Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиная модель вагинальной коколонизации Candida albicans и Streptococcus agalactiae

78 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/72557

⸱

21 августа 2026 г.

В этой статье

Краткое содержание

В данном протоколе подробно описан метод вагинального совместного заселения мышей Candida albicans и Streptococcus agalactiae. Этот метод может быть использован для изучения полимикробных взаимодействий, взаимодействий между хозяином и микробами, а также реакций организма хозяина на эти организмы.

Аннотация

Из влагалища человека выделяют разнообразные микроорганизмы, и многие организмы, населяющие эту нишу, способны переключаться между комменсальным и патогенным образом жизни. На исходы заболеваний влияют такие факторы, как состав сообщества и среда хозяина, однако механизмы, определяющие эти исходы, изучены недостаточно. В данной работе мы описываем мышиную модель для исследования межцарственных взаимодействий и ответа хозяина на Candida albicans и Streptococcus agalactiae (Группа B) Streptococcus, GBS), патобионты, колонизирующие женский половой тракт (ЖПТ). Новые данные свидетельствуют о том, что C. albicans Колонизация является фактором риска носительства GBS в связи с их частой совместной изоляцией. Во время беременности колонизация GBS может привести к неблагоприятным исходам. включая хориоамнионит и мертворождение. GBS также может передаваться плоду in utero (внутриматочный) или новорожденного во время родов и является основной причиной неонатального менингита. Колонизация влагалища является критическим предшественником заболевания, вызванного GBS, и эта ниша оказывает многочисленные селективные воздействия, некоторые из которых могут зависеть от C. albicans колонизация. В данном протоколе описывается модель одновременной C. albicans-вагинальная коколонизация GBS с использованием антибиотикотерапии и однократной дозы 17βэстрадиол для создания C. albicans колонизация, за которой следует отмена антибиотиков и инокуляция GBS. Микробная нагрузка в просвете влагалища количественно определяется на протяжении всего эксперимента с помощью промывания, а нагрузка во всем женском репродуктивном тракте (ЖРТ) — путем вскрытия, гомогенизации и посева образцов влагалища, шейки матки и матки. Данный метод позволит изучить механизмы, посредством которых прямые и косвенные полимикробные взаимодействия влияют на образ жизни и патогенез этих двух организмов, а также на иммунный ландшафт хозяина в ЖРТ.

Введение

Streptococcus agalactiae (Группа B Streptococcus, GBS) представляет собой грамположительный бактериальный патобионт, который колонизирует несколько полимикробных участков, включая желудочно-кишечный тракт и влагалище. В то время как колонизация влагалища обычно протекает бессимптомно, во время беременности GBS может перемещаться из влагалища в матку и преодолевать целые плодные перепонки, вызывая инфицирование амниотической жидкости и плаценты. Таким образом, данный микроорганизм является основным фактором риска неблагоприятных исходов беременности, фетальной инфекции и неонатальных заболеваний.1,2....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Работа с животными, представленная в данной рукописи, была одобрена и проведена в соответствии с требованиями Институционального комитета по уходу и использованию животных (IACUC) Университета Колорадо Аншутс согласно протоколу №00316. На приведенной ниже временной шкале день 0 соответствует дню инокуляции S. agalactiae.

1. Введите антибиотики перед инокуляцией.

  1. Приготовьте концентрированный раствор ампициллина, неомицина и гентамицина с конечной концентрацией каждого препарата 50 mg/mL, используя в качестве растворителя питьевую воду для мышей. Стерилизуйте антибиотический раствор с помощью фильтра с п....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Для характеристики вагинальной колонизации GBS и C. albicans мышам проводили внутривагинальное введение штамма C. albicans SC5314 или контрольного раствора PBS, после чего следовала инокуляция штаммом GBS COH1. Данный штамм представляет собой гипервирулентный капсульный серотип III, тип последовательности 17, изоляты которого чаще всего связаны с инвазивными заболеваниями и менингитом у новорожденных1. Мыши, у которых через один день после инокуляции не наблюдалось колонизации GB.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Вагинальная колонизация GBS представляет собой критический риск для здоровья матери, плода и новорожденного. Модели in vivo крайне важны для понимания факторов, определяющих колонизацию, и для разработки средств профилактической терапии. В данной работе мы описываем мышиную модель для совместной вагинальной колонизации мышей GBS и C. albicans, оценки микробной нагрузки в просвете влагалища и верхних отделах женского репродуктивного тракта (FGT), а также сбора соответствующих тканей для последующего анал.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не заявляют о наличии конфликта интересов.

Благодарности

Мы благодарим Отдел ресурсов для лабораторных животных Университета Колорадо Аншутц, включая управляющего объектом и самоотверженный персонал вивария. Данная работа поддерживается грантами NIH R01AI153332 и R21AI188719, предоставленными K.S.D.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
фильтр 0.22 µmSigma-AldrichSLGSR33SB
фильтр 0.45 µmSigma-AldrichSLHAR33SB
шприц с люер-замком 1 mLMcKesson16-S1C
циркониевые шарики 1.0 mmResearch Products International9835
шприц с люер-замком 10 mLMcKesson16-S10C
17β-эстрадиолSigma-AldrichE8875ОСТОРОЖНО: 17β-эстрадиол может впитываться через кожу и слизистые оболочки. Используйте соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ) и соблюдайте осторожность при работе.
игла 18G 1.5"BD305196
пробирка с завинчивающейся крышкой 2 mLFisher Scientific02-681-374
игла 26G 0.5"McKesson16-N2605
АгарAlpha BiosciencesA01-102
АмпициллинResearch Products InternationalA40040
CHROMagar CandidaCHROMagarCA222
CHROMagar StrepBCHROMagarSB282
ГентамицинVWR Life Science0304
НеомицинResearch Products InternationalN20040
Фосфатно-солевой буферный растворFisher ScientificBP2944
Кунжутное маслоSigma-AldrichS3547
Бульон Тодда-ХьюиттаResearch Products InternationalT47500
Декстрозный бульон с пептоном для дрожжейBD242810

Ссылки

  1. Megli CJ et al. Virulence and pathogenicity of group B Streptococcus.: virulence factors and their roles in perinatal infection. Virulence. 2025;16(1):2451173.
  2. Manuel G et al. Group B streptococcal infections in pregnancy and early life. Clin Microbiol Rev. 2025;38(1):e00154-22.
  3. Verani JR, McGee L, Schrag SJ. Prevention of perinatal group B streptococcal disease: revised guidelines from CDC, 2010. MMWR Recomm Rep. 2010;59(RR-10):1-36.
  4. Prevention of group B streptococcal early-onset disease in newborns: ACOG Committee Opinion Summary, Number 797. Obstet Gynecol. 2020;135(2):489....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Streptococcus группы Bженские половые путимежцарственные взаимодействияантибиотикотерапияколичественное определение микробной нагрузкииммунный ответ хозяина

Эта статья была опубликована

Видео скоро будет доступно