Name: Ген-пушечный Трансфекция нейронов гиппокампа (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Изучите метод ген-пушечной трансфекции нейронов гиппокампа с использованием изолированной ткани мозга. Этот протокол демонстрирует точную диссекцию гиппокампа для исследований в области нейронауки.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Авторы не имеют конфликтов интересов, подлежащих раскрытию.

Ген-пушечный Трансфекция нейронов гиппокампа

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Здравствуйте, я Кма. Я работаю в Case Lab в Университете Брауна. Этап очистки слайсера 70% ethanol. Поместите вставку планшета в шесть.Наполните лунки планшета средой и инкубируйте при 37 °C; с помощью пинцета отделите весь мозг в области между средним мозгом и четвертым желудочком. Изолируйте гиппокамп с одной стороны, затем изолируйте гиппокамп со второй стороны. Поместите гиппокампы в каплю PBS.Отососите PBS, затем сделайте сагиттальные срезы с помощью томического микротома. Повторите процедуру, перенося срезы на чашку Петри, аккуратно прижимая их с помощью PBS. Промойте срезы, осторожно добавляя и затем отосасывая PBS и среду. Разделите срезы пинцетом.Промойте срезы в PBS и среде. Снова перенесите срезы на планшет и вставьте их. Удалите среду из срезов с помощью пинцета.Подсоедините шланг генного пистолета к баллону с гелием. Прикрепите ствол к генному пистолету. Заполните магазин микрочастицами (пулями).Вставьте магазин в пистолет Jing. Отрегулируйте давление на баллоне с гелием. Нанесите бусины, покрытые EGFP, на срезы.А теперь.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Мы опишем способ получения ДНК пулями золота и продемонстрировать использование таких пуль biolistically трансфекции нейронов гиппокампа в культуре ломтиками.

Подготовка генной пушки Маркеры и Biolistic Трансфекция Нейроны фрагмент культуры

Живая клетка изображений имеет особую полезность при изучении динамики торговли органелл. Здесь мы опишем протокол для живого изображения плотных процессоров пузырьки в культуре нейронов использованием широкого поля флуоресцентной микроскопии. Этот протокол является гибкой и может быть адаптирована для изображения других органелл типа митохондрий, эндосомы и пероксисом.

Живая съемка Плотные-ядерные Пузырьки в начальной культивированный нейронов гиппокампа

Этот протокол описывает шаги, необходимые для расчленения, трансфекции с помощью электропорации и культуры гиппокампа мышей и корковые нейроны. Краткосрочные культуры могут быть использованы для изучения результатом аксонов и руководства, в то время как долгосрочные культуры могут быть использованы для изучения синаптогенез и дендритные анализ позвоночника.

Nucleofection и первичной культуры эмбриональных Мышь гиппокампа и корковых нейронов

Источник: Keener, D. G., et al. Электропорация одиночных клеток на различные органотипические культуры срезов возбуждающих и классово-специфических тормозных нейронов гиппокампа мышей. J. Vis. Exp. (2020).В этом видео демонстрируется процесс электропорации одиночных клеток для введения плазмидной ДНК в нейроны культур среза гиппокампа мыши. Процедура включает в себя точное позиционирование пипетки, регулировку давления и импульсы электропорации для временного проникновения в мембрану нейрона,...

Экспрессия генов с помощью электропорации одиночных клеток в культурах среза гиппокампа мышей

Источник: Denaxa, M., el al., Трансплантация хемогенетически модифицированных предшественников кортикальных интернейронов в мозг ранних постнатальных мышей. J. Vis. Exp. (2019)В этом видео показана процедура введения плазмидного вектора, несущего интересующий ген, в интернейроны-предшественники в эмбриональном срезе мозга с последующей электропорацией для проникновения плазмиды и экспрессии генов. Эти модифицированные предшественники в дальнейшем могут быть использованы для лечения заболеваний...

Встроенный в агарозу перенос генов с помощью электропорации в предшественниках корковых интернейронов мышей

Фосфат кальция осадков удобный и экономичный способ для трансфекции культивируемых клеток. С оптимизации, можно использовать этот метод на труднодоступных трансфекции клеток, как первичных нейронов. Здесь мы опишем наш подробный протокол для кальций-фосфатного трансфекции нейронов гиппокампа совместно культивировали с астроглиальных клеток.

Фосфат кальция Трансфекцию первичной нейронов гиппокампа

Недавние усовершенствования в органотипических препаратах срезов мозга позволили использовать их для биотехнологических приложений. Органотипические срезы сохраняют локальные структурные характеристики биологии in vivo, включая функциональные синаптические связи. Здесь мы представляем региоселективный биолистический метод доставки для маркировки и генетической манипулирования этими срезами.

Региоселективный Biolistic Ориентация в Органотипической мозга Ломтики Использование модифицированного гена Gun

Представлены здесь метод трубки модифицированных ролика для культивирования и прерывистый с высоким разрешением изображений грызунов мозга ломтики в течение многих недель с точное перемещение на photoetched coverslips. Нейрональных жизнеспособность и морфология срез хорошо поддерживаются. Приложения полностью замкнутой системы с использованием вирусов для конкретного выражения типа клеток предоставляются.

Изменение ролик трубки метод для точно локализованы и повторяющиеся прерывистый изображений во время долгосрочного культуры срезы мозга в замкнутой системе

Здесь представлен протокол для одноклеточной электропорации, который может доставлять гены как в возбуждающие, так и в тормозные нейроны в диапазоне возрастов культуры среза гиппокампа in vitro. Наш подход обеспечивает точную и эффективную экспрессию генов в отдельных клетках, которая может быть использована для изучения клеточных автономных и межклеточных функций.

Одноклеточная электропорация по различным органотипическим культурам срезов возбуждающих и специфических для класса тормозных нейронов гиппокампа мыши

Этот метод демонстрирует эффективный способ подготовки к репликации дефектной ретровирусных запасов кодирования человека онкоген, а в дальнейшем использоваться для индукции миелопролиферативные заболевания в мышиной модели.

Производство репликации ретровируса Дефектные от переходных Трансфекция 293T клетки

Изучите метод ген-пушечной трансфекции нейронов гиппокампа с использованием изолированной ткани мозга. Этот протокол демонстрирует точную диссекцию гиппокампа для исследований в области нейронауки.

Ген-пушечный Трансфекция нейронов гиппокампа

Больше видео