Экспрессия генов с помощью электропорации одиночных клеток в культурах среза гиппокампа мышей

Начните со среза гиппокампа из мозга мыши, культивируемого на вставке культуры в чашке.

Разрежьте вкладыш, содержащий срез, и закрепите его в камере электропорации под микроскопом.

Перфузируйте камеру буфером, содержащим потенциал-зависимый блокатор натриевых каналов, чтобы подавить чрезмерное возбуждение и предотвратить клеточную токсичность.

Расположите пипетку, содержащую плазмиды с интересующим геном, рядом со срезом.

Поддерживайте положительное давление, чтобы предотвратить закупорку пипетки при приближении к целевому нейрону гиппокампа до тех пор, пока не образуется мембранная ямочка.

Переключитесь на отрицательное давление, чтобы создать уплотнение с мембраной.

Чередуйте положительное и отрицательное давление, чтобы свести к минимуму повреждение клеток.

Подайте импульс электропорации для временного проникновения в мембрану, облегчая проникновение плазмиды.

Извлеките пипетку, сохраняя положительное давление, и повторите электропорацию для соседних целевых нейронов.

Перенесите электропорированный срез в свежую вставку и инкубируйте его, чтобы обеспечить экспрессию интересующего гена.

Чтобы подготовить срезы культур для электропорации, перенесите интересующие вас вкладыши для культур в о