Метод висячей капли: техника получения 3D сфероидов меланомы

- Сфероиды представляют собой трехмерные модели клеточных культур in vitro, которые имитируют архитектуру опухоли in vivo и помогают изучать внутриопухолевые взаимодействия. Чтобы установить культуру, сначала приготовьте одноклеточную суспензию клеток меланомы в соответствующей среде. Затем нанесите небольшие объемы этой клеточной суспензии на внутреннюю поверхность крышки стерильной, неадгезивной формы для культур. Осторожно переверните крышку и поместите ее на основание чашки для культуры, содержащей PBS, чтобы создать камеру гидратации. Инкубируйте тарелку в соответствующих условиях.

Влага из PBS препятствует испарению среды из висящих капель. Освежите капли, заменив несколько микролитров среды. Благодаря поверхностному натяжению капли сохраняют свою сферическую форму и остаются подвешенными к внутренней поверхности пластины. Гравитационные силы позволяют клеткам оставаться во взвешенном состоянии, не распространяясь, но агрегируются с образованием трехмерных сфероидов внутри капель. Наконец, промойте капли PBS, чтобы собрать фероиды. Соберите их в неадгезивную посуду для культуры.

В следующем протоколе мы продемонстрируем генерацию трехмерных сфероидов клеток меланомы 451-LU ме