Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Лювэй Дихуан Вань подавляет остеокластогенез и потерю костной ткани, вызванную овариэктомией, подавляя сигнализацию NF-κB

115 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/72270

⸱

28 июля 2026 г.

 ,  ,  ,  , 
1School of Medicine, Nankai University, 2School of Basic Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 3Emergency Medical Center, Ningbo Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, 4The Second People's Hospital of Changzhou, the Third Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Это исследование показало, что Лювэй Дихуан Вань (LWDHW) подавляет дифференцировку остеокластов и потерю костной ткани, вызванную овариэктомией, ингибируя сигнальный путь NF-κB, что было выявлено с помощью анализа LC-MS/MS, сетевой фармакологии, а также валидации in vivo и in vitro.

Аннотация

Лювэй Дихуан Вань (LWDHW), классическая формула традиционной китайской медицины, широко используется для лечения различных заболеваний, связанных с почечной недостаточностью, и показала удовлетворительную клиническую эффективность при постменопаузальном остеопорозе (PMOP). Однако его фармакологические механизмы остаются неясными. Для решения этой проблемы мы сначала проанализировали химические компоненты LWDHW с помощью LC-MS/MS, который выявил 1615 компонентов. Сетевая фармакология затем предсказала, что воспаление и сигнальный путь NF-κB являются потенциальными терапевтическими механизмами, лежащими в основе эффекта LWDHW на PMOP. Впоследствии 27 самок мышей C57BL/6J были случайным образом распределены в группы Sham, Model и LWDHW. Мыши из последних двух групп проходили двустороннюю овариэктомию (OVX), а мыши в группе LWDHW получали пероральную LWDHW в 9,75 г/кг/день в течение 8 недель. Были собраны образцы сыворотки и бедренной кости для ферментно-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA), микрокомпьютерной томографии (μКТ), гистологического исследования и иммуногистохимии (IHC). Макрофаги, полученные из первичного костного мозга (BMM), были обработаны LWDHW и затем подвергнуты TRAP-окрашиванию и qRT-PCR. У мышей OVX LWDHW значительно облегчил потерю костной ткани и ухудшение микроархитектуры костей, сопровождаясь снижением уровня β-CTX в сыворотке и уменьшением количества остеокластов в тканях бедрен. IHC окрашивание показало заметно низкую экспрессию TNF-α, IL-1β и p-P65 в бедренных тканях мышей, обработанных LWDHW, по сравнению с модельной группой. In vitro окрашивание TRAP показало, что LWDHW ингибирует дифференцировку остеокластов, вызванную RANKL/M-CSF, и снижает экспрессию Ctsk, MMP9 и Nfatc1. Анализ Western Blot также показал, что уровни белков P65, p-P65, IκBα и p-IκBα значительно снизились в BMM после лечения LWDHW. В совокупности LWDHW облегчает постменопаузальный остеопороз, возможно, подавляя NF-κB сигнальный остеокластогенез.

Введение

Постменопаузальный остеопороз (PMOP) — это распространённое метаболическое заболевание костей, характеризующееся потерей костной массы и ухудшением микроархитектурыкостей. С ростом старения населения растущая заболеваемость PMOP стала глобальной проблемой общественного здравоохранения, серьёзно угрожая здоровью женщин впостменопаузе 2. В Китае общая распространённость PMOP достигает 32,1%. Поражённые люди более подвержены серьёзным осложнениям, таким как хроническая боль в спине, деформации позвоночника и хрупкиепереломы 4,5. В настоящее время одобренные FDA препараты для лечения остеопороза включают бисфосфонаты6, паратиреоидныйгормон67 и деносумаб8, которые широко используются в клинической практике. Однако их долгосрочное применение часто ограничено различными побочнымиэффектами 9. Поэтому существует острая необходимость разработать более безопасные и эффективные терапевтические средства для PMOP. Среди возможных альтернатив китайские травяные препараты привлекают всё больше внимания благодаря своей признанной эффективности и благоприятному профилю безопасности10.

Лювэй Дихуан Вань (LWDHW) — это классическая формула традиционной китайской медицины (ТКМ), впервые задокументированная в древнем тексте «Ключ к терапии детских болезней во времена династии Сун». На протяжении тысячелетий LWDHW широко используется в клинической практике для лечения различных заболеваний, связанных с почечнойнедостаточностью 11,12,13,14. Согласно теории ТКМ о «почечных управляющих костях», потеря костной массы и разрушение костной ткани у пациентов с PMOP в основном вызваны недостаточным питанием эссенциейпочки 15. В результате LWDHW широко применяется в клиническом лечении PMOP и продемонстрировал определённую терапевтическуюэффективность 16,17. Однако, несмотря на то, что исследования на животных и клинические исследования показали, что LWDHW оказывает различные фармакологические эффекты, включаяантиоксиданты 18,противовоспалительные 19 и противофибрознуюактивность 14, его основной механизм против PMOP остаётся в значительной степени неизвестным.

Гомеостаз костей основан на балансе между резорбцией кости остеокластами и образованием костей остеобластами20. Этот баланс нарушается из-за усиления дифференцировки остеокластов и активности при воспалительных условиях, что приводит к ускоренной резорбциикостей 21. В этом процессе путь NF-κB служит основным регулятором. Воспалительные факторы, такие как TNF-α и IL-1β, могут вызывать фосфорилирование и деградацию IκBα, вызывая ядерную транслокацию фосфорилированного p65 (p-P65)22. В результате активируются гены, специфические для остеокластов ниже по потоку, включая Ctsk, Mmp9 и Nfatc1, для стимулирования остеокластогенеза23,24.

Сетевая фармакология — это междисциплинарная область, объединяющая информатику, фармакологию ибиоинформатику. Она обладает явными преимуществами в всестороннем исследовании фармакологических механизмов, лежащих в основе терапевтического эффекта китайскихтрав 26. В настоящем исследовании была использована сетевая фармакология для прогнозирования потенциальных биологических процессов и сигнальных путей, участвующих в антиостеопоротическом эффекте LWDHW. Одновременно химические компоненты LWDHW анализировались с помощью LC-MS/MS. Кроме того, была проведена валидация in vivo с использованием модели мышей OVX и эксперименты in vitro с макрофагами, полученными из первичного костного мозга (BMM), для дальнейшего изучения фармакологического механизма LWDHW против PMOP. Рабочий процесс представлен на рисунке 1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике животных Китайского медицинского университета Чжэцзяна (IACUC-202402-07).

Подготовка и анализ LC-MS/MS LWDHW

Формула LWDHW состоит из шести китайских трав: Rehmannia glutinosa (Gaertn.), Cornus officinalis (Sieb.), Paeonia suffruticosa (Andr.), Dioscoreae напротив (Thunb), Poria cocos (Schw.) и Alisma orientale (Sam.). Подробная информация об этих травах приведена в таблице 1. Все сырые травы поставлялись в Первой аффилированной больнице Чжэцзянского китайского медицинского университета (Ханчжоу, Китай) и варили в очищенной воде с соотношением трав к воде 0,1 кг/л. Полученный водный экстракт фильтровали и концентрировали в рабочем растворе с концентрацией 0,5 г/мл для последующих анализа LC-MS/MS и экспериментов на животных. Кроме того, рабочий раствор был обработан в сублимированный порошок для экспериментов с клетками.

В анализе LC-MS/MS условия жидкой хроматографии были следующими: мобильная фаза A (водная) и подвижная фаза B (органическая) состояли из 0,1% муравьиной кислоты в воде и ацетонитрила соответственно для положительного ионного режима, или 5 мМ аммония формиата в воде и ацетонитрила в отрицательном ионном режиме. Общее время работы составляло 8 мин, расход 0,3 мл/мин, температура столба 40 °C и объём впрыска 2 мкл. Для масс-спектрометрии данные собирались в полном режиме MS-ddMS2 с напряжениями распыления на уровне +3,50 кВ (положительно) и –2,50 кВ (отрицательно).

Биоактивные компоненты и прогнозирование целей LWDHW

Индивидуальные названия шести составляющих трав были внесены в базу данных фармакологии традиционной китайской медицины (TCMSP) для получения полного списка ингредиентов для LWDHW. Биоактивные ингредиенты были впоследствии проверены с использованием фармакокинетических параметров: пероральная биодоступность (OB) ≥ 30% и похожие на лекарства (DL) ≥ 0,18 27,28,29,30. Соответствующие белки биоактивных компонентов были идентифицированы и отправлены в UniProt для получения их стандартизированных названий генов, которые были определены как конечные генные мишени LWDHW.

Перекрывающиеся цели между LWDHW и PMOP

Генные мишени, связанные с PMOP, были получены путём поиска по ключевому слову «постменопаузальный остеопороз» в базах данных GeneCards и DisGeNET 2 октября 2024 года. Мишени фильтровались по порогам баллов >0,1 в DisGeNET и >10 в GeneCards, а дублирующиеся записи удалялись для получения неизбыточного набора генов, связанных с PMOP. Впоследствии мишени LWDHW и связанные с PMOP мишени импортировались в онлайн-инструмент Venny для создания диаграммы Венна, показывающей перекрывающиеся цели между LWDHW и PMOP.

Генная онтология (GO) и анализ обогащения сигнальных путей

Перекрывающиеся цели между LWDHW и PMOP подвергались анализу обогащения GO с использованием базы данных DAVID. Полученные термины ГО были классифицированы на три категории: клеточный компонент, молекулярная функция и биологический процесс (BP). После фильтрации FDR < 0,01 топ-30 терминов BP были переведены в пузырьковой диаграмме в убывающем порядке обогащения по фолдингу.

Далее перекрывающиеся цели были внесены в базы данных Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) и Metascape для анализа обогащения сигнальных путей. Обогащённые пути из баз данных KEGG и Metascape ранжировались по количеству соответствующих целей в порядке убывания, а 25 лучших путей из каждой базы данных отображались в виде столбчатых диаграмм.

Строительство сети

Сети «Формула-Травы-Ингредиенты-Мишени-Болезни» и «Мишени-Пути» были созданы в Cytoscape для визуализации взаимосвязей между компонентами. Сеть взаимодействия белков и белков (PPI) была создана путём ввода перекрывающихся целей в базу данных STRING. Целевые хабы внутри сети определялись методом скрининга на основе топологических признаков, включая центральность степени (DC), центральность промежуточности (BC) и центральность близости (CC).

Группирование животных, модель остеопороза, индуцированного OVX, и медикаментозное вмешательство

Всего 27 самок мышей C57BL/6J (2 месяца, весом 22 ± 2 г) были предоставлены Центром экспериментов на животных Китайского медицинского университета Чжэцзяна (Ханчжоу, Чжэцзян). Все животные содержались в определённых условиях, свободных от патогенов (SPF), с 12-часовым циклом света/темноты, поддержанной температурой окружающей среды 25 °C и влажностью от 40% до 60%, с свободным доступом к корму и воде. После недели адаптивного кормления мышей случайным образом распределили на три группы (n = 9 на группу) с использованием таблицы случайных чисел: Sham, Model и LWDHW. Мыши в группах Model и LWDHW прошли двустороннюю овариэктомию (OVX) для установления модели PMOP, в то время как группа Sham прошла фиктивную процедуру с удалением эквивалентного объёма жировой ткани перияичников. Начиная с двух дней после операции, мыши группы LWDHW получали ежедневную внутреннюю гагавизацию рабочего раствора LWDHW в дозе 9,75 г/кг в день (с учетом человеческой эквивалентной дозы с учётом площади поверхности тела), тогда как группы Model и Sham получали одинаковый объём физиологического раствора. Биологические образцы, включая сывороточные и бедренные ткани, были собраны через 8 недель после введения для последующего анализа. В течение экспериментального периода в группах не произошло неожиданной смерти или смерти.

Сывороточный ферментно-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA)

Цельная кровь была собрана из ретроорбитального сплетения и центрифугана при 1000 x g в течение 15 минут при 4 °C для получения сыворотки. Концентрации остеокальцина (OCN) и β-C-терминального телопептида коллагена типа I (β-CTX) в сыворотке измерялись с помощью соответствующих комплектов ELISA согласно протоколам производителя.

μCT и биомеханический анализ

Образцы бедренной кости были сканированы с помощью высокоразрешающей микрокомпьютерной томографии (μCT) с изотропным разрешением 10 мкм. Трёхмерная (3D) микроструктура дистальной бедренной кости была восстановлена на основе полученных изображений с помощью программного обеспечения NRecon. Впоследствии были количественно оценены следующие параметры микроархитектуры кости, включая плотность минералов кости (BMD, г/мм 3), долю объёма кости (BV/TV, %), толщину трабекуляров (Tb.Th, мм) и трабекулярное число (Tb.N, 1/мм), в интересующей области (ROI) дистальной бедренной кости.

Биомеханические свойства образцов бедренной кости (n = 3 на группу) оценивались с помощью трёхточечного теста на изгиб с использованием системы осевой кручения усталости. На средний диафиз прикладывалась сжимающая нагрузка с постоянной скоростью смещения 2 мм/мин до возникновения конструктивного разрушения. Максимальная нагрузка (N) автоматически фиксировалась программным обеспечением системы.

Гистоморфология, иммуногистохимия (IHC) и иммунофлуоресцентное (IF) окрашивание

После фиксации 4% параформальдегида, декальцификации в растворе 14% ЭДТА и обезвоживания через серию градуированного этанола, образцы бедренной кости были обработаны в парафинные срезы толщиной 3 мкм, как описаноранее 31. Срезы были окрашены гематоксилином Alcian Blue (ABH)/Orange G для морфологической оценки. Количественный анализ области трабекулярной кости в дистальной бедренной метафизе был проведён с помощью программного обеспечения OsteoMetrics.

Образцы печени и почек фиксировались, помещались в парафин и разрезали на срезы размером 4 мкм. После плановой депарафинизации и регидратации срезы были окрашены гематоксилином и эозином. Гистологическое исследование проводилось под световым микроскопом.

Анализы IHC и IF проводились на срезах, вложенных в парафин, согласно установленным процедурам. Кратко, извлечение антигена проводилось путём инкубации сечений в буфере цитратов 0,01 м при 60 °C в течение 4 часов. Затем секции инкубировали ночью при 4 °C с первичными антителами, включая ALP (1:300), IL-1β (1:500), TNF-α (1:500) и p-P65 (1:300). После инкубации с соответствующими вторичными антителами в течение 20 минут секции подвергались раствору диаминобензидина (DAB) и гематоксилиновой контрокрашиванию для IHC или окрашены DAPI для ядерной маркировки в IF. Для количественной оценки положительного окрашивания из каждого из трёх срезов ткани были взяты четыре случайно выбранных поля. В окрашивании IHC средняя оптическая плотность определялась как отношение интегрированной оптической плотности (IOD) к соответствующей площади полости, определяемое с помощью программного обеспечения Image-Pro Plus. При IF окрашивании область положительного окрашивания нормализовалась относительно поля и выражалась в процентах, а количественная оценка проводилась с помощью того же программного обеспечения.

Культура первичных макрофагов костного мозга (BMM) и анализ подсчёта клеток

Клетки костного мозга были выведены из бедренных и большеберцовых мышей 2-месячных мышей C57BL/6 с помощью фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS). Полученная суспензия ячейки фильтровалась через сито диаметром 70 мкм и центрифугирована при 200 x g в течение 5 минут. Клеточная гранула была вновь суспендирована в α-MEM полную среду, содержащую 10% сыворотку плода бычьего скота. После 24 часов инкубации при 37 °C в атмосфере с содержанием 5% CO₂ клетки были удалены. Для индуцирования дифференцировки макрофагов клеточные клетки культивировали в среде с макрофагами, стимулирующими колониостимулирующий фактор 50 нг/мл (M-CSF) и 40 нг/мл РАНКЛ в течение 5–7 дней, пока не были обнаружены зрелые BMM.

BMM были покрыты на 3 x 104 ячейках на колодцу в пластинах с 96 колодцами. После 24 часов обработки градиентными концентрациями LWDHW BMM инкубировали с рабочим раствором 10% Cell Counting Kit-8 (CCK-8) при 37 °C в течение 1 часа. Поглощение каждой ямы измерялось на 450 нм с помощью считывателя микропластин.

Количественный анализ экспрессии генов на первичных BMM

BMM сеяли в тарелки размером 6 см с плотностью 3 x 106 ячеек на тарелку. После обработки 500 и 1 000 мкг/мл LWDHW в течение 24 часов полная РНК была извлечена из BMM с помощью комплекта RNA-Quick Purification Kit согласно инструкциям производителя. После количественной оценки с помощью спектрофотометрии 500 нг общей РНК было обратно транскрибовано в кДНК. Количественная ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) проводилась с использованием геноспецифических праймеров (Таблица 2), а условия цикла ПЦР были следующими: начальная денатурация при 95 °C в течение 30 с, затем 40 циклов при 95 °C в течение 5 с и 60 °C в течение 30 с. Уровни экспрессии генов анализировались методом 2ΔΔCt , при этом GAPDH был внутренним эталонным геном.

Вестерн-блот-анализ на первичных BMM

После того как BMM были выкладены в размере 3 x 106 клеток в тарелке размером 6 см, BMM лечили различными вмешательствами, а затем лизировали на льду с буфером RIPA для лизисирования. Общий белок был собран и количественно измерен с помощью BCA Protein Assay Kit. Образцы белка (30 мкг на полосу) были разделены SDS-PAGE на гелях с 12,5% полиакриламидом и перенесены на мембраны PVDF размером 0,2 мкм. После блокировки в течение 20 минут мембраны инкубировали ночью при 4 °C с помощью следующих основных антител: P65 (1:1000), p-P65 (1:1000), IκBα (1:1000), p-IκBα (1:1000) и β-актин (1:1000). На следующий день мембраны инкубировали с вторичным антителом в течение 1 часа при комнатной температуре. Белковые полосы визуализировались с помощью ECL Chemiluminescence Detection Kit и фиксировались с помощью Автоматической системы анализа изображений хемилюминесценции.

TRAP-окрашивание тканей бедра и BMM

Срезы ткани бедренной кости и BMM, покрытые пластинами с 24 лунками с размером 1 x10 5 клеток на яму, были окрашены с помощью набора окрашивания с кислотной фосфатазой (TARTRATE-резистентностью) (TRAP) согласно протоколу производителя. Покрытая остеокластами поверхность трабекулярной кости (Oc.S/BS) в срезах тканей и область образования остеокластов в культурах BMM были количественно измерены с помощью программного обеспечения Image-Pro Plus.

Статистический анализ

Все данные были представлены как среднее ± стандартное отклонение. Для статистического анализа в SPSS использовался односторонний ANOVA, за которым следовал тест Даннетта. *p < 0,05 и **p < 0,01 считались статистически значимыми.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Химические компоненты LWDHW, проанализированные LC-MS/MS

Химический профиль водного раствора LWDHW был охарактеризован с помощью анализа LC-MS/MS. Всего было идентифицировано 1615 компонентов, из которых 968 обнаружены в режиме положительной ионизации и 647 в режиме отрицательной ионизации (рисунок 2A). Подробности о 10 основных компонентах каждого режима ионизации приведены на

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

С изменением глобального населения PMOP стал серьёзной проблемой для здравоохранения во всём мире, затрагивая миллионы женщинежегодно 36 лет. Учитывая побочные эффекты, связанные с современными противоостеопоротическими препаратами, крайне важно разрабатывать более безопасные и эффективные терапевтические стратегии. LWDHW — это классическая формула тонизирующей почки в ТКМ и служит альтернативной медициной для лечения различных заболеванийкостей ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Все авторы не заявляют о конкурирующих финансовых или нефинансовых интересах.

Благодарности

Эта работа была поддержана Фондом естественных наук провинции Чжэцзян (ZCLQN25H2701).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
0.01 M буфер цитратSolarbioC1010Для обращения антигена секций бедренной кости для IHC и IF окрашивания на шаге 10 протокола
0.2 µm PVDF мембраныBioRad1620177Для электропереноса белков из SDS-PAGE на мембрану на шаге 13 протокола
12.5% полиакриламидные гелиEpizyme BiotechPG113Для разделения белков в SDS-PAGE на шаге 13 протокола
Антитela к ALPARIGOARG57422Для IHC обнаружения в секциях бедренной кости на шаге 10 протокола
Автоматическая система анализа хемилюминесцентных изображенийTanon5200Для визуализации полос Western blot на шаге 13 протокола
Система испытаний на износ от осевых крутящих нагрузокInstronмодель 5569R1412Для биомеханических испытаний образцов бедренной кости на шаге 9 протокола
Набор для определения количества белка BCABeyotimeP0010SДля количественного определения белка перед Western blot на шаге 13 протокола
CCK-8BeyotimeC0039Для измерения жизнеспособности клеток BMMs на шаге 11 протокола
CytoscapeНе применимоНе применимоВерсия 3.8.0
База данных DAVIDНе применимоНе применимоВерсия 6.8; https://david.ncifcrf.gov/home.jsp
База данных DisGeNETНе применимоНе применимоhttps://www.disgenet.org/
Набор для хемилюминесцентного обнаружения ECLVazymeE411-04Для хемилюминесцентного обнаружения сигналов Western blot на шаге 13 протокола
ELISA набор для OCNMEIMIANMM-0551M1Для измерения уровня сывороточного остеокальцина на шаге 8 протокола
ELISA набор для β-CTXMEIMIANMM-44858M1Для измерения уровня сывороточного β-CTX на шаге 8 протокола
База данных GeneCardsНе применимоНе применимоhttps://www.genecards.org/
Green Premix Ex Taq II FASTTakaraCN830AДля qRT-PCR амплификации на шаге 12 протокола
Оборудование для высокоразрешимого микро-компьютерного томографа (µCT)BrukerSkyscan 1176Для высокоразрешимого µCT изображения микроструктуры бедренной кости на шаге 9 протокола
Антитeла к IL-1βBIOSSbs6319RДля IHC обнаружения в секциях бедренной кости на шаге 10 протокола
Антитeла к IκBαCST4812Для Western blot обнаружения на шаге 13 протокола
База данных Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)Не применимоНе применимоhttps://www.kegg.jp/
M-CSFAMIZONAAMK1001-S1Для индукции дифференцировки BMMs на шаге 11 протокола
База данных MetascapeНе применимоНе применимоhttps://metascape.org/
Orbitrap Exploris 120Thermo Fisher ScientificBRE725531Для анализа LC-MS/MS LWDHW на шаге 2 протокола
Антитeла к P65CST8242Для Western blot обнаружения на шаге 13 протокола
Антитeла к p-IκBαCST2859Для Western blot обнаружения на шаге 13 протокола
Антитeла к p-P65CST3033SДля Western blot обнаружения на шаге 13 протокола
Антитeла к p-P65Suzhou RuiyingRLP0187Для IHC обнаружения в секциях бедренной кости на шаге 10 протокола
Набор для обратной транскрипции PrimeScript RT ReagentTakaraRR047AДля обратной транскрипции общей РНК в BMMs для анализа qRT-PCR на шаге 12 протокола
Система QuantStudio 5Applied BiosystemsA28573Для анализа qRT-PCR маркерных генов остеокластов на шаге 12 протокола
RANKLAMIZONAAMK1001-S1Для индукции дифференцировки BMMs на шаге 11 протокола
Буфер для лизиса RIPAEpizyme BiotechPC101Для общей экстракции белков из BMMs на шаге 13 протокола
Набор для быстрой очистки РНКTransGen BiotechER501-01-V2Для экстракции общей РНК в BMMs на шаге 12 протокола
Программное обеспечение SPSSIBMверсия 26Для статистического анализа экспериментальных данных на шаге 15 протокола
База данных STRINGНе применимоНе применимоhttps://string-db.org/
Набор для окрашивания тартратоустойчивой кислой фосфатазы (TRAP)AMIZONAAMK1001-S1Для TRAP окрашивания для идентификации и количественного определения остеокластов на шаге 14 протокола
Система Thermo Vanquish UPLCThermo Fisher ScientificTSLC-002Для анализа LC-MS/MS LWDHW на шаге 2 протокола
Антитeла к TNF-αSuzhou RuiyingRLM3

Ссылки

  1. Liang H, et al. Global epidemiology and burden of osteoporosis among postmenopausal women: insights from the Global Burden of Disease Study 2021. NPJ Aging. 2025;11(1):78.
  2. Yi YT, Zhao HF, Wang WZ, Li X. Osteosarcopenia: epidemiology, molecular mechanisms, and management. Front Endocrinol (Lausanne). 2025;16:1577758.
  3. Wang J, et al. The prevalence of osteoporosis in China, a community based cohort study of osteoporosis. Front Public Health. 2023;11:1084005.
  4. Peris P, et al. Effect of gender on the evolution of pain and quality of life after treatment of symptomatic vertebral fragility fractures. Osteoporos Int. 2024;35(3):515-21.
  5. McClung MR. Sequential and long-term therapy for osteoporosis. Curr Osteoporos Rep. 2025;23(1):15.
  6. Tamechika S, Ohmura S, Maeda S, Naniwa T. Efficacy of denosumab on bisphosphonate-treated osteoporosis and osteopenia in systemic rheumatic disease patients receiving glucocorticoids. J Bone Miner Metab. 2023;41(2):203-11.
  7. Fuggle N, et al. Parathyroid hormone receptor agonists in the management of osteoporosis. Nat Rev Rheumatol. 2025;21(10):599-611.
  8. Curtis JR, et al. Comparative effectiveness of denosumab vs alendronate among postmenopausal women with osteoporosis. J Bone Miner Res. 2024;39(7):826-34.
  9. Thomasius F, et al. Clinical practice guideline: the diagnosis and treatment of osteoporosis. Dtsch Arztebl Int. 2025;122(1):12-18.
  10. Tan M, Li Q, Yang B, Wang S, Chen Z. Insight of Chinese herbal medicine in treating osteoporosis: achievements from 2013 to 2023. Am J Chin Med. 2024;52(5):1303-28.
  11. Qiu Z, et al. Liuwei Dihuang Pills alleviate the polycystic ovary syndrome with improved insulin sensitivity through PI3K/Akt signaling pathway. J Ethnopharmacol. 2020;250:111965.
  12. Zheng W, Wang G, Zhang Z, Wang Z, Ma K. Research progress on classical traditional Chinese medicine formula Liuwei Dihuang pills in the treatment of type 2 diabetes. Biomed Pharmacother. 2020;121:109564.
  13. Song J, et al. Liuwei Dihuang improved cognitive functions in SAMP8 mice by inhibiting COX-2 expression and subsequent neuroinflammation. J Ethnopharmacol. 2022;296:115491.
  14. Wang H, et al. Liu Wei Di Huang Decoction alleviates renal fibrosis by inhibiting endothelial mesenchymal transitions via upregulating Sirt1 expression and inhibiting the Wnt/β-catenin signaling pathway. Drug Des Devel Ther. 2025;19:6587-603.
  15. Zhou Z, et al. Transcriptional sequencing analysis reveals the potential use of deer antler for "tonifying the kidney and strengthening bone". J Orthop Surg Res. 2022;17(1):419.
  16. Liu Y, et al. Liuwei Dihuang Decoction for primary osteoporosis: a protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2019;98(16):e15282.
  17. Long Z, et al. Research on the mechanism of Liuwei Dihuang Decoction for osteoporosis based on systematic biological strategies. Evid Based Complement Alternat Med. 2022;2022:7017610.
  18. Liu B, et al. Liuwei Dihuang Decoction alleviates cognitive dysfunction in mice with D-galactose-induced aging by regulating lipid metabolism and oxidative stress via the microbiota-gut-brain axis. Front Neurosci. 2022;16:949298.
  19. Perry B, Zhang J, Saleh T, Wang Y. Liuwei Dihuang, a traditional Chinese herbal formula, suppresses chronic inflammation and oxidative stress in obese rats. J Integr Med. 2014;12(5):447-54.
  20. Wang L, You X, Zhang L, Zhang C, Zou W. Mechanical regulation of bone remodeling. Bone Res. 2022;10(1):16.
  21. Luo J, et al. Oxidative stress and inflammation: roles in osteoporosis. Front Immunol. 2025;16:1611932.
  22. Jing R, et al. Toll-like receptor 7 promotes periodontal inflammation and alveolar bone resorption through the NF-κB signaling pathway. J Periodontal Res. 2025;60(8):823-34.
  23. Tao H, et al. Urolithin A suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis and postmenopausal osteoporosis by suppressing inflammation and downstream NF-κB-activated pyroptosis pathways. Pharmacol Res. 2021;174:105967.
  24. Xue C, et al. Aconine attenuates osteoclast-mediated bone resorption and ferroptosis to improve osteoporosis via inhibiting NF-κB signaling. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;14:1234563.
  25. Zhang P, et al. Network pharmacology: towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 2023;25(1).
  26. Zhao L, et al. Network pharmacology, a promising approach to reveal the pharmacology mechanism of Chinese medicine formula. J Ethnopharmacol. 2023;309:116306.
  27. Xia C, Zhu H, Li J, Jin H, Fu D. Network pharmacology-based mechanism prediction and pharmacological validation of Bushenhuoxue formula attenuating postmenopausal osteoporosis in ovariectomized mice. J Orthop Surg Res. 2023;18(1):200.
  28. Gu Y, et al. Exploring the efficacious constituents and underlying mechanisms of Sini Decoction for sepsis treatment through network pharmacology and multi-omics. Phytomedicine. 2024;123:155212.
  29. Tian M, Wang K, Chen D. Efficacy and mechanisms of Xiangsha Liujunzi Decoction for gastroesophageal reflux disease: a study integrating meta-analysis, network pharmacology and molecular docking. Phytomedicine. 2026;151:157766.
  30. Ma Y, et al. Multi-omics and experimental validation reveal the mechanism of Danxia Tiaoban Decoction in treating atherosclerosis. Phytomedicine. 2025;147:157216.
  31. Xia C, et al. β-catenin inhibition disrupts the homeostasis of osteogenic/adipogenic differentiation leading to the development of glucocorticoid-induced osteonecrosis of the femoral head. Elife. 2024;12.
  32. He Q, et al. Amlexanox enforces osteogenic differentiation and bone homeostasis through inhibiting ubiquitin-dependent degradation of β-catenin. Int J Biol Sci. 2024;20(13):5254-71.
  33. Feng X, et al. CX3CL1 promotes M1 macrophage polarization and osteoclast differentiation through NF-κB signaling pathway in ankylosing spondylitis in vitro. J Transl Med. 2023;21(1):573.
  34. Wang X, et al. Isoliquiritigenin alleviates periodontitis by suppressing inflammation via NF-κB signaling pathway of immune cell. J Inflamm Res. 2025;18:6133-48.
  35. Guo Q, et al. NF-κB in biology and targeted therapy: new insights and translational implications. Signal Transduct Target Ther. 2024;9(1):53.
  36. Walker MD, Shane E. Postmenopausal osteoporosis. N Engl J Med. 2023;389(21):1979-91.
  37. Liang B, et al. Liuwei Dihuang pills attenuate ovariectomy-induced bone loss by alleviating bone marrow mesenchymal stem cell senescence via the Yes-associated protein-autophagy axis. Pharm Biol. 2024;62(1):42-52.
  38. Liu MM, et al. Therapeutic potential of Liuwei Dihuang pill against KDM7A and Wnt/β-catenin signaling pathway in diabetic nephropathy-related osteoporosis. Biosci Rep. 2020;40(9).
  39. Xie Y, et al. Clinical practice guideline for postmenopausal osteoporosis with traditional Chinese medicine. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2021;46(22):5992-8.
  40. Li YQ, et al. Astragaloside IV modulates oxidative stress and osteoimmune-Wnt signaling in ovariectomized rats: an integrated study of RNA sequencing, molecular docking, and experimental validation. Front Nutr. 2026;13:1785452.
  41. Zhao J, et al. Yishen Qianggu Mixture formulation suppresses osteometabolic inflammation by modulating the IL-17/NF-κB/MAPK signaling axis. J Ethnopharmacol. 2026;358:121011.
  42. Chen C, et al. Hydrolyzed egg yolk peptide prevented osteoporosis by regulating Wnt/β-catenin signaling pathway in ovariectomized rats. Sci Rep. 2024;14(1):10227.
  43. Yang Y, et al. Nrf2 mitigates RANKL and M-CSF induced osteoclast differentiation via ROS-dependent mechanisms. Antioxidants (Basel). 2023;12(12).
  44. Wang Y, et al. Xian Huang Fang inhibits the PKCδ/MAPK signaling pathway to attenuate renal tubular epithelial cell senescence and thereby delay renal interstitial fibrosis. Drug Des Devel Ther. 2025;19:6991-7004.
  45. Niu MY, et al. Fanlian Huazhuo Formula alleviates high-fat diet-induced non-alcoholic fatty liver disease by modulating autophagy and lipid synthesis signaling pathway. World J Gastroenterol. 2024;30(30):3584-608.
  46. Huang G, et al. Artemisia capillaris Thunb. water extract attenuates adriamycin-induced renal injury by regulating apoptosis through the ROS/MAPK axis. J Food Biochem. 2022;46(2):e14065.
  47. Zhao J, et al. Liuwei Dihuang Pills enhance osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells through the activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway. Pharmaceuticals (Basel). 2024;17(1).
  48. Zhang X, Xu D, Zhang R, Wang H, Yang G. Interaction between diabetes and osteoporosis: imbalance between inflammation and bone remodeling. Osteoporos Int. 2025;36(12):2401-9.
  49. Zhao W, et al. Osteoclast activation and inflammatory bone diseases: focusing on receptors in osteoclasts. J Inflamm Res. 2025;18:3201-13.
  50. Zeng J, et al. Comparison of donepezil, memantine, melatonin, and Liuwei Dihuang Decoction on behavioral and immune endocrine responses of aged senescence-accelerated mouse resistant 1 mice. Front Pharmacol. 2020;11:350.
  51. Wu Y, et al. Effect of Bifidobacterium on osteoclasts: TNF-α/NF-κB inflammatory signal pathway-mediated mechanism. Front Endocrinol (Lausanne). 2023;14:1109296.
  52. Zulfiqar Z, et al. Zn glycine attenuates LPS-induced inflammatory bone loss in geese through suppression of osteoclastogenesis via reducing TLR-4/NFκB signaling. Ecotoxicol Environ Saf. 2026;309:119655.
  53. Kingeter LM, Lin X. C-type lectin receptor-induced NF-κB activation in innate immune and inflammatory responses. Cell Mol Immunol. 2012;9(2):105-12.
  54. Zhao Y, et al. Trimethylamine-N-oxide promotes osteoclast differentiation and oxidative stress by activating NF-κB pathway. Aging (Albany NY). 2024;16(10):9251-63.
  55. Zhang Q, et al. Activation of Nrf2/HO-1 signaling: an important molecular mechanism of herbal medicine in the treatment of atherosclerosis via the protection of vascular endothelial cells from oxidative stress. J Adv Res. 2021;34:43-63.
  56. Tseng YT, Chang FR, Lo YC. The Chinese herbal formula Liuwei Dihuang protects dopaminergic neurons against Parkinson's toxin through enhancing antioxidative defense and preventing apoptotic death. Phytomedicine. 2014;21(5):724-33.
  57. Xu Y, et al. Pharmacology-based molecular docking of 4-methylcatechol and its role in RANKL-mediated ROS/Keap1/Nrf2 signalling axis and osteoclastogenesis. Biomed Pharmacother. 2023;159:114101.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Биологиявыпуск 233Постменопаузальный остеопорозСигнальный путь NF-κBвоспаление
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.