHOP, ATF5, Bcl-2 и Bax. В качестве внутреннего референсного гена использовали GAPDH. Относительную экспрессию генов рассчитывали методом 2−ΔΔCt. Последовательности праймеров приведены в Дополнительной таблице 1.

Вестерн-блоттинг

Общий белок экстрагировали из клеток GES-1 и образцов тканей желудка крысы. Для клеточных образцов обработанные клетки GES-1 промывали холодным PBS и лизировали с использованием буфера для радиоиммунопреципитационного анализа (RIPA), содержащего ингибитор протеаз. Для образцов тканей ткани слизистой оболочки желудка гомогенизировали в буфере RIPA в условиях низких температур, затем центрифугировали для сбора супернатанта. Концентрации белка определяли с помощью BCA-анализа белка. Всего 20 µg белка на дорожку разделяли методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и переносили на мембраны из поливинилиденфторида (PVDF). После блокировки бычьим сывороточным альбумином (BSA) мембраны инкубировали в течение ночи при 4°C с первичными антителами к CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) и β-actin (1:5000). После промывки мембраны инкубировали с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (1:10000). Полосы белков визуализировали с помощью реагента для усиленной хемилюминесценции и фиксировали с помощью системы хемилюминесцентной визуализации. Интенсивность полос количественно оценивали с помощью программного обеспечения для анализа изображений и нормализовали по β-actin.

Гистопатологическая оценка

Образцы тканей желудка крыс линии Sprague–Dawley были собраны после введения клопидогрела и зафиксированы в 10% нейтральном буферизованном формалине. Образцы подвергли дегидратации, просветлению, заливке в парафин и нарезали на срезы толщиной 4 µm. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Гистопатологические изменения оценивали качественно с помощью светового микроскопа, основываясь на морфологии слизистой оболочки, целостности эпителия, наличии отека и инфильтрации воспалительными клетками. Были получены репрезентативные изображения. Система гистологического скоринга не применялась.

Иммуногистохимический анализ

Срезы тканей желудка, залитых парафином, депарафинизировали в ксилоле и регидратировали через серию спиртов decreasing concentration. Термическую демаскировку антигенов проводили в цитратном буфере. Эндогенную пероксидазную активность блокировали 3% раствором перекиси водорода в течение 10 мин, а неспецифическое связывание блокировали нормальной сывороткой козы в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем срезы инкубировали в течение ночи при 4°C с первичными антителами к CHOP, ATF5, Bcl-2 и Bax. После промывки PBS срезы инкубировали с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена. Иммунореактивные сигналы визуализировали с помощью хромогенного раствора DAB с последующим докрашиванием гематоксилином. Срезы дегидратировали, просветляли, заключали вmounting medium и исследовали под световым микроскопом. Выполняли захват репрезентативных изображений, а площадь положительного окрашивания количественно оценивали с помощью программного обеспечения для анализа изображений.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Срезы тканей желудка, залитых парафином, подвергли депарафинизации, регидратации и термически индуцированному восстановлению антигенов в цитратном буфере. После блокировки нормальной сывороткой козы в течение 30 мин срезы инкубировали в течение ночи при 4°C с первичными антителами к CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) и Bax (1:200). После промывки PBS срезы инкубировали с соответствующими флуоресцентными вторичными антителами (1:500) в течение 1 ч при комнатной температуре в темноте, а затем окрашивали DAPI для контрастирования ядер. Изображения были получены с помощью флуоресцентного микроскопа при увеличении ×200. Три случайно выбранных неперекрывающихся поля от каждого животного анализировали с помощью Image-Pro Plus 6.0, а интенсивность флуоресценции выражали как IOD/Area. В анализ были включены три животных из каждой группы.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Образцы крови собирали у крыс линии Sprague–Dawley после проведения терапии и оставляли для свертывания при комнатной температуре. Сыворотку отделяли путем центрифугирования и хранили при −80°C до проведения анализа. Уровни IL-1β, IL-6 и TNF-α в сыворотке определяли с помощью наборов для ИФА в соответствии с инструкциями к наборам. Оптическую плотность измеряли на микропланшетном ридере, а концентрации цитокинов рассчитывали по стандартным кривым.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения для статистического анализа. Данные представлены в виде среднего значения ± SD. Нормальность распределения и однородность дисперсии оценивали с помощью теста Шапиро–Уилка и критерия Левеней соответственно. Сравнение двух групп проводили с использованием t-критерия Стьюдента t-тест. Сравнение нескольких групп проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим апостериорным тестом Даннетта. Значение P < Значение 0,05 считалось статистически значимым. Все эксперименты с клетками проводились с использованием как минимум трех независимых биологических повторов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Клопидогрел снижает жизнеспособность клеток GES-1 и увеличивает апоптоз in vitro

Сначала мы исследовали, влияет ли клопидогрел на жизнеспособность и апоптоз клеток GES-1. Анализ с помощью CCK-8 показал, что воздействие клопидогрела значительно снижало жизнеспособность клеток GES-1 (Рисунок 1A,B), что свидетельствует о снижении жизнеспособности клеток. Исходя из общего снижения жизнеспособности клеток во всем протестирован...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Клопидогрел широко применяется для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний; однако его клиническое использование связано с риском кровотечений и желудочно-кишечными осложнениями, включая пептические язвы, кровотечения и перфорацию¹⁹. Таким образом, понимание молекулярных изменений, связанных с повреждением слизистой оболочки желудка, индуцированным клопидогрелом, имеет важное значение для улучшения профилактики и коррекции этих побочных эффектов. В настоящем исследовании мы изучили ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов:

Авторы заявляют, что им не известно о наличии каких-либо конфликтов финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на результаты исследования, представленного в данной работе.

Благодарности

Данная работа была поддержана проектом «Фундаментальные исследования сигнального пути CHOP/ATF5/Bcl-2 при апоптозе эпителиальных клеток слизистой оболочки желудка, индуцированном клопидогрелом» (проект № 2023BWKY009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Набор для определения апоптоза Annexin V-FITC/PI	Elabscience	E-CK-A211	Набор для детектирования апоптоза
Антитело к ATF5	Proteintech	67066-1-AP	Первичные антитела
Набор для определения концентрации белка методом БКА	Solarbio	PC0020	Метод определения концентрации белка
Антитело к Bax	Proteintech	50599-1-AP	Первичные антитела
Антитела к Bcl-2	Proteintech	26593-1-AP	Первичные антитела
βантитело к $\beta$-актину	Proteintech	66009-1-Ig	Первичные антитела
Блокирующий буфер	Beyotime	P0252	Блокирующий раствор для вестерн-блоттинга
Набор для подсчета клеток CCK-8	KeyGen Biotech	KGA317	Анализ жизнеспособности клеток
Набор для синтеза кДНК	TransGen Biotech	AU341	Набор для синтеза первой цепи кДНК с удалением геномной ДНК
Набор для определения фаз клеточного цикла	Lianke Biotechnology	CCS012	Набор для анализа клеточного цикла
Антитело к CHOP	Proteintech	15204-1-AP	Первичные антитела
Гидросульфат клопидогрела (чистота ≥99%)	Макклин	C874834	Экспериментальный препарат
Набор хромогена DAB	Beyotime	P0201M	Субстрат для иммуногистохимического анализа
Диметилсульфоксид (ДМСО)	MedChemExpress	HY-Y0320C	Растворитель
Реагент для усиленной хемилюминесценции (ECL)	Meilunbio	MA0186	Хемилюминесцентный субстрат
Фетальная бычья сыворотка (ФБС)	Gibco	10099-141	Добавка для культуральных сред
Линия клеток эпителия желудка человека GES-1	iCell Bioscience	iCell-h062	Линия клеток эпителия желудка человека
Гематоксилин и эозин (Г&E) Набор для окрашивания	Beyotime	C0105S	Гистологическое окрашивание
Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP)	Proteintech	RGAM001/RGAR001	Вторичное антитело
Раствор перекиси водорода	Абсинтум	ABS9333-100 мл	Реагент для блокировки эндогенной пероксидазы
ИЛ-1β Набор для ИФА	МЭЙМЯН	MM-0047R2	Анализ содержания цитокинов в сыворотке крови
Набор для ИФА на ИЛ-6	МЭЙМЯН	MM-0190R2	Анализ содержания цитокинов в сыворотке крови
Считыватель микропланшетов	Beijing Liuyi Biotechnology	WD-2102B	Измерение абсорбции
Раствор пенициллина и стрептомицина	Solarbio	P1400	Раствор антибиотика
Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS)	Servicebio	G4202-500ML	1× ФОСБ (фосфатно-солевой буфер)
Мембрана из поливинилиденфторида (ПВДФ)	Millipore	IPVH00010	Мембрана для вестерн-блоттинга
Растворитель для первичных антител	Beyotime	P0023A	Разбавитель для антител
Маркер молекулярной массы белков	Yeasen	WJ103	Преокрашенный маркер молекулярных масс белков
Мастер-микс для количественной ПЦР в реальном времени (SYBR Green)	CWBio	CW3008	реагент для кПЦР
Буфер для лизиса RIPA (радиоиммунопреципитационный анализ)	Solarbio	R0010	Буфер для экстракции белков
РНКаза А	Lianke Biotechnology	CCS012	Реагент для анализа клеточного цикла
Среда RPMI-1640	Servicebio	G4535-500ML	Базальная среда для культивирования клеток
Крысы линии Sprague-Dawley	Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	Поскольку исходный текст не был предоставлен, я не могу выполнить перевод. Пожалуйста, введите текст, который необходимо перевести на русский язык.	стерильный класс SPF (без специфических патогенов)
ФНО-α Набор для ИФА	МЭЙМЯН	MM-0180R2	Анализ содержания цитокинов в сыворотке крови
Набор для экстракции тотальной РНК	TransGen Biotech	ER501-01	Набор для экстракции РНК
Раствор трипсин-ЭДТА	Solarbio	T1300	Реагент для диссоциации клеток

Ссылки

Mills JC, Shivdasani RA. Gastric epithelial stem cells. Gastroenterology. 2011;140(2):412-424.
Zhou CB, et al. The role of pyroptosis in gastrointestinal cancer and immune responses to intestinal microbial infection. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2019;1872(1):1-10.
Boltin D, Niv Y. Pharmacological and alimentary alteration of the gastric barrier. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 2014;28(6):981-994.
Kwon DA, et al. Protective effects of a standardized extract (HemoHIM) using indomethacin- and ethanol/HCl-induced gastric mucosal injury models. Pharm Biol. 2019;57(1):543-549.
Guo XZ, et al. Effect of Bax, Bcl-2 and Bcl-xL on regulating apoptosis in tissues of normal liver and hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol. 2002;8(6):1059-1062.
Gomi A, et al. Effect of Bifidobacterium bifidum BF-1 on gastric protection and mucin production in an acute gastric injury rat model. J Dairy Sci. 2013;96(2):832-837.
Chiou SK, et al. Suppression of growth arrest and DNA damage-inducible 45alpha expression confers resistance to sulindac- and indomethacin-induced gastric mucosal injury. J Pharmacol Exp Ther. 2010;334(3):693-702.
Chen X, et al. Endoplasmic reticulum stress: molecular mechanism and therapeutic targets. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):352.
Lian X, et al. ATF5-regulated mitochondrial unfolded protein response attenuates neuronal damage in epileptic rats by reducing endoplasmic reticulum stress through mitochondrial ROS. Neurochem Res. 2024;49(2):388-401.
He C, et al. Progression of gastrointestinal injury during antiplatelet therapy after percutaneous coronary intervention: a secondary analysis of the OPT-PEACE randomized clinical trial. JAMA Netw Open. 2023;6(11):e2343219.
Zongdan J, et al. The mechanism of miR-363-3p/DUSP10 signaling pathway involved in the gastric mucosal injury induced by clopidogrel. Toxicol Mech Methods. 2021;31(2):150-158.
Chan FK, et al. Clopidogrel versus aspirin and esomeprazole to prevent recurrent ulcer bleeding. N Engl J Med. 2005;352(3):238-244.
Taha AS, et al. Upper gastrointestinal mucosal abnormalities and blood loss complicating low-dose aspirin and antithrombotic therapy. Aliment Pharmacol Ther. 2006;23(4):489-495.
Wu HL, et al. Increased endoplasmic reticulum stress response is involved in clopidogrel-induced apoptosis of gastric epithelial cells. PLoS One. 2013;8(9):e74381.
Forsgard RA, et al. Intestinal permeability to iohexol as an in vivo marker of chemotherapy-induced gastrointestinal toxicity in Sprague-Dawley rats. Cancer Chemother Pharmacol. 2016;78(4):863-874.
Wu H, et al. Clopidogrel-induced gastric injury in rats is attenuated by stable gastric pentadecapeptide BPC 157. Drug Des Devel Ther. 2020;14:5599-5610.
Zhu XM, et al. The involvement of endoplasmic reticulum stress response in immune dysfunction of dendritic cells after severe thermal injury in mice. Oncotarget. 2017;8(6):9035-9052.
Oakes SA, Papa FR. The role of endoplasmic reticulum stress in human pathology. Annu Rev Pathol. 2015;10:173-194.
Abrignani MG, et al. Gastroprotection in patients on antiplatelet and/or anticoagulant therapy: a position paper of the National Association of Hospital Cardiologists (ANMCO) and the Italian Association of Hospital Gastroenterologists and Endoscopists (AIGO). Eur J Intern Med. 2021;85:1-13.
Takahashi K, et al. Influence of antiplatelet drugs on gastric ulcer healing after endoscopic submucosal dissection in patients with early gastric cancer. DEN Open. 2025;5(1).
Wu H, et al. Role of MKP-5-p38/MAPK pathway in clopidogrel-induced gastric mucosal epithelial cells apoptosis and tight junction dysfunction. Am J Transl Res. 2020;12(5):1741-1753.
Fu X, et al. Protective effect of teprenone on gastric mucosal injury induced by dual antiplatelet therapy in rats. Am J Transl Res. 2021;13(4):2702-2709.
Oyadomari S, Mori M. Roles of CHOP/GADD153 in endoplasmic reticulum stress. Cell Death Differ. 2004;11(4):381-389.
Sears TK, Angelastro JM. The transcription factor ATF5: role in cellular differentiation, stress responses, and cancer. Oncotarget. 2017;8(48):84595-84609.
Zhang Y, et al. Puerarin attenuates neurological deficits via Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3 and Sirt3/SOD2 apoptotic pathways in subarachnoid hemorrhage mice. Biomed Pharmacother. 2019;109:726-733.
Manas A, et al. Immunohistochemical detection of the pro-apoptotic BaxΔ2 protein in human tissues. Histochem Cell Biol. 2020;154(1):41-53.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Повреждение слизистой желудка клопидогрелом клетки GES-1 маркеры апоптоза анализ жизнеспособности клеток проточная цитометрия вестерн-блоттинг воспалительные цитокины соотношение Bax/Bcl-2

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно

Сообщать об обновлениях: