Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Белок человека, подобный Wings Apart, как сывороточный диагностический биомаркер при раке шейки матки: интегративный биоинформатический анализ с валидацией по сыворотке крови

73 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/72194

⸱

21 августа 2026 г.

 ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine, Shaanxi Provincial People's Hospital

В этой статье

Краткое содержание

В данном исследовании с помощью комплексного биоинформационного анализа и валидации по сыворотке крови оценивается белок hWAPL (human wings apart-like) как серологический диагностический биомаркер рака шейки матки; показано, что сочетание hWAPL в сыворотке с антигеном плоскоклеточного рака повышает эффективность диагностики.

Аннотация

Рак шейки матки остается серьезной угрозой для здоровья женщин во всем мире, а количество надежных сывороточных биомаркеров для раннего выявления и терапевтической стратификации остается ограниченным. Белок human wings-apart-like (hWAPL) был связан с канцерогенезом шейки матки, однако его диагностическая и клиническая значимость не была полностью выяснена. Чтобы восполнить этот пробел, в данном исследовании были интегрированы общедоступные мультиомные наборы данных, включая The Cancer Genome Atlas, GEPIA2, Human Protein Atlas и данные транскриптомики единичных клеток, для характеристики экспрессии hWAPL, его клинико-патологических связей, иммунной инфильтрации, сетей коэкспрессии, посттрансляционных модификаций и прогнозирования чувствительности к лекарственным препаратам. Эти результаты были оценены в независимой одноцентровой сывороточной когорте, включавшей 89 пациенток с гистологически подтвержденной плоскоклеточной карциномой шейки матки и 89 здоровых женщин в контрольной группе. Измерялись уровни hWAPL и антигена плоскоклеточного рака (SCC) в сыворотке крови, а диагностическая эффективность оценивалась с помощью анализа ROC-кривых. In silico было установлено, что hWAPL широко экспрессируется при множестве злокачественных новообразований, особенно при раке шейки матки, обогащен в злокачественных эпителиальных клетках и моноцитах/макрофагах, связан с более коротким интервалом до прогрессирования, что предсказывает снижение чувствительности к цисплатину, паклитакселу и 5-фторурацилу, а также чувствительность к ингибиторам MCL-1 и Wee1. В сывороточной когорте уровни hWAPL были значимо выше у пациенток, чем в контрольной группе, и позволяли дифференцировать рак шейки матки с показателем площади под кривой 0,961, что превышает эффективность одного лишь SCC. Сочетание hWAPL с SCC дополнительно улучшило диагностическую эффективность (площадь под кривой — 0,974; чувствительность — 93,3%; специфичность — 95,5%). Эти результаты позволяют предположить, что сывороточный hWAPL является потенциальным новым диагностическим биомаркером плоскоклеточной карциномы шейки матки, эффективность которого повышается при совместном использовании с SCC, в то время как наблюдаемые связи с химиорезистентностью и перестройкой иммунного микроокружения носят гипотетический характер и требуют экспериментального подтверждения.

Введение

Рак шейки матки занимает четвертое место по распространенности среди злокачественных новообразований и является четвертой ведущей причиной смертности от рака среди женщин во всем мире; в 2022 году было зарегистрировано примерно 660 000 новых случаев заболевания и 350 000 смертей1. Это бремя болезни непропорционально сильно затрагивает страны с низким и средним уровнем дохода, где программы систематического скрининга остаются недостаточными2. Хотя вакцинация против ВПЧ и цитологический скрининг (мазок Папаниколау) успешно снизили показатели заболеваемости во многих странах с высоким уровнем дохода, современные диагностические подходы имеют заметные ограничения. Тестирование на ДНК ВПЧ демонстрирует субоптимальную специфичность, а цитологическая интерпретация по своей сути субъективна и вариабельна. Эти недостатки подчеркивают острую необходимость в инновационных, объективных и минимально инвазивных сывороточных биомаркерах для дополнения существующих диагностических систем.

Антиген плоскоклеточного рака (SCC-Ag) служит основным серологическим биомаркером плоскоклеточного рака шейки матки — гистологического подтипа, на который приходится примерно 85–90% всех случаев рака шейки матки3. Систематический обзор и метаанализ показали, что повышенные уровни SCC-Ag до начала лечения при плоскоклеточном раке ассоциированы со значительно более низкими показателями общей и безрецидивной выживаемости4. В контексте мониторинга рецидивов SCC-Ag демонстрирует чувствительность 78,9% и специфичность 91,2% для плоскоклеточного рака4. Тем не менее, эффективность SCC-Ag для раннего выявления ограничена, так как повышенные уровни наблюдаются лишь у 28–88% лиц с диагностированным плоскоклеточным раком шейки матки5. Кроме того, многие опухоли на ранних стадиях не сопровождаются повышенными концентрациями SCC-Ag, и данный биомаркер не применим для неплоскоклеточных гистологических вариантов3. Следовательно, поиск новых сывороточных биомаркеров с более высокой диагностической чувствительностью, особенно для рака шейки матки на ранних стадиях, представляет собой важную и нерешенную клиническую задачу.

Помимо SCC-Ag, при раке шейки матки оценивали несколько других циркулирующих маркеров, включая раково-эмбриональный антиген, раковый антиген CA-125, фрагмент цитокератина-19 (CYFRA 21-1), а в последнее время — циркулирующую опухолевую ДНК и внеклеточную ДНК HPV. Однако на практике применение этих маркеров ограничено низкой чувствительностью при выявлении заболевания на ранних стадиях, плохой специфичностью в отношении плоскоклеточной гистологии, преобладающей при раке шейки матки, или необходимостью использования специализированных молекулярных платформ, которые пока не имеют широкого распространения. Такая ситуация оставляет значительную нишу для белкового маркера, который был бы одновременно механистически связан с канцерогенезом шейки матки и определяем с помощью рутинного иммуноанализа.

Ген человека wings apart-like (hWAPL), также называемый WAPL, кодирует фактор высвобождения когезина, необходимый для правильного разделения сестринских хроматид во время митотического деления6. Первоначально идентифицированный Ойкавой и соавт., hWAPL был охарактеризован как новый ген человека, экспрессия которого индуцируется онкобелками E6 и E7 ВПЧ. Он демонстрирует сильную экспрессию при карциномах шейки матки, в то время как в других нормальных и неопластических тканях наблюдается лишь минимальная экспрессия7. Дальнейшие исследования показали, что уровни мРНК hWAPL значительно повышены при карциноме шейки матки по сравнению с доброкачественным эпителием шейки матки, при этом экспрессия увеличивается корреляционно со степенью интраэпителиальной неоплазии шейки матки (CIN)8,9. С точки зрения механизмов, нарушение регуляции и гиперэкспрессия WAPL нарушают процессы митоза и цитокинеза, тем самым способствуя хромосомной нестабильности и прогрессированию опухоли10. Кроме того, WAPL вносит значительный вклад в туморогенез и регуляцию прогрессии клеточного цикла. В различных образцах эпителия шейки матки были идентифицированы многочисленные альтернативно сплайсированные изоформы WAPL, что подчеркивает его молекулярное разнообразие11. Помимо установленной роли в развитии рака шейки матки, растущее число данных указывает на диагностическую значимость hWAPL при поражениях шейки матки. Более того, опосредованный TAT-пептидом нокдаун hWAPL снижал экспрессию E6 ВПЧ, подавлял инвазию опухоли и формирование колоний в стволовых клетках рака шейки матки, а также значительно ослаблял рост опухоли в моделях на голых мышах12. Эти результаты позволяют предположить, что hWAPL служит маркером пролиферации стволовых клеток рака шейки матки и представляет собой потенциально жизнеспособную терапевтическую мишень12.

Несмотря на многообещающий характер этих результатов, ряд важных вопросов остается нерешенным. Во-первых, способность hWAPL в сыворотке крови дифференцировать пациентов с раком шейки матки и здоровых лиц, а также эффективность этого маркера по сравнению с установленным биомаркером SCC или в комбинации с ним не были оценены в строго контролируемой популяции исследования. Во-вторых, связь между уровнями hWAPL в сыворотке крови и статусом инфекции ВПЧ, а также ключевыми клинико-патологическими характеристиками, такими как клиническая стадия, гистологическая степень злокачественности и метастазы в лимфатических узлах, до сих пор не ясна. В-третьих, не было исследовано, обладают ли hWAPL и SCC дополнительной взаимодополняющей ценностью для диагностики.

Несмотря на то, что hWAPL был изучен на тканевом и клеточном уровнях, ранее не было установлено, можно ли измерить концентрацию этого белка в кровотоке и может ли измерение в сыворотке крови позволить дифференцировать рак шейки матки от контрольной группы; именно этот пробел в знаниях восполняет данное исследование. Опираясь на более ранние отчеты по анализу тканей, а не повторяя их, мы объединили комплексный биоинформатический обзор hWAPL с использованием данных The Cancer Genome Atlas и других общедоступных репозиториев с первой оценкой белка в сыворотке крови в независимой одноцентровой когорте, состоящей из 89 пациенток с плоскоклеточным раком шейки матки и 89 здоровых женщин из контрольной группы. Основная цель заключалась в определении диагностической эффективности hWAPL в сыворотке крови, количественно выраженной как площадь под ROC-кривой, для дифференциации плоскоклеточного рака шейки матки от здорового контроля, как самостоятельно, так и в сочетании с SCC-Ag; таким образом, основным показателем исхода была площадь под кривой, а вторичными показателями — чувствительность и специфичность при оптимальном индексе Юдена. Второстепенные цели состояли в том, чтобы охарактеризовать связь hWAPL в сыворотке крови со статусом ВПЧ и другими клинико-патологическими особенностями, а также сформулировать механистические гипотезы относительно биологического контекста hWAPL на основе биоинформатического анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Данное исследование было одобрено Институциональным наблюдательным советом провинциальной народной больницы провинции Шэньси (номер одобрения 2024-R055) и проведено в соответствии с принципами Хельсинкской декларации. Перед забором крови от каждого участника было получено письменное информированное согласие. Все образцы человеческой крови и сыворотки собирались, обрабатывались и хранились в соответствии с внутренними правилами отделения лабораторной медицины.

Все образцы венозной крови и сыворотки рассматривались как потенциально инфекционный биологический материал. Обработка образцов проводилась в лаборатории 2-го уровня биологической безопасности обученным персоналом с использованием соответствующих средств индивидуальной защиты. Одноразовые пластиковые изделия, наконечники для пипеток и использованные микропланшеты, контактировавшие с биологическим материалом, подвергались автоклавированию или собирались как биоопасные отходы и утилизировались через лицензированную систему утилизации медицинских отходов учреждения в соответствии с местными нормативными требованиями.

Обзор дизайна исследования:
Рабочий процесс данного исследования обобщен на схеме дизайна исследования (Дополнительный рисунок S1>) и разделен на два взаимодополняющих направления. В направлении in silico были проанализированы общедоступные наборы данных по транскриптомике, единичным клеткам, белкам, посттрансляционным модификациям, иммунитету и лекарственной чувствительности для характеристики биологического контекста hWAPL и формулирования механистических гипотез. В экспериментальном направлении в независимой одноцентровой когорте измеряли уровни hWAPL и SCC-Ag в сыворотке крови, а их диагностическая эффективность, как по отдельности, так и в сочетании, оценивалась с помощью анализа рабочей характеристики приемника и логистической регрессии. Эти два направления были интегрированы только на уровне интерпретации, при этом анализ сыворотки обеспечивал единственную экспериментальную валидацию.

Профилирование экспрессии генов при различных видах рака и плоскоклеточном раке шейки матки
Данные секвенирования РНК из The Cancer Genome Atlas (TCGA) были получены с помощью UCSC Xena Browser. Доступ ко всем публичным базам данных и веб-инструментам, использованным в данном исследовании, осуществлялся в период с сентября по октябрь 2025 года; конкретные версии и даты доступа указаны в Таблице материалов. Уровни экспрессии WAPL, количественно определенные как количество фрагментов на килобазу транскрипта на миллион картированных прочтений (FPKM), подвергались log₂-преобразованию с добавлением псевдосчета 1. Эти преобразованные значения затем использовались для проведения сравнительного анализа между злокачественными тканями и соответствующими прилегающими нормальными образцами для нескольких типов рака. Для детального исследования злокачественных новообразований шейки матки были выделены данные экспрессии WAPL, специфичные для плоскоклеточного рака шейки матки и эндоцервикальной аденокарциномы (CESC). Профиль экспрессии в этих образцах опухоли был впоследствии визуализирован и сопоставлен с уровнями экспрессии в контрольных тканях нормального эпителия шейки матки.

Анализ изоформ транскриптов WAPL
Профили экспрессии изоформ транскриптов WAPL были изучены с помощью базы данных GEPIA2. Конкретные изоформы были определены по соответствующим идентификаторам транскриптов Ensembl (ENST). Уровни экспрессии рассчитывались как логарифм по основанию 2 от количества транскриптов на миллион плюс один [log₂(TPM+1)] и представлены графически в виде скрипичных диаграмм.

Анализ секвенирования РНК единичных клеток
Набор данных scRNA-seq GSE168652 был получен из репозитория Gene Expression Omnibus (GEO). Предварительная обработка данных, оценка качества, нормализация и кластеризация проводились с помощью платформы scCancerExplorer. Клетки, экспрессирующие менее 200 генов, и гены, обнаруженные менее чем в трех клетках, были отфильтрованы. Нормализация выполнялась методом Log-Normalize с коэффициентом масштабирования 10,000.

С помощью стабилизирующего дисперсию преобразования были определены 2 000 наиболее вариабельных генов, которые впоследствии были использованы для анализа главных компонент (PCA). Для снижения размерности на основе первых 30 главных компонент был применен метод аппроксимации и проекции однородного многообразия (UMAP). Графовая кластеризация была реализована с помощью алгоритма Louvain при разрешении 0,8. Клеточные кластеры были аннотированы в соответствии с установленными генами-маркерами. Уровни экспрессии WAPL измерялись в различных популяциях клеток, а стадии клеточного цикла определялись с использованием метода CellCycleScoring.

Анализ экспрессии белков и посттрансляционных модификаций
Экспрессию и субклеточное распределение WAPL при плоскоклеточном раке кожи (CSCC) оценивали с помощью базы данных Human Protein Atlas. Сайты посттрансляционных модификаций (PTM) были идентифицированы с использованием PhosphoSitePlus. Кроме того, с помощью инструмента Xiantao Academic исследовались потенциальные связи между уровнями экспрессии WAPL и генами, участвующими в процессах модификации белков, в частности AKT1, AKT2, KAT2B, EP300, USP7 и KAT5, при CSCC13,14,15,16,17.

Анализ сетей коэкспрессии и функционального обогащения
Данные секвенирования РНК для TCGA-CSCC, обработанные с помощью выравнивателя STAR и нормализованные по количеству транскриптов на миллион (TPM), были получены с портала Genomic Data Commons (GDC). Для выявления генов, коэкспрессирующихся с WAPL, был применен порог отсева, основанный на абсолютном значении коэффициента корреляции Пирсона более 0,6 и уровне статистической значимости P < 0,05.

Для изучения биологических функций, связанных с WAPL, сначала был проведен анализ дифференциальной экспрессии после разделения пациентов на группы с высокой и низкой экспрессией WAPL, используя медианное значение экспрессии в качестве порога. Дифференциально экспрессируемые гены были идентифицированы с помощью платформы Xiantao Academic и впоследствии подвергнуты анализу обогащения Gene Ontology, включая категории биологических процессов, клеточных компонентов и молекулярных функций, а также анализу путей Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes. Независимо от этого с помощью STRING были исследованы белковые взаимодействия с участием WAPL, а полученная сеть взаимодействий была реконструирована и проанализирована в Cytoscape.

Анализ обогащения наборов генов (GSEA) проводили с использованием баз данных Reactome, WikiPathways и KEGG, при этом критериями отбора были абсолютное нормированное значение обогащения (|NES|) > 1 и частота ложных открытий (FDR) < 0,25.

Анализ иммунной инфильтрации
Для анализа транскриптомных данных когорты TCGA-CESC использовались вычислительные инструменты TIMER 2.0 и xCell, что позволило количественно оценить статус инфильтрации 24 различных популяций иммунных клеток.

Прогнозирование чувствительности к препаратам
Прогнозы чувствительности к препаратам были получены из базы данных GDSC2 с использованием пакета oncoPredict для языка R. Полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC50) была рассчитана для панели из 86 химиотерапевтических соединений.

Анализ выживаемости и диагностический анализ
Кривые общей выживаемости (OS) и выживаемости без прогрессирования (PFI) были построены с использованием аналитической платформы Xiantao, при этом когорты пациентов были разделены на две группы по медианному уровню экспрессии WAPL. Прогностическая значимость переменных оценивалась с помощью моделей одномерного и многофакторного регрессионного анализа пропорциональных рисков Кокса. Для оценки диагностической способности WAPL и SCC (SERPINB3) в дифференциации CSCC от прилежащей нормальной ткани к транскриптомным данным, выраженным в количестве транскриптов на миллион (TPM) и полученным из базы The Cancer Genome Atlas, был применен анализ кривых рабочих характеристик приемника (ROC-анализ).

Сбор образцов сыворотки и проведение ИФА
Данное исследование было одобрено Институциональным наблюдательным советом провинциальной народной больницы провинции Шэньси (номер одобрения 2024-R055) и проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией. В общей сложности было получено 89 образцов сыворотки от пациенток с гистопатологически подтвержденным плоскоклеточным раком шейки матки (CSCC), а также 89 образцов от здоровых женщин контрольной группы, сопоставимых по возрасту. Медиана возраста в когорте CSCC составила 54 года (диапазон 31–77 лет), а в контрольной когорте — 41 год (диапазон 30–52 лет). Все случаи рака шейки матки были впервые диагностированы; на момент забора крови пациентки не получали лечения; образцы были получены до начала любого хирургического, химиотерапевтического или лучевого лечения. Следует отметить, что, хотя обе группы были сформированы в схожих клинических условиях, медианный возраст различался на 13 лет. Это различие непосредственно рассматривается в разделе «Результаты» и в отдельном анализе чувствительности с поправкой на возраст, а также признается в качестве ограничения в разделе «Обсуждение».

Венозную кровь собирали в пробирки без антикоагулянта, оставляли для свертывания при комнатной температуре на 10–20 min, после чего центрифугировали при 2,000–3,000 × g в течение 20 min. Сыворотку отделяли в течение 1 h после забора, немедленно разделяли на аликвоты и хранили при −20 °C; интервал между венепункцией и замораживанием для всех образцов не превышал 2 h. Перед анализом аликвоты подвергались одному циклу замораживания-оттаивания, и все измерения были завершены в течение трех месяцев хранения. Полученную сыворотку разделяли на аликвоты и хранили при −20 °C. Любые гемолизированные или липемические образцы исключали из анализа.

Количественное определение уровней белка hWAPL в сыворотке крови проводили с помощью коммерчески доступного набора для иммуноферментного анализа (ИФА), основанного на принципе двойного антитела («сэндвич»-метод). Вкратце, калибровочные стандарты и исследуемые образцы вносили в двух повторах в лунки микропланшета, предварительно покрытые захватывающим антителом к hWAPL, с последующей инкубацией в течение 30 min при 37 °C. После серии этапов промывки для удаления несвязавшегося материала добавляли детектирующее антитело к hWAPL, меченное пероксидазой хрена (HRP), и инкубировали при аналогичных условиях.

После повторной промывки в лунки добавляли по 50 µL растворов А и В хромогенного субстрата, которые инкубировали в темноте при 37 °C в течение 10 мин. Для остановки ферментативной реакции добавляли стоп-реагент (50 µL). Оптическую плотность измеряли при основной длине волны 450 nm с референтным чтением при 630 nm в течение 15 мин после остановки реакции. Стандартную кривую строили с использованием калибраторов с серийным разведением в диапазоне концентраций 10–450 pg/mL. Концентрацию hWAPL для каждого неизвестного образца определяли путем интерполяции по этой стандартной кривой с учетом любого преаналитического разведения. Анализ проводили строго в соответствии с инструкциями производителя. Согласно спецификациям производителя, рабочий диапазон детекции набора составляет 10–450 pg/mL. Образцы анализировали при окончательном 5-кратном разведении; образцы, оптическая плотность которых превышала плотность самого высокого калибратора, подвергали дополнительному разведению и повторному анализу с применением общего коэффициента разведения при обратном расчете. Аналитические характеристики были подтверждены в матрице сыворотки перед анализом исследуемых образцов: серийно разведенный пул сыворотки с высокой концентрацией продемонстрировал приемлемую линейность во всем калибровочном диапазоне, а степень извлечения рекомбинантного калибратора (spike recovery) в трех пулах сыворотки находилась в пределах допустимого окна, что соответствует принципу «сэндвич» с использованием двух антител. Нижний предел количественного определения соответствовал самому низкому калибратору (10 pg/mL). Подчеркиваем, что данный набор маркирован производителем как предназначенный только для исследовательских целей и не является клинически валидированным устройством для диагностики in vitro; следовательно, абсолютные концентрации и полученное пороговое значение следует интерпретировать как специфичные для данной платформы и предварительные, как обсуждается ниже.

Одновременно с этим определяли уровни SCC-Ag в сыворотке крови с использованием платформы Abbott Alinity i методом хемилюминесцентного микрочастичного иммуноанализа (CMIA) с верхним пределом нормы 1.5 ng/mL. Все аналитические процедуры проводились в дубликатах сотрудниками лаборатории, которые были ослеплены в отношении статуса заболевания и всех клинических переменных, включая клиническую стадию, гистологическую степень злокачественности и статус HPV. Коэффициенты вариации как между сериями, так и внутри одной серии анализов для применяемых методик поддерживались на уровне ниже 10%.

Статистический анализ
Поскольку концентрации hWAPL в сыворотке крови не соответствовали критерию нормальности согласно тесту Шапиро–Уилка (все P < 0.05), последующий анализ проводили с использованием непараметрических методов. Таким образом, непрерывные переменные представлены в виде медиан с межквартильным размахом (IQR). Различия между двумя независимыми группами оценивали с помощью U-критерия Манна–Уитни, тогда как сравнение трех и более групп проводили с помощью H-критерия Краскела–Уоллиса. Корреляции между переменными оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена для непрерывных или порядковых данных и точечно-бисериального коэффициента корреляции для бинарных переменных, таких как статус инфекции HPV. Показатели выживаемости сравнивали с помощью лог-рангового критерия, а отношения рисков с 95% доверительными интервалами рассчитывали на основе регрессионных моделей пропорциональных рисков Кокса.

Диагностическая эффективность оценивалась с помощью анализа ROC-кривых, при этом оптимальный порог отсечки для каждого биомаркера определялся путем максимизации индекса Юдена. Различия в площади под кривой (AUC) проверялись с использованием метода DeLong. Для изучения комбинированной диагностической значимости была построена модель бинарной логистической регрессии, где зависимой переменной выступал статус заболевания (CSCC = 1; контроль = 0), а независимыми предикторами — сывороточные hWAPL и антиген SCC. Полученные прогнозируемые вероятности были сохранены в виде комбинированного показателя для последующего ROC-анализа.

Различия в чувствительности к препаратам между группами с высоким и низким уровнем WAPL оценивали с помощью пакета limma, применяя пороговые значения скорректированного P < 0.05 и |log₂ fold change| > 0.3. Статистическая значимость определялась как двустороннее значение P < 0.05. Все анализы проводились с использованием SPSS, R или указанных онлайн-инструментов. Использовались следующие пакеты R: survival, survminer, pROC, ggplot2, oncoPredict и limma. Для всех многомерных анализов, в которых одновременно проверялось множество гипотез, а именно: для панракового сравнения, скрининга коэкспрессии, анализа дифференциальной экспрессии и функционального обогащения, а также анализа чувствительности к препаратам, значения P были скорректированы для множественных сравнений с использованием метода контроля ложноположительных результатов Бенджамини–Хохберга; там, где это применимо, приводятся скорректированные значения P. Попарные корреляции между hWAPL и отдельными генами или фракциями иммунных клеток представлены с номинальными значениями P, и эти корреляционные результаты рассматриваются как генерирующие гипотезы, а не подтверждающие их. Поскольку небольшое количество клинико-патологических полей в общедоступной когорте были заполнены не полностью, случаи с отсутствующими данными исключались из соответствующего анализа попарно, а не импутировались; количество оцениваемых случаев для каждой переменной приведено в Таблице 1. Чтобы учесть разницу в возрасте между когортами сыворотки, был проведен анализ чувствительности с использованием бинарной логистической регрессии с поправкой на возраст, а также рассчитана корреляция Спирмена между уровнем hWAPL в сыворотке и возрастом внутри каждой группы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Широкая повышающая регуляция hWAPL при различных злокачественных новообразованиях человека, особенно в тканях рака шейки матки
Панрак-анализ наборов данных TCGA показал, что WAPL демонстрирует значительно повышенную экспрессию в большинстве солидных опухолей по сравнению с соответствующими нормальными тканями (Рисунок 1A). Примечательно, что hWAPL был значительно сверхэкспрессирован при плоскоклеточном раке шейки матки и эндоцервикальной аденок...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Наш панраковый анализ данных TCGA показал, что экспрессия WAPL заметно повышена в большинстве солидных опухолей по сравнению с нормальными тканями, при этом наиболее выраженная повышающая регуляция наблюдалась при CESC. Это наблюдение согласуется с предыдущими данными о том, что мРНК hWAPL экспрессируется преимущественно при раке шейки матки, при минимальной экспрессии в других нормальных и злокачественных тканях7. Oikawa и соавт. первоначально охарактеризовали hWAPL как...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы выражают благодарность всем участникам и медицинскому персоналу, принявшим участие в данном исследовании. Эта работа была поддержана Программой фундаментальных исследований в области естественных наук провинции Шэньси (грант № 2021JM-552).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Abbott GmbH, Висбаден, ГерманияПожалуйста, предоставьте исходный текст для перевода.Используется для детекции SCC-Ag
Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd., Шэньчжэнь, КитайМодель RT-3100Используется для промывки планшета
Шанхайский завод научных приборов «Антин» (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory), Шанхай, КитайНизкоскоростная центрифуга модели TLXY-IICИспользуется для центрифугирования образцов сыворотки
Консорциум CytoscapeВерсия 3.9.1Используется для визуализации сетей; визуализация сетей
Национальный институт ракаhttps://portal.gdc.cancer.gov; доступ в октябре 2025 г.Используется для извлечения данных TPM из базы данных TCGA-CSCC, выровненных с помощью STAR; RRID:SCR_014514
Онлайн-платформа/база данныхНе применимоИспользуется для прогнозирования чувствительности к лекарственным препаратам; эталонные данные о чувствительности к лекарственным препаратам
Национальный центр биотехнологической информацииGPL24676 Illumina NovaSeq 6000 (Homo sapiens)Используется для извлечения наборов данных секвенирования РНК единичных клеток; набор данных scRNA-seq
Онлайн-платформаНеприменимоИспользуется для анализа экспрессии генов и изоформ транскриптов; анализ экспрессии и изоформ транскриптов
пакет RВерсия 3.4.4Используется для визуализации данных
Онлайн-платформа/база данныхНеприменимоИспользуется для анализа экспрессии белков и их субклеточной локализации; экспрессия и локализация белков
Shanghai Fusheng Biotechnology Co., Ltd.A977261-96TA977261-96T; двухэтапный сэндвич-ЭЛИФА; диапазон определений 10–450 пг/мл; только для исследовательских целей (www.affandi-e.com)
пакет RВерсия 3.54.0Используется для дифференциального анализа
Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd., Шэньчжэнь, КитайМодель RT-6100Используется для измерения оптической плотности
пакет RВерсия 0.2Используется для определения чувствительности к препаратам (IC50) прогнозирование; RRID:SCR_023220
Онлайн-платформа/база данныхНеприменимоИспользуется для анализа посттрансляционных модификаций; анализ сайтов посттрансляционных модификаций
пакет RВерсия 1.18.0Используется для анализа ROC-кривых
R Foundation for Statistical ComputingВерсия 4.2.1Используется для статистического и биоинформатического анализа; статистический и биоинформатический анализ
Abbott GmbH, Висбаден, ГерманияREF 09P3374Используется для количественного определения SCC-Ag в сыворотке крови
Онлайн-платформаНеприменимоИспользуется для анализа секвенирования РНК единичных клеток
Sanli Medical Technology Development Co., Ltd., Люян, Хунань, КитайПоскольку исходный текст не был предоставлен, пожалуйста, отправьте текст, который необходимо перевести. Я готов приступить к профессиональному переводу вашего научно-образовательного контента JoVE на русский язык, строго соблюдая все указанные инструкции по терминологии, стилю и точности.Используется для забора венозной крови
IBM Corp.Версия 26.0Используется для статистического анализа; статистический анализ
Консорциум STRINGВерсия 11.5Используется для анализа сетей белок-белковых взаимодействий; сети белок-белковых взаимодействий
пакет RВерсия 3.4Используется для анализа выживаемости
пакет RВерсия 0.4.9Используется для визуализации кривых выживаемости
Национальный институт ракаhttps://www.cancer.gov/tcga; accessed в октябре 2025 г.RRID:SCR_003193; транскриптомные данные рака
Онлайн-платформаhttp://timer.cistrome.org; дата обращения: октябрь 2025 г.RRID:SCR_018737; анализ иммунной инфильтрации
Браузер UCSC Xenahttps://xenabrowser.net; дата обращения: октябрь 2025 г.Используется для извлечения данных TCGA; извлечение данных TCGA
Онлайн-платформа/инструментВерсия 1.0Используется для оценки инфильтрации иммунных клеток
Онлайн-платформаhttps://www.xiantaoxueshu.com; доступ по состоянию на октябрь 2025 г.Используется для дифференциального анализа экспрессии, корреляционного анализа, анализа выживаемости и диагностического анализа

Ссылки

  1. Bray F, et al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2024;74(3):229-63.
  2. Sung H, et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-49.
  3. Gadducci A, Tana R, Cosio S, Genazzani AR. The serum assay of tumour markers in the prognostic evaluation, treatment monitoring, and follow-up of patients with cervical cancer: a review of the literature. Crit Rev Oncol Hematol. 2008;66(1):10-20.
  4. Liu Z, Shi H. Prognostic role of squamous cell carcinoma antigen in cervical cancer: a meta-analysis. Dis Markers. 2019;2019:6710352.
  5. Tony V, et al. Role of squamous cell carcinoma antigen in prognostication, monitoring of treatment response, and surveillance of locally advanced cervical carcinoma. J Cancer Res Ther. 2023;19(5):1236-40.
  6. Sekhar PS, et al. A bird's-eye view of the wings apart-like protein in cell biology and implications for disease and therapeutics. OMICS. 2025;29(10):476-85.
  7. Oikawa K, et al. Expression of a novel human gene, human wings apart-like (hWAPL), is associated with cervical carcinogenesis and tumor progression. Cancer Res. 2004;64(10):3545-9.
  8. Kuroda M, et al. The human papillomavirus E6 and E7 inducible oncogene, hWAPL, exhibits potential as a therapeutic target. Br J Cancer. 2005;92(2):290-3.
  9. Lu X, Cui J, Fu M, Wang W. Human wings apart-like gene is specifically overexpressed in cervical cancer. Oncol Lett. 2016;12(1):171-6.
  10. Ohbayashi T, et al. Unscheduled overexpression of human WAPL promotes chromosomal instability. Biochem Biophys Res Commun. 2007;356(3):699-704.
  11. Oikawa K, et al. Expression of various types of alternatively spliced WAPL transcripts in human cervical epithelia. Gene. 2008;423(1):57-62.
  12. Gong P, et al. TAT-mediated si-hWAPL inhibits the invasion and metastasis of cervical cancer stem cells. Exp Ther Med. 2017;14(6):5452-8.
  13. Zhao Y, et al. Expression and clinical significance of FANCI gene in pan-cancer: a comprehensive analysis based on multi-omics data. Front Genet. 2025;16:1542888.
  14. Guo Q, et al. Integrated pan-cancer analysis and experimental verification of the roles of tropomyosin 4 in gastric cancer. Front Immunol. 2023;14:1148056.
  15. Zhao JW, et al. The role of the mitochondrial ribosomal protein family in detecting hepatocellular carcinoma and predicting prognosis, immune features, and drug sensitivity. Clin Transl Oncol. 2024;26(2):496-514.
  16. Chen N, Luan Y. Specific expression and common potential therapeutic drugs in different brain regions of major depressive disorder patients: bioinformatics analysis. J Affect Disord. 2025;382:478-87.
  17. Shi H, et al. Identification of hub genes for psoriasis and thyroid cancer using bioinformatics analysis. Discov Oncol. 2025;16(1):1460.
  18. Kumagai K, et al. WAPL induces cervical intraepithelial neoplasia modulated with estrogen signaling without HPV E6/E7. Oncogene. 2021;40(21):3695-706.
  19. Haarhuis JHI, et al. WAPL-mediated removal of cohesin protects against segregation errors and aneuploidy. Curr Biol. 2013;23(20):2071-7.
  20. Nunobiki O, Sano D, Hata S, Okunugi N. Clinical significance of hWAPL polymorphisms in the risk of cervical carcinogenesis. Hum Cell. 2018;31(2):149-53.
  21. Benedict B, et al. WAPL-dependent repair of damaged DNA replication forks underlies oncogene-induced loss of sister chromatid cohesion. Dev Cell. 2020;52(6):683-98.e7.
  22. van Schie JJM, de Lange J. The interplay of cohesin and the replisome at processive and stressed DNA replication forks. Cells. 2021;10(12):3455.
  23. Hirai H, et al. Small-molecule inhibition of Wee1 kinase by MK-1775 selectively sensitizes p53-deficient tumor cells to DNA-damaging agents. Mol Cancer Ther. 2009;8(11):2992-3000.
  24. Hirai H, et al. MK-1775, a small molecule Wee1 inhibitor, enhances anti-tumor efficacy of various DNA-damaging agents, including 5-fluorouracil. Cancer Biol Ther. 2010;9(7):514-22.
  25. Bridges KA, et al. MK-1775, a novel Wee1 kinase inhibitor, radiosensitizes p53-defective human tumor cells. Clin Cancer Res. 2011;17(17):5638-48.
  26. Swiecki M, Colonna M. The multifaceted biology of plasmacytoid dendritic cells. Nat Rev Immunol. 2015;15(8):471-85.
  27. Reizis B. Plasmacytoid dendritic cells: development, regulation, and function. Immunity. 2019;50(1):37-50.
  28. Del Prete A, et al. Dendritic cell subsets in cancer immunity and tumor antigen sensing. Cell Mol Immunol. 2023;20(5):432-47.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Сывороточный биомаркербелок hWAPLиммунная инфильтрациясети коэкспрессиичувствительность к лекарственным препаратамплоскоклеточный ракрабочая характеристика приемника
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.