Name: Cell Block получение из цитологии образцов с преобладанием индивидуально отдельные клетки (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Изучите метод Шидхэма для получения цитоблоков из образцов с отдельными клетками с использованием маркера AV и HistoGel. Эта техника улучшает иммунопрофилирование и оценку специальных окрасок в цитологии.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Авторы благодарят Криса Чартранд, HT (ASCP) для демонстрации разделе резки ячейки блок с маркером AV.

Введение: Это видео описании метода Shidham для ячейки блока препарат из жидкого цитология (LBC) образец использования HistoGelTM (Thermo Scientific) (HG). По сравнению с другими случайными подходы, следующие два важнейших особенностей этого протокола для приготовления клеточных блоков из относительно hypocellular образцов с однократно рассеянного свободные клетки (1-5). <ol><li> Этот протокол включает в себя шаги, чтобы сосредоточиться ячеек по плоскости, параллельной резки поверхности клетки блока. </li><li> Она также включает маяк, как темные включения AV-маркер (рис. 1б), который служит двум из следующих целей: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Чтобы представить себе уровень, при котором клетки сосредоточены. Площадь ячейки блока с клетками интерес в настоящее время могут быть визуализированы histotechnologist когда темные маяк подвергается в процессе резки. Эта способность контролировать бы предотвратить один из прорезая уровне с большинством клеток, или не разрезая слишком поверхностно на уровне с высокой концентрацией образец клеток. </li><li> Чтобы служить в качестве отправной точки локатор ссылки в разделе серийного блока ячейки на разных слайдах. Эта контрольная точка действует как маяк, чтобы помочь найти конкретный клетки или группы клеток для оценки картины координировать иммунореактивности с СКИП подход (6,7). </li></ol></li></ol> ПРОТОКОЛ (рис. 2) Подготовка образца. <ol><li> Передача остаточной LBC цитология шейки матки образца к плоской трубки со стеклянным дном (15 мм диаметр х 45 мм) (Рисунок 2.1 по 2.4). Место стеклянной трубки в большую пластиковую трубку носитель (28 х 85 мм) и центрифуги. Снимите трубку со стеклянным дном от несущей трубой и слить супернатант. </li><li> Стеклянная трубка, то ограничен (для предотвращения утечки горячей воды в следующем шаге) и поместили обратно в большую плоскую трубку перевозчика пластиковым дном </li><li> Трубки перевозчик пластиковых содержащие стеклянную трубку, затем ограничен, размещенных в центрифуге (с поворотным чашки, а не фиксированной чашки так, чтобы угол падения клетки перпендикулярно к плоской нижней части стеклянной трубки) и центрифугировали при 1805 G (3000 RPM, радиуса ротора-17см) в течение пяти минут (рис. 2.5). </li><li> Трубы затем удаляются вертикально от центрифуги и меньше стеклянной трубки удаляется пинцетом из больших пластиковую трубку перевозчика, не нарушая осевших гранул с ячейками. </li><li> Стеклянную трубку с образца без колпачков и супернатант сливают осторожно, чтобы не мешать плоский слой осадка клетки в нижней части (рис. 2.6). </li></ol> Включение ссылки координировать AV-маркер и того геля <ol><li> Темный маяк AV-маркер (около 2 мм х 2 мм, плоская поверхность, фрагмент темного цвета, sectionable материала) (рис. 3) добавляется в качестве указателя на стеклянную трубку (рис. 2.7). </li><li> Liquefy аликвоту HG путем плавления его в микроволновой печи в течение 10 секунд при средней мощности. </li><li> Добавить 0,5 мл расплавленного HG к трубке, смешивается с осадком быстро, и повторение его (рис. 2.8) (Перейдите к следующему шагу, быстро, не позволяя HG начала затвердевания). </li><li> Добавить около 2,5 мл теплой (45 ° С) водой пластиковую трубку носителя (рис. 2.9). </li><li> Меньше ограничен стеклянной трубки находится внутри пластиковой трубки с теплой водой. (Этот шаг необходим, чтобы держать HG от затвердевания в течение следующих шагах) (рис. 2.9). </li><li> Трубки перевозчик пластиковых помещается в центрифугу (с поворотным чашки, а не фиксированной чашки так, чтобы угол падения клетки перпендикулярно к плоской нижней части стеклянной трубки) и центрифугировали при 1805 G (3000 оборотах ротора радиус-17см) в течение пяти минут. Цель этого центрифугирования шагом будет толкать AV-маркер и сосредоточиться клеток в слое ближе к режущей поверхности окончательного парафин ячейки блока (рис. 1г). </li><li> Трубы затем удаляются нежно и по вертикали от центрифуги заботясь, чтобы не мешать осаждают тонкий слой с образцами клеток на дно. </li><li> Большие пластиковые трубки без колпачков и меньше стеклянной трубки удаляется по вертикали щипцами, не нарушая слоя осадка образца клеток. </li><li> Небольшая стеклянная трубка охлаждается в вертикальном положении в течение 15 минут, чтобы охладить и укрепить HG (рис. 2.11). </li></ol> Удаление ячейки блока в виде кнопки геля с образцами для окончательной обработки <ol><li> Затвердевших HG диск, со слоем концентрированной / осадка образца на дно выбили из плоской стеклянной трубки нижней, впрыскивая 10% формалина через 23 иглы со шприцем (рис. 2.12). </li><li> Игла вводится вдоль боковой трубкой на периферии затвердевших HG диск с образцами (рис. 2.12). </li><li> Needlэлектронной поворачивается вдоль боковой трубкой в ​​то время как формалин медленно протолкнул шприц. Это приводит к разделению HG кнопку вместе с темным маяком AV-маркер и концентрированного образца в нем с плоским дном из стеклянной трубки (рис. 2.12). </li><li> Ячейки блока (гель кнопку с образцами клеток), затем помещается в меченых кассеты и представлены для обработки ткани для подготовки парафин ячейки блока (рис. 2.13). </li></ol> Вложения и резки образца <ol><li> Диск в парафин с темной стороной маркерного радиомаяка поста режущей поверхности (рис. 1). </li><li> Блок подразделяется пока темные AV-маркера в качестве маяка подвергается и четко видны. </li><li> От трех до четырех разделов микрон вырезаны из этого уровня, которое должно содержать большую часть однократно рассеянного клеток из образца. </li><li> Разделах собраны на предметное стекло для дальнейшего окрашивания, иммуногистохимического окрашивания, или другие тесты, как указано. Протоколы этих испытаний, включая тип слайды использовать для установки секций может варьироваться. В общем, для иммунной, с покрытием слайды используются для предотвращения плавающей и потере разделов из слайдов во время иммунной шагов. </li></ol> Сокращения, используемые (в алфавитном порядке): CISH, хромогенных на месте тесты гибридизации, рыба, флуоресцентная лампа на месте тесты гибридизации; FFPE, формалин-фиксированных парафин; FNA, тонкая аспирационная биопсия, HG, HistoGel ™ (Thermo Scientific); LBC, жидкие цитология, ПЦР-полимеразная цепная реакция; <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> Рисунок 1. Структуры клеточных блок подготовленный протокол Shidham в. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2. Резюме различные шаги для приготовления клеточных квартале от LBC образца по протоколу Shidham в. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig3.jpg" alt="Рисунок 3" /> Рисунок 3. Подготовка AV-маркер из банановой кожуры. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig4.jpg" alt="Рисунок 4" /> Рисунок 4. Сравнение ячейки блоков и секций с и без AV-маркер. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig5.jpg" alt="Рисунок 5" /> Рисунок 5. Сравнение клеточности разделам клеточной блок с и без AV-маркер.

<ol><li>Shidham, V. B., Epple, J. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. Forthcoming.</li>
<li>Varsegi, G., D'Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology - Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. 2009 Mar 7-13, Boston, Ma, , Abstract 424 97a-97a (2009).</li>
<li>Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cell+block+preparation+methods+for+nongynecologic+ThinPrep+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens.</a> Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).</li>
<li>Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Thin-Prep+and+cell+block+preparation+for+the+evaluation+of+Thyroid+epithelial+lesions+on+fine+needle+aspiration+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22CytoJournal%22%5BJournal%5D)">Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy.</a> CytoJournal. 5, 3-3 (2008).</li>
<li>Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+diagnostic+accuracy+with+a+cell+block+preparation+from+thin-layer+endometrial+cytology%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study.</a> Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).</li>
<li>Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtkinson%2C+BF+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
<li>Shidham, V. B. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
</ol>

Сотовые блоки ценным инструментом для оценки различных образцов цитологии (1). Самое главное, в дополнение к архитектурным деталям образца, сотовые блоки позволяют проводить оценку вспомогательные исследования, такие как иммуноцитохимия, флуоресцентные / хромогенных на месте гибридизация тесты (FISH / CISH) и на месте ПЦР. Различные способы получения клеточных блока описаны. Тем не менее, большинство из них подходят для не-гинекологической образцов цитологии, которые содержат относительно много клеток и тканей с микрофрагментов например, в FNA всасывает и некоторые серозной жидкости, такие как излияния (1,3,4,5). Поскольку ячейки блоков в первую очередь обеспечить возможность для иммуноцитохимического оценки, их обработки желательно похож на фиксированных формалином парафин (FFPE) тканей. В конечном итоге результаты, полученные после иммуноцитохимического оценки разделы ячейки блока по сравнению с теми с опубликованной литературы осуществляется преимущественно на FFPE разделах ткани. Любые изменения в протокол скомпрометировать и свести на нет действия результатов, полученных на сотовые блоки обрабатываются с помощью различных фиксаторов и реагента последовательности кроме того, что используется для рутинной FFPE. Некоторые коммерческие методы, возможно, недостаток обработки через протокол воздействия других фиксатором-реагент экспозиции. Различные методы клеточной подготовки блока доступны для образцов со значительным количеством осадков и фрагментов тканей. В принципе, сосредоточен отложений поддерживаются некоторыми геля или коагуляции принципе. Маневренный кнопка затем заливали в парафин после обработки, как хирургическая патология экз / биопсии. Гели использованы, включают желатин, агар, фибриноген / плазменных тромбина, и других коммерческих гели, такие как HG. Методы концентрации варьируются от простой гранулирования осадка центрифугированием к концентрации клеток вдоль различных типов мембран. Примеры включают в себя: Milipore, collodin (целлоидин) мешки или соскоба клеток из цитология мазков на предметные стекла (1). Мы также оценили различные гели с помощью перебора различных комбинаций агара и желатина. Ни одна из комбинаций достигнута достаточно фирма, последовательность, чтобы получить легко маневренные диск затвердевшего геля со встроенными клетками образца в один кусок. HG показали соответствующие последовательности и по нашему опыту иммунной результаты по разделам HG ячейки блока были отличными. Жидкостная цитология (LBC) образцов для цервиковагинальных цитологии, как правило, меньше, чем сотовые без гинекологических образцы как упоминалось выше. Кроме того, гинекологические LBC образцов преимущественно содержать отдельные рассеянные вспученного поверхностные клетки слизистой оболочки цервиковагинальных. В связи с этим соответствующие клеточности в разделах ячейки блока не может быть достигнуто без особого подхода. Поскольку эти однократно рассеянного клеточных компонентов в блок не может быть видели histotechnologist во время раздела резки, уровень, при котором клетки начинают появляться в разделах не могут быть оценены и могут быть упущены, либо за счет сокращения прошлом уровень с самыми клетки или нет резки достаточно глубоко в уровень с высокой концентрацией образец клеток (рис. 4). Протокол Shidham адреса обе эти проблемы с использованием HG как вложение средних и обычных лаборатории оборудования (2) (рис. 2). Этот протокол включает в себя следующие две основные функции (рис. 1): <ol><li> Концентрация и выравнивание однократно рассеянного клеток в узкой плоскости соседних и параллельно режущей поверхности клетки блока (рис. 5). </li><li> Включение маяк-как темные AV-маркер, как указатель. Это имеет решающее значение для достижения следующих функций: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Выявление и мониторинг уровня, при котором клетки сосредоточены в ячейки блока. Экспозиции темные указателя подчеркивает уровня, при котором большая часть однократно рассеянного клеток в ячейке блока как ожидается, будут расположены (рис. 4). Это предотвращает с рубками (резка прошлом уровень с самыми клеток) или подрывает (не резки достаточно глубоко в уровень с высокой концентрацией образец клеток) в в ячейку блока и позволяют выбрать разделы из уровня в ячейки блока, соответствующих высокая концентрация клеток. </li><li> Темные указатель в разделах также служит ориентиром для обследования и определить точно такие же клетки в разных серийных срезов ячейки блока на различных слайдов (рис. 4). Это имеет решающее значение при интерпретации и оценке координировать такие свойства immunoprofile особое клеток СКИП подход следовать той же клетки в разных разделах (6,7). </li></ol></li></ol> Хотя НУГ протокол стандартизирован и сообщалось жидкости на основе образцов шейки цитологии, она также может быть использован для повышения диагностической ценности многих других не-гинекологической образцов, таких как выпот жидкости, FNA, щеткой, киста содержания и т.д. Кроме того А. В. маркер позволит улучшить Применение СКИП подход при оценке иммуногистохимического клеточных разделы блок этих образцов. Вложение среды могут быть заменены другими реагентами с соответствующими изменениями в соответствующие шаги. HG может быть заменен плазмы (фибриногена), которые будут загущенное тромбином при комнатной температуре (1).

cell block получение из цитологии образцов с преобладанием индивидуально отдельные клетки

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

Это видео демонстрирует метод Shidham для подготовки клеточных блоков из жидкости на основе образцов цервиковагинальных цитологии содержащие индивидуально рассеянных элементов и малых группах клеток. Эта техника использует HistoGel (Thermo Scientific) с обычным лабораторным оборудованием. Использование разделов ячейки блока ценным вспомогательным инструментом для оценки не-гинекологической цитологии. Они позволяют cytopathologist изучать дополнительные морфологические подробно образца в том числе архитектура поражения. Самое главное, они позволяют оценка вспомогательных исследований, таких как иммуноцитохимия, на месте гибридизация тесты (FISH / CISH) и на месте полимеразной цепной реакции (ПЦР). Традиционные методы подготовки блока ячейки в основном были применены к не-гинекологической цитологии образцов, как правило, для излияния жидкости организма и тонкой биопсия аспирационная биопсия. Жидкостная цервиковагинальных образцов относительно менее сотовые, чем их не-гинекологической коллеги с большим количеством отдельных рассеянных клеток. Из-за этого, адекватное клеточности внутри клетки разделах блока трудно достичь. Кроме того, histotechnologist секционирования блок не может визуализировать уровня, при котором клетки находятся на самом высоком концентрации. В связи с этим трудно контролировать соответствующего уровня, на какие разделы могут быть выбраны для быть переданы стеклах для тестирования. В результате, площадь ячейки блока с клетками проценты могут быть упущены, либо за счет сокращения прошлом или не резки достаточно глубоко. Текущий протокол для метода Shidham уделяется внимание этим вопросам. Хотя этот протокол является стандартным и сообщил для гинекологических жидкости на основе образцов цитологии, он может быть применен и к не-гинекологической образцов, таких как выпот жидкости, FNA, щеткой и т.д. содержимое кисты для улучшения качества диагностических материалов в разделах ячейки блока.

Shidham это метод получения клеточных блоков с AV-маркер из образцов, содержащих цитологии индивидуально рассеянных элементов и малых группах клеток.

Cell Block получение из цитологии образцов с преобладанием индивидуально отдельные клетки

В данном видео демонстрируется метод Шидхама по приготовлению клеточных блоков из жидкостных цитологических образцов цервико-вагинальных мазков, содержащих отдельные...

Подготовка клеточного блока начинается с переноса концентрированных клеток образца в стеклянную пробирку с плоским дном, помещенную в более широкую пробирку. Затем клетки осаждают на дно путем центрифугирования, после чего добавляют маркер AV и расплавленный HistoGel. Добавление теплой воды в внешнюю стеклянную пробирку обеспечивает сохранение HistoGel в жидком состоянии.Последующее центрифугирование перемещает маркер AV сквозь гель и концентрирует клетки в слой, прилегающий к поверхности среза клеточного блока. После затвердевания гель-кнопку можно извлечь и подготовить к парафиновой заливке. Здравствуйте, я доктор Джордж Вар세기 из секции цитологии отделения патологии Медицинского колледжа Висконсина в Милуоки, штат Висконсин.Я доктор Всам, также из отдела цитопатологии департамента патологии Медицинского колледжа Висконсина в Милуоки. Сегодня мы хотим продемонстрировать вам процедуру приготовления клеточных блоков из цитологических препаратов с преобладанием одиночных разрозненных клеток. Мы используем этот метод для изучения иммунопрофиля этих разрозненных клеток в срезах клеточного блока, а также для проведения специальных окрасок этих срезов.Итак, приступим. Для начала данной процедуры перенесите около 0.5 milliliters предпочтительно концентрированного образца в стеклянную пробирку с плоским дном длиной 45 millimeters и диаметром 15 millimeter. Затем поместите стеклянную пробирку в большой пластиковый держатель с плоским дном и центрифугируйте при 1800 Gs в течение пяти минут при комнатной температуре.После центрифугирования извлеките стеклянную пробирку с плоским дном из пластивого адаптера и слейте супернатант, стараясь не задеть плотный слой осадка клеток на дне. В качестве маркера-ориентира к клеткам добавляют темный сигнал на Johnny Vena или AV-маркер.После заливки клеток используется маркер AV для определения уровня концентрации клеток в парафиновом блоке. С помощью специальной пипетки добавьте к клеткам в пробирке заранее приготовленный кубик маркера AV с плоской поверхностью. Теперь приступите к добавлению геля: разжижите аликвоту гистогеля (histo gel или HG), расплавив его в микроволновой печи в течение 10 секунд на средней мощности, или следуйте инструкциям производителя.Добавьте 0,5 мл расплавленного HG в пробирку с осажденными клетками. Быстро перемешайте и снова закройте пробирку крышкой. Сразу после этого добавьте около двух с половиной миллилитров теплой воды при 45 °C в пластиковую пробирку-носитель.Затем вставьте пробирку CAPAs, содержащую клетки, маркер AV и HistoGel. Быстрая работа и использование теплой воды предотвратят затвердевание геля на последующих этапах. Далее проведите центрифугирование, чтобы протолкнуть маркер AV сквозь гель и сконцентрировать клетки в слой, который будет располагаться ближе к поверхности среза итогового парафинированного блока с клетками.Используйте поворотные стаканы, а не стаканы с фиксированным углом, чтобы клетки концентрировались перпендикулярно плоскому дну стеклянной пробирки; центрифугируйте при 1800 Gs в течение пяти минут при комнатной температуре. По завершении центрифугирования осторожно и вертикально извлеките пробирки из центрифуги, стараясь не задеть тонкий слой осадка клеток на дне. С помощью пинцета вертикально извлеките внутреннюю стеклянную пробирку, не нарушая слой осадка клеток образца.Наконец, поместите маленькую стеклянную трубку в холодильник в вертикальном положении на 15 минут для охлаждения и отверждения геля. По истечении 15 минут извлеките гель с клетками из стеклянной трубки, чтобы вытолкнуть отвердевший диск HG, который содержит слой концентрированного образца в нижней части вместе с темноокрашенным маркером AV. Используйте иглу 23 G, присоединенную к шприцу, заполненному 10% формином.Начните с введения иглы вдоль стенки пробирки по периферии затвердевшего диска HG. Продолжайте вращать иглу вдоль стенки пробирки, одновременно медленно вводя раствор Formin с помощью шприца. Обратите внимание на отделение кнопки HG от плоского дна стеклянной пробирки.Отделившуюся каплю геля, содержащую темноокрашенный маркер-маяк AV и концентрированный образец, называют клеточным блоком. Завершите процедуру, поместив клеточный блок в маркированную кассету и отправив его на гистологическую проводку для изготовления парафиновых блоков. После заливки клеточного блока приступайте к нарезке образца. Начните с обрезки диска клеточного блока, залитого в парафин; закрепите парафиновый блок в микротоме и выполните грубую обрезку для выравнивания поверхности парафинового блока и обнажения диска клеточного блока до тех пор, пока темноокрашенный маркер AV не станет открытым и четко видимым. Как только темноокрашенный маркер AV станет виден, нарежьте срезы толщиной от трех до четырех микрон.Эти срезы содержат концентрированные клетки из исходного образца. Поместите каждый срез на предметное стекло для последующего окрашивания и микроскопии. Здесь при малом увеличении видно влияние включения в образец маркера из банановой кожуры, окрашенного краской AV, на клеточность в этих срезах, окрашенных гематоксилином и эозином.На изображении слева видно, что данный маркер позволяет контролировать глубину среза для достижения уровня с хорошей клеточностью. Маркер AV также позволяет ориентировать различные клетки, в частности, отслеживать срезы в разных серийных сериях на других стеклах с этим маркером. Без него контроль глубины среза был бы невозможен.Образцы тканей были собраны на уровне сечения с низкой клеточностью. Степень клеточности в образцах становится еще более очевидной при большом увеличении; при наличии маркера AV можно легко контролировать глубину среза и избегать получения образцов с недостаточной клеточностью. Мы продемонстрировали вам метод приготовления клеточного блока из биоматериала с разрозненными фрагментами и клетками.Темный маркер AV, который мы добавили в процессе подготовки клеточного блока, помогает выбрать срезы с наивысшей концентрацией клеток. Он также позволяет правильно ориентировать эти срезы на предметных стеклах. Важно, чтобы HistoGel находился в расплавленном состоянии, пока клетки выстраиваются вдоль нижней стеклянной трубки flood pla, которая является поверхностью резания.Тем не менее, данную процедуру можно модифицировать для других методов, включая «холодные» методы, такие как использование тромбина и фибриногена, с внесением соответствующих изменений. На этом все. Благодарим за просмотр и желаем успехов в проведении ваших процедур.Спасибо.

cell-block-preparation-from-cytology-specimen-with-predominance

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Этот протокол описывает подготовку образцов опухолей, встроенных в парафин с фиксированным формалином, которые используются для сохранения образцов тканей и цитологических образцов немелкоклеточного рака легкого...

Приготовление образцов опухолей, залитых формалином и парафином: протокол сохранения образцов тканей и цитологических образцов немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ)

Это видео описывает приготовление субклеточных фракций из лейкозных клеток, которое является методом получения клеточных и ядерных фракций из лейкозных клеток. Ядерная и цитоплазматическая фракции могут быть использованы для дальнейшего анализа.

Получение субклеточных фракций из лейкозных клеток: метод получения клеточных и ядерных фракций из лейкозных клеток

Хромосомы могут быть выделены из живых клеток, таких как лимфоциты или фибробластами кожи, и из организмов, включая человека или мышей. Эти препараты хромосом могут быть дополнительно использованы для рутинного G-диапазонов и молекулярных цитогенетических процедур, таких как флуоресценции в гибридизация (FISH), сравнительной геномной гибридизации (CGH) и спектральной кариотипирование (SKY).

Хромосома Подготовка из культивируемых клеток

Использование отбора цитобрашных проб для сбора лимфоцитов и моноцитов из эндоцервикса является минимально инвазивным методом, который предоставляет образцы для анализа иммунитета женских половых путей. В этом протоколе мы описываем сбор образцов цитощетки и выделение иммунных клеток для анализов проточной цитометрии.

Коллекция, Изоляция и проточной цитометрии анализа человеческой Endocervical образцов

Понимание роли раковых стволовых клеток в рецидиве опухоли и устойчивости к терапии стало темой большого интереса в последнее десятилетие. В данной статье описывается выделение и характеристика субпопуляции раковых стволовых клеток из клеточных линий плоскоклеточной карциномы головы и шеи (HNSCC).

Выделение и характеристика головы и шеи карцинома роговых клеток субпопуляции Имея стволовой клетки Характеристики

Здесь мы представляем протокол подготовки образцов с низким числом клеток для анализа с помощью просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ).

Альтернативный подход к Подготовка проб с низкой Количество сотовых для анализа ПЭМ

Этот протокол описывает использование центробежных сцеживания для разделения клетки первичной острый лимфобластный лейкоз на фазы различных клеточного цикла.

Подготовка первичных острый лимфобластный лейкоз клеток в разных клеточного цикла этапов, центробежные сцеживания

В настоящее время immunofluorescent окрашивание на фиксированные клетки является методом выбора для определения уровнях выражения протеина при морфологическом информация также необходима. Этот протокол, представленная в настоящем документе предоставляет альтернативный метод immunocytochemistry на ячейку парафин врезанных блоков.

Определение уровня выражения протеина в культивируемых клеток Immunocytochemistry на клетки, парафин врезанных блоков

Здесь мы представляем интегрированный рабочий процесс для идентификации фенотипических и молекулярных особенностей, характеризующих циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК). Мы объединяем живые иммуноокрашивания и роботизированные микроманипуляции одиночных и кластерных КЦС с помощью единой ячейки на основе методов для анализа и оценки метастазирования способность посева.

Микроманипуляции циркулирующей опухолевой клетки для молекулярного анализа вниз по течению и метастатического потенциального оценивания

Этот протокол фракционирования позволит исследователям выделить цитоплазматические, ядерные, митохондриальные и мембранные белки из клеток млекопитающих. Последние две субклеточные фракции дополнительно очищаются с помощью изопикнового градиента плотности.

Фракционирование клеток U937 методом изопикновой очистки градиента плотности

Протокол обеспечивает надежный и оптимизированный подход к выделению ядер из солидных образцов опухолей для мультиомного секвенирования с использованием платформы 10x Genomics, включая рекомендации по условиям диссоциации тканей, криоконсервации одноклеточных суспензий и оценке изолированных ядер.

Оптимизированное выделение ядер из свежих и замороженных образцов твердых опухолей для секвенирования мультиома

Изучите метод Шидхэма для получения цитоблоков из образцов с отдельными клетками с использованием маркера AV и HistoGel. Эта техника улучшает иммунопрофилирование и оценку специальных окрасок в цитологии.

Cell Block получение из цитологии образцов с преобладанием индивидуально отдельные клетки

Больше видео