Исследовательская статья

Подавление LINC0707 облегчает воспаление и окислительный стресс в микроглии BV2, стимулированной LPS, через ось miR-145-5p/TRAF6 при травме спинного мозга

111 просмотров

⸱

11 сентября 2026 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nursing, Zhangjiakou First Hospital, 2Department of Orthopedics, Zhangjiakou First Hospital, 3Department of Pediatrics, Zhangjiakou First Hospital

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Экспрессия LINC0707 в плазме повышена при травме спинного мозга и способствует развитию микроглия-опосредованного воспаления и окислительного стресса через сигнальную ось miR-145-5p/TRAF6. Сайленсинг LINC00707 ослабляет эти патологические реакции, что подчеркивает его потенциал в качестве терапевтической мишени.

Аннотация

Травма спинного мозга (ТСМ) приводит к пожизненной инвалидности, значительно снижает качество жизни и ложится тяжелым социально-экономическим бременем. В данном исследовании изучалась роль LINC0707 при ТСМ посредством регуляции сигнальной оси miR-145-5p/TRAF6. В образцах плазмы 30 здоровых добровольцев и 75 пациентов с ТСМ методом RT-qPCR анализировали экспрессию LINC0707, miR-145-5p и TRAF6. У пациентов с ТСМ оценивали взаимосвязь между уровнями LINC0707 в плазме и провоспалительными факторами. Микроглиальные клетки BV2 подвергали воздействию LPS в концентрации 10 ng/mL, после чего измеряли показатели воспаления и окислительного стресса. Молекулярные взаимодействия оценивали с помощью двухлюциферазного репортерного анализа. Для выявления факторов, связанных с экспрессией LINC0707, использовали логистический регрессионный анализ. У пациентов с ТСМ уровни LINC0707 и TRAF6 в плазме были повышены, тогда как уровни miR-145-5p были снижены. Уровни LINC0707 в плазме положительно коррелировали с уровнями воспалительных факторов в плазме. LINC0707 действовал как молекулярная губка для miR-145-5p, а TRAF6 был мишенью miR-145-5p. Ингибирование LINC00707 приводило к снижению уровней воспалительных факторов, веществ, вызывающих окислительный стресс, и мРНК TRAF6 в клетках BV2. Ингибирование miR-145-5p вызывало противоположные эффекты. Эти результаты свидетельствуют о том, что повышенная экспрессия LINC0707 связана с тяжестью ТСМ, и что нокдаун LINC0707 может облегчить опосредованное микроглией воспаление и окислительный стресс путем регуляции сигнальной оси miR-145-5p/TRAF6.

Введение

Травма спинного мозга (ТСМ) представляет собой травматическое состояние, приводящее к повреждению спинного мозга, который является критически важным компонентом центральной нервной системы. ТСМ напрямую нарушает пути нейронной проводимости между спинным мозгом и головным мозгом, что вызывает серьезные нарушения двигательных, сенсорных и вегетативных функций1,2. Эпидемиологические исследования сообщают о ежегодной заболеваемости примерно 5 случаев на 10 0 человек, при этом смертность, связанная с заболеванием, достигает 16,7%3,4. Согласно канадскому опросу, пожизненные затраты на реабилитацию каждого пациента с ТСМ могут достигать 336 0 долларов США5. Высокая заболеваемость, смертность и значительные расходы, связанные с диагностикой, лечением и реабилитацией, делают ТСМ серьезной клинической проблемой, требующей разработки более эффективных терапевтических стратегий.

Патологическое прогрессирование травмы спинного мозга (ТСМ) состоит из двух стадий: первичного и вторичного повреждения. Первичное повреждение возникает в результате травматического механического сдавления или разрыва тканей спинного мозга, тогда как вторичное повреждение опосредовано патологическими процессами, включая воспаление и окислительный стресс6,7. В физиологических условиях нейровоспаление, опосредованное микроглией, способствует гомеостазу центральной нервной системы8,9,10. Однако после ТСМ микроглия становится чрезмерно активированной и высвобождает большое количество провоспалительных медиаторов1,12. Эти медиаторы вызывают избыточную выработку активных форм кислорода (АФК), что приводит к повреждению и гибели нейронов и усугубляет вторичное повреждение спинного мозга13,14. Таким образом, подавление избыточной активации микроглии и прерывание воспалительного каскада представляют собой перспективные терапевтические стратегии для стимуляции неврологического восстановления и улучшения исходов после ТСМ.

Длинные некодирующие РНК (днКРНК) представляют собой класс некодирующих РНК длиной более 20 нуклеотидов, которые не обладают потенциалом к кодированию белков15. Первоначально рассматриваемые как транскрипционный «шум», днКРНК в настоящее время признаны важными регуляторами различных физиологических и патологических процессов16. Недавние исследования показали, что днКРНК играют критическую роль при повреждениях нервной системы. Длинная межгенная некодирующая РНК 707 (LINC0707) оказалась важным регулятором расстройств нервной системы. В предыдущих работах сообщалось, что LINC0707 усугубляет последствия черепно-мозговой травмы, усиливая опосредованное микроглией воспаление17. Кроме того, Zhu et al. продемонстрировали, что сайленсинг LINC0707 значительно ослабляет индуцированное липополисахаридом (ЛПС) воспаление и апоптоз в клетках PC1218. Эти данные обеспечивают предварительную теоретическую базу для изучения роли LINC00707 при травмах спинного мозга (ТСМ). Однако вопрос о том, регулирует ли LINC0707 опосредованное микроглией воспаление при ТСМ, все еще остается открытым.

Длинные некодирующие РНК (lncRNA) действуют как молекулярные губки посредством механизма конкурентных эндогенных РНК (ceRNA), секвестрируя микроРНК (miRNA) и регулируя экспрессию нижележащих генов-мишеней19. Эта регуляторная модель широко задействована в патогенезе различных заболеваний. В частности, экспрессия miR-145-5p значительно снижена в тканях при травме спинного мозга (SCI)20, а также при повреждении, индуцированном LPS21, и ее гиперэкспрессия эффективно ослабляет воспалительные ответы и окислительный стресс в микроглии22. Фактор 6, ассоциированный с рецептором фактора некроза опухоли (TRAF6), также играет ключевую роль в патологии SCI23,24,25. Тем не менее, остается выяснить, осуществляют ли LINC0707, miR-145-5p и TRAF6 скоординированные регуляторные функции при SCI.

В настоящем исследовании было обнаружено, что экспрессия LINC0707 значительно повышается в микроглиальных клетках, стимулированных LPS. В связи с этим мы выдвинули гипотезу, согласно которой LINC0707 может выступать в качестве провоспалительного регулятора в микроглии, а его нокдаун может ослабить нейровоспалительный ответ, тем самым замедляя патологическое прогрессирование ТСП. В данной работе изучалось, регулирует ли LINC0707 воспалительные реакции микроглии и вносит ли он вклад в патогенез ТСП.

Протокол

Данное исследование было одобрено Комитетом по этике Первой больницы Чжанцзякоу (номер одобрения 2024-KY-18). Все участники были проинформированы о целях исследования и потенциальных рисках и предоставили письменное информированное согласие перед включением в исследование. Образцы венозной крови собирали у здоровых добровольцев группы контроля во время плановых медицинских осмотров и у пациентов с SCI сразу после поступления в стационар. Лабораторные измерения проводились в клинической лаборатории больницы. Инструменты исследования, использованные в данном протоколе, перечислены в Таблице материалов.

1. Испытуемые
В период с января 2023 года по январь 2025 года на базе Первой больницы города Чжанцзякоу было отобрано в общей сложности 75 пациентов с ТСП. Критерии включения: подтвержденная с помощью компьютерной томографии (КТ) или магнитно-резонансной томографии (МРТ) ТСП и время от момента получения травмы до госпитализации ≤ 12 h. Критерии исключения: травмы или хирургические вмешательства на спинном или головном мозге в течение предыдущих 6 месяцев; тяжелые сердечно-сосудистые заболевания, включая инфаркт миокарда или аритмию; беременность или лактация; злокачественные новообразования, нарушение функций печени или почек, тяжелые цереброваскулярные заболевания или инфекционные заболевания.

Согласно стандартам неврологической классификации Американской ассоциации спинальных травм (ASIA)26, 75 пациентов с ТСП были разделены на группы с нормальной неврологической функцией (n = 21), неполным повреждением спинного мозга (n = 36) и полным повреждением спинного мозга (n = 18). Распределение локализации повреждений было следующим: шейный отдел — 36,0%; грудной отдел — 30,7%; поясничный отдел — 3,3%. Для формирования контрольной группы были случайным образом отобраны 30 здоровых добровольцев, соответствующих характеристикам исследуемой популяции. Для всех участников были собраны исходные клинические данные. Критерии включения для здоровых лиц включали: отсутствие в анамнезе травм спинного или головного мозга, операций или неврологических расстройств; отсутствие хронических воспалительных заболеваний, аутоиммунных расстройств или злокачественных новообразований; отсутствие тяжелых сердечно-сосудистых, печеночных или почечных заболеваний; отсутствие острых или хронических инфекций в течение последних 4 недель; отсутствие беременности или лактации; соответствие группе с ТСП по возрасту и полу.

Для оценки функциональной независимости в повседневной деятельности использовалась Мера функциональной независимости (FIM). Максимальный балл по шкале FIM составляет 126. Для оценки сенсорных и моторных функций использовались показатели тактильной чувствительности, акместизии и моторные показатели. Максимальные баллы за тактильную чувствительность и акместизию составили 12, а максимальный моторный балл — 10. Более низкие баллы указывают на более тяжелое неврологическое нарушение.

2. Культивирование клеток, создание модели и трансфекция
Иммортализованные клетки микроглии мыши линии BV2 были получены из Центра клеточных ресурсов Шанхайского института биотехнологии. Клетки культивировали в среде DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) с высоким содержанием глюкозы, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), пенициллином (10 U/mL) и стрептомицином (10 U/mL). Клетки содержали при 37 °C в увлажненном инкубаторе с содержанием 5% CO₂.

Для построения модели клетки BV2 стимулировали липополисахаридом (LPS) в концентрациях 0, 10, 20, 50, 10, 150 или 20 ng/mL в течение 24 h. Оптимальная концентрация LPS была выбрана на основании полученных экспериментальных результатов.

Для трансфекции клетки BV2 высевали в 6-луночные планшеты и трансфецировали по достижении соответствующей конфлюэнтности. Реагент для трансфекции использовали в объеме 1.5 µL на лунку согласно инструкции производителя. Через 6 ч культуральную среду заменяли свежей, после чего клетки культивировали еще 24 ч. Конструкт для нокдауна LINC0707, соответствующий отрицательный контроль, олигонуклеотид miR-145-5p и соответствующий контрольный олигонуклеотид использовали в концентрации 50 nM на лунку. Все эксперименты по трансфекции повторяли независимо не менее 5 раз, с 3 параллельными повторностями в каждом независимом эксперименте. Статистический анализ данных проводили на основе результатов не менее 5 независимых экспериментов.

3. ИФА
Супернатанты культур трансфицированных и стимулированных LPS клеток BV2 собирали путем центрифугирования при 12,0 × g в течение 10 мин, после чего уровни интерлейкина-1β (IL-1β), IL-6 и фактора некроза опухоли-α (TNF-α) измеряли с помощью соответствующих наборов для ИФА. Вкратце, анализ проводили путем последовательной инкубации с биотинилированным антителом, конъюгатом HRP-стрептавидина и субстратом TMB в соответствии с инструкциями производителя. Оптическую плотность регистрировали при 450 nm с помощью микропланшетного ридера. Уровни цитокинов определяли по стандартным кривым. Каждый образец измеряли в трех повторностях, всего было проведено 6 независимых экспериментов.

4. Измерение АФК
Уровни внутриклеточных АФК в клетках BV2, стимулированных LPS, измеряли с помощью набора для анализа активных форм кислорода. Вкратце, клетки инкубировали с 10 µmol/L DCFH-DA при 37 °C в течение 20 мин. После инкубации супернатант удаляли, а клетки промывали 3 раза фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) для удаления избытка внеклеточного зонда. Интенсивность флуоресценции измеряли на микропланшетном ридере при длинах волн возбуждения и эмиссии 48 nm и 525 nm соответственно. Относительные уровни АФК рассчитывали на основе интенсивности флуоресценции. Все образцы анализировали в трех повторностях, и весь эксперимент независимо повторяли не менее 5 раз.

5. Определение уровней малонового диальдегида, супероксиддисмутазы и глутатиона
Обработанные клетки BV2 собирали и готовили гомогенаты клеток. Образцы центрифугировали при 12,0 × g в течение 10 мин при 4 °C для получения супернатанта. Для определения уровней малонового диальдегида (MDA), супероксиддисмутазы (SOD) и глутатиона (GSH) в супернатантах клеток использовали коммерческие наборы для анализа согласно инструкциям производителя. Все образцы анализировали в трех повторностях, и весь эксперимент независимо повторяли не менее 5 раз.

6. Двойной люциферазный репортерный анализ
Фрагменты 3'-нетранслируемой области (3' UTR) LINC0707 и TRAF6, содержащие predicted сайты связывания miR-145-5p, вместе с соответствующими мутантными последовательностями, были клонированы в люциферазный репортерный вектор pmirGLO для создания репортерных конструкций дикого типа (WT-LINC0707 и WT-TRAF6) и мутантных конструкций (MUT-LINC0707 и MUT-TRAF6). Клетки BV2 подвергли ко-трансфекции репортерными конструкциями и олигонуклеотидами miR-145-5p, после чего культивировали в течение 24 h. Затем клетки собирали и измеряли активность люцифераз светлячка и Renilla с помощью планшетного ридера.

7. ОТ-ПЦР в реальном времени
Общая РНК была экстрагирована с использованием реагента для экстракции РНК. Качество РНК оценивали по показателю оптической плотности (OD).₂₆₀/OD₂₈₀ коэффициент, при этом значения от 1,8 до 2,0 считаются приемлемыми. Примерно 1 µg общей РНК была проведена обратная транскрипция в кДНК с использованием набора для обратной транскрипции. Экспрессия генов была количественно определена методом ОТ-кПЦР с использованием мастер-микса для ПЦР с SYBR Green. Обратную транскрипцию проводили при 42 °C в течение 15 мин, после чего следует инактивация обратной транскриптазы при 95 °C в течение 3 мин. Синтезированную кДНК хранили при −20 °C до проведения анализа. Количественную ПЦР в реальном времени проводили с предварительной денатурацией при 95 °C в течение 1 мин, затем 40 циклов денатурации при 95 °C в течение 5 с, затем отжиг и элонгация при 60 °C в течение 15 с. Сигналы флуоресценции регистрировали по окончании каждого этапа отжига и элонгации. Анализ кривых плавления проводили при 95 °C в течение 15 с, затем 60 °C в течение 1 мин. Относительные уровни экспрессии рассчитывали с использованием метода 2-⁻ΔΔCt метод. В качестве внутреннего контроля для нормализации экспрессии генов использовали GAPDH или 5S. Последовательности праймеров были следующими: LINC0707, прямой 5'-CCAACAGGGTATCAGAATTCTC-3' и обратный 5'-TGCTGACAATAGCCATTAGG-3'; miR-145-5p, прямой 5'-GCCGAGGTCCAGTTCCCA-3' и обратный 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'; TRAF6, прямой 5'-ATTACAACTGAGGTGCTTCT-3' и обратный 5'-GCATCTGGTTCTGTTATAGGA-3'; GAPDH, прямой 5'-ATCCCATCACCATCTTCCAGG-3' и обратный 5'-CGCCCCACTTGATTTTGG-3'; и 5S, прямой 5'-TCGTCTGATCTCGGAAGCTAA-3' и обратный 5'-AAGCCTACAGCACCCGGTAT-3'.

8. Статистический анализ
Статистический анализ проводили с использованием специализированного программного обеспечения. Нормальность распределения данных оценивали с помощью критерия Шапиро-Уилка; значение P > 0.05 свидетельствовало о нормальном распределении. Данные с нормальным распределением представляли в виде среднего значения ± SD, а данные с ненормальным распределением — в виде медианы (P25, P75). Для непрерывных переменных с нормальным распределением сравнение двух групп проводили с помощью t-критерия Стьюдента, а сравнение нескольких групп — с помощью однофакторного ANOVA с последующим апостериорным тестом Тьюки. Для данных с ненормальным распределением при сравнении двух групп использовали U-критерий Манна-Уитни, а при сравнении нескольких групп — критерий Краскела-Уоллиса. Для анализа категориальных переменных между группами использовали критерий хи-квадрат. Для оценки клинических факторов, связанных с экспрессией LINC0707, применяли одномерный и многомерный логистический регрессионный анализ. Непрерывные переменные дихотомизировали по медиане когорты (группа с высоким значением = 1; группа с низким значением = 0). Переменные, при которых P < 0.05 в одномерном логистическом регрессионном анализе, включали в многомерный логистический регрессионный анализ. Результаты представляли в виде отношения шансов (ORs) с 95% доверительными интервалами (CIs), где OR > 1 указывало на положительную связь, а OR < 1 — на отрицательную связь. Все эксперименты по изучению фенотипа клеток включали не менее 4 независимых биологических повторностей с 3 техническими повторностями для каждой биологической повторности. Значение P < 0.05 считали статистически значимым.

Результаты

Уровни LINC0707 в плазме крови были повышены у пациентов с ССП
Были проанализированы исходные клинические характеристики 30 здоровых добровольцев и 75 пациентов с ССП. По сравнению со здоровыми добровольцами, у пациентов с ССП наблюдались заметно более низкие показатели тактильной чувствительности, акместезии, двигательной функции и показатели по шкале функциональной независимости (FIM), что указывает на нарушение сенсорной и моторной функций. Кроме того, уровни провоспалительных цитокинов в сыворотке крови у пациентов с ССП были значительно выше, чем в контрольной группе здоровых добровольцев (Таблица 1, P < 0.01), что свидетельствует об усилении воспалительного ответа.

Перечень материалов и оборудованияHSНАУКАPзначение p
(n=30)(n=75)
Возраст (лет)45.83±10.0646.17±9.920.786
ИМТ (кг/м²2)22.82±1.5723.94±1.290.69
Пол (мужчина, n)18410.619
Курение (сущ.)11280.949
Употребление напитков (n)14330.804
Классификация ASIA при травмах спинного мозга (n)/
Полный SCI/18
Неполный SCI/36
Нормальное функционирование нейронов/21
Степень повреждения спинного мозга (n, %)/
Шейный позвонок/27 (36.0%)
Грудной позвонок/23 (30.7%)
Поясничный позвонок/25 (33.3%)
Балл тактильной чувствительности/53.42±22.12
Шкала оценки акместезии/53.39±24.68
Балл за выполнение упражнения/49.07±18.74
балл по шкале измерения функциональной независимости/71.33±19.41
ИЛ-1β (пг/мл)1.47±0.5252.21±11.32<0.001
ИЛ-6 (пг/мл)2.14±0.9788.47±23.52<0.001
ФНО-α (пг/мл)2.84±1.1361.09±18.24<0.001
СРБ (мг/л)1.42±0.6362.67±21.85<0.001
Сокращения: HS — здоровый доброволец; SCI — травма спинного мозга; BMI — индекс массы тела; ASIA — Американская ассоциация спинальных травм; FIM — мера функциональной независимости; IL — интерлейкин; TNF — фактор некроза опухоли; CRP — С-реактивный белок.

Таблица 1: Сравнение исходных клинических характеристик здоровых добровольцев и пациентов с травмой спинного мозга.В данной таблице приводится сравнение демографических характеристик, показателей неврологической функции, переменных, связанных с травмой, и уровней маркеров воспаления у здоровых добровольцев и пациентов с травмой спинного мозга. Сокращения: HS, здоровые добровольцы; SCI, травма спинного мозга; ASIA, Американская ассоциация спинальных травм; FIM, мера функциональной независимости; IL, интерлейкин; TNF, фактор некроза опухоли; CRP, С-реактивный белок.

Уровень экспрессии LINC0707 в плазме крови определяли методом RT-qPCR. По сравнению со здоровыми добровольцами, у пациентов с ТСП наблюдалось значительное повышение экспрессии LINC0707 в плазме (Рисунок 1A, P < 0.01). Анализ ROC-кривой (рабочей характеристики приемника) предоставил предварительные данные о том, что экспрессия LINC0707 может иметь определенную диагностическую ценность для дифференциации пациентов с ТСП и здоровых лиц (Рисунок 1B). Кроме того, экспрессия LINC00707 в плазме возрастала по мере увеличения степени тяжести ТСП по клиническим показателям (Рисунок 1C, P < 0.01). Корреляционный анализ показал, что экспрессия LINC0707 в плазме положительно коррелировала с уровнями IL-1β (r = 0.635, P < 0.01), IL-6 (r = 0.612, P < 0.01), TNF-α (r = 0.675, P < 0.01) и С-реактивного белка (CRP; r = 0.61, P < 0.01) (Рисунок 1D–G). Эти результаты свидетельствуют о том, что повышенная экспрессия LINC0707 связана с воспалительными реакциями у пациентов с ТСП.

Столбчатые диаграммы анализа экспрессии A, C; ROC-кривая B; диаграммы рассеяния корреляции D-G; сравнение научных данных.
Рисунок 1Экспрессия LINC0707 в плазме крови и ее корреляция с воспалительными факторами плазмы. (AЭкспрессия LINC0707 в плазме крови была выше у пациентов с травмой спинного мозга (ТСМ), чем у здоровых добровольцев. Статистический анализ проводился с использованием t-критерия для независимых выборок.BАнализ рабочей характеристики приемника (ROC-кривой) дал предварительное основание полагать, что экспрессия LINC0707 может быть полезна для дифференциации пациентов с травмой спинного мозга и здоровых добровольцев.C) Экспрессия LINC0707 в плазме крови увеличивалась по мере возрастания тяжести травмы спинного мозга (ТСМ) в соответствии с классификацией Американской ассоциации спинальных повреждений (ASIA). Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). (D–G) Экспрессия LINC0707 в плазме крови положительно коррелировала с уровнями воспалительных факторов. Статистический анализ проводили с помощью корреляционного анализа Пирсона. *P < 0,01 и **P < 0.01. Здоровые добровольцы, n = 30; пациенты с травмой спинного мозга (ТСМ), n = 75. Данные представлены как среднее значение ± SD. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Факторы, связанные с экспрессией LINC0707, были проанализированы с помощью одномерной и многомерной логистической регрессии
Для выявления факторов, связанных с экспрессией LINC0707, был проведен одномерный и многомерный логистический регрессионный анализ. Одномерный анализ показал, что с экспрессией LINC00707 связаны классификация SCI по шкале ASIA (OR = 3.912, 95% CI: 1.792–8.537, P < 0.01), показатель FIM (OR = 0.281, 95% CI: 0.108–0.729, P = 0.009) и уровень CRP (OR = 4.60, 95% CI: 1.724–12.271, P = 0.02). После поправки на потенциальные смешивающие переменные многомерная логистическая регрессия показала, что независимыми факторами, связанными с экспрессией LINC0707, являются классификация SCI по шкале ASIA (OR = 2.598, 95% CI: 1.08–6.203, P = 0.032), показатель FIM (OR = 0.303, 95% CI: 0.102–0.902, P = 0.032) и уровень CRP (OR = 3.202, 95% CI: 1.024–10.015, P = 0.045) (Таблица 2). Более тяжелая степень по классификации ASIA и повышенный уровень CRP были связаны с более высокой экспрессией LINC0707, тогда как более высокий показатель FIM был связан с более низкой экспрессией LINC00707. Эти взаимосвязи дополнительно подтверждают вероятность того, что LINC0707 участвует в патологическом процессе при SCI.

ПоказателиОдномерный регрессионный анализМногомерный регрессионный анализ
ОШ95% ДИP-значениеОШ95% ДИP-значение
Возраст 1.1760.475-2.9140.725
Пол1.3030.524-3.2400.57
Классификация ASIA при ТСП 3.9121.792-8.537<0.012.5981.08-6.2030.032
Классификация ASIA при ТСП0.580.497-1.4800.582
Показатель тактильной чувствительности0.850.343-2.1050.725
Показатель акместезии0.8540.345-2.1190.734
Показатель физической активности0.3920.153-1.060.051
Показатель FIM0.2810.108-0.7290.090.3030.102-0.9020.032
IL-1β1.1810.475-2.9350.72
IL-6 1.4530.585-3.6080.42
TNF-α1.3040.526-3.230.567
СРБ 4.61.724-12.2710.0023.2021.024-10.0150.045
Сокращения: ОШ, отношение шансов; ДИ, доверительный интервал; ASIA, Американская ассоциация спинальных травм; FIM, мера функциональной независимости; IL, интерлейкин; TNF, фактор некроза опухоли; СРБ, С-реактивный белок.

Таблица 2: Логистический регрессионный анализ факторов, связанных с экспрессией LINC0707.В этой таблице представлены результаты одномерного и многомерного логистического регрессионного анализа, использованного для выявления клинических факторов, связанных с экспрессией LINC0707 у пациентов с травмой спинного мозга. Результаты представлены в виде отношений шансов с 95% доверительным интервалом и соответствующими значениями P. Сокращения: OR, отношение шансов; CI, доверительный интервал; ASIA, Американская ассоциация спинальных травм; FIM, мера функциональной независимости; IL, интерлейкин; TNF, фактор некроза опухоли; CRP, С-реактивный белок.

Нокдаун LINC0707 уменьшал воспаление и окислительный стресс в клетках BV2, стимулированных LPS
Клетки BV2 подвергали воздействию возрастающих концентраций LPS (0, 10, 20, 50, 10, 150 или 20 ng/mL). Анализ RT-qPCR показал, что экспрессия LINC0707 значительно увеличивалась после обработки LPS в концентрациях 10, 150 и 20 ng/mL (Рисунок 2A, P < 0.01, n = 6). На основании этих данных и предыдущих отчетов27˒28 для создания модели SCI in vitro была выбрана концентрация LPS 10 ng/mL. По сравнению с контрольной группой, экспрессия LINC0707 была значительно повышена в клетках BV2, стимулированных LPS. Трансфекция si-LINC0707 эффективно подавляла экспрессию LINC00707 (Рисунок 2B, P < 0.001, n = 6).

Впоследствии были оценены эффекты нокдауна LINC0707 на воспаление и окислительный стресс. Стимуляция LPS значительно увеличивала секрецию IL-1β (Рисунок 2C, P < 0.01, n = 5), IL-6 (Рисунок 2D, P < 0.01, n = 5) и TNF-α (Рисунок 2E, P < 0.01, n = 5), а также уровни внутриклеточных ROS (Рисунок 2F, P < 0.001, n = 6) и содержание MDA (Рисунок 2G, P < 0.01, n = 5). Напротив, стимуляция LPS значительно снижала уровни антиоксидантных маркеров SOD (Рисунок 2H, P < 0.01, n = 6) и GSH (Рисунок 2I, P < 0.01, n = 5). Сайленсинг LINC00707 значительно снижал секрецию провоспалительных цитокинов и уровни маркеров проокислительного стресса, одновременно восстанавливая уровни антиоксидантов в стимулированных LPS клетках BV2. Эти результаты указывают на то, что нокдаун LINC0707 ослабляет индуцированные LPS воспалительные реакции и окислительный стресс в клетках BV2.

Серия столбчатых диаграмм, анализирующая экспрессию цитокинов и биохимические параметры в эксперименте с индукцией ЛПС.
Рисунок 2Влияние нокдауна LINC0707 на воспаление и окислительный стресс в клетках BV2, стимулированных ЛПС. Клетки BV2 стимулировали липополисахаридом (ЛПС) в концентрации 10 нг/мл.AЭкспрессия LINC0707 в клетках BV2, подвергнутых воздействию ЛПС в различных концентрациях, была измерена методом ОТ-ПЦР в реальном времени.BЭкспрессия LINC0707 была повышена в группе LPS и снизилась после трансфекции si-LINC0707.C–EМетод ИФА показал, что секреция провоспалительных факторов была повышена в группе LPS и снизилась после нокдауна LINC00707.F–GУровни активных форм кислорода (АФК) и содержание малонового диальдегида (МДА) были повышены в группе LPS и снизились после нокдауна LINC0707.H–I) Активность супероксиддисмутазы (СОД) и уровень восстановленного глутатиона (GSH) были снижены в группе LPS и повысились после нокдауна LINC0707. **P** < 0,01; ns — статистически не значимо. n ≥ 5. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). Данные представлены в виде среднего значения ± SD. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

LINC0707 функционирует как молекулярная губка для miR-145-5p
Для изучения молекулярного механизма, лежащего в основе биологической функции LINC00707, использовали базу данных ENCORI для прогнозирования потенциальных мишеней среди микроРНК. Биоинформатический анализ выявил комплементарные сайты связывания между LINC00707 и miR-145-5p (Рисунок 3A). Двойной люциферазный репортерный анализ показал, что люциферазная активность в конструкции WT-LINC0707 значительно снижалась при воздействии мимика miR-145-5p и повышалась при использовании ингибитора miR-145-5p. Напротив, ни один из вариантов обработки не повлиял на люциферазную активность в конструкции MUT-LINC0707 (Рисунок 3B, P < 0,01, n = 4), что подтверждает прямое взаимодействие между LINC00707 и miR-145-5p.

Анализ методом RT-qPCR показал, что экспрессия miR-145-5p в плазме крови была значительно снижена у пациентов с SCI по сравнению со здоровыми добровольцами (Рисунок 3C, P < 0.01). Кроме того, экспрессия LINC0707 отрицательно коррелировала с экспрессией miR-145-5p (Рисунок 3D, P < 0.001), а уровни miR-145-5p в плазме прогрессивно снижались по мере увеличения степени тяжести SCI (Рисунок 3E, P < 0.001). In vitro экспрессия miR-145-5p была значительно снижена в стимулированных LPS клетках BV2 по сравнению с контрольными клетками, тогда как нокдаун LINC0707 восстанавливал экспрессию miR-145-5p (Рисунок 3F, P < 0.01, n = 6). Эти результаты позволяют предположить, что LINC00707 функционирует как конкурирующая эндогенная РНК (ceRNA), секвестрируя miR-145-5p и тем самым регулируя ее экспрессию в ходе патологического прогрессирования SCI.

Анализ экспрессии генов; miR-145-5p, люциферазный анализ, корреляционный график; столбчатые диаграммы, выравнивание последовательностей.
Рисунок 3LINC0707 функционирует как молекулярная губка для miR-145-5p. (A) База данных ENCORI предсказала комплементарные последовательности связывания между LINC00707 и miR-145-5p. (B) Взаимодействие между LINC0707 и miR-145-5p было подтверждено с помощью двухлюциферазного репортерного анализа. Статистический анализ проводили с использованием двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). (C) Метод RT-qPCR показал, что экспрессия miR-145-5p в плазме крови была снижена у пациентов с травмой спинного мозга. Статистический анализ проводили с помощью t-критерия для независимых выборок. (D) Экспрессия LINC0707 отрицательно коррелировала с экспрессией miR-145-5p у пациентов с травмой спинного мозга. Статистический анализ проводился с использованием корреляционного анализа Пирсона. (E) Экспрессия miR-145-5p в плазме крови снижалась по мере увеличения степени тяжести ТСП согласно классификации ASIA. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). (F) Экспрессия miR-145-5p была снижена в группе LPS, повысилась после трансфекции si-LINC0707 и снизилась после трансфекции ингибитором miR-145-5p. Статистический анализ был выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным критерием Тьюки (HSD). P < 0,05, *P < 0,01, и **P < 0,01; ns — статистически не значимо. Здоровые добровольцы, n = 30; пациенты с ТСП, n = 75; клеточные эксперименты, n ≥ 4. Данные представлены как среднее значение ± SD. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

Ингибирование miR-145-5p усиливало воспаление и окислительный стресс в клетках BV2, стимулированных LPS
Для изучения роли miR-145-5p клетки BV2 трансфицировали ингибитором miR-145-5p или соответствующим отрицательным контролем. Затем оценивали уровни воспалительных цитокинов и маркеров окислительного стресса. По сравнению с группой отрицательного контроля ингибитора, ингибирование miR-145-5p значительно увеличивало секрецию IL-1β (Рисунок 4A, P < 0.01, n = 5), IL-6 (Рисунок 4B, P < 0.001, n = 5) и TNF-α (Рисунок 4C, P < 0.01, n = 5). Кроме того, уровни внутриклеточных ROS (Рисунок 4D, P < 0.01, n = 6) и содержание MDA (Рисунок 4E, P < 0.01, n = 5) значительно повысились, в то время как уровни SOD (Рисунок 4F, P < 0.01, n = 6) и GSH (Рисунок 4G, P < 0.001, n = 5) значительно снизились. Эти результаты показывают, что ингибирование miR-145-5p отменяет защитные эффекты нокдауна LINC0707 при вызванном LPS воспалении и окислительном стрессе в клетках BV2.

Столбчатые диаграммы, сравнивающие уровни экспрессии белков при обработке ЛПС в исследовании по ингибированию генов.
Рисунок 4Влияние ингибирования miR-145-5p на воспаление и окислительный стресс в клетках BV2. (А–СМетод ИФА показал, что секреция провоспалительных факторов значительно увеличилась после трансфекции ингибитором miR-145-5p.D–EУровни активных форм кислорода (АФК) и содержание малонового диальдегида (МДА) значительно увеличились после трансфекции ингибитором miR-145-5p.F–G) Активность супероксиддисмутазы (СОД) и уровни глутатиона (GSH) значительно снизились после трансфекции ингибитором miR-145-5p. **P** < 0,01. n ≥ 5. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). Данные представлены в виде среднего значения ± стандартного отклонения (SD). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

TRAF6 был идентифицирован как ген-мишень miR-145-5p
База данных miRDB предсказала TRAF6 в качестве потенциальной мишени miR-145-5p. Были выявлены комплементарные последовательности связывания между 3′-UTR TRAF6 и miR-145-5p (Рисунок 5A). Анализ с использованием двойного люциферазного репортера показал, что люциферазная активность в конструкте WT-TRAF6 значительно снижалась при воздействии мимика miR-145-5p и повышалась при воздействии ингибитора miR-145-5p. Напротив, ни одно из воздействий не повлияло на люциферазную активность в конструкте MUT-TRAF6 (Рисунок 5B, P < 0,01, n = 4), что подтверждает, что TRAF6 является прямой мишенью miR-145-5p.

Анализ методом RT-qPCR показал, что экспрессия мРНК TRAF6 в плазме крови была значительно повышена у пациентов с SCI (Рисунок 5C, P < 0.01). Экспрессия TRAF6 отрицательно коррелировала с экспрессией miR-145-5p (Рисунок 5D, P < 0.01), а уровни мРНК TRAF6 в плазме повышались по мере увеличения тяжести SCI (Рисунок 5E, P < 0.001). In vitro экспрессия TRAF6 была значительно повышена в стимулированных LPS клетках BV2 по сравнению с контрольной группой, но существенно снижалась после нокдауна LINC00707 (Рисунок 5F, P < 0.01, n = 6). Напротив, ингибирование miR-145-5p восстанавливало экспрессию TRAF6 (Рисунок 5G, P < 0.01, n = 6). Эти результаты указывают на то, что LINC0707 регулирует экспрессию TRAF6 через сигнальный путь miR-145-5p.

Схема регуляции экспрессии генов с участием miR-145-5p; включает уравнения, графики, данные.
Рисунок 5TRAF6 является геном-мишенью miR-145-5p. (AБаза данных miRDB предсказала наличие комплементарных последовательностей связывания между TRAF6 и miR-145-5p.B) Двойной люциферазный репортерный анализ подтвердил наличие мишеневых отношений между TRAF6 и miR-145-5p. Статистический анализ проводили с помощью двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). (CRT-qPCR показал, что экспрессия TRAF6 в плазме крови была повышена у пациентов с травмой спинного мозга. Статистический анализ проводили с помощью t-критерия для независимых выборок.DЭкспрессия TRAF6 отрицательно коррелировала с экспрессией miR-145-5p в плазме крови пациентов с травмой спинного мозга. Статистический анализ проводился с использованием корреляционного анализа Пирсона.E) Экспрессия TRAF6 в плазме крови увеличивалась по мере повышения степени тяжести травмы спинного мозга согласно классификации ASIA. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). (FЭкспрессия TRAF6 повышалась в клетках BV2, стимулированных LPS, и снижалась после нокдауна LINC00707. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD).GЭкспрессия TRAF6 повышалась после ингибирования miR-145-5p. Статистический анализ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Тьюки (HSD). P < 0,05, *P < 0,01, и **P < 0,01; ns — статистически не значимо. Здоровые добровольцы, n = 30; пациенты с ТСП, n = 75; эксперименты на клетках, n ≥ 4. Данные представлены как среднее значение ± SD. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.

ДОСТУПНОСТЬ ДАННЫХ:
Наборы данных, созданные и/или проанализированные в настоящем исследовании, доступны в репозитории Zenodo по ссылке: https://doi.org/10.5281/zenodo.21470454.

Обсуждение

Травма спинного мозга (ТСМ) представляет собой тяжелое травматическое поражение центральной нервной системы, которое приводит к нарушению или полной потере нервной проводимости через спинной мозг, что влечет за собой пожизненную моторную, сенсорную и вегетативную дисфункцию, а также глубокие физиологические и психологические последствия29˒30. Степень тяжести этих нарушений обычно возрастает по мере увеличения масштаба ТСМ. В настоящем исследовании экспрессия LINC0707 в плазме была повышена у пациентов с ТСМ и положительно коррелировала с уровнями циркулирующих провоспалительных цитокинов, что указывает на потенциальную роль LINC0707 в воспалении и окислительном стрессе, связанных с ТСМ. Основываясь на этих клинических данных, мы далее изучили регуляторную роль LINC0707 в процессах воспаления и окислительного стресса в клетках BV2, обработанных LPS, в контексте патогенеза ТСМ.

LINC00707 вовлечен в различные биологические процессы посредством регуляции множества сигнальных путей31. Помимо регуляции пролиферации, апоптоза, миграции и инвазии клеток, было показано, что LINC00707 участвует в воспалительных реакциях и окислительном стрессе18˒32˒33. В предыдущих исследованиях сообщалось о повышенной экспрессии LINC0707 при раке легких34, молочной железы35, шейки матки36 и печени37, где он способствует прогрессированию заболевания путем регуляции нижележащих молекулярных мишеней. Кроме того, сайленсинг LINC0707 способствует остеогенной дифференцировке мезенхимальных стволовых клеток костного мозга через регуляцию miR-103a-3p38. Zou et al. далее продемонстрировали, что LINC0707 усиливает вызванные LPS воспалительные реакции в клетках MRC-5, что подтверждает его провсполительную роль3. В соответствии с этими данными, настоящее исследование показало, что экспрессия LINC00707 была значительно повышена в стимулированных LPS клетках BV2, тогда как нокдаун LINC0707 снижал выработку провоспалительных цитокинов и маркеров окислительного стресса. Эти результаты дополнительно подтверждают участие LINC00707 в реакциях на воспаление и окислительный стресс.

Также сообщалось, что LINC0707 функционирует как конкурирующая эндогенная РНК (ceRNA), регулируя miR-145-5p при нескольких патологических состояниях, включая ревматическую болезнь сердца39, рак мочевого пузыря40 и остеогенную дифференцировку41. Предыдущие исследования показали, что miR-145-5p оказывает защитное действие при ТСХ, подавляя воспаление и окислительный стресс42˒43, а также стимулируя ангиогенез и восстановление нервной ткани4˒45. В соответствии с этими наблюдениями, настоящее исследование показало, что экспрессия miR-145-5p в плазме крови была снижена у пациентов с ТСХ и в клетках BV2, стимулированных LPS. Было дополнительно подтверждено, что LINC00707 напрямую взаимодействует с miR-145-5p, а сайленсинг LINC0707 восстанавливал экспрессию miR-145-5p. Кроме того, ингибирование miR-145-5p отменяло защитные эффекты нокдауна LINC0707 в отношении воспалительных реакций и окислительного стресса. Эти результаты позволяют предположить, что LINC0707 может способствовать прогрессированию ТСХ путем регулирования опосредованных miR-145-5p воспалительных реакций и реакций на окислительный стресс.

Предыдущие исследования показали, что TRAF6 играет важную роль при заболеваниях центральной нервной системы46. Данные также указывают на то, что ингибирование TRAF6 может значительно облегчить течение ТСХ47˒48. В настоящем исследовании TRAF6 был дополнительно идентифицирован как прямая мишень miR-145-5p. Экспрессия TRAF6 была значительно повышена у пациентов с ТСХ и в клетках BV2, стимулированных LPS. Кроме того, нокдаун LINC0707 снижал экспрессию TRAF6, тогда как ингибирование miR-145-5p восстанавливало экспрессию TRAF6. Эти результаты позволяют предположить, что LINC0707 может регулировать экспрессию TRAF6 через miR-145-5p при ТСХ.

Данное исследование позволяет предположить, что LINC0707 может влиять на микроглиальные воспалительные ответы и повреждения, вызванные окислительным стрессом при травме спинного мозга (SCI), регулируя сигнальную ось miR-145-5p/TRAF6. Этот результат согласуется с предыдущим отчетом Zhu et al., в котором было показано, что нокдаун LINC0707 облегчал вызванное LPS воспаление и апоптоз в клетках PC-12; однако лежащий в основе их исследования механизм включал ось miR-30a-5p/Neurod118. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что LINC0707 может действовать не через одну мишень miRNA, а через различные сети miRNA в зависимости от типа клеток, способствуя тем самым патологическим процессам при SCI.

Данное исследование имеет несколько ограничений. Во-первых, оценивалась только экспрессия мРНК TRAF6, в то время как экспрессия белка не изучалась. Будущие исследования должны включать валидацию на уровне белка, например, с помощью вестерн-блоттинга, чтобы далее охарактеризовать регуляторную связь между LINC0707, miR-145-5p и TRAF6. Во-вторых, данное исследование проводилось исключительно на клеточном уровне с использованием модели микроглии BV2, стимулированной LPS, без валидации in vivo. Учитывая сложность микроокружения при травме спинного мозга (ТСМ), полученные результаты могут не полностью воспроизводить патофизиологические условия in vivo. Предстоит подтвердить, оказывает ли LINC0707 аналогичные провоспалительные эффекты на животных моделях ТСМ. В последующих работах будут созданы животные модели ТСМ для подтверждения регуляторной роли LINC00707 и лежащих в ее основе молекулярных механизмов. В-третьих, хотя наши результаты указывают на то, что LINC0707 воздействует на воспаление через сигнальный путь miR-145-5p/TRAF6, остается неизвестным, функционирует ли LINC0707 исключительно как «губка» для специфических микроРНК или также напрямую связывается с определенными белками. Для уточнения этих механистических деталей требуются дальнейшие исследования. В-четвертых, анализ ROC-кривых основывался на данных одного медицинского центра и относительно небольшого количества пациентов. Это могло привести к возникновению систематической ошибки, что делает полученные результаты предварительными. Для подтверждения диагностического потенциала выявленных биомаркеров необходимы более масштабные многоцентровые исследования с большим количеством пациентов.

Результаты данного исследования позволяют предположить, что LINC0707 может служить потенциальным исследовательским плазменным биомаркером и терапевтической мишенью при травмах спинного мозга (ТСМ). Однако внедрение этих результатов в клиническую практику потребует ряда дополнительных этапов. Во-первых, потенциальную диагностическую ценность LINC0707 в плазме крови следует оценить на более крупных многоцентровых когортах, независимых валидационных когортах, а также в соответствующих контрольных группах с травмами или воспалительными процессами. Клиническое обследование и радиологическое исследование остаются основными методами диагностики ТСМ. Во-вторых, терапевтический потенциал воздействия на LINC0707 должен быть изучен на животных моделях для оценки его эффективности и безопасности. В конечном итоге модуляция сигнального пути LINC00707/miR-145-5p/TRAF6 может предложить новый подход к уменьшению нейровоспаления и окислительного стресса у пациентов с ТСМ, хотя предстоит проделать значительную работу, чтобы преодолеть разрыв между фундаментальными исследованиями и клиническим применением.

В целом, экспрессия LINC0707 и TRAF6 в плазме крови была повышена, тогда как экспрессия miR-145-5p была снижена у пациентов с SCI и в стимулированных LPS клетках BV2. Нокдаун LINC0707 ослаблял воспалительные реакции и окислительный стресс через сигнальную ось miR-145-5p/TRAF6, что позволяет предположить, что данный регуляторный путь может быть потенциальной терапевтической мишенью при SCI.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Данная работа была поддержана в рамках Научно-исследовательского проекта в области медицины провинции Хэбэй (грант № 20251479).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
микроцентрифужная пробирка объемом 1,5 млKIRGENKG211Полипропиленовая пробирка с защелкивающейся крышкой, без ДНКаз/РНКаз, непирогенная, максимальная центрифужная сила 20 00 × g, для центрифугирования и хранения образцов РНК/белков.
6-луночный планшет для культивирования клетокCorning3516стерильный полистирольный планшет с плоским дном, обработанный для культивирования клеток (TC-treated), в индивидуальной упаковке; объем лунки составляет 16,8 мл, площадь поверхности для роста — 9,5 см²
Игла для забора кровиBecton, Dickinson and Company367283Одноразовая игла для забора крови BD Vacutainer. Двусторонняя конструкция иглы: один конец предназначен для венепункции, а другой соединяется с держателем и вакуумной пробиркой для забора крови в несколько пробирок. Силиконовое покрытие для минимизации дискомфорта пациента при введении.
Пробирки для забора кровиBecton, Dickinson and Company367605Вакуумные пробирки для забора крови BD Vacutainer. Разные цвета крышек указывают на наличие различных добавок, соответствующих конкретным лабораторным исследованиям.
иммортализованная линия микроглиальных клеток мыши BV2Центр клеточных ресурсов Шанхайского института биотехнологииRRID: CVCL_0182Иммортализованная линия клеток микроглии мыши, стабильно экспрессирующая специфические маркеры микроглии (Iba1, CD1b, F4/80). При стимуляции LPS клетки BV2 секретируют провоспалительные цитокины (IL-1β, ИЛ-6, ФНО-α) и накапливают внутриклеточные АФК, МДА для имитации воспалительной активации микроглии in vivo после повреждения спинного мозга. Клетки культивируют в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы, дополненной 10% FBS и 1× пенициллин-стрептомицин, выдерживаемый при 37 °C с 5% CO2 увлажненный инкубатор; пассаж при достижении 70% конфлюэнтности–конфлюэнтность 80% во избежание гиперактивации.
Набор для анализа содержания малонового диальдегида (МДА) в клеткахНанкинский институт биоинженерии ЦзяньчэнA03-4-2Колориметрический набор на основе микропланшетов для количественного определения клеточного малонового диальдегида, маркера перекисного окисления липидов. MDA при нагревании реагирует с тиобарбитуровой кислотой (TBA) с образованием красных аддуктов; абсорбция регистрируется при 532 нм с помощью микропланшетного спектрофотометра. Набор оптимизирован для образцов клеточных лизатов, обеспечивает высокопроизводительный анализ в 96-луночном формате, а линейный диапазон количественного определения охватывает низкие и умеренные уровни окисления липидов в микроглии.
CO2 инкубаторThermo Scientific3111Увлажненный CO2 с водяной рубашкой2 инкубатор с внутренним объемом 184 л, ИК-контроль CO22 датчик, система фильтрации воздуха HEPA для минимизации микробиологического загрязнения. Поддерживает стабильную среду культивирования при 37 °C, 5% CO₂2 и насыщенная влажность для длительного культивирования адгезивных клеток.
Набор для анализа активности репортерных генов с использованием двойной люциферазыBeyotime BiotechnologyRG028Данный набор для двойного люциферазного анализа позволяет проводить последовательное количественное определение люциферазы светлячка и люциферазы Renilla в клеточных лизатах. Сначала измеряют сигнал люциферазы светлячка с использованием субстрата люциферина; последующий реагент для детектирования Renilla содержит мощный гаситель, который устраняет >9,9% остаточной люминесценции светлячка, что обеспечивает чистоту считывания сигнала Renilla при использовании субстрата целентеразина. Набор включает специальный буфер для лизиса адгезивных клеток, совместимый с люминометром для 96-луночных микропланшетов. Реагент для светлячка представляет собой готовую жидкую смесь для непосредственного использования; значения люминесценции светлячка и Renilla регистрируются последовательно для расчета нормализованной относительной люциферазной активности (отношение Firefly/Renilla) с целью валидации мишеней цеРНК.
Модифицированная среда Игла-ДулбеккоGibco11995065DMEM представляет собой широко используемую базальную среду для поддержания роста многих различных типов клеток млекопитающих. Данный состав содержит высокую концентрацию глюкозы, L-глутамин, феноловый красный и пируват натрия. Среда требует добавления вспомогательных компонентов, обычно 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) и 5–10% CO2 среда для поддержания физиологического значения pH.
Фетальная бычья сывороткаВСЕ ЗЕЛЕНОЕ13011-8611FBS премиум-класса, с низким содержанием эндотоксинов и без микоплазмы & отрицательный по бактериофагам, добавляемый в DMEM в концентрации 10% по объему для поддержания роста клеток.
GraphPad Prism версии 9GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, СШАН/ДПрограммное обеспечение для построения научных графиков и статистического анализа, специализированное для данных экспериментов с клетками in vitro. Все необработанные значения абсорбции qPCR, ELISA, окислительного стресса и люминесценции в двойном люциферазном анализе были импортированы в Prism 9 для проверки нормальности распределения, проведения параметрических/непараметрических сравнений групп, построения всех количественных рисунков и расчета среднего значения ± СО, точные значения P и 95% ДИ, а также экспорт рисунков с высоким разрешением (30 dpi), соответствующих стандартам журнальных публикаций. Исходные файлы проектов .prism для всех графиков размещены в общедоступном репозитории данных в соответствии с требованиями.
IBM SPSS Statistics версия 26.0IBM Corporation, Армонк, штат Нью-Йорк, СШАН/ДКомплексный пакет статистического программного обеспечения, используемый для сортировки исходных данных клинических образцов, проверки распределения на нормальность (критерий Шапиро-Уилка), проведения независимого/непарного t-критерия, однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с поправкой Тьюки’с поправкой на множественные сравнения, непараметрическим U-критерием Манна — Уитни, а также расчетом точных значений P и 95% доверительных интервалов для всех количественных наборов данных по человеку и клеточным культурам. Все клинические демографические и лабораторные данные пациентов обрабатывались и анализировались на этой платформе.
ИЛ-1β Набор для ИФА SimpleStepAbcamab25730Данный набор для проведения однократного сэндвич-колориметрического ИФА основан на запатентованной технологии SimpleStep, позволяющей выполнить всю процедуру анализа в течение 90 минут. Набор предназначен для количественного определения интерлейкина-1 крысы.β в супернатанте клеточных культур, сыворотке, образцах плазмы с ЭДТА/цитратом/гепарином. Чувствительность обнаружения достигает 26,58 пг/мл при линейном диапазоне количественного определения 54,69–350 пг/мл. В комплект входит предварительно покрытый разломный 8-луночный стрип-микропланшет. Сигналы абсорбции регистрируются при 450 нм с помощью микропланшетного ридера для расчета концентрации IL-1β концентрация
Набор для SimpleStep ELISA на ИЛ-6Abcamab234570Набор для сэндвич-колориметрического SimpleStep-ELISA, оптимизированный для количественного определения интерлейкина-6 (IL-6) крысы в супернатанте культур клеток, сыворотке, а также в образцах плазмы с цитратом, ЭДТА или гепарином. В наборе используется одноэтапная инкубация и однократная промывка, что сокращает общее время анализа до 90 минут; чувствительность обнаружения составляет 43 пг/мл, а диапазон линейного количественного определения — от 125 пг/мл до 80 пг/мл. В комплект входит предварительно покрытый разломный 8-луночный стрип-микропланшет; для окончательного расчета концентрации IL-6 значения оптической плотности измеряются при 450 нм с помощью микропланшетного спектрофотометра.
Многолуночный планшет LightCycler на 96 лунок, белыйRoche LifeScience, Швейцария4729692001Белые полипропиленовые 96-луночные реакционные планшеты с полуюбкой, специально оптимизированные для системы ПЦР в реальном времени LightCycler 96. Белые стенки лунок снижают фоновые помехи флуоресценции и усиливают отражение сигнала, что повышает чувствительность детектирования транскриптов с низким уровнем экспрессии. Однородная конструкция с тонкими стенками гарантирует стабильную теплопроводность во всех лунках; планшеты совместимы с объемами реакционной смеси от 10 до 50 μLНе содержит ДНКаз/РНказ и пирогенов; подходит для анализов по амплификации кДНК, полученной из РНК.
Реагент для трансфекции LipofectamineTM 30Thermo Fisher ScientificL30015Реагент для трансфекции на основе липидных наночастиц в сочетании с усилителем P30 обеспечивает высокоэффективную трансфекцию микроглии BV2 с помощью siRNA или плазмид при низкой цитоксичности.
Набор для синтеза первой цепи кДНК длинных некодирующих РНК lnRcute lncRNA First-Strand cDNA Synthesis KitTIANGENKR202-02Данный набор специально оптимизирован для обратной транскрипции длинных некодирующих РНК (днкРНК) с низкой экспрессией, вариабельным содержанием ГЦ-пар и сложной вторичной структурой. В состав набора входит отдельный буфер для удаления гДНК, позволяющий устранить контаминацию геномной ДНК перед обратной транскрипцией, а также специализированная смесь праймеров lnR-RT для обогащения полноразмерными матрицами днкРНК. Модифицированная обратная транскриптаза обеспечивает эффективный синтез длинных цепей кДНК из общего количества РНК в диапазоне от 10 нг до 2 нг.
Набор для количественной ПЦР-детекции длинных некодирующих РНК lnRcute lncRNA qPCR Detection Kit (SYBR Green)TIANGENFP402Специализированная смесь для количественной ПЦР на основе SYBR Green для количественного определения днкРНК. ДНК-полимераза с «горячим стартом», опосредованным антителами, обеспечивает высокую специфичность амплификации; компоненты H-конкурента устраняют влияние вторичных структур высоко-ГЦ-содержащих матриц днкРНК. Смесь совместима с кДНК, полученной с помощью набора для обратной транскрипции днкРНК lnRcute, и подходит для количественного определения относительной экспрессии низкопийных днкРНК.
олигонуклеотиды miR-145-5pGeneralbiol (Ухань, Китай)Нет данныхСинтетический мимик miR-145-5p, ингибитор и соответствующие олигонуклеотиды отрицательного контроля, использованные для модуляции активности miR-145-5p в клетках BV2. Применялись в анализах экспрессии, воспаления, окислительного стресса и в двухлюциферазном репортерном анализе.
Набор для синтеза первой цепи кДНК микроРНК miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA KitTIANGENKR21-02Для упрощения рабочего процесса используется однопробирочная реакция, сочетающая полиаденилирование и обратную транскрипцию. Смесь ферментов содержит поли(А)-полимеразу *E. coli*, обратную транскриптазу, дефицитную по РНказе H, и ингибитор РНказы, что обеспечивает специфическое воздействие на зрелые одноцепочечные миРНК и позволяет избежать интерференции при амплификации пре-миРНК, имеющих структуру «шпильки». Метод подходит для миРНК, экстрагированных из клеточного лизата, плазмы и образцов тканей.
Набор для qPCR-детекции микроРНК miRcute Plus miRNA qPCR Detection Kit (SYBR Green)TIANGENFP41Готовый состав (премикс) SYBR Green, оптимизированный для количественного определения зрелых микроРНК и полностью совместимый с продуктами обратной транскрипции miRcute. Буферная система повышает эффективность отжига праймеров для коротких ампликонов микроРНК, обеспечивает стабильные флуоресцентные сигналы и высокую чувствительность при детектировании слабо экспрессируемых микроРНК. Для нормализации в качестве внутреннего контроля обычно используется малая ядерная РНК U6 (U6 snRNA).
Раствор пенициллина и стрептомицина (10×)Beyotime BiotechnologyC022Стерильно отфильтрованная смесь, содержащая 10 00 ЕД/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина; рабочий разведение 1:10 в культуральной среде для предотвращения бактериальной контаминации.
Набор для анализа активных форм кислорода с разбавителемBeyotime BiotechnologyS034MВ данном наборе используется флуоресцентный зонд DCFH-DA для количественного определения внутриклеточных активных форм кислорода (АФК). DCFH-DA проникает через клеточную мембрану и гидролизуется внутриклеточными эстеразами до DCFH, который окисляется АФК с образованием флуоресцентного DCF. Набор совместим с 96-луночными микропланшетами и флуоресцентными планшетными ридерами для высокопроизводительного анализа (Ex = 48 нм, Em = 525 нм). В комплект входят специальный разбавитель зонда и реагент положительного контроля Rosup для стабилизации сигналов окрашивания; набор подходит для определения окислительного стресса в адгезивных микроглиях BV2 без лизиса клеток.
Набор для анализа восстановленного глутатиона (GSH)Нанкинский институт биоинженерии ЦзяньчэнA06-1-2Колориметрический набор для микропланшетов для определения восстановленного глутатиона (GSH), основного внутриклеточного антиоксиданта. GSH реагирует с дитионитробензойной кислотой (DTNB) с образованием желтого хромогенного продукта, абсорбция которого регистрируется при 405 нм на микропланшетном ридере. Набор адаптирует стандартный протокол для пробирок под высокопроизводительный анализ в 96-луночном микропланшете для исследования антиоксидантов в клеточных лизатах.
si-LINC0707GenePharma (Шанхай, Китай)Нет данныхМалая интерферирующая РНК, разработанная для снижения экспрессии LINC0707 в клетках BV2. Используется в экспериментах по потере функции для оценки влияния нокдауна LINC00707 на воспалительные реакции, окислительный стресс, экспрессию miR-145-5p и экспрессию TRAF6.
si-LINC0707 NCGenePharma (Шанхай, Китай)Нет данныхНетаргетная малая интерферирующая РНК, используемая в качестве отрицательного контроля при трансфекции si-LINC0707. Применяется для контроля неспецифических эффектов процедуры трансфекции и воздействия siRNA.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGEN4992777Универсальная смесь для количественной ПЦР с SYBR Green для относительного количественного определения мРНК, содержащая Taq-полимеразу с «горячим стартом», дНТФ, SYBR Green I и референсный краситель ROX для нормализации флуоресценции. Характеризуется низким уровнем неспецифической амплификации и стабильной эффективностью амплификации; широко применяется для количественного определения целевых генов мРНК (TRAF6, GAPDH и др.).
Малая настольная центрифуга Thermo ScientificTM SorvallTM ST 8Thermo Scientific75200709Классический выбор для клинических лабораторий, позволяющий обрабатывать до 24 × 5/7 мл пробирок для сбора крови за один цикл. Серия R представляет собой охлаждаемую версию, которая обеспечивает более надежную защиту образцов, требующих центрифугирования при низких температурах.
Набор для синтеза первой цепи кДНК TIANScript IITIANGENGKR107-02Разработан для общей обратной транскрипции мРНК с целью получения длинных кДНК размером до 12 т.п.н. Препарат укомплектован праймерами Oligo (dT) 15 и случайными гексамерами для гибкого выбора стратегии праймирования. Модифицированная обратная транскриптаза M-MLV эффективно синтезирует цепь через участки с высоким содержанием ГЦ-пар и сложные вторичные структуры мРНК, обеспечивая широкую совместимость с последующей амплификацией мРНК методом кПЦР.
ФНО-α Набор для SimpleStep ELISAAbcamab236712Набор для проведения экспресс-анализа SimpleStep методом сэндвич-ИФА с одним этапом промывки, оптимизированный для количественного определения фактора некроза опухоли крысы-α (ФНО-α) в супернатанте клеточной культуры, сыворотке и различных образцах плазмы. Общая продолжительность анализа составляет 90 мин, при этом сверхвысокая чувствительность достигает 1,04 пг/мл, а линейный диапазон детектирования составляет от 15,63 пг/мл до 100 пг/мл. Оснащен съемными 8×предварительно покрытая планшетка на 12 лунок; значения оптической плотности при 450 нм регистрируют для конечного определения TNF-α количественный расчет
Набор для определения общей супероксиддисмутазы (T-SOD)Нанкинский институт биоинженерии ЦзяньчэнA01-3-2Набор для хромогенного микропланшетного анализа WST-1 для определения общей ферментативной активности СОД. СОД устраняет супероксид-анионные радикалы и ингибирует реакцию восстановления WST-1. Для расчета активности регистрируют оптическую плотность при 450 нм с помощью микропланшетного ридера. Подходит для анализа гомогенатов клеток, сыворотки и образцов тканей; характеризуется стабильным развитием окраски и высокой воспроизводимостью для оценки антиоксидантной способности.
реагент TRIzolThermo Fisher Scientific15596018Однофазный фенол-гуанидин-изотиоцианатный реагент для одноэтапного выделения тотальной РНК из культивируемых клеток микроглии; позволяет одновременно экстрагировать ДНК и белок из идентичных образцов.

Ссылки

  1. Trueblood CT, Singh A, Cusimano MA, Hou S. Autonomic dysreflexia in spinal cord injury: mechanisms and prospective therapeutic targets. Neuroscientist. 2024;30(5):597-611.
  2. Anderson MA, Squair JW, Gautier M, Hutson TH, Kathe C, Barraud Q, et al. Natural and targeted circuit reorganization after spinal cord injury. Nat Neurosci. 2022;25(12):1584-96.
  3. Liu Y, Yang X, He Z, Li J, Li Y, Wu Y, et al. Spinal cord injury: global burden from 1990 to 2019 and projections up to 2030 using Bayesian age-period-cohort analysis. Front Neurol. 2023;14:1304153. doi:10.3389/fneur.2023.1304153.
  4. Sekhon LH, Fehlings MG. Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury. Spine (Phila Pa 1976). 2001;26(24 Suppl):S2-12.
  5. Chan BC, Cadarette SM, Wodchis WP, Krahn MD, Mittmann N. The lifetime cost of spinal cord injury in Ontario, Canada: a population-based study from the perspective of the public health care payer. J Spinal Cord Med. 2019;42(2):184-93.
  6. Van Broeckhoven J, Sommer D, Dooley D, Hendrix S, Franssen A. Macrophage phagocytosis after spinal cord injury: when friends become foes. Brain. 2021;144(10):2933-45.
  7. Xiao S, Zhong N, Yang Q, Li A, Tong W, Zhang Y, et al. Aucubin promoted neuron functional recovery by suppressing inflammation and neuronal apoptosis in a spinal cord injury model. Int Immunopharmacol. 2022;111:109163. doi:10.1016/j.intimp.2022.109163.
  8. Li F, Wang Y, Zheng K. Microglial mitophagy integrates the microbiota-gut-brain axis to restrain neuroinflammation during neurotropic herpesvirus infection. Autophagy. 2023;19(2):734-6.
  9. Beattie MS. Inflammation and apoptosis: linked therapeutic targets in spinal cord injury. Trends Mol Med. 2004;10(12):580-3.
  10. Brennan FH, Li Y, Wang C, Ma A, Guo Q, Li Y, et al. Microglia coordinate cellular interactions during spinal cord repair in mice. Nat Commun. 2022;13(1):4096. doi:10.1038/s41467-022-31797-0.
  11. Kwon HS, Koh SH. Neuroinflammation in neurodegenerative disorders: the roles of microglia and astrocytes. Transl Neurodegener. 2020;9(1):42. doi:10.1186/s40035-020-00221-2.
  12. Zhong J, Qiu X, Yu Q, Chen H, Yan C. A novel polysaccharide from Acorus tatarinowii protects against LPS-induced neuroinflammation and neurotoxicity by inhibiting TLR4-mediated MyD88/NF-κB and PI3K/Akt signaling pathways. Int J Biol Macromol. 2020;163:464-75.
  13. Han X, Xu T, Fang Q, Zhang H, Yue L, Hu G, et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via .the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 2021;44:102010. doi:10.1016/j.redox.2021.102010.
  14. Simpson DSA, Oliver PL. ROS generation in microglia: understanding oxidative stress and inflammation in neurodegenerative disease. Antioxidants (Basel). 2020;9(8):743. doi:10.3390/antiox9080743.
  15. Onoguchi-Mizutani R, Akimitsu N. Long noncoding RNA and phase separation in cellular stress response. J Biochem. 2022;171(3):269-76.
  16. Zhang Y. LncRNA-encoded peptides in cancer. J Hematol Oncol. 2024;17(1):66. doi:10.1186/s13045-024-01591-0.
  17. Hu W, Zhou J, Jiang Y, Bao Z, Hu X. Silencing of LINC00707 alleviates brain injury by targeting miR-30a-5p to regulate microglia inflammation and apoptosis. Neurochem Res. 2024;49(1):222-33.
  18. Zhu S, Zhou Z, Li Z, Shao J, Jiao G, Huang YE, et al. Suppression of LINC00707 alleviates lipopolysaccharide-induced inflammation and apoptosis in PC-12 cells by regulating miR-30a-5p/Neurod1. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;83(11):2049-56.
  19. Long J, Lan W, Shen B, Liao F, Cai H, Li J, et al. LncRNA-miRNA-mRNA network in schizophrenia. J Mol Neurosci. 2025;75(3):104.
  20. De Gasperi R, Graham ZA, Harlow LM, Bauman WA, Qin W, Cardozo CP. The signature of microRNA dysregulation in muscle paralyzed by spinal cord injury includes downregulation of microRNAs that target myostatin signaling. PLoS One. 2016;11(12):e0166189.
  21. Lin Y, Liu L, Lin Y, Yang R, Liao S, Xu M, et al. MiR-145 alleviates sepsis-induced inflammatory responses and organ injury by targeting ADAM17. Front Biosci (Landmark Ed). 2024;29(1):44. doi:10.31083/j.fbl2901044.
  22. Wang C, Gu L, Yang Z, Su J, Wen X. Mume Fructus total flavonoids modulate miR-145-3p expression to inhibit lipopolysaccharide-induced inflammatory cytokine production in BV2 cells. Comb Chem High Throughput Screen. 2026;29. doi:http://dx.doi.org/10.2174/0113862073447531260414195911
  23. Chen S, Wei J, Huang L, Feng B, Guo W. MiRNA-194-5p inhibits inflammatory response after spinal cord injury via .regulating TRAF6. Minerva Med. 2020;111(6):603-6.
  24. Lu Y, Jiang BC, Cao DL, Zhang ZJ, Zhang X, Ji RR, et al. TRAF6 upregulation in spinal astrocytes maintains neuropathic pain by integrating TNF-α and IL-1β signaling. Pain. 2014;155(12):2618-29.
  25. Zhao Y, Li T, Zhang L, Yang J, Zhao F, Wang Y, et al. TRAF6 promotes spinal microglial M1 polarization to aggravate neuropathic pain by activating the c-JUN/NF-κB signaling pathway. Cell Biol Toxicol. 2024;40(1):54. doi:10.1007/s10565-024-09900-6.
  26. Kirshblum SC, Memmo P, Kim N, Campagnolo D, Millis S, American Spinal Injury Association. Comparison of the revised 2000 American Spinal Injury Association classification standards with the 1996 guidelines. Am J Phys Med Rehabil. 2002;81(7):502-5.
  27. Xue MT, Sheng WJ, Song X, Shi YJ, Geng ZJ, Shen L, et al. Atractylenolide III ameliorates spinal cord injury in rats by modulating microglial/macrophage polarization. CNS Neurosci Ther. 2022;28(7):1059-71.
  28. Zhang H, Xiang L, Yuan H, Yu H. PTPRO inhibition ameliorates spinal cord injury through shifting microglial M1/M2 polarization via .the NF-κB/STAT6 signaling pathway. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2024;1870(5):167141. doi:10.1016/j.bbadis.2024.167141.
  29. Eli I, Lerner DP, Ghogawala Z. Acute traumatic spinal cord injury. Neurol Clin. 2021;39(2):471-88.
  30. Brouwers E, van der Meent H, Curt A, Maier DD, Abel RF, Weidner N, et al. Recovery after traumatic thoracic and lumbar spinal cord injury: the neurological level of injury matters. Spinal Cord. 2020;58(9):980-7.
  31. Yao Q, Li Z, Chen D. Review of LINC00707: a novel lncRNA and promising biomarker for human diseases. Front Cell Dev Biol. 2022;10:813963. doi:10.3389/fcell.2022.813963.
  32. Chen L, Chen Y, Huang J, Zhang J. LncRNA LINC00707 serves as a sponge of miR-382-5p to alleviate lipopolysaccharide-induced WI-38 cell injury through upregulating NKAP in infantile pneumonia. Autoimmunity. 2022;55(5):328-38.
  33. Zou X, Gao C, Shang R, Chen H, Wang B. Knockdown of lncRNA LINC00707 alleviates LPS-induced injury in MRC-5 cells by acting as a ceRNA of miR-223-5p. Biosci Biotechnol Biochem. 2021;85(2):315-23.
  34. Ma T, Ma H, Zou Z, He X, Liu Y, Shuai Y, et al. The long intergenic noncoding RNA 00707 promotes lung adenocarcinoma cell proliferation and migration by regulating Cdc42. Cell Physiol Biochem. 2018;45(4):1566-80.
  35. Li H, Liu Q, Hu Y, Yin C, Zhang Y, Gao P. LINC00707 regulates autophagy and promotes the progression of triple-negative breast cancer by activation of the PI3K/AKT/mTOR pathway. Cell Death Discov. 2024;10(1):138. doi:10.1038/s41420-024-01906-7.
  36. Fang F, Guo C, Zheng W, Li Q. LINC00707 promotes cell proliferation in cervical cancer via .the miR-374c-5p/SDC4 axis. Biomed Res Int. 2022;2022:5793912. doi:10.1155/2022/5793912.
  37. Wei M, Lu L, Ma J, Luo Z, Tan X, Wang J. LINC00707 impairs natural killer cell antitumor activity in hepatocellular carcinoma by decreasing YTHDF2 stability. J Cell Mol Med. 2024;28(5):e18106.
  38. Liu J, Wu M, Feng G, Li R, Wang Y, Jiao J. Downregulation of LINC00707 promotes osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells by regulating DKK1 via .targeting miR-103a-3p. Int J Mol Med. 2020;46(3):1029-38.
  39. Zhao W, Huang G, Ye J. LINC00707 inhibits myocardial fibrosis and immune disorder in rheumatic heart disease by regulating miR-145-5p/S1PR1. Biotechnol Genet Eng Rev. 2024;40(4):3073-86.
  40. Gao T, Ji Y. Long noncoding RNA LINC00707 accelerates tumorigenesis and progression of bladder cancer via .targeting the miR-145/CDCA3 regulatory loop. Urol Int. 2021;105(9–10):891-905.
  41. Cai WL, Zeng W, Liu HH, Zhu BY, Liu JL, Liu Y. LncRNA LINC00707 promotes osteogenic differentiation of hBMSCs through the Wnt/β-catenin pathway activated by the LINC00707/miR-145/LRP5 axis. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(1):18-28.
  42. Jiang L, Wei ZC, Xu LL, Yu SY, Li C. Inhibition of miR-145-5p reduces spinal cord injury-induced inflammatory and oxidative stress responses via .affecting the Nurr1-TNF-α signaling axis. Cell Biochem Biophys. 2021;79(4):791-9.
  43. Jiang Z, Zhang J. Mesenchymal stem cell-derived exosomes containing miR-145-5p reduce inflammation in spinal cord injury by regulating the TLR4/NF-κB signaling pathway. Cell Cycle. 2021;20(10):993-1009.
  44. Park AJ, Fandl HK, Garcia VP, Coombs GB, DeSouza NM, Greiner JJ, et al. Differential expression of vascular-related microRNA in circulating endothelial microvesicles in adults with spinal cord injury: a pilot study. Top Spinal Cord Inj Rehabil. 2023;29(2):34-42. doi:10.46292/sci22-00032.
  45. Gao C, Yin F, Li R, Ruan Q, Meng C, Zhao K, et al. MicroRNA-145-mediated KDM6A downregulation enhances neural repair after spinal cord injury via .the NOTCH2/Abcb1a axis. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:2580619. doi:10.1155/2021/2580619.
  46. Dou Y, Tian X, Zhang J, Wang Z, Chen G. Roles of TRAF6 in the central nervous system. Curr Neuropharmacol. 2018;16(9):1306-13.
  47. Huang T, Jia Z, Fang L, Cheng Z, Qian J, Xiong F, et al. Extracellular vesicle-derived miR-511-3p from hypoxia-preconditioned adipose mesenchymal stem cells ameliorates spinal cord injury through the TRAF6/S1P axis. Brain Res Bull. 2022;180:73-85.
  48. Wei J, Wang J, Zhou Y, Yan S, Li K, Lin H. MicroRNA-146a contributes to SCI recovery via .regulating TRAF6 and IRAK1 expression. Biomed Res Int. 2016;2016:4013487.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Регуляция воспаленияОТ-ПЦРдвухлюциферазный репортерный анализактивация микроглии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.