Техника для сбора и измерения хирургической раны биохимических посредников в определенные моменты времени.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Сбор и измерения Ноцицептивная и медиаторов воспаления в хирургических ран
В этой статье
Retraction Notice
This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice
Краткое содержание
Аннотация
Целью данной работы было проверить возможности сбора и измерения воспалительных и ноцицептивных биохимических посредников на место операции, оценить отношения между раны и сыворотке крови, а также определить какие-либо связи между посредником освобождения, боль и обезболивающий потребления после кесарева сечения доставки. Двадцать здоровых женщин, перенесших плановое родоразрешение кесарево со спинальной анестезией были зачислены. Экссудата раны и сыворотки посредников, боль десятки и анальгетики потребления были измерены при 1, 6, 24 и 48 часов после кесарева сечения. В ране экссудата, 19 из 20 посредников были надежно обнаружены в том числе ИЛ-1β, IL-2, ИЛ-4, ИЛ-6, IL-7, IL-8, ИЛ-10, Ил-12, Ил-13, ИЛ -17, ФНО, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 и MIP-1β, фактора роста нервов (ФРН), простагландина Е2 (ПГ-Е2) и вещества П. Рана ПГ-Е2 и различные цитокины пика рано , тогда как NGF показала более замедленным высвобождением. Существовали нет корреляции между концентрацией в зависимости от времени профиля раны и сыворотки цитокинов. Это исследование демонстрирует возможности сбора и измерения ноцицептивных и медиаторов воспаления при хирургических ран в определенные моменты времени. Отсутствие значимых корреляций между раны и сыворотке крови подчеркивает важность определения конкретных участков освобождении, если локализованной патологии должны быть изучены.
Протокол
Ноцицептивная и воспалительных биохимических коллекции посредника
- По-Q ® ® PainBuster облегчения боли Система вводится в подкожном слое путем хирургической команде незадолго до закрытия раны. Система постоянно доставляет физиологического раствора (или местной анестезией) подкожно в рану со скоростью 2 мл / ч.
- Трехходовой кран включен в эту систему, чтобы стремление раны экссудат в определенные моменты времени.
- В то время пунктах, указанных в протоколе (например, 1, 6, 24 и 48 часов после кесарева сечения), 1 мл раневого экссудата изымается в полиэтиленовый чашку, содержащую 30 мкл ингибитора протеиназ.
- В то же время интервалы 10 мл крови собирается в зеленой верхней трубы для сбора крови, содержащие литий гепарин. 300 мкл ингибитора протеиназ будет добавлен в пробы крови.
- В течение 1 часа после сбора, образцы ставятся на льду и центрифугировали при 3000 оборотов в минуту в течение 10 мин.
- Сыворотке крови и раны supranate удаляется и место в стандартной трубки микроцентрифужных и хранится при температуре -20 ° C.
Пробирного анализа
- После того как все образцы собираются, они оттаивают и проанализированы в то же время.
- Цитокины затем измеряется с помощью А17-мультиплекс бусинка пластины иммуноанализа массива. Мультиплекс иммуно-анализа технология позволяет опробования до 100 аналитов в теле жидкости образцов небольшого объема до 50 мкл и давать результаты сопоставимы с результатами, полученными с ИФА. Эта пластинка способна измерять интерлейкина 1ß (IL-1ß), интерлейкин 2 (IL-2), интерлейкина 4 (IL-4), интерлейкина 5 (IL-5), интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 7 (IL -7), интерлейкин 8 (IL-8), интерлейкин (IL-10), интерлейкина 12 (IL-12), интерлейкина 13 (IL-13), интерлейкина 17 (IL-17), фактор некроза опухолей α (ФНО) , интерферон α (INFα), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитов и макрофагов колониестимулирующий фактор (GM-CSF), моноцитов белка хемоаттрактант 1 (MCP-1) и макрофагов воспалительный белок 1 (MIP-1β).
- Фактор роста нервов измеряется с NGF антител DY256, добавив его в 17-сложной пластинку с помощью Bio-Plex комплект связи амин.
- Каждое измерение производится в двух экземплярах и в соответствии со спецификацией производителя. Стандартные кривые для каждого анализируемого генерируются с помощью ссылки аналитов поставляются производителями в концентрации 0,20, 0,78, 3,13, 12,5, 50, 200, 800, 3200 пг / мл плюс нулевой стандарт (физиологический раствор только). Стандартные кривые входят в каждой серии и образцом концентрации рассчитывались с Bio-Plex менеджер программного обеспечения.
- Е2 и простагландина субстанция Р измеряются с помощью высокой чувствительности ИФА наборов Каждое определение проводится в двух экземплярах в соответствии со спецификацией производителя.
Рисунок 1: экссудата и сывороточные уровни различных про-и противовоспалительных цитокинов (интерлейкин 1ß (IL-1ß), интерлейкин 2 (IL-2), интерлейкина 4 (IL-4), интерлейкин-5 (IL-5), интерлейкин 6 (ИЛ-6), интерлейкина 7 (IL-7), интерлейкин 8 (IL-8), интерлейкин (IL-10), интерлейкина 12 (IL-12), интерлейкина 13 (IL-13), интерлейкина 17 (IL -17), фактор некроза опухолей α (ФНО-α), интерферон γ (INFγ), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитов и макрофагов колониестимулирующий фактор (GM-CSF), моноцитов хемоаттрактант белка 1 (МСР-1 ) и макрофагов воспалительный белок 1 (MIP-1ß), фактор роста нервов (ФРН), простагландина Е2 (ПГ-Е2) и субстанция Р (SP) уровнях (пг / мл) измеряли в начале исследования, 6 и 24 часов после кесарева сечения .
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
По-Q ® ® PainBuster облегчения боли системы должны быть вставлены по всей разрез в подкожном слое незадолго до закрытия раны. Это способствует стремление с помощью трехходового крана на определенные промежутки времени. По-Q ® система постоянно обеспечивает физиологического раствора подкожно в рану со скоростью 2 мл / ч. Это предотвращает свертывание катетер и повышает надежность системы для получения экссудата образцов. Если стремление экссудата трудно (примерно в 5% случаев), рассмотреть вопрос об изменении позиции субъекта (например, сидя...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не заявляют о наличии конфликта интересов.
Благодарности
Работа д-ра Карвальо поддерживается Строительство Междисциплинарный Карьера в охране здоровья женщин исследовательский грант от Управления исследований в области здоровья женщин и Национального института детского здоровья и человеческого развития Национальных Институтов Здоровья (5K12 HD043452). Доктор Angst получил поставок (С-Q ® ® PainBuster послеоперационных болей System) и финансирования для проведения биохимических анализов из I-Flow (Лейк-Форест, Калифорния).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Система для облегчения послеоперационных болей On-Q® PainBuster® | I-Flow, Лейк-Форест, Калифорния | ||
| Комплект ингибиторов протеиназ | Roche Group | ||
| Планшет для 17-кратного мультиплексного бусинкового иммуноанализа Bio-PlexTM | Bio-Rad | ||
| Набор для аминного связывания Bio-Plex | Bio-Rad | ||
| Антитела к NGF DY256 | R&D Systems | ||
| Наборы ИФА для определения простагландина E2 и субстанции P | Assay Designs |
Ссылки
- Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
- Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
- Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
- Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.