Микрофлюидное моделирование и флуоресцентное отслеживание роста бактерий в одиночных клетках

Начните с бактериальной культуры с флуоресцентной меткой, добавленной в безуглеродный буфер.

Центрифуга, чтобы удалить бактерии и выбросить надосадочную жидкость.

Повторно суспендируйте гранулу в свежем безуглеродном буфере, содержащем мягкое моющее средство.

Отсутствие источника углерода останавливает рост, в то время как моющее средство предотвращает образование комков и поддерживает клетки в подвешенном состоянии.

Загрузите бактериальную суспензию в шприц и подключите ее к насосу.

Введите суспензию во входное отверстие микрофлюидного чипа, содержащего канал с заложенными в пол ловушками.

Медленно извлеките жидкость из выходного отверстия канала.

По мере того, как жидкость отступает, капиллярные силы направляют бактерии к выходу.

В этом процессе отдельные бактериальные клетки оседают в ловушках, что приводит к образованию бактериального узора.

Постоянно промойте канал подогретым, богатым питательными веществами бульоном.

Бактерии возобновляют рост и образуют микроколонии внутри ловушек.

Используйте флуоресцентную микроскопию для получения покадровых изображений и анализа роста бактерий в контролируемой среде.

Нанесите пипеткой один миллилитр среды MOPS во флакон центрифуги и добавьте 10 микр