Анализ образования сфер: метод in vitro для идентификации стволовых клеток рака поджелудочной железы и скрининговой терапии

- Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC) содержит подмножество исключительно опухолевых раковых стволовых клеток (CSC). ЦСК являются самообновляющимися, плюрипотентными и способны образовывать опухоли. Они экспрессируют антиапоптотические белки, а также содержат гены с множественной лекарственной устойчивостью, что делает их устойчивыми к химиотерапии. Чтобы выявить раковые стволовые клетки и изучить влияние на них лекарственных препаратов, мы проводим анализ на образование сфер.

Во-первых, суспензируйте извлеченные раковые стволовые клетки в желаемой среде для культивирования клеток. Затем высейте клеточную суспензию в многолуночный планшет и инкубируйте в течение желаемого времени. Добавьте необходимое количество интересующего препарата в несколько лунок и плацебо в другие лунки в качестве отрицательного контроля. Инкубируйте клетки в течение желаемого времени. Раковые стволовые клетки образуют колонии сферической формы в неадгезивной культуральной среде.

После инкубации пипеткой нанесите небольшое количество клеточной суспензии на гемоцитометр и поместите ее в автоматический счетчик клеток. Теперь подсчитайте количество образовавшихся сфер. Клетки, обработанные ле