Name: Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 3 (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-13T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Изучите метод маркировки РНК с помощью аминоаллильного сопряжения красителей для анализа экспрессии генов вируса вакцинии в клетках HeLa. Этот подход позволяет исследовать динамику вирусных и хозяйских генов.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Уайтхед Институт стипендиаты фондов

Часть 1: Арна маркировки: аминокислоты связи аллил из красителей <ol><li> Добавить 1 мкг образцов Арна в 1,5 мл труб микроцентрифужных. </li><li> Вакуумные сухие образцы на низкой или нулевой температуре, пока они полностью не высохнут. Cap каждой трубки, как только она сухая - не пересушить! </li><li> Добавить 9μl связи буфера в каждую пробирку и ресуспендируйте Арна, осторожно вортексе в течение 1 минуты. Центрифуга кратко собрать образец в нижней части трубки, а затем дать образец сидеть на льду. </li><li> Добавить 22μl высокой ДМСО качества для каждой трубки Cy3 или Cy5 красителя. Один трубку краситель достаточно для 2 образцов. Красителя Cy3 для маркировки вашего эталонных образцов, и краситель Cy5 для маркировки ваши образцы тестов. </li><li> Vortex красителей тщательно перемешать. Держите красителей в темноте, пока готов к использованию. Не готовьте красителя ранее чем за 1 час перед использованием. Убедитесь, что вода не попадает в красителях / ДМСО смесь в любой момент. </li><li> Добавить 11μl подготовленных ДМСО / Су краситель для каждого образца. Хорошо перемешайте на вортексе мягко. </li><li> Инкубируйте в течение 30-45 минут при комнатной температуре. Обложка образцы с фольги или держать их в ящик, чтобы минимизировать воздействие света. </li><li> После инкубации, добавьте 4.5μl hydroxlyamine для каждого образца, чтобы утолить реакции. Хорошо перемешайте на вортексе мягко. </li><li> Инкубируйте в течение еще 15 минут при комнатной температуре. Обложка образцы с фольги или держать их в ящик, чтобы минимизировать воздействие света. </li></ol> Часть 2: Маркированный Арна очистке <ol><li> Vortex связывание РНК бисером кратко получить даже смесь перед использованием. </li><li> Подготовка Арна Связывание Смешать при комнатной температуре. (Табл. 1) </li><li> Хорошо перемешайте на вортексе. </li><li> Aliquote буфера Арна Элюирование в 1,5 мл трубки и инкубировать при 50-60 ° С в течение не менее 10 минут. </li><li> Добавить 70μl из Арна обязательным смеси для каждого образца и хорошо перемешать с помощью пипетки вверх-вниз 3-4 раза. </li><li> Передача образца от пластины ПЦР для 96-луночного круглым дном тарелку. </li><li> Добавить 50 мкл 100% изопропанола к каждому образцу и хорошо перемешать с помощью пипетки вверх-вниз 3-4 раза. </li><li> Осторожно встряхните пластину на орбитальный шейкер, по крайней мере 2 минуты для тщательного перемешивания образцов. </li><li> Перемещение пластины для магнитного стоять, чтобы захватить магнитных бус. Оставьте пластину на стенде, пока смесь не станет прозрачной и обязательным бисера гранулированный. </li><li> Тщательно аспирата супернатанта с вакуумным аспиратором, не нарушая магнитных бус. Кроме того, осторожно удалите супернатант с пипеткой и отбросить супернатант. Супернатант должен быть либо ярко-розовый или ярко-голубые на данный момент из-за неинкорпорированных молекул красителя. </li><li> Удалите пластину из магнитного стенда. </li><li> Добавить 100 мкл Арна промывочного раствора в каждую лунку и встряхните пластине в течение 1 минуты на орбитальном шейкере при умеренной скорости. Бусины могут не расходиться на этот шаг. </li><li> Перемещение пластины для магнитного стоять, чтобы захватить магнитных бус. </li><li> Тщательно аспирата супернатанта с вакуумным аспиратором, не нарушая магнитных бус. Кроме того, осторожно удалите супернатант с пипеткой и отбросить супернатант. </li><li> Удалите пластину из магнитного стенда. </li><li> Повторите мыть 2-й раз с 100 мкл промывочного раствора Арна. </li><li> После 2-й вымыть, обсушить бисером встряхиванием пластины в течение 1 минуты на орбитальном шейкере при максимальной скорости. Не пересушить образцы! </li><li> Элюировать Арна из бисера, добавляя 20 мкл предварительно нагретую Элюирование Арна буфера для каждого образца. </li><li> Энергично встряхните пластину на орбитальном шейкере в течение 3 минут, а затем проверить, чтобы убедиться, магнитных шариков полностью рассеялись. Если нет, то продолжать дрожать. </li><li> После магнитных шариков полностью рассеяны, перемещать пластину магнитного стоять, чтобы захватить магнитных шариков. Супернатант содержит в порядок, помечены образцы Арна, и должно быть или бледно-розового или бледно-голубым. </li><li> Тщательно передачи элюировали Арна к новой пластинкой ПЦР (или ПЦР). </li><li> (Необязательный шаг) Проверьте концентрацию РНК и количество красителя в образцах путем измерения 1.5μl на NanoDrop спектрофотометр использования Microarray модуля. </li><li> Сразу гибридизации меченых Арна на микрочипов платформы на ваш выбор, или в качестве альтернативы, вы можете хранить помечены Арна при -80 ° С, пока вы не готовы к гибридизации. </li></ol> Таблица 1 Арна Связывание Mix <table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Сумма за 1 реакция </td></tr><tr><td> Связывание РНК бисер * </td><td> 10 мкл </td></tr><tr><td> Бусы ресуспендирования Решение * </td><td> 4μl </td></tr><tr><td> 100% изопропанола ** </td><td> 6μl </td></tr><tr><td> Арна Связывание Концентрат буфера </td><td> 50 мкл </td></tr></tbody></table> * Смешать связывание РНК бисер сбусинка ресуспендирования решение первой ** Добавьте изопропанола и хорошо перемешать перед добавлением Арна обязательным концентрат буфера.

<ol><li>Rubins, K. H., Hensley, L. E., Bell, G. W., Wang, C., Lefkowitz, E. J., Brown, P. O., Relman, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+viral+gene+expression+programs+during+poxvirus+infection%3A+a+transcriptional+map+of+the+vaccinia+and+monkeypox+genomes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes.</a> PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).</li>
<li>Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. C., Lefkowitz, E. J., Tscharke, D. C., Sidney, J., Grey, H. M., Head, S. R., Peters, B., Sette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+a+complete+poxvirus+transcriptome+reveals+an+immediate-early+class+of+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of a complete poxvirus transcriptome reveals an immediate-early class of genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 105 (6), 2140-2145 (2008).</li>
<li>Satheshkumar, P. S., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poxvirus+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Poxvirus transcriptome analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, E62-E62 (2008).</li>
<li>Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. C., Lefkowitz, E. J., Tscharke, D. C., Sidney, J., Grey, H. M., Head, S. R., Peters, B., Sette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A.+Reply+to+Satheshkumar+and+Moss%3A+Poxvirus+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A. Reply to Satheshkumar and Moss: Poxvirus transcriptome analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, E63-E64 (2008).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Pascual-Montano, A., Muñoz, M., Harshman, K., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+gene+expression+survey+of+vaccinia+virus+infection+of+human+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Cellular gene expression survey of vaccinia virus infection of human HeLa cells.</a> J Virol. 77 (11), 6493-6506 (2003).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Conde, R., Pascual-Montano, A., Harshman, K., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+reveals+characteristic+changes+of+host+cell+gene+expression+in+response+to+attenuated+modified+vaccinia+virus+Ankara+infection+of+human+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis reveals characteristic changes of host cell gene expression in response to attenuated modified vaccinia virus Ankara infection of human HeLa cells.</a> J Virol. 78 (11), 5820-5824 (2004).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Pascual-Montano, A., Nájera, J. L., Zaballos, A., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+response+to+the+attenuated+poxvirus+vector+NYVAC%3A+upregulation+of+apoptotic+genes+and+NF-kappaB-responsive+genes+in+infected+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Host response to the attenuated poxvirus vector NYVAC: upregulation of apoptotic genes and NF-kappaB-responsive genes in infected HeLa cells.</a> J Virol. 80 (2), 985-998 (2006).</li>
<li>Guerra, S., Nájera, J. L., González, J. M., López-Fernández, L. A., Climent, N., Gatell, J. M., Gallart, T., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+gene+expression+profiling+after+infection+of+immature+human+monocyte-derived+dendritic+cells+by+the+attenuated+poxvirus+vectors+MVA+and+NYVAC%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Distinct gene expression profiling after infection of immature human monocyte-derived dendritic cells by the attenuated poxvirus vectors MVA and NYVAC.</a> 81 (16), 8707-8721 (2007).</li>
</ol>

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Критические Шаги При выполнении аминокислоты аллилового связи, очень важно для ресуспендирования красителя в ДМСО незадолго (менее 1 часа), прежде чем связь и убедиться в отсутствии воды попадает в красителях / ДМСО смеси, как он будет реагировать с активными группы по красителя. Не пересушивать РНК (можно высушить до 1-2UL, а не полностью высохнет), а также ресуспендируют в связи буфера. Во время реакции сочетания, держать реакции в темноте, с редкими и стряхивая со спином вниз по желанию. </...

<table><tbody><tr><td>Набор активных красителей CyDye для пост-маркировки</td><td>Реагент</td><td>GE Healthcare</td><td>RPN5661</td><td>Содержит красители Cy3 и Cy5</td></tr><tr><td>УФ-видимый спектрофотометр NanoDrop ND-1000</td><td>Прочее</td><td>NanoDrop</td><td>ND-1000</td><td>Или эквивалентный спектрофотометр</td></tr></tbody></table>

vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 3

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 3

Семья<em&gt; Poxviridae</em&gt; Состоит из больших двухцепочечной ДНК, содержащие вирусы, которые копируют только в цитоплазме инфицированных клеток. Члены<em&gt; Orthopox</em&gt; Рода включают натуральной оспы, возбудитель человеческого оспа, обезьяньей, и вакцины (VAC), прототипных член вирус семьи. В течение относительно большого (~ 200 кб) вакцины генома, три класса гены закодированы: ранние, средние и поздние. Хотя все три класса транскрибируются вирусно-закодированных РНК-полимеразы, каждый класс выполняет различные функции в жизненном цикле вируса. Poxviruses использовать несколько стратегий для модуляции хост клеточного окружения во время инфекции. Для того чтобы понять регулирования хозяина и выражение гена вируса, мы использовали генома подходы к анализу стенограммы изобилии от обоих вирусов и клеток-хозяев. Здесь мы демонстрируем время курс инфекции клеток HeLa с вирус коровьей оспы и отбора проб РНК в нескольких точках времени после заражения. Оба хозяина и вирусных общей РНК выделяют и усиливаются для гибридизации микрочипов для анализа экспрессии генов.

Протокол Vaccinia заражения клеток HeLa и анализ хозяина и вирусных экспрессии генов. Часть 3 описывает процесс флуоресцентно маркировки усиливается РНК из хозяина и вирусных образцов аминокислот аллилового связи красителей. Часть 3 из 3.

Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 3

Семейство Poxviridae состоит из крупных вирусов, содержащих двухцепочечную ДНК, которые реплицируются исключительно в цитоплазме инфицированных клеток. Представители...

Здравствуйте, я Джуди Y из лаборатории Кейт Рубинс в Институте биомедицинских исследований Уайтхеда. В данном видео мы демонстрируем способ маркировки образцов антисмысловой РНК, полученных как из инфицированных вакцинированным вирусом клеток HeLa, так и из самого вируса, путем сочетания красителей с аминоаллильным LEO-связыванием. Затем мы покажем, как очистить маркированную антисмысловую РНК и подготовить ее к гибридизации для микрочипового анализа экспрессии генов.В предыдущих видео JoVE было показано, как проводить заражение вирусом, выделение тотальной РНК и этапы амплификации РНК. Итак, приступим. Для начала маркировки РНК добавьте 1 µg образцов РНК в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл.Высушите образцы в вакууме при низкой температуре или без нагрева до полного высыхания. Закройте каждую пробирку крышкой сразу после высыхания. Важно не пересушивать образцы после того, как они высохли.Добавьте девять µL буфера для связывания в каждую пробирку и ресуспендируйте РНК A, аккуратно перемешивая на вортексе в течение одной минуты; кратковременно центрифугируйте, чтобы осадить образец на дне пробирки, после чего поместите образец на лед. Затем добавьте 22 µL высококачественного DMSO в каждую пробирку с красителем Cy3 или Cy5; одной пробирки с красителем достаточно для двух образцов. Краситель Cy3 используется для маркировки ваших контрольных образцов, а краситель Cy5 — для маркировки исследуемых образцов.Перемешайте красители на вортексе до полного гомогенизирования. Помните, что до начала использования красители следует хранить в темноте. Не готовьте раствор красителя ранее чем за один час до применения и следите за тем, чтобы в смесь красителя с DMSO ни при каких условиях не попала вода.Теперь добавьте по 11 µL подготовленной смеси красителя в D-M-S-O-S в каждый образец и тщательно перемешайте на вортексе. Осторожно инкубируйте в течение 30–45 минут при комнатной температуре. Накройте образцы алюминиевой фольгой или поместите их в ящик стола, чтобы минимизировать воздействие света.После инкубации в каждый образец добавьте 4,5 µL гидроксиламина для остановки реакции и тщательно перемешайте на вортексе. Осторожно инкубируйте еще 15 минут при комнатной температуре. Накройте образцы алюминиевой фольгой или поместите их в выдвижной ящик, чтобы минимизировать воздействие света.Для очистки метки необходимо перемешать в вортексе РНК-связывающие гранулы. Для получения однородной смеси перед использованием подготовьте смесь для связывания РНК при комнатной температуре. Тщательно перемешайте связывающую смесь с помощью вортекса, перенесите аликвоту буфера для элюции РНК в пробирку объемом 1,5 мл и инкубируйте при 50–60 °C не менее 10 минут.Добавьте 70 µL смеси для связывания РНК А в каждый образец и тщательно перемешайте, пипетируя раствор вверх-вниз три-четыре раза; после перемешивания перенесите образцы из ПЦР-планшета в 96-луночный планшет с круглым дном. Затем добавьте 50 µL 100% изопропанола в каждый образец и тщательно перемешайте, пипетируя вверх-вниз три-четыре раза. Осторожно встряхните планшет на орбитальном шейкере в течение не менее двух минут.Для тщательного перемешивания образцов. Перенесите планшет на магнитный штатив. Для захвата магнитных частиц.Оставьте планшет на стойке до тех пор, пока смесь не станет прозрачной, а связывающие гранулы не выпадут в осадок. Осторожно удалите супернатант с помощью вакуумного аспиратора, не задевая магнитные гранулы. В качестве альтернативы осторожно удалите супернатант пипеткой и утилизируйте его.На данном этапе супернатант должен иметь ярко-розовый или ярко-синий цвет из-за несвязавшихся молекул красителя. После удаления супернатанта снимите планшет с магнитного стенда. Затем добавьте в каждую лунку 100 µL раствора для промывки РНК и встряхивайте планшет в течение одной минуты на орбитальном шейкере при умеренной скорости.На данном этапе гранулы могут распределиться не полностью; в этом случае верните планшет на магнитную подставку для захвата магнитных гранул. Осторожно удалите супернатант с помощью вакуумного аспиратора, чтобы не потревожить магнитные гранулы.В качестве альтернативы осторожно удалите супернатант с помощью пипетки и утилизируйте его. Снимите планшет с магнитного штатива. Повторите промывку второй раз, используя 100 µL раствора для промывки РНК A.После второй промывки просушите гранулы, встряхнув планшет в течение одной минуты на орбитальном шейкере на максимальной скорости. Не пересушивайте образцы. Элюируйте A RNA с гранул, добавив 20 µL предварительно нагретого буфера для элюции A RNA.Интенсивно встряхивайте планшет с каждым образцом на орбитальном шейкере в течение трех минут. Затем убедитесь, что магнитные бусины полностью диспергированы. Если это не так, продолжайте встряхивание.После полного диспергирования магнитных частиц поместите планшет на магнитный штатив для их осаждения. Супернатант содержит очищенные образцы меченой РНК A и должен иметь бледно-розовый или бледно-голубой цвет. Затем осторожно перенесите полученную РНК A в новый ПЦР-планшет или ПЦР-пробирки.На данном этапе можно проверить концентрацию РНК и количество красителя в образцах, измерив 1.5 µL на спектрофотометре NanoDrop. С помощью модуля для микрочипов немедленно проведите гибридизацию меченой РНК A на выбранной вами платформе микрочипов. В качестве альтернативы меченую РНК A можно хранить при температуре -80 °C до начала гибридизации.Это репрезентативный результат измерения на спектрофотометре и график оптической плотности (OD), полученные с помощью спектрофотометра NanoDrop для определения концентрации образца и степени включения красителя. Видны пики OD на 260 нанометрах, используемые для расчета концентрации образцов, а также два пика в области 532 и 635 нанометров, соответствующих красителям S3 и SCI 5 соответственно. Мы только что продемонстрировали способ флуоресцентного мечения амплифицированных образцов РНК, содержащих иммуноаллели, для микрочиповой гибридизации.При выполнении данной процедуры важно помнить, что ресуспендировать краситель в DMSO следует менее чем за один час до проведения конъюгации; также необходимо следить за тем, чтобы в смесь красителя с DMSO не попала вода, так как она вступит в реакцию с активной группой красителя. Также важно не пересушивать РНК, если это необходимо. Образцы можно выпарить до объема одного-двух микролитров, не доводя до полного высушивания, а затем тщательно ресуспендировать в буфере для конъюгации непосредственно во время реакции конъюгации.Держите реакционные смеси в темноте, периодически слегка встряхивая их; при необходимости центрифугируйте для осаждения. На этом всё. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.Обязательно посмотрите другие видео из этой серии, в которых мы демонстрируем, как проводить инфекционный эксперимент с вакцинированным вирусом в динамике, выполнять экстракцию РНК из образцов, а также процедуру линейной амплификации образцов РНК.

vaccinia-virus-infection-temporal-analysis-virus-gene-expression-part

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Протокол Vaccinia заражения клеток HeLa и анализ хозяина и вирусных экспрессии генов. Часть 1 из 3.

Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 1

Протокол Vaccinia заражения клеток HeLa и анализ хозяина и вирусных экспрессии генов. Часть 2 из 3.

Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 2

Новый хозяин факторов, связанных с вирусной инфекцией, могут быть идентифицированы с помощью клеточной генома потери функция экранирования RNAi.

RNAi Скрининг на хост факторов, участвующих в Vaccinia Вирусной инфекции использованием Drosophila Ячейки

Онколитических вирусы являются перспективными для рака терапии. Возможность установить infectability живых образцов ткани, полученных от пациентов до начала лечения является уникальным преимуществом этого терапевтического подхода. Этот протокол описывает процесс тканей...

Экс Vivo Заражение живой ткани с онколитических Вирусы

Мы описываем протокол определить ключевые роли принимающей сигнальных молекул в литическая репликация вируса герпеса модели, гамма-герпесвирусов 68 (γHV68). Использование генетически модифицированных мышей штамма эмбриональных фибробластов и для γHV68 литической репликации, протокол позволяет как фенотипическая характеристика и молекулярно допроса вирус-хозяин взаимодействий в вирусную литической репликации.

Пройдя Host-вирус Взаимодействие в Литические репликации Модель Herpesvirus

Метод трассировки синаптически связанных нейронов описано. Мы используем TVA специфику вверх клетки, чтобы исследовать, является ли клетка интерес населения получает синаптические вход из генетически определены типы клеток.

Вирусный отслеживание генетически определенных нервной системы

Быстрый и модульный протокол для генерации рекомбинантных вирусов вакцины, выражаюющих флуоресцентно помеченные белки одновременно с использованием метода преходящее доминирующее отбора описано здесь.

Методология эффективного поколения флуоресцентно помеченных вирусных белков Vaccinia

Мы описываем использование флуоресцентного репортера вируса коровьей оспы, который позволяет в режиме реального времени измерения вирусной инфекционной и экспрессии генов через выражение стадии конкретных спектрально различных репортеров флуорофорами. Мы подробно метод пластина основе для точного определения стадии, на которой репликация вируса поражается в ответ на небольшой торможения молекулы.

Коровьей оспы Reporter Вирусы для Количественная Вирусный функции на всех этапах экспрессии генов

Здесь мы представляем протоколы для идентификации 1) вирус кодировке иммунокорректоров, которые способствуют арбовирусных репликации и 2) эукариотических хост факторы, которые ограничивают арбовирусных репликации. Эти методы на основе флуоресценции и люминесценции позволяют исследователям быстро получить количественные отсчетов арбовирусных репликации в упрощенческой анализов с низкого соотношения сигнал шум.

Арбовирусных инфекций как скрининг инструменты для выявления вирусной иммуномодуляторов и принимающих противовирусное факторов

ICP0 подвергается ядерной и цитоплазматических транслокации во время инфекции HSV-1. Молекулярный механизм этого события не известна. Здесь мы описываем использование Конфокальный микроскоп как инструмент для количественной оценки ICP0 движения в инфекции HSV-1, которая закладывает основу для количественного анализа ICP0 транслокации в механистической будущих исследований.

Временной анализ ядерных и цитоплазматических транслокации герпеса вирус 1 белок, Immunofluorescent конфокальная микроскопия

Изучите метод маркировки РНК с помощью аминоаллильного сопряжения красителей для анализа экспрессии генов вируса вакцинии в клетках HeLa. Этот подход позволяет исследовать динамику вирусных и хозяйских генов.

Vaccinia вирусной инфекции и временной анализ вируса экспрессия генов: часть 3

Больше видео