JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 3:27 мин • October 30th, 2025
Начните с бактериальной культуры с флуоресцентной меткой, добавленной в безуглеродный буфер.
Центрифуга, чтобы удалить бактерии и выбросить надосадочную жидкость.
Повторно суспендируйте гранулу в свежем безуглеродном буфере, содержащем мягкое моющее средство.
Отсутствие источника углерода останавливает рост, в то время как моющее средство предотвращает образование комков и поддерживает клетки в подвешенном состоянии.
Загрузите бактериальную суспензию в шприц и подключите ее к насосу.
Введите суспензию во входное отверстие микрофлюидного чипа, содержащего канал с заложенными в пол ловушками.
Медленно извлеките жидкость из выходного отверстия канала.
По мере того, как жидкость отступает, капиллярные силы направляют бактерии к выходу.
В этом процессе отдельные бактериальные клетки оседают в ловушках, что приводит к образованию бактериального узора.
Постоянно промойте канал подогретым, богатым питательными веществами бульоном.
Бактерии возобновляют рост и образуют микроколонии внутри ловушек.
Используйте флуоресцентную микроскопию для получения покадровых изображений и анализа роста бактерий в контролируемой среде.
Нанесите пипеткой один миллилитр среды MOPS во флакон центрифуги и добавьте 10 микролитров 0,132 молярного калийфосфата.
Добавьте 100 микролитров ночной культуры в флакон центрифуги и центрифугируйте культуру в 2300 раз г в течение двух минут. Аккуратно выбросьте надосадочную жидкость для ресуспендирования гранулы в одном миллилитре свежей среды MOPS с 0,015% Tween 20 и 0,01% фосфата калия и загрузите бактериальную суспензию в одномиллилитровый шприц. Чтобы зафиксировать шприц и соединение трубки, вставьте иглу непосредственно в трубку.
Теперь установите шприц на шприцевой насос и впрыскивайте суспензию в микрофлюидный чип через входное отверстие, расположенное в верхней части канала, пока суспензия не покроет область шаблона ловушками. Установите шприцевой насос на расход от 0,07 до 0,2 микролитра в минуту для удаления бактериальной суспензии и контролируйте процесс структурирования с помощью программного обеспечения микроскопа. После того, как шаблон будет смоделирован с помощью ячеек, увеличьте скорость потока на выходе, чтобы быстро опорожнить микрофлюидный канал, и промойте его свежим LB, который был предварительно дегазирован в течение не менее 30 минут и предварительно нагрет до 30 градусов Цельсия.
Теперь установите шприцевой насос на скорость потока два микролитра в минуту, чтобы аккуратно промыть канал. Как только канал будет заполнен, снова увеличьте расход. Получение изображений растущих бактерий с нужным увеличением и временным интервалом.
В данной статье описывается метод структурирования бактериальных клеток с использованием микрофлюидного чипа. Процесс включает впрыскивание бактериальной суспензии в канал, где капиллярные силы направляют отдельные клетки в ловушки для наблюдения за их ростом.
Микрофлюидное структурирование и отслеживание роста отдельных бактериальных клеток с помощью флуоресценции предоставляют платформу с высоким разрешением для изучения поведения микроорганизмов в строго контролируемых условиях. Этот подход позволяет осуществлять точную изоляцию отдельных клеток, что способствует надежной проверке гипотез и количественному анализу, которые имеют решающее значение для раннего поиска и валидации мишеней в исследованиях и разработках противоинфекционных средств. Воспроизводимость и масштабируемость данного метода делают его универсальным инструментом для полнопортфельного скрининга и снижения рисков при изучении механизмов действия.
Этот микрофлюидный рабочий процесс с использованием флуоресценции интегрируется на стыке этапов раннего поиска, разработки анализа и оптимизации доклинических моделей.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026