Протокол исследования был рассмотрен и одобрен Комитетом по этике Больницы интегрированной традиционной китайской и западной медицины города Цанчжоу провинции Хэбэй (номер одобрения CZX2023-KY-164) и проведен в соответствии с Хельсинкской декларацией. Этот же комитет освободил исследователей от необходимости получения письменного информированного согласия в связи с ретроспективным характером исследования и использованием полностью анонимизированных данных.
Дизайн и условия исследования
Данное ретроспективное сравнительное когортное исследование было проведено в госпитале интегрированной традиционной китайской и западной медицины Хэбэй Цанчжоу в период с января 2022 года по декабрь 2024 года. Целью исследования была оценка клинических результатов гемостаза, эксплораторных профилей тканевых биомаркеров и безопасности применения ZHF по сравнению с TXA у женщин в пременопаузе с АМК на фоне ЭП.
Отбор пациентов
Для проверки соответствия критериям отбора были привлечены женщины в возрасте 25–50 лет, которым была проведена гистероскопическая оценка с последующей гистероскопической полипэктомией и гистопатологическим подтверждением доброкачественных полипов эндометрия. Окончательным критерием включения было гистопатологическое подтверждение доброкачественности полипов эндометрия, что позволило исключить из аналитической когорты образования с гиперплазией, атипией или злокачественными изменениями.
Критерии включения были следующими: регулярный менструальный цикл до появления АМК; подтвержденный методом ультразвукового исследования или гистероскопии диагноз ЭП; наличие аномальных маточных кровотечений, вызванных полипами эндометрия (АМК-П), сохранявшихся в течение как минимум двух циклов; а также наличие полных клинических, лабораторных данных и данных последующего наблюдения для анализа. Критериями исключения были: наличие миом матки размером ≥3 cm, аденомиоз или внутриматочные синехии; беременность, лактация или перименопаузальный статус; применение гормональной терапии, внутриматочных устройств или антикоагулянтов в течение предшествующих 3 месяцев; наличие в анамнезе или в настоящее время гистопатологических признаков гиперплазии эндометрия с атипией, атипичных поражений эндометрия или злокачественных новообразований; а также неполные медицинские записи или период последующего наблюдения короче одного цикла лечения. После применения этих критериев в исследование было включено 181 пациент: 87 получали ZHF и 94 получали TXA.
Протоколы лечения
Пациенты были разделены на группы лечения в соответствии с режимом, назначенным в рамках стандартного амбулаторного наблюдения перед гистероскопической полипэктомией. Выбор метода лечения определялся рутинной клинической практикой, а не протоколом исследования, и не был рандомизирован.
В группе ZHF пациенты получали стандартизированный госпитальный состав формулы Чжуян-Хуачжэн (Zhuyang-Huazheng Formula), приготовленный и выданный аптекой традиционной китайской медицины госпиталя интегрированной традиционной китайской и западной медицины Хэбэй Цанчжоу. Состав формулы оставался неизменным на протяжении всего периода исследования и не корректировался индивидуально в зависимости от симптомов пациента. Ежедневный рецепт включал: Bupleuri Radix (Chaihu; Bupleurum chinense DC., корень), 10 g; Curcumae Rhizoma (Ezhu; Curcuma phaeocaulis Valeton, корневище), 10 g; Paeoniae Radix Alba (Baishao; Paeonia lactiflora Pall., корень), 15 g; Sparganii Rhizoma (Sanleng; Sparganium stoloniferum Buch.-Ham., клубень), 10 g; Astragali Radix (Huangqi; Astragalus membranaceus [Fisch.] Bunge, корень), 20 g; и Agrimoniae Herba (Xianhecao; Agrimonia pilosa Ledeb., надземная часть), 30 g. Подробный состав, ботанические источники, используемые части растений и количество компонентов формулы приведены в Дополнительной таблице 1.
Все исходные растительные материалы были получены через больничную аптеку и прошли стандартную проверку подлинности и качества в соответствии с применимыми институциональными стандартами и Фармакопеей Китайской Народной Республики. Для каждого ежедневного рецепта растительные материалы смешивали, замачивали в приблизительно 800 mL очищенной воды на 30 min, а затем дважды кипятили, используя стандартную процедуру приготовления отваров в больничной аптеке. Первую экстракцию проводили в течение 30 min после закипания, за чем следовала вторая экстракция с добавлением примерно 600 mL воды в течение 25 min. Два водных экстракта фильтровали, объединяли и концентрировали до конечного объема примерно 400 mL. Полученный отвар разделяли на две герметичные однодозные упаковки по 200 mL и хранили в холодильнике (2–8 °C) до момента выдачи. Пациентам было рекомендовано подогревать отвар перед применением и принимать по 200 mL перорально дважды в день, утром и вечером после еды, в течение 15 дней подряд в рамках предоперационного цикла лечения.
Состав, процедура приготовления, дозировка и курс лечения были задокументированы достаточно подробно, чтобы обеспечить воспроизводимость в соответствии с установленными рекомендациями по точному описанию вмешательств с использованием китайских лекарственных трав11.
В группе TXA пациенты принимали таблетки транексамовой кислоты по 500 mg три раза в день в течение 5 последовательных дней в соответствующем цикле предоперационной подготовки. Пациентам обеих групп было рекомендовано придерживаться обычного режима питания и физических нагрузок, а также избегать одновременного применения гормональных или гемостатических препаратов. Впоследствии всем пациентам была проведена гистероскопическая резекция полипа с использованием стандартных электрохирургических методов опытными гинекологами. Гистероскопическая полипэктомия предпочтительно планировалась после прекращения менструальных кровотечений и в начале пролиферативной фазы, если это было клинически возможно. Однако, поскольку лечение и хирургическое вмешательство проводились в рамках стандартной клинической практики, сроки операции не были строго стандартизированы по идентичной фазе менструального цикла для всех пациентов.
Клиническая и лабораторная оценка
Исходные характеристики:
Демографические и клинические параметры, включая возраст, индекс массы тела (ИМТ), продолжительность менструального цикла и паритет, были извлечены из медицинских карт. Трансвагинальное ультразвуковое исследование проводилось в ранней пролиферативной фазе для измерения толщины эндометрия и размера полипа. Количество образований фиксировалось как единичное или множественное.
Конечные точки эффективности:
Основной конечной точкой эффективности было изменение объема менструальных кровопотерь, оцениваемое с помощью иллюстрированной шкалы оценки кровопотери (PBAC). Показатели PBAC сравнивались между циклом до начала лечения (C–2) и циклом, непосредственно предшествовавшим гистероскопической полипэктомии (C–1).
Вторичные конечные точки:
Концентрация гемоглобина (g/dL) до и после лечения;
Доля пациентов с ответом на лечение PBAC, определяемая как снижение PBAC на ≥50% относительно исходного уровня;
Время до достижения клинической стабильности (TtCS), определяемое как количество дней, необходимых для прекращения или нормализации маточных кровотечений в течение цикла лечения.
Гистопатологическая и биомаркерная оценка:
Образцы эндометрия были собраны как из тканей полипа, так и из прилегающего нормального эндометрия во время гистероскопической операции. Прилегающим эндометрием считалась неполипоидная ткань эндометрия, полученная от того же пациента в ходе той же гистероскопической процедуры и гистологически отличающаяся от тела полипа и непосредственной зоны перехода полипа в эндометрий. Для сравнительного анализа включалась только морфологически пригодная ткань эндометрия с сохраненной архитектурой желез и стромы. Образцы фиксировали в 10% нейтральном буферизованном формалине, заливали в парафин и срезали толщиной 4 µm.
Иммуногистохимический анализ (ИГХ) проводили с использованием моноклональных антител к Ki-67 (клон MIB-1, 1:200) и p53 (клон DO-7, 1:100). Слайды инкубировали в течение ночи при 4 °C, визуализацию осуществляли с помощью хромогена DAB, докрашивание проводили гематоксилином. Оба метода анализа с использованием антител были валидированы для рутинного диагностического использования в патологоанатомической лаборатории учреждения в соответствии с установленными лабораторными процедурами. В каждую серию окрашивания включали соответствующие срезы положительного контроля; также регулярно проверяли имеющееся внутреннее положительное окрашивание в качестве дополнительной меры контроля качества для подтверждения адекватности окрашивания. Препараты отрицательного контроля, обработанные без первичных антител, также оценивали согласно рутинному лабораторному протоколу. Технически достоверными и включенными в количественную оценку считались только те серии окрашивания, в которых были получены ожидаемые результаты контроля.
Перед количественной оценкой каждый препарат просматривали при малом увеличении для выявления репрезентативных и хорошо сохранившихся участков эпителия. Затем из этих пригодных для анализа областей выбирали пять неперекрывающихся полей зрения при большом увеличении для количественной оценки. Выбор полей не основывался на участках с наибольшей интенсивностью окрашивания. Области с выраженным воспалением, обширным кровоизлиянием, распадом или фрагментацией тканей, артефактами сдавления или иным ненадлежащим сохранением тканей исключались из количественной оценки. Все иммуногистохимические препараты независимо оценивали два патолога, которые не имели информации о группах лечения. Каждый патолог самостоятельно оценивал пять выбранных полей зрения при большом увеличении и фиксировал индекс Ki-67 и H-score p53, не имея доступа к оценке другого патолога. После завершения независимой оценки случаи с расхождениями в результатах рассматривались совместно, и итоговые значения, использованные для анализа, устанавливались путем консенсуса.
Индекс Ki-67 (%) рассчитывали как средний процент положительно окрашенных ядер среди ≥500 эпителиальных клеток. Экспрессию p53 количественно оценивали с помощью метода H-score в диапазоне от 0 до 300 (интенсивность × процент положительных ядер). Как указано выше, H-score для p53 рассматривался как предварительный непрерывный показатель иммуногистохимической экспрессии, а не как формальная классификация статуса p53 на основе паттернов. Отношения экспрессии в полипе по отношению к прилегающим тканям для Ki-67 и p53 рассчитывали как предварительные относительные показатели иммуногистохимической экспрессии между парными отделами ткани.
Оценка безопасности:
Данные о нежелательных явлениях (НЯ) ретроспективно собирались из амбулаторных карт и журналов телефонного наблюдения. Оцениваемые параметры включали желудочно-кишечные реакции (тошнота, рвота, дискомфорт в области живота), повышение активности печеночных ферментов, нарушения функции почек (расчетная скорость клубочковой фильтрации <60 mL/min/1.73 m2) и аллергические проявления. Комбинированная конечная точка безопасности (не желудочно-кишечная) была предопределена как возникновение нарушения функции печени, нарушения функции почек, аллергического проявления или любого серьезного нежелательного явления (СНЯ).
Анализ Каплана-Мейера по времени достижения клинической гемостатической стабильности:
Были построены кривые кумулятивной вероятности по методу Каплана-Мейера для визуализации временного хода достижения клинической гемостатической стабильности после начала лечения. Время до достижения клинической стабильности определялось как количество дней от начала лечения до первого документированного прекращения или нормализации маточного кровотечения в течение цикла лечения. Профили кумулятивной стабилизации в группах ZHF и TXA сравнивали с помощью лог-рангового критерия.
Статистический анализ
Непрерывные переменные проверялись на нормальность распределения с помощью теста Шапиро-Уилка и выражались как среднее значение ± стандартное отклонение (SD). Сравнение групп проводили с использованием t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна-Уитни, в зависимости от ситуации. Категориальные переменные анализировали с помощью критерия χ2 или точного теста Фишера. Для внутригрупповых сравнений «до и после» использовали парный t-критерий. Метод Каплана-Мейера с лог-ранговым тестом применяли для сравнения совокупной вероятности достижения клинической гемостатической стабильности между группами лечения. Корреляционный анализ Спирмена проводили для оценки взаимосвязи между соотношением уровней биомаркеров в полипе и прилежащих тканях и клиническими параметрами, связанными с кровотечением. Кроме того, был проведен исследовательский одномерный и многомерный линейный регрессионный анализ, где в качестве непрерывных зависимых переменных использовали исходный балл PBAC и время до достижения клинической стабильности (TtCS). Для модели исходного балла PBAC в качестве потенциальных ковариат рассматривались возраст, индекс массы тела, исходный уровень гемоглобина, размер полипа, наличие множественных полипов, толщина эндометрия, соотношение Ki-67 в полипе и прилежащих тканях, а также соотношение p53 в полипе и прилежащих тканях. Для модели TtCS потенциальными ковариатами были группа лечения, исходный балл PBAC, исходный уровень гемоглобина, размер полипа, наличие множественных полипов, соотношение Ki-67 в полипе и прилежащих тканях, а также соотношение p53 в полипе и прилежащих тканях. Все анализы экспрессии Ki-67 и p53, включая межгрупповые сравнения, корреляционный анализ и регрессионные модели, рассматривались как исследовательские и предназначенные для выдвижения гипотез, а не для их подтверждения. Результаты регрессии представлены в виде стандартизированных бета-коэффициентов с 95% доверительными интервалами (CI). Двустороннее P < 0,05 считалось статистически значимым. Весь статистический анализ проводился с помощью программного обеспечения R.