Методическая статья
Здесь мы сообщаем поколения Tre рекомбиназы через направлена, молекулярной эволюции. Tre рекомбиназы признает предопределенные последовательности-мишени в LTR последовательностей ВИЧ-1 провируса, в результате вырезания и искоренение провируса из инфицированных человеческих клеток. Хотя еще в зачаточном состоянии, направленной молекулярной эволюции позволит создавать собственные ферменты, которые будут служить инструментами молекулярной хирургии и молекулярной медицины.
Здесь мы сообщаем поколения Tre рекомбиназы через направлена, молекулярной эволюции. Tre рекомбиназы признает предопределенные последовательности-мишени в LTR последовательностей ВИЧ-1 провируса, в результате вырезания и искоренение провируса из инфицированных человеческих клеток.
Мы начали с Cre, 38-кДа рекомбиназы, который признает 34-б.п. двухцепочечной ДНК последовательность известна как loxP. Потому что Cre может эффективно устранять геномных последовательностей, мы приступаем к портному рекомбиназы, которые могли бы удалить последовательности между 5'-LTR и 3'-LTR комплексного ВИЧ-1 провируса. В качестве первого шага мы определили последовательность в LTR сайтов, которые были похожи на loxP и испытан для рекомбинации деятельности. Первоначально Cre и мутагенизированных Cre библиотеки не удалось рекомбинируют выбрали loxLTR сайты ВИЧ-1 провируса. Как начать любой направленной молекулярной эволюции процесса требует, по крайней мере остаточной активности, оригинальные асимметричные последовательности loxLTR были разделены на подмножества и повторную проверку для рекомбинации деятельности. Выступая в качестве промежуточных продуктов, рекомбинации деятельности был показан с подмножества. Далее, рекомбиназы библиотеки обогатились через повторяющийся цикл эволюции. Впоследствии, обогащенный библиотеки перетасовываются и рекомбинации. Сочетание различных мутаций доказал синергетического и рекомбиназ были созданы, которые были способны рекомбинировать loxLTR1 и loxLTR2. Это было доказательством того, что эволюционная стратегия через промежуточные может быть успешным. После общей сложности 126 циклов эволюции отдельных рекомбиназ были функционально и структурно проанализированы. Наиболее активными рекомбиназы - Tre - было 19 аминокислот изменения кислоты по сравнению с Cre. Tre рекомбиназы смог акцизного ВИЧ-1 провируса из генома ВИЧ-1 инфицированных клеток HeLa (см. "ВИЧ-1 провирусной Иссечение ДНК Использование Evolved рекомбиназы", Hauber Дж., Генриха Pette-Института экспериментальной вирусологии и иммунологии, Гамбург, Германия). Хотя еще в зачаточном состоянии, направленной молекулярной эволюции позволит создавать собственные ферменты, которые будут служить в качестве инструментов "молекулярную хирургию» и молекулярной медицины.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение