Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Исследовательская статья

Ретроспективное когортное исследование уровней miR-486-3p в периферической крови пациентов с острым инфарктом головного мозга и обструктивным апноэ сна

42 просмотров

⸱

DOI:

10.3791/72643

⸱

28 августа 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, 2The Second Clinical Medical College, Xuzhou Medical University

В этой статье

Краткое содержание

Экспрессия miR‑486‑3p снижена у пациентов с острым инфарктом головного мозга и обструктивным апноэ сна, отрицательно коррелирует с тяжестью заболевания и маркерами воспаления, а также предсказывает неблагоприятный прогноз через 1 год, что подтверждает её потенциал в качестве диагностического и прогностического биомаркера.

Аннотация

Острый инфаркт мозга (ОИМ), осложненный синдромом обструктивного апноэ сна (СОАС), сопряжен с высоким риском рецидива инсульта и летальности, однако количество эффективных биомаркеров для этого коморбидного состояния остается ограниченным. В данное ретроспективное когортное исследование были включены 270 пациентов с ОИМ в период с ноября 2020 г. по декабрь 2023 г., которые были разделены на группу ОИМ (n = 100, индекс апноэ-гипопноэ [AHI] < 5) и группу ОИМ с СОАС (n = 170, AHI ≥ 5); последняя была далее стратифицирована на подгруппы с легкой степенью (5 ≤ AHI < 15, n = 60), средней степенью (15 ≤ AHI < 30, n = 75) и тяжелой степенью (AHI ≥ 30, n = 35). Экспрессия сывороточного miR‑486‑3p измерялась методом RT‑qPCR, а уровни воспалительных маркеров, включая фактор некроза опухоли-α (TNF‑α), С-реактивный белок (CRP) и индуцируемый гипоксией фактор-1α (HIF‑1α), определялись с помощью ELISA. Диагностическая ценность miR‑486‑3p оценивалась с использованием анализа ROC-кривых, а его прогностическая значимость — с помощью анализа выживаемости Каплана-Мейера и моделей регрессии Кокса. Уровень miR-486-3p был заметно ниже в коморбидной группе и продемонстрировал высокую диагностическую способность (AUC = 0,927). Примечательно, что в подгруппах разной степени тяжести СОАС наблюдалась четкая дозозависимая тенденция: уровень miR‑486‑3p прогрессивно снижался, а уровни TNF‑α и CRP ступенчато повышались при переходе от легкой к тяжелой степени СОАС. Корреляционный анализ Спирмена показал, что miR‑486‑3p отрицательно коррелирует с AHI, баллом по шкале NIHSS, TNF‑α и CRP. При последующем наблюдении через 1 год у пациентов с низкой экспрессией miR‑486‑3p наблюдались значительно худшие функциональные исходы по сравнению с пациентами с высокой экспрессией. Многофакторная регрессия Кокса подтвердила, что miR‑486‑3p является независимым протективным фактором для прогноза на 1 год. Эти результаты позволяют предположить, что miR‑486‑3p может служить новым диагностическим и прогностическим биомаркером для пациентов с ОИМ и СОАС, потенциально за счет своей регуляторной роли в системном воспалении, что требует дальнейшего подтверждения в более крупных проспективных когортах.

Введение

Синдром обструктивного апноэ сна (СОАС) — это распространенное состояние, характеризующееся повторяющимися остановками дыхания во время сна1. СОАС часто сопровождается сопутствующими заболеваниями, такими как метаболические, сердечно-сосудистые, почечные, легочные и нейропсихиатрические расстройства2. Помимо общей связи с сердечно-сосудистыми и метаболическими заболеваниями, СОАС представляет особую и серьезную угрозу при остром ишемическом инсульте, осложняя до 70% случаев и повышая риск неврологического ухудшения, летальности и рецидива инсульта3,4,5. Острый инфаркт мозга (ОИМ) является наиболее распространенной формой инсульта. Несмотря на значительный прогресс в лечении ОИМ в последние годы, большинство пациентов по-прежнему страдают от тяжелой инвалидности или даже умирают6. Синергетическое взаимодействие ОИМ и сопутствующего СОАС усугубляет ишемическое повреждение и системное воспаление, существенно повышая риск рецидива инсульта, инвалидности и смерти. Следовательно, поиск надежных биомаркеров для ранней диагностики и лечения этого коморбидного состояния высокого риска имеет первостепенное значение.

В последние годы микроРНК (миРНК) демонстрируют большие перспективы в качестве биомаркеров. Среди них miR-486-3p имеет большое значение при нейроваскулярных заболеваниях. Предыдущие исследования показали, что экспрессия miR-486-3p подавляется при обструктивном апноэ сна (ОАС)7. Кроме того, терапия с использованием экзосом, содержащих гликопротеин вируса бешенства и miR-486-3p, может облегчить нейроповеденческие расстройства, отек головного мозга, повреждение гематоэнцефалического барьера и нейродегенерацию8, что указывает на роль miR-486-3p в повреждении мозга. После ишемического инсульта в поврежденной ткани мозга активируются микроглии, что способствует секреции воспалительных цитокинов5. ОАС вызывает симптомы перемежающейся гипоксии, что приводит к активации симпатической нервной системы и окислительному стрессу, запуская тем самым системную воспалительную каскадную реакцию9. miR-486-3p тесно связана с воспалением10. Эти данные свидетельствуют о том, что miR-486-3p может служить молекулярным звеном между гипоксией, связанной с ОАС, системным воспалением и восстановлением после инсульта.

Однако профиль экспрессии, диагностическая точность и прогностическая значимость данного маркера у пациентов с ACI в сочетании с OSAS не были систематически изучены, и остается неизвестным, коррелирует ли он с тяжестью OSAS или воспалительными медиаторами дозозависимым образом. Чтобы восполнить эти пробелы, в данной работе была оценена диагностическая ценность miR-486-3p для выявления OSAS у пациентов с ACI, изучена его дозозависимая связь с тяжестью OSAS и маркерами воспаления (TNF-α, CRP и HIF-1α), а также определена прогностическая значимость для оценки функциональных исходов через 1 год. Насколько нам известно, это первое комплексное исследование, демонстрирующее, что miR-486-3p может служить новым диагностическим и прогностическим биомаркером при коморбидности ACI-OSAS, потенциально за счет регуляции системного воспаления.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Данное исследование было одобрено комитетом по этике при аффилированной больнице медицинского университета Сючжоу (номер одобрения: XYFY2024-KL238-01); требование о получении дополнительного информированного согласия от пациентов было отменено. Используемые реагенты и оборудование перечислены в таблице материалов.

Пациенты и образцы
Данное исследование представляло собой ретроспективное когортное исследование. С ноября 2020 г. по декабрь 2023 г. в Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University последовательно набирали в общей сложности 270 пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения (ОНМК). Процесс отбора пациентов обобщен на Дополнительном рисунке 1. Соответствующие критериям пациенты выявлялись путем ежедневного скрининга всех новых поступлений в отделение инсульта. Начало симптомов в течение 72 ч до госпитализации подтверждалось путем изучения записей скорой медицинской помощи и верифицировалось сертифицированным неврологом на основании анамнеза пациента и опроса родственников. Размер выборки рассчитывался исходя из возможности обнаружить значимую разницу в уровнях miR-486-3p между группами. При допущении величины эффекта 0,5, двустороннем α = 0,05 и мощности (1-β) = 0,80 требовалось минимум 64 пациента в каждой группе. Окончательный размер групп отражает фактический набор и более высокую распространенность СОАС в популяции пациентов с инсультом, а не заранее определенное распределение. Пациенты с сочетанием ОНМК и СОАС наблюдались в течение 1 года для оценки прогноза.

Критериями включения были: (1) острый ишемический инсульт с началом симптомов в течение 72 ч до поступления, подтвержденный магнитно-резонансной томографией. (2) Способность понимать и заполнять опросники исследования, а также проходить неврологическую оценку. (3) Тяжесть ОИИ оценивалась по шкале инсульта Национальных институтов здоровья (NIHSS) при поступлении. При значении NIHSS <5 инсульт классифицировался как легкий ОИИ; при значении NIHSS от 5 до 20 он считался ОИИ средней тяжести. Основные критерии исключения включали: наличие в анамнезе злокачественных новообразований, предшествующую тяжелую физическую инвалидность или психические расстройства, тяжелую сердечную, легочную или почечную недостаточность, обширные хирургические вмешательства или травмы в течение предшествующих 3 месяцев, активные инфекции или аутоиммунные заболевания; перенесенный инсульт в течение последних 6 месяцев; иммуносупрессивную терапию; а также ранее установленный диагноз или лечение ОСАЭ (включая терапию с созданием положительного давления в дыхательных путях).

Для подтверждения с помощью МРТ всем пациентам была проведена стандартная МРТ головного мозга на системе 3.0-T, включая следующие последовательности: T1-взвешенную, T2-взвешенную, режим подавления сигнала от свободной жидкости (FLAIR), диффузионно-взвешенную МРТ (DWI) и картирование измеряемого коэффициента диффузии (ADC). Острый инфаркт определялся как наличие гиперинтенсивного сигнала на DWI с соответствующим гипоинтенсивным сигналом на ADC. Все МР-сканы интерпретировались двумя опытными нейрорадиологами, которые не имели доступа к клиническим данным; расхождения разрешались путем консенсуса. Оценка по шкале NIHSS проводилась при поступлении сертифицированными неврологами до начала любого тромболитического или эндоваскулярного лечения.

Венозную кровь натощак собирали в интервале от 24 ч до 48 ч после начала инсульта, после ночного голодания продолжительностью не менее 8 ч. Забор крови проводили с 6:00 до 8:00, чтобы минимизировать влияние циркадных ритмов. В вакуумные пробирки с ЭДТА собирали в общей сложности 5 mL периферической венозной крови. В течение 2 ч после забора образцы крови центрифугировали в охлаждаемой центрифуге при 1 500 × g в течение 15 мин при 4 °C. Супернатант сыворотки осторожно переносили по аликвотам в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 mL, свободные от РНказ, и немедленно хранили при −80 °C до экстракции РНК. Повторных циклов замораживания-оттаивания строго избегали; все аликвоты подвергались максимум одному циклу замораживания-оттаивания перед анализом.

Группировка пациентов
Участники были распределены по группам на основании показателей AHI, полученных в результате полисомнографии. Все записи проводились в госпитальной лаборатории сна с 22:00 до 6:00 продолжительностью не менее 7 h. Мониторинг физиологических каналов включал: электроэнцефалографию (EEG; шесть каналов), электроокулографию (EOG; два канала), электромиографию (EMG; подбородок и двусторонние передние большеберцовые мышцы), электрокардиографию (ECG; один отведение), назальный поток воздуха (термистор и датчик давления), торакальные и абдоминальные дыхательные усилия (респираторная индукционная плетизмография) и пульсоксиметрию (SpO2). Расчет AHI выполнял техник по исследованию сна. Оценка стадий сна и респираторных событий проводилась вручную сертифицированным техником по сну в соответствии с руководством по скорингу Американской академии медицины сна (AASM) 2012 года с использованием программного обеспечения Somnolyzer 24×7. Согласно общепринятым диагностическим критериям Американской академии медицины сна, AHI от 5 и более событий в час является стандартным порогом для диагностики OSA. Таким образом, участники с AHI < 5 были отнесены к группе ACI (n = 100), в то время как участники с AHI ≥ 5 были отнесены к группе ACI в сочетании с OSAS (n = 170). Среди пациентов с AHI ≥ 5 (группа ACI в сочетании с OSAS, n = 170) было проведено дальнейшее разделение на три подгруппы по степени тяжести на основе установленных критериев: легкая OSAS (5 ≤ AHI < 15, n = 60), умеренная OSAS (15 ≤ AHI < 30, n = 75) и тяжелая OSAS (AHI ≥ 30, n = 35). Такая стратификация позволила оценить дозозависимую взаимосвязь между гипоксической нагрузкой, экспрессией miR‑486‑3p и маркерами воспаления. Пациенты, ранее проходившие лечение по поводу OSAS (например, CPAP), не включались в исследование, чтобы избежать искажения исходных показателей AHI.

Оценка прогноза
Контрольный срок через 1 год позволяет купировать острые эффекты и проявиться кумулятивной гипоксической нагрузке при OSAS, обеспечивая надежное окно для оценки его прогностического влияния. Клинический прогноз пациентов с ACI в сочетании с OSAS оценивали по модифицированной шкале Рэнкина (mRS) после начала заболевания. Все оценки по mRS проводились сертифицированными неврологами, прошедшими стандартизированное обучение перед исследованием, с использованием структурированной формы интервью mRS. Межэкспертная надежность была оценена с помощью коэффициента каппа >0,85. Последующее наблюдение проводилось в ходе запланированного визита в амбулаторную клинику. Для пациентов, не имевших возможности посетить клинику лично, обученная исследовательская медсестра проводила структурированное телефонное интервью по стандартизированному сценарию. Все эксперты были ослеплены относительно уровней miR-486-3p и статуса OSAS у пациентов. Для обеспечения согласованности между амбулаторными и телефонными оценками в обоих форматах использовался один и тот же структурированный опросник, а все эксперты прошли предварительную калибровочную процедуру перед началом исследования. Пациенты с баллами 0–2 были включены в группу с благоприятным прогнозом, а пациенты с баллами 3–6 — в группу с неблагоприятным прогнозом. Потеря пациентов для последующего наблюдения отсутствовала. SAQLI, ESS, TNF-α и HIF-1α оценивались как прогностические переменные, а не использовались для определения групп прогноза. Оценки по NIHSS, SAQLI и ESS проводились обученным исследовательским персоналом. SAQLI и ESS заполнялись в виде опросников при участии интервьюера в тихом помещении.

Индексы оценки
NIHSS представляет собой количественную шкалу для оценки инсульта11, при которой более высокие баллы указывают на большую степень тяжести OCI. SAQLI — это опросник качества жизни при OSA по шкале от 1 до 7, где более высокие баллы свидетельствуют о более низком качестве жизни; опросник охватывает повседневную деятельность, социальные взаимодействия, эмоциональное состояние, симптомы и симптомы, связанные с лечением12. ESS используется для оценки дневной сонливости по самоотчетам пациентов, диапазон баллов составляет от 0 до 24, при этом показатель > 10 указывает на наличие дневной сонливости13.

Экстракция РНК и обратная транскрипция
Общую РНК экстрагировали из 200 µL сыворотки с использованием реагента TRIzol. Кратко: образцы сыворотки смешивали с 800 µL TRIzol, инкубировали при комнатной температуре в течение 5 min и центрифугировали при 12,000 × g в течение 15 min при 4 °C. Добавляли хлороформ (200 µL), смесь интенсивно встряхивали в течение 15 s, инкубировали 3 min и центрифугировали при 12,000 × g в течение 15 min при 4 °C. Водную фазу переносили в новую пробирку, РНК осаждали 500 µL изопропанола, инкубировали при −20 °C в течение 1 h и центрифугировали при 12,000 × g в течение 10 min при 4 °C. Осадок РНК промывали 75% этанолом, высушивали на воздухе и растворяли в 20 µL воды, свободной от РНказ. Концентрацию и чистоту РНК оценивали с помощью микрообъемного спектрофотометра; для последующего анализа принимали образцы с соотношением A260/A280 от 1.8 до 2.0. Целостность РНК проверяли методом электрофореза в агарозном геле.

Обратную транскрипцию проводили с использованием 500 ng суммарной РНК и набора Reverse Transcription Kit в общем объеме реакции 20 µL с применением праймеров на случайных гексамерах согласно протоколу производителя. Реакцию обратной транскрипции проводили при 25 °C в течение 10 min, при 42 °C в течение 60 min и при 70 °C в течение 5 min. Полученную кДНК хранили при −20 °C до использования.

RT-qPCR
Экспрессию miR-486-3p определяли с помощью набора для ПЦР в реальном времени на основе SYBR Green для количественного анализа микроРНК на системе количественной ПЦР в реальном времени (qPCR). Реакционная смесь содержала 10 µL 2× SYBR Green Master Mix, 2 µL матрицы кДНК (разведенной 1:5), 1 µL каждого праймера (10 µM) и нуклеаза-free воду до конечного объема 20 µL. Последовательности праймеров следующие (5'-3'): miR-486-3p-прямой: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, обратный: CTCAACTGGTGTCGTGGA; и U6-прямой: CTCGCTTCGGCAGCACA, обратный: AACGCTTCACGAATTTGCGT. Условия циклов qPCR были следующими: 95 °C в течение 2 min, затем 40 циклов по 95 °C в течение 30 s, 60 °C в течение 30 s и 72 °C в течение 60 s. Каждый образец анализировали в трех повторностях, в каждую серию включали отрицательный контроль (без матрицы). Специфичность амплификации подтверждали анализом кривых плавления в диапазоне от 60 °C до 95 °C. Пороговый цикл (Ct) определялся автоматически с помощью программного обеспечения QuantStudio 6 Pro (v1.5) с использованием стандартных настроек порога. Уровень miR-486-3p рассчитывали методом 2-ΔΔCT с нормализацией по U6. U6 была валидирована как стабильный референсный ген в наших образцах сыворотки с использованием алгоритма NormFinder для обеспечения согласованности между группами. Межсерийный и внутрисерийный коэффициенты вариации составляли <5%.

ИФА
Концентрации C-реактивного белка (CRP), TNF-α и HIF-1α в сыворотке определяли с помощью набора для ИФА. Экспериментальные процедуры проводили в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, образцы сыворотки размораживали на льду и разводили 1:2 в прилагаемом буфере для разведения. Образцы и стандарты вносили в предварительно покрытые 96-луночные планшеты (100 µL/лунку) и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После четырехкратной промывки 300 µL промывочного буфера добавляли 100 µL конъюгированных с биотином детектирующих антител и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. После еще одного этапа промывки добавляли 100 µL стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена, и инкубировали в течение 30 мин при 37°C в темноте. Добавляли хромогенный субстрат (тетраметилбензидин, 100 µL) и инкубировали в течение 15 мин при 37°C в защищенном от света месте. Реакцию останавливали добавлением 50 µL стоп-раствора, после чего измеряли оптическую плотность при 450 nm с помощью микропланшетного ридера. Концентрации рассчитывали по стандартным кривым, построенным с использованием известных концентраций рекомбинантных белков. Каждый образец измеряли в дубликате, для анализа использовали среднее значение. В каждый планшет включали образцы контроля качества, предоставленные производителем; результаты принимали только в том случае, если значения КК находились в пределах диапазона, указанного производителем.

Контроль качества и воспроизводимость
Все лабораторные анализы проводились в соответствии с рекомендациями MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) для RT-qPCR и соответствующими стандартами отчетности для ELISA. Основное оборудование калибровалось согласно графикам производителей. В каждую серию анализов RT-qPCR и ELISA включались отрицательные и положительные контрольные образцы для мониторинга вариабельности между планшетами. Все данные регистрировались и обрабатывались с помощью Microsoft Excel; автор, ответственный за переписку, предоставит подробные экспериментальные протоколы и необработанные данные по обоснованному запросу.

Статистический анализ
Данные анализировали с помощью SPSS 23.0 и программного обеспечения для статистического анализа и построения графиков. Нормальность распределения оценивали с помощью критерия Шапиро–Уилка. Непрерывные переменные представлены как среднее ± SD или медиана (IQR); их сравнивали с помощью t-критерия или U-критерия Манна–Уитни, в зависимости от распределения. Категориальные переменные сравнивали с помощью критерия χ2. Корреляции изучали с помощью анализа Пирсона или Спирмена в зависимости от распределения данных. Прогностическую значимость определяли с помощью ROC-кривой и проверяли путем 5-кратной перекрестной проверки. Оптимальное пороговое значение для miR-486-3p определяли путем максимизации индекса Юдена. Для оценки корреляций использовали корреляционный анализ Пирсона и Спирмена. Для прогностического анализа пациентов стратифицировали по медиане экспрессии miR‑486‑3p; для сравнения показателей выживаемости между группами использовали кривые Каплана–Мейера с лог-ранговым критерием. Переменные с P < 0.1 в однофакторной регрессии Кокса включали в многофакторную модель Кокса. Значение P < 0.05 считали статистически значимым.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Исходные характеристики в группе ACI и в группе ACI в сочетании с OSAS
Как показано в таблице 1, группа ACI состояла из 68 мужчин и 32 женщин со средним возрастом 62,84 ± 12,65 лет, а группа ACI в сочетании с OSAS включала 116 мужчин и 54 женщины со средним возрастом 61,31 ± 11,25 лет. В группе ACI в сочетании с OSAS наблюдались значительно более высокие показатели AHI, баллы по шкале NIHSS и уровни CRP. Тем не менее, в обеих группах было отмечено сопоставимое распределение по возрас...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Пациенты с синдромом обструктивного апноэ сна (СОАС) подвержены повторяющимся коллапсам и обструкции дыхательных путей, что приводит к интермиттирующей гипоксии (ИГ) и чрезмерной дневной сонливости (ЧДС), которые могут вызвать повреждение нейронов.14ОСА крайне распространено после ОКС, встречаясь примерно у 72% пациентов, и значительно повышает сердечно-сосудистый риск15Острая церебральная ишемия (ОЦИ) представляет собой спектр неврологических дефицитов, возникающих в резул...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Данное исследование было профинансировано программой «Исследования технологий профилактики и лечения инсульта» (№ WKZX2023CZ0143).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
МРТ-сканер 3,0 ТлSiemens Healthineers, ГерманияMAGNETOM SkyraВизуализация головного мозга для подтверждения острого церебрального инфаркта
96-луночные микропланшеты для ИФАShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., КитайXBS-PLATEРеакция антиген-антитело для детекции методом ИФА
Клинические рекомендации AASM по лечению нарушений дыхания во снеАмериканская академия медицины снаполное руководство 2020 годаСтандартизированные критерии диагностики АИЧ и стратификации степени тяжести СОАС
Китайская валидированная версия Калгарийского индекса качества жизни при апноэ во сне (SAQLI)Университет Калгарипереводное издание 2021 годаОценка качества жизни пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения, осложненным синдромом обструктивного апноэ сна
Вакуумные пробирки для сбора крови с EDTA-K2, 5 млBD Biosciences, США367863Забор периферической венозной крови для выделения сыворотки
Китайская валидированная версия шкалы сонливости Эпворта (ESS)Университет Джонса Хопкинсапересмотренное издание 2018 годаОценка дневной сонливости у пациентов после инсульта
GraphPad Prism 9GraphPad Software, СШАВерсия 9.4.1Диаграммы рассеяния, диаграммы размаха, визуализация ROC-кривой
Набор для ИФА на СРБ человекаShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Шэньчжэнь, КитайXBS-H001Количественное определение С-реактивного белка в сыворотке крови
Человеческий HIF-1α Набор для ИФАShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Шэньчжэнь, КитайXBS-H007Количественное определение фактора, индуцируемого гипоксией 1, в сыворотке кровиα
Человеческий ФНО-α Набор для ИФАShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Шэньчжэнь, КитайXBS-H003Количественное определение TNF-α в сыворотке кровиα фактор воспаления
IBM SPSS Statistics 23.0IBM, Армонк, Нью-Йорк, СШАВерсия 23.0Все статистические анализы (t-критерий, корреляция, ROC-анализ, Каплан-Мейера)–(регрессия Кокса, метод Майера)
Микропланшетный спектрофотометрThermo Fisher Scientific (Уолтем, Массачусетс, США)Multiskan FCИзмерение оптической плотности планшетов для ИФА при 450 нм
miR-486-3p & Праймеры для кПЦР U6Sangon Biotech, Шанхай, КитайСинтез на заказАмплификация целевого и референсного генов для количественной ПЦР
набор для ПЦР miScript SYBR Green PCR KitQiagen GmbH, Хильден, Германия218073Количественная ПЦР в реальном времени для амплификации miR-486-3p и U6
Валидированная китайская версия шкалы инсульта NIH (NIHSS)Национальный институт неврологических расстройств и инсульта (NINDS), СШАСтандартное клиническое изданиеИсходная оценка неврологического статуса пациентов с острым цереброваскулярным инсультом
Программное обеспечение для скоринга данных полисомнографииBMC Medical Co., Ltd., Китайv3.2Автоматизированная предварительная оценка респираторных событий во время сна
Система ПЦР в реальном времени QuantStudio 6 ProApplied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Уолтем, штат Массачусетс, США)QuantStudio 6 Proамплификация методом RT-qPCR, получение кривой плавления, регистрация значения Ct
Программное обеспечение для ПЦР в реальном времени QuantStudioApplied Biosystems, СШАv1.7Экспорт необработанных данных кПЦР, анализ значений Ct
Настольная центрифуга с охлаждениемXiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., провинция Хунань, КитайTDZ5-WSОтделение сыворотки от цельной крови (2700 × г, 4 °C)
Набор для обратной транскрипции RevertAid RTThermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, СШАK1691Обратная транскрипция мРНК сыворотки в кДНК
Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл, свободные от РНказAxygen, СШАMCT-150-CАликвотирование и хранение отделенной сыворотки
реагент для выделения РНК TRIzolInvitrogen, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США15596026Экстракция всей РНК из образцов сыворотки крови человека
Низкотемпературный морозильникHaier Biomedical, Шаньдун, КитайDW-86L388Длительное хранение образцов сыворотки крови при −80 °C
Полисомнографический монитор YH-600BBMC Medical Co., Ltd., Пекин, КитайYH-600BНочной мониторинг сна и расчет ИААС для диагностики ОСАС

Ссылки

  1. Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
  2. Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
  3. Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
  4. Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
  5. Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
  6. Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
  7. Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
  8. Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
  9. May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
  10. Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
  11. Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
  12. Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
  13. Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
  14. Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
  15. Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
  16. Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
  17. Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
  18. Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
  19. Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
  20. Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
  21. Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
  22. Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
  23. Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
  24. Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
  25. Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
  26. Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
  27. Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
  28. Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
  29. Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
  30. Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
  31. Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
  32. Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
  33. Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Маркеры воспаленияОТ-ПЦРИФАпрогностический биомаркеррецидив инсультасистемное воспаление
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.