Методическая статья

Создание Patch-пипетки и Sharp Электроды с программируемой Puller

DOI:

10.3791/939

⸱

8 октября 2008 г.

 ,  , 
1Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University , 2Department of Molecular and Cellular Physiology, Stanford University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это видео показывает, как использовать программируемые съемник, чтобы сделать патч пипетки и острые электроды для электрофизиологии. Аналогичная процедура может быть использована для разнообразных стеклянных инструментов, в том числе введение иглы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Стекло микроэлектродов (также называется пипетки) были лошадкой электрофизиологии на протяжении десятилетий. Сегодня такие пипетки изготавливаются из стеклянных капилляров использованием программируемых съемника. Такое тепло инструментов капиллярной используя либо нити металла или лазера и извлечь из стекла, используя гравитацию, двигателя или обоих. Пипетки для патч-зажим записи формируются с использованием только тепло и гравитация, в то время как резкое электродов для внутриклеточной регистрации использовать сочетание тепла, тяжести, и двигатель. Процедура используется для внутриклеточных пипетки записи аналогична используется, чтобы сделать инъекции иглами для различных приложений, в том числе кРНК инъекции в ооциты Xenopus. В общем, капиллярные стеклянные <1,2 мм в диаметре используется для изготовления пипеток для исправления записи зажим, в то время как узкие стекло используется для внутриклеточной регистрации (наружный диаметр = 1,0 мм). Для каждого инструмента, съемник запрограммировано несколько иначе. Это видео показывает, как сделать оба вида записи пипетки с использованием предварительно установленными программами съемника.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Тяговая пипетки

Использование микроэлектрода съемник, таких как Саттер Р-97 Flaming / Браун, тянуть набор примерно 10-20 пипеток.

  1. Выберите капиллярной стекла. Мы используем боросиликатного капилляров (Саттер BF150-110-10, внешний диаметр 1,5 мм, 1,1 мм внутренний диаметр, 10 см в длину). Магазин стекла осторожно, чтобы она остается чистой и без пыли.
  2. Дизайн потянув программы. Мы используем 5-ти ступенчатая программа, с нисходящим тепла и скорость на каждом этапе, и небольшой тянуть на последний шаг. Пипетки поваренную книгу Саттера является отличным основу для разработки соответствующих программ.
  3. Проверьте на....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол показано здесь в ежедневном использовании в электрофизиологии лабораторий, а также используется, чтобы сделать инъекции иглами для клеток и животных. С программируемой съемник, это легко сделать пипетки для различных целей. С вниманием и заботой, нити на съемник будет длиться в течение одного года или более. Удачи вам в ваших экспериментах.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим следующие финансовые учреждения и фонды поддержки: Национальный институт здоровья, Национальный научный фонд, Американской кардиологической ассоциации, Ассоциации мышечной дистрофии, Дональд Б. и Делия Э. Бакстер Фонда Klingenstein фонд и фонд поддержки McKnight Neuroscience.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пульлер для микропипетокИнструментSutter Instrument Co.P-97Или аналогичный инструмент (например, Sutter P-87 или P-2000)
Стеклянные капиллярыРеагентSutter Instrument Co.BF150-86-10Или аналогичное капиллярное стекло. Для облегчения заполнения пипетки используйте капилляр со стеклянной нитью.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sutter Instrument, P-97 Pipette Cookbook. , Sutter Instrument. http://www.sutter.com/contact/faqs/pipette_cookbook.pdf (2008).
....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Sutter P97Microforge

Похожие статьи