Выделение стволовых клеток меланомы: метод получения CD133-положительных и отрицательных клеток меланомы с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток

- Меланома содержит небольшую субпопуляцию раковых стволовых клеток, обладающих как способностью к самообновлению, так и к инициации опухоли. CD133 или Проминин-1, пентаспановый трансмембранный гликопротеин, является одним из ключевых маркеров, экспрессируемых стволовыми клетками метастатической меланомы. Чтобы выделить CD133-положительные клетки, начните с суспензии первичных клеток меланомы в соответствующем буфере.

Инкубируйте с блокирующим реагентом, содержащим белки, которые блокируют неспецифические участки связывания на поверхности клетки. Обработайте клетки биотинилированными первичными антителами к CD133. Эти антитела связываются с антигенами CD133, экспрессируемыми на CD133-положительных клетках. Теперь добавьте в суспензию антибиотиновые магнитные микрогранулы. Инкубируйте микрогранулы, чтобы они связывались с клетками, меченными биотином.

Наконец, пропустите инкубированную суспензию через колонку, помещенную в магнитное поле. При магнитном воздействии все меченые микрошариками CD133-положительные клетки прилипают к колонке, в то время как немеченые клетки проходят сквозь нее. Соберите эти немеченые CD133-отрицательные клетки. Извлеките колонку из магнитного поля. Промой