Name: Wolbachia Бактериальные инфекции у дрозофилы (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Изучите протокол изоляции и инъекции Wolbachia у дрозофилы с помощью фильтрующего устройства. Этот метод позволяет исследовать передачу бактерий через ткани и изучать инфекционную динамику.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Авторы не имеют конфликта интересов.

wolbachia Бактериальные инфекции у дрозофилы

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia Бактериальные инфекции у дрозофилы

Меня зовут Войя Фридман. Я младший научный сотрудник Принстонского университета. Сегодня я расскажу вам о нескольких протоколах, которые я разработала для транс-инфицирования: сначала для того, чтобы выделить гемолимфу из инфицированных мух, а затем для того, чтобы ввести эту гемолимфу неинфицированным мухам.Таким образом, это очень простой протокол по изоляции только для базовых целей. Вы будете использовать устройство от Mepo, которое содержит фильтр, устанавливаемый сверху на пробирку типа «E». Для начала потребуется около ста мух. Обезболите мух, поместите их в фильтрующее устройство — для этого можно использовать воронку, чтобы легко перенести их в данный аппарат, — и промойте 70% ethanol.Затем удалите этанол; его можно просто слить. После трех последних промывок используйте молекулярно чистую воду, чтобы бактерии не содержали следов этанола. После этого перенесите содержимое в новую пробирку и центрифугируйте в микроцентрифуге в течение двух минут. Затем это можно ввести; скармливайте смесь только не подверженным воздействию мухам.Таким образом, возьмите двустороннюю клейкую ленту; обычно у такой ленты две стороны, одна из которых более липкая, чем другая. Оставьте липкую сторону обращенной вверх, так как именно к ней вы будете приклеивать мух. В газовой установке, если сверху будет закреплено предметное стекло, поток газа будет отсутствовать, и мухи окажутся сверху на стекле, когда они проснутся.Таким образом, вы можете просто направить поток, создав небольшой кожух или камеру с помощью клейкой ленты. Затем направьте газ на мух. После этого закрепите здесь с помощью ленты этот источник света, и ваши мухи будут готовы.Прикрепите мух к верхней стороне ленты, расположив их всех в одном направлении, головами туда, откуда вы будете вводить иглу. Таким образом, вы сможете пройти над крылом; это важно, так как мухи летают, и вы не хотите, чтобы они улетели. Если они проснутся во время процедуры, необходимо предотвратить их побег.Следовательно, убедитесь, что вы слегка прижимаете кончик иглы к крыльям мухи в области хвоста. Ничего страшного, если крылья будут повреждены. Когда вы будете извлекать мух после инъекции, они, скорее всего, все равно потеряют крылья, но выживут.Это может быть полезно, так как вы не потеряете мух. Таким образом, он наносит минеральное масло на микродозатор для задней части иглы, затем вводит иглу, и после этого можно просто отрегулировать давление, чтобы поднять материал к кончику иглы. Я вводил от 10 до 15 nanoliters, но важно, чтобы этот объем был постоянным. Итак, одна важная деталь этого эксперимента заключается в том, что при введении иглы в муху она должна пройти настолько глубоко, насколько это возможно, через верхнюю часть брюшка.Поскольку здесь, по сути, при введении иглы имеется большее пространство для перемещения вверх и вниз. Кроме того, если игла находится ближе к кутикуле, вероятность повреждения жизненно важных органов в ходе процедуры ниже. Весьма маловероятно, что вы проткнете, например, кишечник, что могло бы привести к гибели особи, на которой вы проводите операцию.Меня зовут Войя Фридман. Я младший научный сотрудник Принстонского университета в лаборатории Эрика Хелса. Сегодня я хочу рассказать вам о протоколе, который вы только что видели в демонстрации.Данный протокол был разработан с целью доказать способность UBA преодолевать тканевые барьеры. UBA является одним из наиболее успешных внутриклеточных паразитов на планете, поражающим от 20 до 70% насекомых и множество других видов.Кроме того, это имеет большое значение для изучения заболеваний человека, поскольку данные организмы также инфицируют нематод, переносящих такие болезни, как речная слепота или онхоцеркоз. Таким образом, CCA является облигатным эндосимбионтом этих червей. Существует огромный интерес к использованию CCA в качестве средства борьбы с паразитарными заболеваниями, переносимыми клещами и комарами, такими как малярия и лихорадка денге.Таким образом, данный протокол был разработан, чтобы продемонстрировать, что после введения CCA в брюшную полость мухи они способны пересекать ткани и достигать зародышевых клеток. По сути, здесь вы видите иерархию яичника дрозофилы; если вещество присутствует в гемолимфе, оно может преодолеть перинефральную оболочку, окружающую яичник.Затем они пересекают мышечный слой. Фактически, одним из первых мест, куда они проникают внутри яичника, является область соматических стволовых клеток. После этого они могут достичь зародышевой линии.Эта бактерия передается таким же образом, как и митохондрии, — через мать, посредством цитоплазмы, присутствующей в яйцеклетке. Следовательно, они должны присутствовать в зародышевой линии. Именно поэтому был разработан данный протокол.Данный протокол может быть очень полезен, поскольку традиционный способ, который обычно используют для трансфекции wBaa, заключается в том, чтобы взять wBaa и ввести их в новый вид насекомых с помощью микроинъекций в эмбрион. Однако такие методы гораздо сложнее.По сути, здесь мы просто используем особенности биологии, поскольку они способны пересекать ткани и проникать в ткани стволовых клеток, откуда они могут попасть в зародышевую линию. Это облегчает получение UBA от некоторых видов зараженных насекомых, которые затем могут быть переданы незараженным видам. Вероятно, дело в самой инъекции.В основном необходимо тщательно зафиксировать муху. Мы используем двусторонний клейкий скотч; иглу следует вводить максимально близко и параллельно телу мухи, чтобы не погрузиться слишком глубоко. Это снизит вероятность гибели мухи после проведения операции.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Паразитоид (паразитарных) ос представляют собой основной класс естественных врагов многих насекомых,...

Введение в паразитических наездников<em&gt; Drosophila</em&gt; И противопаразитарной иммунного ответа

Источник: Siva-Jothy, J. A. и др. Пероральная бактериальная инфекция и выделение у Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)В видео демонстрируется инфекция Drosophila melanogaster патогенными бактериями. Он включает приготовление флаконов с инфекцией и перенос голодающих мух для обеспечения бактериального проглатывания. Процедура захватывает колонизацию кишечника, затем поверхностную стерилизацию и гомогенизацию мух. Наконец, он показывает количественную оценку внутренней бактериальной...

Инфекция Drosophila melanogaster патогенными бактериями

Источник: Hiroyasu, A., D и др., Извлечение гемоцитов из личинок Drosophila melanogaster для микробной инфекции и анализа. J. Vis. Exp .(2018)В этом видео демонстрируется процедура установления бактериальной инфекции у личинок дрозофилы , помещая их в бактериальную каплю и прокалывая вольфрамовой иглой. Личинки затем инкубируются на борозенной, богатой питательными веществами агаровой пластине для изучения взаимодействий хозяина и патогена.

Установление бактериальной инфекции у личинок дрозофилы

Drosophila melanogaster является выдающимся модельным организмом для изучения врожденных иммунных систем и физиологических последствий инфекций и болезней. В этом протоколе описывается, как доставить устойчивые и количественно повторяемые бактериальные инфекции D. melanogaster, а также как впоследствии измерить тяжесть инфекции и количественно оценить иммунный ответ хозяина.

Системная бактериальная инфекция и иммунная Фенотипы обороны в<em&gt; Дрозофилы</em

Способ выращивания дрозофилы под аксенический и гнотобионтных условиях представлена. Fly эмбрионы dechorionated в гипохлорит натрия, асептически переносят в стерильную диету, и выращены в закрытых контейнерах. Инокулируя диеты и эмбрионов с бактериями приводит к гнотобионтных ассоциаций, и бактериальный присутствие подтверждается металлизированный всего тела дрозофилы гомогенатах.

Выращивание дрозофилы<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Под аксенический и гнотобионтных Условия

Комары Aedes aegypti , инфицированных Wolbachia выпускаются в природных популяциях для подавления передачи арбовирусов. Мы описываем методы задней А.е. aegypti с Wolbachia инфекции в лаборатории для экспериментов и поля релиз, принимая меры предосторожности для сведения к минимуму Лаборатория адаптации и отбора.

Поддержание инфицированных комаров Aedes aegypti с Wolbachia

Этот протокол описывает методы устно разоблачить и заразить плодовой мушки Drosophila melanogaster с бактериальных патогенов и измерить количество инфекционных бактерий сарай после инфекции кишечника. Мы далее описывают эффект иммунных мутантов на лету выживание после устного бактериальной инфекции.

Устные бактериальной инфекции и осыпания в Drosophila melanogaster

Этот протокол описывает в Drosophila melanogaster с использованием нано инъекционный метод и основные методы для анализа взаимодействия вируса узла создать вирусной инфекции в естественных условиях .

Создание вирусной инфекции и анализа взаимодействия хост вирус в Drosophila Melanogaster

Взрослые мухи Drosophila melanogaster широко использовались в качестве модельных организмов для исследования молекулярных механизмов, лежащих в основе врожденных иммунных реакций хозяина противомикробных препаратов и стратегий микробной инфекции. Для продвижения стадии личинки D. melanogaster в качестве дополнительной или альтернативной модельной системы описана методика личиночного впрыска.

Дрозофила меланогастер Протокол инжекции личинок

Для выявления внутриклеточной вольбахии использовались четыре метода, которые дополняли друг друга и повышали точность обнаружения инфекции Wolbachia Aedes albopictus Aa23 и Aa23-T, вылеченной от нативной инфекции Wolbachia с использованием антибиотиков.

Обнаружение штамма Wolbachia wAlbB в клеточных линиях Aedes albopictus

Клеточные линии полезны в исследованиях внутриклеточных организмов, которые не могут быть культивированы вне клеток-хозяев. Несмотря на то, что линии, инфицированные Wolbachia, позволили сделать много открытий, гетерогенность внутри этих линий может привести к различным экспериментальным результатам. Представлен протокол получения клонов одиночных клеток и непрерывных культур из инфицированных Wolbachia клеток JW18.

Получение моноклональных культур из инфицированной Wolbachia клеточной линии Drosophila melanogaster JW18

Изучите протокол изоляции и инъекции Wolbachia у дрозофилы с помощью фильтрующего устройства. Этот метод позволяет исследовать передачу бактерий через ткани и изучать инфекционную динамику.

Wolbachia Бактериальные инфекции у дрозофилы

Больше видео