Быстрое культивирование первичных меланоцитов и фибробластов мыши: выделение меланоцитов и фибробластов из цельного образца кожи мыши

- Кожа состоит из различных клеток, населяющих ее различные слои. Меланоциты, клетки, продуцирующие меланин, локализуются в эпидермально-дермальном соединении, в то время как фибробласты, клетки, генерирующие соединительную ткань, находятся в дерме.

Чтобы быстро выделить меланоциты и фибробласты, начните с забора туловища усыпленного щенка мыши. Разрежьте кожуру вентрально по всей длине ствола. Отшелушите кожу, содержащую эпидермальный и дермальный слой, и измельчите ткань на мелкие кусочки.

Теперь лечите с помощью буфера для пищеварения, содержащего ферменты трипсин и коллагеназу, которые разрушают внеклеточный матрикс, высвобождая клетки в суспензию. Центрифуга для гранулирования клеток и выброса надосадочной жидкости. Повторно суспендируйте клетки в меланоцитарной среде и перенесите суспензию в многолуночный планшет.

Во время культивирования большая часть фибробластов прилипает к дну лунки, в то время как меланоциты и другие эпидермальные клетки остаются во взвешенном состоянии. Аспирируйте взвешенные клетки и добавьте в культуру фибробластов специфичные для фибробластов среды, чтобы стимулировать их рост. Перенесите аспирированную суспензию в свежую лунку, покрытую коллагеном,