Измерение артериального давления у мышей использованием тома давления Запись, хвост манжеты Метод

Слово coda в переводе с итальянского означает «хвост». Система неинвазивного измерения артериального давления Coda позволяет измерять давление у грызунов с помощью специализированного объемного датчика давления, который фиксирует изменения объема крови в хвосте животного при его размещении на хвосте. В данном видео демонстрируется процесс настройки системы, подготовки животных и одновременного измерения артериального давления у восьми особей.

Здравствуйте, меня зовут Анджу Бала Кришнан, я работаю в лаборатории Алана Доэрти в Центре сердечно-сосудистых исследований Университета Кентукки в Лексингтоне. Сегодня мы продемонстрируем процедуру измерения артериального давления у мышей с помощью метода записи давления по объему с использованием манжеты на хвосте. Мы применяем эту процедуру в нашей лаборатории для изучения сердечно-сосудистой системы.

Итак, приступим. Для установки системы CODA выберите в лаборатории место, где температура воздуха стабильно составляет 20 °C или выше. Избегайте размещения рядом с вентиляционными отверстиями кондиционеров; воздействие громкого шума или резких запахов может вызвать раздражение или стресс у животных.

К запахам животных может относиться любой сильный парфюм, которым вы пользуетесь. Включите контроллер Coda, а затем нагревательные платформы, установив их на третий уровень. Если температура в помещении превышает 25 °C, начните с первого или второго уровня.

Сначала выполните диагностический тест контроллера: откройте программное обеспечение Coda. Выберите устройство Coda, щелкнув по нему. Нажмите «тест выбранного устройства» (test selected device).

Выберите манжеты и каналы для тестирования и нажмите «тест». После завершения диагностического теста контроллера закройте окно тестирования устройства. Выберите код используемого контроллера, затем нажмите.

Используйте эти устройства для настройки программного обеспечения. Выберите инструменты управления персоналом. Затем нажмите на «Исследователь 1».

Чтобы изменить имя, нажимайте на последующие строки для добавления дополнительных исследователей. Затем нажмите «сохранить данные». Перейдите на вкладку «технические специалисты», чтобы изменить данные о них или добавить новых специалистов.

После этого перейдите на вкладку «Specimens» (Образцы), чтобы присвоить животным имена для удобной идентификации и выбрать тип животного. Затем нажмите «Save data» (Сохранить данные). В завершение перейдите на вкладку «Animals» (Животные).

Чтобы изменить тип животного и чувствительность, нажмите «Сохранить данные» (save data), а затем закройте окно. Чтобы начать новый эксперимент, выберите «Файл» $\rightarrow$ «Новый эксперимент» (file New experiment). Введите название эксперимента, выберите главного исследователя и укажите дату начала.

Нажмите «Далее». Следующий шаг — ввод основной информации о сессии. Сначала введите название сессии. Установите количество циклов акклиматизации равным пяти; если вы предпочитаете не включать циклы акклиматизации, установите значение ноль.

Установите количество серий на одну, время между сериями — на 30 секунд (для нескольких серий). Количество циклов в серии — 20 циклов, время между циклами — пять секунд. Затем нажмите «Next».

Для начала выбора образца выберите образец из общего пула и назначьте его на первый доступный канал. Затем нажмите «Далее», чтобы установить параметры сессии. Установите максимальное давление окклюзии на 250 мм.

Установите время сдувания ртути на 20 секунд. Для мышей установите минимальный объем на 15 µL и стиль отображения — один канал на график. Вы также можете добавить дополнительных исследователей и технических специалистов.

Затем нажмите «Next» (Далее). Ознакомьтесь со сценарием сеанса и нажмите «Next». Не выбирайте «Finish» (Завершить) до тех пор, пока не выполните раздел по подготовке животного, который описан далее.

Теперь можно забрать животных и поместить их рядом с системой измерения артериального давления Coda. Перед тем как поместить животных в держатели, оцените размер каждого животного относительно размера выбранного держателя. Животное должно свободно входить в держатель.

Поместите каждое животное в держатель, взяв его за хвост и осторожно поместив в заднюю часть держателя, обращенную к открытому концу конуса для носа. Осторожно зафиксируйте заднюю крышку на держателе, закрутив винт на задней крышке. Будьте осторожны, чтобы не защемить хвост или любые другие части тела при фиксации задней крышки.

Следующий слайд. Конус для носа направлен к заднему люку. Это ограничивает перемещение животного.

Конус для носа должен быть расположен так, чтобы животное не могло развернуться. Поместив животное в фиксатор, установите фиксатор на платформу для подогрева. В таком положении дайте животному минимум пять минут, чтобы оно привыкло к фиксатору.

Не прикасайтесь к животному и не пытайтесь его удерживать. Пребывание в фиксаторе и избыточный контакт могут вызвать раздражение у животного; никогда не оставляйте животное в фиксаторе без присмотра. Чтобы правильно установить окклюзионную манжету для хвоста, проденьте хвост сквозь манжету и поместите ее как можно ближе к основанию хвоста, не прилагая усилий.

После этого проденьте хвост через манжету датчика VPR, расположив ее в пределах двух миллиметров от окклюзионной манжеты. Закрепите трубку в выемке в верхней задней части держателя. Окклюзионная манжета на хвосте раздувается для перекрытия кровотока в хвосте.

Окклюзионная манжета медленно сдувается, и манжета VPR на хвосте, оснащенная специально разработанным датчиком, измеряет физиологические характеристики возвращающегося кровотока по мере возобновления тока крови в хвосте. Датчик VPR в манжете фиксирует отек хвоста, возникающий в результате артериальных пульсаций кровотока. Систолическое артериальное давление измеряется автоматически в момент первого появления отека хвоста.

Диастолическое артериальное давление рассчитывается автоматически, когда скорость увеличения отека хвоста прекращается. После того как все животные будут помещены в держатели и на их хвосты будут закреплены манжеты, дайте им не менее пяти минут для терморегуляции. Зафиксируйте температуру животных.

Как правило, при измерении инфракрасным термометром температура животного должна составлять от 32 до 35 °C. Теперь, когда животные подготовлены, можно приступать к эксперименту. Нажмите кнопку «Завершить», чтобы начать эксперимент.

Красная линия обозначает сдувание окклюзионной манжеты и манжеты датчика VPR. Синяя линия отображает изменения объема крови в хвосте. Первый перегиб синей линии (минимальная скорость изменения) определяет систолическое артериальное давление.

Вторая точка перегиба синей линии, соответствующая максимальной скорости изменения, определяет диастолическое артериальное давление по завершении эксперимента. Немедленно снимите манжеты и извлеките животных из держателя. На экране отобразится краткий отчет по итогам сеанса.

Данные, полученные в ходе эксперимента, сохраняются в виде файла Excel. Существует несколько способов обработки данных в этом файле. Общепринятой практикой является расчет среднего значения и стандартного отклонения, а также удаление ошибочных измерений.

Если стандартное отклонение превышает 30. Кроме того, можно просмотреть отклоненные циклы, а всю базу данных легко экспортировать в Excel. Обратитесь к письменному протоколу и руководству пользователя.

Для получения дополнительной информации: я только что продемонстрировал вам способ неинвазивного измерения артериального давления у мышей с использованием метода регистрации объемного давления. Для получения точных и воспроизводимых результатов крайне важно минимизировать стресс у животных, строго следуя данной процедуре. На этом все.

Спасибо за просмотр и успехов в проведении экспериментов.