Создание Patch-пипетки и Sharp Электроды с программируемой Puller

Summary

Это видео показывает, как использовать программируемые съемник, чтобы сделать патч пипетки и острые электроды для электрофизиологии. Аналогичная процедура может быть использована для разнообразных стеклянных инструментов, в том числе введение иглы.

Abstract

Стекло микроэлектродов (также называется пипетки) были лошадкой электрофизиологии на протяжении десятилетий. Сегодня такие пипетки изготавливаются из стеклянных капилляров использованием программируемых съемника. Такое тепло инструментов капиллярной используя либо нити металла или лазера и извлечь из стекла, используя гравитацию, двигателя или обоих. Пипетки для патч-зажим записи формируются с использованием только тепло и гравитация, в то время как резкое электродов для внутриклеточной регистрации использовать сочетание тепла, тяжести, и двигатель. Процедура используется для внутриклеточных пипетки записи аналогична используется, чтобы сделать инъекции иглами для различных приложений, в том числе кРНК инъекции в ооциты Xenopus. В общем, капиллярные стеклянные <1,2 мм в диаметре используется для изготовления пипеток для исправления записи зажим, в то время как узкие стекло используется для внутриклеточной регистрации (наружный диаметр = 1,0 мм). Для каждого инструмента, съемник запрограммировано несколько иначе. Это видео показывает, как сделать оба вида записи пипетки с использованием предварительно установленными программами съемника.

Protocol

Тяговая пипетки

Использование микроэлектрода съемник, таких как Саттер Р-97 Flaming / Браун, тянуть набор примерно 10-20 пипеток.

1. Выберите капиллярной стекла. Мы используем боросиликатного капилляров (Саттер BF150-110-10, внешний диаметр 1,5 мм, 1,1 мм внутренний диаметр, 10 см в длину). Магазин стекла осторожно, чтобы она остается чистой и без пыли.
2. Дизайн потянув программы. Мы используем 5-ти ступенчатая программа, с нисходящим тепла и скорость на каждом этапе, и небольшой тянуть на последний шаг. Пипетки поваренную книгу Саттера является отличным основу для разработки соответствующих программ.
3. Проверьте на....

Discussion

Протокол показано здесь в ежедневном использовании в электрофизиологии лабораторий, а также используется, чтобы сделать инъекции иглами для клеток и животных. С программируемой съемник, это легко сделать пипетки для различных целей. С вниманием и заботой, нити на съемник будет длиться в течение одного года или более. Удачи вам в ваших экспериментах.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Инструмент для вытягивания микропипеток		Sutter Instrument Co.	P-97	Или аналогичный инструмент (например, Sutter P-87 или P-2000)
Реагент для стеклянных капилляров		Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	Или, аналогичное капиллярное стекло. Чтобы облегчить наполнение пипетки, используйте капилляр со стеклянной нитью.